检测糖类的传感器的制作方法

专利名称：：检测糖类的传感器的制作方法
技术领域：
：本发明涉及传感器、制备传感器的方法和使用传感器的方法。该传感器可以用于测量分析物的存在或浓度，所述分析物可以是组织液的组分，例如葡萄糖。该传感器特别适用于必须精密地监测葡萄糖水平和/或必须重复地测量葡萄糖的情况，例如在糖尿病监护中。
背景技术：
：在糖尿病监护中，血液中葡萄糖的常规测量是必要的，以便保证恰当的胰岛素剂量。另外，已经表明在糖尿病患者的长期护理中较好地控制血糖水平可以延緩，如果不能预防，视网膜病、循环问题和其它通常与糖尿病相关联的变性疾病的发作。因此，糖尿病患者需要可靠地和精确地自我监测血糖水平。希望测量可能在糖尿病患者中出现的浓度范围内的血糖，即，0~35mM或甚至更高。虽然在此广泛地将葡萄糖作为相应的例子，但是应当理解本发明的原理广泛地适用于大范围的分析物。目前，糖尿病患者利用可商业得到的比色测试条或电化学生物传感器(例如酶电极)来监测血糖，但是它们在每次测量时都需要常规地使用柳叶刀型的工具以取出合适量的血液。大多数糖尿病患者平均每天要使用这种工具测量血糖两次。但是，美国NationalInstitutesofHealth推荐每天应该进行至少四次血糖测试，美国糖尿病协会(AmericanDiabetesAssociation)已经认可了该推荐。血糖测试频率的增加给糖尿病患者施加了相当大的负担，不仅在金钱方面而且在疼痛和不适方面，尤其是不得不常规地使用柳叶刀从指尖采血的长期糖尿病患者。因此，毫无疑问地，需要不用从患者采血的较好的长期葡萄糖监测体系。已经有许多不需要从患者采血的葡萄糖测量技术的提议。观察到分析物在皮下流体中的浓度与所述分析物在血液中的浓度相关联，因此已经有几个使用位于皮下位置的葡萄糖监测装置的报告。对可以远程讯问的葡萄糖竟争结合检测物的使用是尤其感兴趣的。一种测定竟争结合的方法为使用基于接近性的信号产生/调制部分对(proximity國basedsignalgenerating/modulatingmoietypair)(在US6232120中讨论)，所述部分对通常是能量转移供体-受体对(包含能量供体部分和能量受体部分)。能量供体部分是光致发光的(通常是荧光的)。在该方法中，使能量转移供体-受体对与待分析的样品接触(例如皮下流体)。然后样品发光并且检测到所产生的发射。供体-受体对的或者能量供体部分或者能量受体部分与受体载体结合，而供体-受体对的另一部分(结合到配体载体)和存在的任何分析物竟争在受体栽体上的结合位点。当使供体和受体在一起时它们之间发生能量转移，这产生能量供体部分的可检测的荧光寿命变化(减少)。另外，由能量供体部分发射的部分荧光信号猝灭。通过分析物的竟争结合使寿命变化减少或甚至消失。因此，通过测量明显的发光寿命，例如通过相调制荧光计或时间分辨荧光计(参见Lakowicz,PrinciplesofFluorescenceSpectroscopy,PlenumPress,1983，第3章)，可以测定样品中分析物的量。应当注意能量转移的效率取决于供体的量子产率、供体的发射光镨与受体的吸收光镨的重叠、和供体与受体之间的相对距离和方向。在EP0561653中，乂^开了一种如上所述的i礼问受体和配体的方法。供体-受体能量转移的例子为荧光共振能量转移(F6rster共振能量转移，FRET),其是从初始激发的供体(D)到受体(A)的非辐射的激发态能量转移。供体通常以较短波长发射，并且它的发射光镨与受体的吸收光谱重叠。不出现光子地发生能量转移并且是供体和受体之间的长程偶极-偶极相互作用的结果。术语共振能量转移(RET)是更准确的，这是因为FRET方法不包括光子的出现。但是FRET和RET通常可以替换使用。FRET的重要特性在于它可以在相当于生物大分子尺寸的距离上发生。被称为F6rster距离的FRET50。/。有效的距离，通常为20~60A。20-90A的F6rster距离^f更于竟争结合研究。用供体(D)标记分析物结合部分并用受体(A)标记分析物类似物，或者反之亦然，将会产生能够产生基于供体-受体距离的可测量响应的检测物。因此，D-"分析物结合部分"到A-"分析物类似物"的结合导致供体强度或寿命的降低。样品中的分析物在D-"分析物结合部分"上竟争分析物结合部分，从受体(A)释放D-"分析物结合部分"。因此期望供体的强度衰减时间和相位角随葡萄糖浓度的增加而增加。将这些原理用于通过能量转移的葡萄糖感测。WO91/09312描述了一种采用基于通过光学装置远程讯问的葡萄糖(引入能量转移供体-受体对)的亲和力分析的皮下方法和装置。每个例子W097/19188、WO00/02048、WO03/006992和WO02/30275描述通过产生可以被远程读取的光学信号的能量转移来感测葡萄糖。本领域技术人员应当理解受体可以是荧光团。在用能量受体部分的吸收光镨内的波长的入射辐射束激发后，由能量受体部分发射的任何荧光信号未受到FRET过程的影响。因此，可以将由能量受体部分发射的荧光信号的强度用作内参比信号，例如在传感器的连续校准中，或者用以监测传感器降级的程度，并因此指示需要植入或注入新的传感器。该信号下降到可接受的基线水平之下表明需要植入或注入新的传感器。但是，能量受体部分可以是非荧光染料。在这种情况下用具有荧光猝灭性能的化合物代替特定的能量受体部分。由Tyagi等人NatureBiotechnology(1998)18:49页给出强有力的和非特异性的荧光猝灭剂的例子。目前已知的体液内葡萄糖水平的非侵入分析的局限性为能够精确地测量分析的葡萄糖浓度范围。据说WO91/09312的皮下植入能够测量在0.5~18mgmr1(2.6~94mM)范围内的葡萄糖浓度，其覆盖了除细胞内液葡萄糖浓度测量必需的目标范围的较低端值之外的所有范围。在非常低的葡萄糖浓度下的精确测量在糖尿病控制中是特别重要的，这是因为它对应于〗氐血糖。在WO98/05589中报告了类似的装置，并且据说具有测量0.05~5mgmr1(0.26~26mM)范围内的葡萄糖浓度的能力，其覆盖了细胞内液葡萄糖浓度测量所需的较低端值。在WO00/16099中z〉开了第三种装置。上述装置使用了竟争检测物，其包含分析物类似物、和能够竟争地结合感兴趣的分析物和分析物类似物的结合剂。从结合剂取代分析物的分析物能力取决于分析物、配体和结合剂的一致性。检测物产生的可测量的响应与分析物结合到结合剂的比例相关联。因此，对于特定的检测物，将存在可以被测量的分析物浓度范围。该范围将通过从结合剂取代分析物类似物的所需的分析物最小浓度、和用来从结合剂取代所有的分析物类似物的分析物最大浓度来限定。配制一种检测物，以在所有感兴趣的分析物浓度范围内产生可测量的响应，尤其是当存在必须被考虑的检测物的其它特性(例如寿命、成本、毒性)时，是困难的和可能昂贵的方法。
发明内容本发明人发现了一种克服浓度范围局限性的方法，在所述浓度范围内的分析是精确的。因此，在第一方面，本发明提供了用于感测分析物浓度的传感器，所述传感器包含适当竟争结合检测物的至少两个不同的变化形式(variant),通过该检测物的变化形式，所述传感器能够精确地感测所需范围的分析物浓度，其中所述检测物的变化形式的每一种都能够精确地感测所需分析物浓度范围的仅仅一部分，并且所述检测物的变化形式被选择用于感测覆盖所述整个所需范围的重叠或邻接浓度范围。合适地，检测物变化形式在它们能够精确地感测的分析物浓度范围内具有最佳灵敏度。优选地，该传感器能够在比任何单一检测物变化形式(assayvariant)能够感测浓度的范围更宽的浓度范围内感测分析物浓度。检测物变化形式能够在宽度上相似或不同、和在IQo值上相似或不同的浓度范围内感测分析物浓度。使用能够在宽度上不同的浓度范围内感测分析物浓度的检测物变化形式的结合是特别有用的，这是因为它能更精密地监测全部浓度范围的某些部分(见下文)。优选地，传感器适于检测或测量在体液内，例如皮下流体中的分析物。希望传感器适合于在体内使用，并且下文将更详细地讨论这一点。优选待通过分析检测或测量的分析物为糖类、更优选为单糖，高度优选为葡萄糖。优选地，传感器能够测量0~35mM葡萄糖范围的至少一部分内的血糖浓度，例如025mM葡萄糖的范围内。例如，一个检测物变化形式可以具有7~8mM的ICs。值，另一个检测物变化形式可以具有大约18mM的ICso值。更优选地，传感器能够在210mM葡萄糖范围内测量葡萄糖浓度。希望在该范围内的剂量-响应曲线尽可能地接近直线。在优选实施方案中，传感器包含两个竟争结合检测物的变化形式，一个变化形式能够感测在015mM范围内的葡萄糖浓度，另一个变化形式能够感测在10~35mM、10~25mM或15~35mM范围内的葡萄糖浓度。优选使用重叠范围，因为每个检测物变化形式在IC5Q值附近具有最佳灵敏度。例如，本发明人已经制备了具有相当于0.08。pr.mMGlc的7.5相位度(phasedegrees)的0~100mM范围内的葡萄糖响应的单个检测物。如果最佳地使用合适的竟争结合检测物的两个变化形式，那么在相当于0.5°pr.mMGlc的0~15mMGlc范围内得到7.5相位度，并且在另一个检测物中在相当于0.5°pr.mMGlc的10~25mM的Glc范围内得到7.5相位度。能够在0~35mM葡萄糖范围内感测葡萄糖浓度的检测物变化形式与能够在0~10mM葡萄糖的较窄范围内感测葡萄糖浓度的检测物变化形式的结合是特别优选的，这是因为在010mM葡萄糖范围内更灵敏的检测物将会降低通常与其它葡萄糖连续监测装置相关联的假血糖过低报警的次数。优选地，传感器还包含能够感测25~50mM范围内的葡萄糖浓度的竟争结合检测物第三变化形式。在优选实施方案中，本发明使用竟争检测物，其中分析物类似物可以在许多位点非共价地结合到分析物结合剂上。通常在分析物类似物的分析物类似部分处形成键。取代分析物类似物所需的分析物浓度将取决于分析物类似物对分析物结合剂的亲合力(整体结合能力)。对于指定的分析物结合剂，影响分析物类似物亲合力的参数包括-分析物类似部分的数目；—分析物类似部分对凝集素的亲合力(单独的结合能力)；-钙浓度；和-分析物类似物的柔性。生理钓浓度不能控制。但是，可以选择其它参数。具有给定亲合力的分析物类似部分的数目越多，配体对分析物结合剂的亲合力越大，取代它所需的分析物浓度越大。类似地，给定数目的分析物类似部分的亲合力越大，配体对分析物结合剂的亲合力越大，取代它所需的分析物浓度越大。因此，通过改变分析物类似部分的数目、一些或全部分析物类似部分的性质和分析物类似物的柔性，可通过检测物变化形式感测的浓度范围可以在较高和较低的分析物浓度之间变化。因此，可以使用检测物变化形式的结合，每个所述检测物变化形式包含对于分析物结合剂具有不同亲合力的分析物类似物，选择所述检测物变化形式使得单个检测物变化形式的范围重叠或邻接且，当放在一起时，覆盖感兴趣的分析物浓度的全部范围。因此，在优选实施方案中，每个竟争结合检测物包含分析物结合剂；和包含至少一个分析物类似部分的分析物类似物；其中分析物结合剂结合分析物类似物的至少一个分析物类似部分以形成复合物，所述分析物从所述复合物取代分析物类似物，和其中不同检测物的区别在于分析物类似物包含的分析物类似部分的数目或性质。本领域技术人员应当理解检测物变化形式除了具有不同的分析物类似物之外，其它方面也可以不同。例如，可以使用不同的分析物结合剂。检测优选地，检测物变化形式产生可与分析物浓度相关联的可测量的光学信号，例如光能激发产生荧光。合适的检测技术包括FRET、荧光能量转移、荧光偏振、荧光猝灭、磷光、发光增强、发光猝灭、衍射、或等离激元共振。结合检测物产生光学信号应该优选为可逆的，以^t可以实现波动水平分析物的连续监测。该可逆性是使用结合检测物形式的特别优点，在其中不消耗检测物组分。优选地，使用基于接近性的信号产生/调制部分对来产生可检测的或可测量的光学信号。当使所述对的第一元与所述对的第二元紧紧地接近时，产生或调制信号。在优选实施方案中，用一个基于接近性的信号产生/调制部分对来标记分析物结合剂，并且用另一个基于接近性的信号产生/调制部分对来标记分析物类似物，并且当分析物类似物和分析物结合剂形成复合物时和当分析物从复合物取代分析物类似物时，在信号中存在可检测的差异。优选地，基于接近性的信号产生/调制部分对为能量供体部分和能量受体部分对。能量供体部分和能量受体部分也分别指供体和受体发色团(或光吸收物质)。不发射荧光的能量受体称为猝灭部分。在这种情况下，用能量供体和能量受体部分对中的一个来标记凝集素，用能量供体和能量受体部分的另一个对来标记分析物类似物。信号中可检测的差异对应于在从能量供体部分到能量受体部分的能量转移中的可检测的差异。更优选地，分析物类似物具有能量受体部分，和分析物结合剂具有能量供体部分合适地，本发明的传感器引入了使用FRET技术产生光学读出的检测物。在优选实施方案中，每个竟争结合检测物的变化形式包含用第一光吸收物质标记的分析物结合剂；用第二光吸收物质标记并包含至少一个分析物类似部分的大分子；其中分析物结合剂缀合大分子的所述至少一个分析物类似部分以形成复合物，所述分析物从所述复合物取代所述大分子，和其中所述复合物能够吸收光能，所述被吸收的光能能够在一种光吸收物质和另一种光吸收物质之间被非辐射地转移，与当所述分析物从所述复合物中取代所述大分子时它们的所述荧光特性相比当所述大分子存在于所述复合物中时所述光吸收物质的荧光特性随后具有可测量的变化，和其中通过可以进行荧光寿命或荧光强度测量。可以通过相位调制技术测量荧光寿命。当将检测物用于体内时，希望供体在550到大约700nm处发荧光，受体在大约650nm处吸收光。这避免了供体荧光和体内较短波长的自身荧光之间的重叠。AlexaFluor594，(例如作为琥珀酰亚胺酯)是用于体内的具有合适发射光镨的能量供体部分。该染料在594nm处吸收并在620nm处发荧光。在WO05/059037中描述的HMCV染料是用于本发明的合适的能量受体部分。这些染料是稳定的碳正离子。一个例子是六曱氧基-结晶紫琥珀酰亚胺酯(HMCV-1)。作为可替代方案，可以将QSY21tm用作能量受体部分，将AlexaFluor594tm用作能量供体部分。可以进行荧光寿命或荧光强度测量。可以通过相位调制技术测量荧光寿命(下文讨论)。在优选实施方案中，用AlexaFluor594TM标记分析物结合剂作为能量供体部分，用HMCV-1标记分析物类似物作为能量受体部分，并且通过相位调制技术测量荧光寿命。在这种类型的检测物中，保持检测物组分的物质优选为能量供体和能量受体部分提供足够的空间，以便在彼此不结合时将其分开使得可以终止能量转移。分析物结合剂优选地，分析物结合剂为凝集素。术语"凝集素"包括不明显地涉及糖类代谢的和不属于任何免疫球蛋白主类的任何缀合糖的蛋白。凝集素通过糖类识别域(carbohydraterecognitiondomains(CRDs))表现出对糖类的选择性结合。凝集素以单体或多聚体形式天然存在，后者通常包含许多子单元，每个子单元具有几个CRDs。因此，当分析物为糖类时使用凝集素分析物结合剂是特别合适的。上述基于FRET的体系基于伴刀豆球蛋白A(ConA)作为葡萄糖结合剂。伴刀豆球蛋白A源于植物的凝集素。在分析条件下伴刀豆球蛋白A不是长期稳定的(参见要求GB0426823.1的优先权的同时提交的申请)。另外，伴刀豆球蛋白A是有毒的和可能产生免疫性的(但是，它以在人体中被认为是安全的小量用于葡萄糖分析)。上面提及的我们同时未决的申请基于获悉需要发现不具有与ConA相关的缺点的葡萄糖缀合部分。已经研究了可替代的葡萄糖结合部分的使用，并且令人吃惊地发现，动物凝集素、尤其是人类凝集素可以用作葡萄糖结合部分。因此，凝集素优选为动物凝集素，尽管不排除使用植物凝集素例如ConA。凝集素优选为C-型(钓依赖型)凝集素。动物凝集素优选为脊推动物凝集素，例如哺乳动物凝集素，更优选人类或人源化凝集素。但是，作为可替代方案，它可以是鸟凝集素、鱼凝集素或无脊推动物凝集素例如昆虫凝集素。合适地，凝集素为源于人体的人类凝集素。作为可替代方案，凝集素可以是重组制造的凝集素。作为另外的可替代方案，凝集素可以是人源化的动物凝集素，例如人源化的牛凝集素。这应用于存在相应的人类凝集素的情况。可以以类似于抗体的方式人源化凝集素。合适地，凝集素为多聚体形式。多聚体凝集素可以源于人或动物体。作为可替代方案，凝集素可以为单体形式。可以通过重组法或通过破坏在源于人或动物体的天然多聚体凝集素中的子单元之间的结合来形成单体凝集素。在US6232130中描述了上述的例子。优选地，凝集素具有三个或更多个CRDs。更优选地，凝集素具有6、9、12、15或更多个CRDs。优选地，凝集素为胶原凝素(胶原状的凝集素)。这些是具有胶原状序列(Gly-Xaa-Yaa三联体(triplet))的C型动物凝集素。MBL是C型胶原凝素而伴刀豆球蛋白A是C型凝集素。可以通过胶原酶的作用来制备单体胶原凝素CRDs。优选地，凝集素为甘露糖缀合凝集素、胶固素或胶原凝素-43(例如牛CL-43)(全血清胶原凝素)或肺表面活性蛋白(肺胶原凝素)。已经证明甘露糖缀合凝集素(也被称为甘露聚糖缀合凝集素或甘露聚糖缀合蛋白质，MBL，MBP)例如人类MBL是特别有益的。MBL为在"花束，，(bouquet)排列中包含几个(通常是3~4个(MALDI-MS)，尽管很可能出现1~6个的分布(SDS-PAGE))子单元的胶原状防御分子(defencemolecule),每个所述子单元由三个相同的多肽组成。每个子单元具有大约75kDa的分子量，并可以任选地与一个或多个MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASPs)复合。每个多肽包含CRD。因此，每个子单元存在三个糖类结合位点。三聚MBL和四聚MBL(其为存在于人血清中的主要形式，Teillet等人，JournalofImmunology,2005，2870-2877页)分别存在九个和十二个糖类结合位点。MBL作为先天免疫系统的一部分天然地存在于体内，其中它结合覆盖在细菌表面的甘露糖部分。人类MBL是无毒的并且对人是不产生免疫性的。期望其它物种的MBL是产生免疫性的但对人类是无毒的。人MBL是以源于人体的形式和以重组制造的形式可商业得到的。在被认为对传染性疾病具有增加易感性的MBL缺乏患者的治疗中将它用作替代治疗。合适地，凝集素基本上是三聚和/或四聚形式的MBL。如上说明，认为三聚MBL和四聚MBL是天然地存在于人血清中的主要的多聚体形式。作为可替代方案，凝集素可以是选自SP-A和SP-D的肺表面活性蛋白。这些蛋白与MBL相似。它们是在先天宿主防御功能(host-defencefunction)中作为钾依赖型糖缀合蛋白质的水溶性的胶原凝素。SP-D也结合脂质。SP-A具有与MBL相似的"花束型"结构(Kilpatrick，D.C.(2000)HandbookofAnimalLectins,37页，JApplPhysiol51,1-8，AmJRespirCellNolBiol4，88-94)。SP-D具有四聚体的"X，，结构，在"X"的每一端具有CRDs。其它合适的动物凝集素为如下所示的那些PC-凝集素(US20030216300、US20040265898)*CTL-l(US179528/10)角质形成细胞膜(Keratinocytemembrane)凝集素(ParfuemerieundKosmetik74,164-80)CD94(EurJImmunol25,2433-7)參P35(又名人类L-纤维胶凝蛋白(ficolin)、一组凝集素)(ImmunolLett67,109-12)ERGIC國53(又名MR60)(Mo1BiolCell,7,483-93)HIP/PAP(EurJBiochem267，1665-71)參CLECSF8(EurJImmunol34,210-20)DCL(凝集素组)(申请No.00231996/US)GLUT家族蛋白，尤其是GLUT1、GLUT4和GLUT11(PNAS97，1125-30)其它合适的动物凝集素列于"HandbookofAnimalLectins:PropertiesandBiomedicalApplications",DavidC.Kilpatrick，Wiley2000的附录A、B和C。如上所述，可以将不同的分析物结合剂用于不同的检测物变化形式。Teillet等人(J.Immunol.,2005，2870-2877页)证明三聚(9CRDs)MBL对糖类的结合不如四聚(12CRDs)MBL强。使用具有不同凝集素的检测物，或者如此处的可以改变不同MBL多聚体的情况，以用以改变灵敏度。因此，可以通过具有不同凝集素分析物结合剂来区分不同的检测物变化形式。不同的凝集素分析物结合剂优选为不同的MBL类，例如具有不同数目CRDs的MBL类(例如上述的9CRDs和12CRDs)。优选如上所述地标记分析物结合剂。分析物类似物分析物类似物优选为葡萄糖似物。分析物类似物优选包含结合到分析物结合剂的结合位点的多个糖类或糖类模拟的分析物类似部分。术语"糖类"包括蔗糖。合适的糖类的模拟部分包括肽，例如模拟N-乙酰基葡糖胺的角蛋白肽(SFGSGFGGGY)。已经表明角蛋白肽可以抑制MBL(Mantacto等人2001J.Immunol.166，4148-4153)。合适地，糖类分析物类似部分为单糖或寡糖(寡聚物)。分析物类似物本身可以为寡糖(见下文)。合适的单糖为任选衍生的丁糖、戊糖、己糖、庚糖或较高的同源的醛糖或酮糖，例如任选衍生的D-葡萄糖、D-甘露糖、N-乙酰基-D-葡糖胺、L-岩藻糖、D-果糖、D-塔格糖或D-山梨糖醇。合适的低聚物可以为直链的或带支链的均低聚物或混合的低聚物，例如包含2~50个糖单元。优选的糖基化为1—6或1—2，因为推测1—3和1—4糖基化会妨碍MBL缀合。例如，推测壬(1—6)-a-葡萄糖(葡聚糖1500Da)比1,3-p-D-葡萄糖(如，laminanarihexaose)对MBL具有更高的亲合力。合适的寡糖包括潘糖(pannose)、麦芽糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、D-明串珠菌二糖、伊尔糖(erlose)、D-帕拉金糖(D-palatinose)、D-水i^二糖或1~250kDa的葡聚糖(优选l40kDa的葡聚糖，例如lkDa、1.5kDa、5kDa、6kDa、10kDa、12kDa、20kDa、25kDa或40kDa的葡聚糖)。优选地，至少一个检测物变化形式的分析物类似部分选自D-果糖、D-明串珠菌二糖、N-乙酰基-葡糖胺、D-甘露糖、L-岩藻糖、N-乙酰基-甘露糖胺、D-阿拉伯糖、肌醇、D-塔格糖、伊尔糖、D-葡萄糖、D-帕拉金糖、D-松二糖、D-核糖、D-山梨糖醇。合成的带支链的糖类的例子为用于构建树枝状高分子(例如源于具有胺连接基的三糖的TRIS，如下所示)的树枝状高分子"楔"。该"楔"能够缀合在蛋白例如HSA(人血清白蛋白)上，例如通过双官能团胺连接基。本发明人已经发现普通糖类部分对MBL的亲合力如下D-甘露糖、N-乙酰基-D-甘露糖胺、D-果糖、D-明串珠菌二糖、伊尔糖、N-乙酰基-D-葡糖胺、L-岩藻糖》肌醇、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、D-帕拉金糖、D-松二糖、D-山梨糖醇、D-核糖、D-塔格糖〉D-来苏糖》乳糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖。本领域技术人员应当理解可以使用该列表选择变化形式被分析物，其中分析物类似物包含对分析物结合剂具有不同亲合力的分析物类似部分。例如，具有甘露糖分析物类似部分的分析物类似物对作为分析物结合剂的MBL具有比具有相同数目的葡萄糖分析物类似部分的分析物类似物更高的亲合力。因此，包含甘露糖的分析物类似物将需要较多的葡萄糖分析物以被从MBL中取代，并且该检测物与使用包含分析物类似物的葡萄糖的检测物相比，将在更高的葡萄糖浓度范围内具有最佳灵敏度。本领域技术人员还应当理解可以制备包含多于一种类型的分析物类似部分的分析物类似物。这使得能更大地控制最佳葡萄糖敏感度范围。优选地，至少一个检测物变化形式的分析物类似部分包含至少一个葡萄糖部分和/或至少一个N-乙酰基葡糖胺部分和/或至少一个甘露糖部分，因为这些部分对MBL和其它动物凝集素具有高的亲合力。最优选地，至少一个检测物变化形式的分析物类似部分为D-葡萄糖。优选地，分析物类似物包含大分子。优选地，大分子为天然聚合物。更优选地，大分子是直链的。对于分析物类似物，三种不同类型的结构特别有意义。首先，分析物类似物可以为糖类-蛋白缀合物或糖类-树枝状高分子缀合物，因此大分子为蛋白或树枝状高分子。在两者的任一情况下，可以用糖类模拟部分代替糖类部分作为分析物类似部分、或除糖类部分之外作为分析物类似部分。用于缀合物中的优选蛋白是具有至少10kDa分子量的人类蛋白，优选至少20kDa。蛋白优选具有非球状的整体三级结构。认为这辅助在多于一个的结合位点处结合，导致高的亲合力。单克隆抗体例如赫赛汀(herceptin)和RemicadeTM(具有带有非球状"Y，，形整体三级结构的几个球状域的免疫球蛋白)是合适的。其它可替代的合适的蛋白为人凝血酶、人乳铁蛋白和因子XIII。作为糖类-蛋白缀合物的另一个例子，蛋白可以是源于凝集素的蛋白，例如具有除去CRDs的凝集素。合适地，缀合物可以为糖类-白蛋白缀合物。例如，缀合物可以为甘露糖-HSA缀合物或甘露糖-BSA(牛血清白蛋白)缀合物。但是，该类型缀合物是非优选的，这是因为如上所述已经发现对MBL的缀合依赖于钙浓度。在生理钓浓度下，发现具有20个甘露糖残基的70kDa甘露糖-HSA缀合物不与MBL缀合。对钩浓度的依赖随甘露糖基化的增加而降低。本领域技术人员应当知道这种类型缀合物的合成路线。作为例子，N-异氰硫基-4-氨基苯基-0-a-D-吡喃甘露糖苷(Man-ITC)可以缀合在HSA上。在优选实施方案中，在每个竟争结合检测物变化形式中，大分子为HSA且分析物类似部分为葡萄糖或甘露糖，并且竟争结合分析的每个变化形式包含含有不同数目葡萄糖或甘露糖部分的HSA-葡萄糖或甘露糖缀合物。合适地，在该实施方案中，分析物缀合剂为MBL。用于本发明的树枝状高分子优选具有胺官能化的、羧酸官能化的或羟基官能化的表面。优选地，树枝状高分子为聚酰胺胺(PAMAM)或聚丙烯亚胺(polypropylenimine)(DAB)型。优选地，分子量小于60kDa，例如约2~10kDa。该树枝状高分子可以通过肾清除(Kobayashi等人,2004，J.Mag.Reson.Imaging20(3)512-518)。第二，分析物类似物可以为糖类和/或糖类模拟部分(二者都包括在在此使用的术语"多糖"内)的任意衍生的聚合物。葡聚糖(葡萄糖聚合物，聚(1—6)-a-葡萄糖)极强地缀合到MBL和类似的凝集素上。本发明人认为这是大量葡萄糖残基(在70kDa葡聚糖中大约430个残基)和葡聚糖的柔性的结果。因此，从MBL中取代葡聚糖所需的葡萄糖的浓度是高的。基于葡聚糖和MBL的葡聚糖检测物变化形式可以最佳地测量约30mM的葡萄糖浓度。这比血液中正常的5mM的葡萄糖浓度高得多。该检测物变化形式可以测量0~10mM的葡萄糖浓度，其具有全部相位响应(phaseresponse)的仅约三分中的一个的灵敏度。因此，本发明人寻找可以不太强地缀合MBL和类似凝集素的可替代的分析物类似物，以便得到在0~10mM葡萄糖范围内可具有多于三分中的一个全部相位响应的检测物变化形式。本发明人发现用高碘酸盐(其在2和3位或3和4位碳之间氧化地打开的葡萄糖吡喃糖环以形成二醛)处理葡聚糖可以用来降低葡聚糖对MBL和类似凝集素的亲合力。这似乎是因为如上说明的MBL缀合到葡萄糖的3和4位平伏羟基。可以以其它方式(例如通过氧化、还原、烷基化、取代、糖基化或酯化)使3和4位羟基失活。本发明人非常惊奇地发现高碘酸盐处理的葡聚糖-MBL缀合没有被生理钾浓度阻止。这和上面讨论的甘露糖-HSA缀合物的MBL缀合相反。本以为高碘酸盐处理的葡聚糖-MBL缀合会被生理钙浓度阻止，尤其是因为葡聚糖的葡萄糖部分对MBL具有比甘露糖部分小的亲合力。理论上，每个葡萄糖单元能够消耗两个当量的高碘酸盐(每个二醇一个)。但是，已经发现对于70kDa葡聚糖1100当量的高碘酸盐是合适的。用氨或胺处理二醛随后还原(例如用氰基硼氢化钠)可以用来得到氨化的葡聚糖。还可以使用其中胺化二醛随后任选地催化氢化以得到游离胺的方法。在这种情况下千胺是可用的胺。4吏用分光光度技术，可以用节胺衍生的胺化葡聚糖来估计高碘酸盐裂解的程度。如果通过催化氢化除去千基，可以将能量供体或能量受体部分连接到剩余的胺上。作为替代方案，如上所述，可以合成基于多糖的分析物类似物，其包含对于MBL和类似凝集素具有不同亲合力的不同的糖或糖模拟分析物类似部分。在Ballerstadt等人,DiabetesTechnology&Therapeuticsvol.6，no.2，2004中公开了在伴刀豆球蛋白AFRET检测物中用甘露糖部分衍生葡聚糖，以调节葡萄糖的检测范围。半乳糖以非常低的亲合力缀合到MBL。因此，包含半乳糖部分(例如半乳糖衍生的葡聚糖)的分析物类似物对MBL具有比未衍生的分析物类似物更低的亲合力。N-乙酰基-葡糖胺对MBL具有高的亲合力。因此包含N-乙酰基-葡糖胺部分(例如GlcNAc衍生的直链淀粉)的分冲斤物类似物对MBL具有比未衍生的分析物类似物更高的亲合力。在该实施方案中，分析物类似物优选地选自任选地衍生的葡聚糖、甘露聚糖、直链淀粉、支链淀粉、糖原、透明质酸酯(盐)、软骨素、肝素、糊精、菊粉、木聚糖、果聚糖和壳多糖。由于半乳糖对MBL具有非常低的亲合力，所以半乳糖的未衍生的聚合物例如琼脂糖作为分析物类似物不是优选的。本领域技术人员应当知道用糖类部分衍生多糖的方法。作为例子，可以方便地衍生胺官能化的多糖(例如氨基葡聚糖，其是由CarboMer，SanDiego，California,USA,Cat.No.5-00060或MolecularProbes,Eugene,Oregon,USA,CatNo.D1862可商业得到的)或上面提及的胺化葡聚糖。作为替代方案，可以用二乙烯基砜连接多糖中的醇基和糖类或糖类模拟部分中的胺基。在EP594772中公开了衍生葡聚糖的方法。用于衍生多糖的合适的糖类分析物类似部分的例子为如上关于糖类-蛋白和糖类-树枝状高分子缀合物所述的那些。在优选实施方案中，分析物为葡萄糖，并且在竟争结合检测物的每个变化形式中大分子和分析物类似部分一起形成衍生的葡聚糖，并且竟争结合分析的每个变化形式包含如此衍生的葡聚糖使得结合到葡聚糖中的分析物类似部分的数目是不同的。合适地，在该实施方案中分析物结合剂为MBL。在特别优选的实施方案中，在每种情况下衍生的葡聚糖任选地为高碘酸盐处理的葡聚糖。第三，分析物类似物可以为合成的聚合物。人造聚合物的合成，而不是蛋白或多糖的衍生，使得易于控制聚合物的参数(例如分子柔性、水溶性、分子量、糖类或糖类模拟部分的性质、糖类或糖类模拟部分的数目、基于接近性的信号产生/调制部分的数目)以改善检测物性能并提供合适的检测物变化形式。与多糖相比，合成聚合物具有可以独立于聚合物长度地控制糖类分析物类似部分数目的优点。此外，与葡聚糖相比，在聚合物中使用不含环的单体例如丙烯酸2-羟乙酯(HEA)得到增加的分子转动柔性。不希望被该理论限制，本发明人认为基于接近性的信号产生/调制部分接近于结合部分以产生强信号是至关重要的。球状配体将结合部分和基于接近性的信号产生/调制部分集中在球面上，使得它们是接近的。在直链葡聚糖中，主链由结合部分组成，并因此不能控制结合是接近或远离基于接近性的信号产生/调制部分。在合成聚合物中这可以通过将结合部分接近地定位于基于接近性的信号产生/调制部分来控制。在该实施方案中，分析物类似物优选为具有糖类或糖类模拟的分析物类似部分侧链的非糖的柔性的水溶性聚合物。术语"柔性的"包含能够显著地单体间转动的聚合物。优选地，除了糖类或糖类模拟的分析物类似部分和基于接近性的信号产生/调制部分侧链之外(下面讨论)，聚合物不包含大基团(例如环结构、叔丁基或其它空间位阻的大基团)。优选地，该聚合物在主链结构中具有很少的双键(例如少于10%)。合适地，该聚合物不具有球状三级结构，尽管它们可能具有这种结构。优选地，聚合物是无支链的(与上面讨论的树枝状高分子不同)。这改善了聚合物的柔性。但是，聚合物可以是在一定程度上支化的或交联的，前提是这不会导致水凝胶的形成。例如，在100kDa总分子量的聚合物中，1~5个支链是可以接受的。术语"水溶性的，，包含在室温下具有至少4mg/ml水溶解度的聚合物，优选至少25mg/ml，更优选至少50mg/ml，例如至少100mg/ml。在体温下溶解度将更高。聚合物是水溶性的是重要的，以便当用于下面讨论的体内传感器时它可以溶于组织液。甚至当被结合到糖结合分子例如MBL时聚合物应该是水溶性的。优选地，聚合物包含不多于1到5种类型的单体单元，更优选不多于3种单体单元。合适地，聚合物为包含具有糖类或糖类模拟部分侧链的第一单体单元残基和具有基于接近性的信号产生/调制部分侧链的第二单体单元残基的共聚物。作为替代方案或附加方案，可以使用具有糖类或糖类模拟部分侧链和基于接近性的信号产生/调制部分侧链的单一类型的单体单元残基。优选使用第一和第二单体单元，这是因为可以独立地控制糖类或糖类模拟部分与基于接近性的信号产生/调制部分的量。优选地，共聚物为无规共聚物。但是，也可以为交替共聚物。具有大嵌段的嵌段共聚物的使用不是优选的。但是，可以使用具有低分子量(例如1~3kDa)嵌段的嵌段共聚物。优选地，当用于具有MBL作为糖结合分子的检测物时，聚合物在OmM葡萄糖下结合到MBL至少相当于氨基葡聚糖结合强度的50%，更优选至少和氨基葡聚糖的强度一样，但是易于被抑制。在0~35mM葡萄糖范围内，尤其是在215mM范围内，聚合物很容易地被抑制是特别重要的。这提供比使用氨基葡聚糖作为葡萄糖似物的相似检测物更灵敏的在特定生理意义的葡萄糖浓度内的检测物。可以存在具有糖类或糖类模拟部分的多于一种类型的单体单元残基。糖类或糖类模拟部分可以是不同的，对MBL和类似凝集素具有不同的亲合力。合适地，每个第一单体单元(或单个单体单元)为糖类或糖类模拟部分的含双键的衍生物。但是，每个第一单体单元(或单个单体单元)可以为包含官能团的含双键分子，在聚合后糖类或糖类模拟部分可以合适地连接到所述官能团上。优选地，糖类或糖类模拟部分的含双键的衍生物为糖类或糖类模拟部分的含烯丙基或乙烯基的衍生物。其它合适的糖类或糖类模拟部分的含双键衍生物包括烯丙基衍生物的同系物，例如3-丁烯基或4-戊烯基衍生物，或在4位具有糖类或糖类模拟部分的苯乙烯衍生物。糖类或糖类模拟部分的其它合适的含双键的衍生物包括基于HEA、甲基丙烯酸2-羟乙酯(HEMA)或乙烯醇(VA)的衍生物。糖类或糖类模拟部分可以连接到第一单体单元(或单个单体单元)的胺、酸、醇和/或砜官能团上。例如，可以使用二乙烯基砜连接单体单元中的醇基和糖类或糖类模拟部分中的胺基。当糖类为甘露糖时，不应该通过C3-OH或C4-OH基团连接，因为这些基团对MBL的结合是重要的。在这种情况下，二乙烯基砜连接可能是不合适的。可以通过二糖的还原胺化产生氨基衍生的糖部分。这使糖部分在其异头位置(C1)处连接。可以通过费歇尔(Fischer)苷化将糖类或糖类模拟部分连接到醇基(例如在HEA中的)上。第一单体单元(或单个单体单元)不必需包含双键。用于共聚物的合适的糖类的例子如上述关于糖类-蛋白缀合物讨论的。合适地，每个第二单体单元(或单个单体单元)为包含官能团的含双键的分子，在聚合后基于接近性的信号产生/调制部分可以合适地连接到所述官能团上。合适的官能团包括酸、醇和/或砜。聚合后的连接有助于使昂贵的能量供体和能量受体部分的损耗最小化。但是，第二单体单元(或单个单体单元)可以包含基于接近性的信号产生/调制部分。在这种情况下，应用上面讨论的合适的可聚合的基团和连接。在优选实施方案中，每个第二单体单元为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺或其衍生物。在优选实施方案中，每个单个单体单元为含双键的、含糖类或糖类模拟部分的赖氨酸衍生物。例子如下所示(多步反应路线)在该反应路线中原料为曱基丙烯酰基-L-赖氨酸，得自PolysSciencesEurope(Eppelheim，Germany).聚合后，a氛基可以连接到基于接近性的信号产生/调制部分。优选地，聚合物还包含不具有糖类或糖类模拟或基于接近性的信号产生/调制部分侧链的第三单体单元残基。这有助于增加柔性。通过使用无空间位阻的第三单体单元例如HEA增加柔性。还通过使用不带电荷的第三单体单元增加柔性。不包含第三单体单元的聚合物具有大量带正电荷的铵基，需要使其失活以最小化由静电排斥导致的柔性降低。聚合物内可以包含多于一种类型的第三单体。优选地，每个第三单体单元为含亲水基团例如羟基的含双键的分子。不优选第三单体单元为亲油的含双键分子例如苯乙烯。在优选实施方案中，每个第三单体单元为HEA、乙烯基吡咯烷酮、MMA、HEMA、乙烯醇和/或乙二醇。但是，本领域技术人员应当理解存在许多其它可以使用的含亲水基团的含双键分子。合适地，单体单元通过加成聚合进行反应。该加成聚合反应可以是自由基引发的，例如使用过二硫酸钾(PPS)或其它过氧化化合物。其它的可能性为缩合聚合(例如离子缩合聚合)、开环聚合和原子转移自由基聚合(ATRP)。本领域技术人员应当理解单体单元的性质将取决于所需的聚合方法(例如对于缩合聚合反应，含双键的单体单元是不必需的)。合适地，在加入引发剂前混合单体单元。优选地，聚合反应进行不到两天。聚合时间的长短可以用来控制共聚产物的分子量。合适地，聚合反应在无氧条件下发生。合适地，聚合反应在室温下进行。当不使用单个单体单元时，第一单体单元优选以2070wto/o的量存在于反应混合物中，更优选以30~50wt。/o的量。当使用第三单体单元时，它们优选以515wt。/。的量存在于反应混合物中。应当理解聚合物的组成不能准确地反映存在于反应混合物中的单体单元的量。这是由于其它因素(例如位阻和溶解度)的影响。在优选实施方案中，分析物为葡萄糖，并且在竟争结合检测物的每个变化形式中，大分子和分析物类似部分一起形成如上所述的聚合物，并且通过在聚合物中的分析物类似部分的数目或特性来区分不同的检测物变化形式。优选的聚合物包括带有甘露糖的聚合物，例如那些由烯丙基-a-D-吡喃甘露糖普作为第二单体单元(对于不同变化形式的聚合物，具有不同量的烯丙基-a-D-吡喃甘露糖苷)制备的聚合物。在该实施方案中，分析物结合剂优选为MBL。还应当注意分析物类似物可以由一起作为分析物类似物的两种或更多种单独的实体组成。特别地，分析物类似物可以由具有至少两个分析物类似部分的第一实体和为分析物结合剂例如凝集素的第二实体组成。例如，可以将受体标记的MBL和供体标记的MBL与作为模板的未标记的葡聚糖或未标记的合成聚合物一起使用，以使受体标记的MBL和供体标记的MBL彼此接近，使得发生FRET。(使用ConA的例子由Gestwicki等人在(2002)ChemistryandBiology9，163页中给出)。优选地，如上所讨论地标记分析物类似物。如上述关于糖类或糖类模拟部分所述的，基于接近性的信号产生/调制部分可以连接到分析物类似物。例如，可以通过直接的二乙烯基砜连接或通过胺化(如上所述)随后偶联实现葡聚糖的标记。当将胺衍生的葡聚糖用作分析物类似物时，在能量供体或能量受体部分的连接期间，必须小心以避免交联，因为这可能导致不希望的沉淀。在EP594772中公开了用DVS衍生葡聚糖以最小化交联的方法。分析物类似物应该具有足够高的分子量以防止从传感器中漏出，分析物类似物具有25~250kDa的重量，更优选40~250kDa，还更优选70~150kDa，高度优选100~120kDa,例如优选110kDa。基于110kDa葡聚糖的分析物类似物是尤其优选的。分析物类似物和分析物结合剂是任选地结合在一起的。传感器构造优选地，通过具有允许分析物扩散但不允许检测物组分扩散的孔径的材料保留检测物组分。但是，这种选择性可以通过其它方式实现，例如通过使用允许不带电荷的物质扩散的材料。优选地，传感器的不同检测物变化形式包含在传感器的单独的室中。室可以是宏观的或微观的并且优选彼此充分地靠近以便通过单个测量装置同时讯问。但是，检测物变化形式可以包含在同一个室中，尽管这是不优选的。优选地，通过壳或基质材料保留检测物组分。可以将分析物类似物和/或分析物结合剂接枝到该材料上。更优选地，如在WO00/02048中所描述的，材料为可生物降解的。任选地，如在WO03/006992中所描述的，传感器可以包含由可生物降解材料的壳体保留的微粒子(例如两种或更多种类型粒子的，或包含检测物变化形式的两种或更多种基质物质的混合物)。在优选实施方案中，通过包嚢检测物组分的可生物降解材料的壳包嚢保留检测物组分，同时使葡萄糖与检测物组分接触，并且可生物降解材料包括具有疏水和亲水单元的共聚物，如WO2005/110207所述。共聚物优选为无规共聚物。共聚物优选具有至少5.0xlO"VmVs的渗透率。术语"渗透率，，用来指可以实验测量的分析物(葡萄糖)通过水合共聚物的整体渗透率。优选地，一旦被植入体内，共聚物就在一周到一年的时间里降解，例如30天。对于厚度为5jim的普通聚合物来说，这相当于0.17fim/天的降解速率。对于葡萄糖的流动性，可生物降解材料优选具有不大于25000Da的分子量截留限。更优选可生物降解材料具有不大于10000Da的分子量截留限。疏水单元的重量份数优选占共聚物的10~卯％，更优选占共聚物的10~50%。优选每个亲水单元的分子量为200~10000Da，更优选400~4000Da。优选共聚物的每个亲水单元包含聚乙二醇和二元酸的酯。作为聚乙二醇的替代方案，可以使用乙二醇和丙二醇的混合聚合物，和/或可以用疏水和/或亲水基团取代聚醚主链。作为聚乙二醇的其它替代方案，可以使用聚四氢呋喃(聚-THF)。优选地，亲水单元包含作为二元酸的对苯二甲酸和/或丁二酸。其它合适的二元酸为草酸、酒石酸、邻苯二甲酸、天冬氨酸、丙二酸和寡聚或聚合二元酸，例如聚(二聚酸-癸二酸)。在一个优选实施方案中，二元酸仅为对苯二甲酸。在可替代的优选实施方案中，对苯二甲酸与丁二酸的摩尔比为l:2~2:1，合适地为1:1。作为可替代方案，共聚物的亲水单元可以包含低聚物。合适的低聚物为曱基丙烯酸羟乙酯(HEMA)、乙烯吡咯烷酮、乙烯醇、糖类、环氧乙烷和/或2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸的低聚物。当亲水单元包含HEMA时，在聚合物中提供可生物降解的连接(例如酯连接，例如对苯二甲酸酯连接)以增加可生物降解性。优选地，每个疏水单元的分子量为400~5000Da。优选地，共聚物的疏水单元包含丁-l，4-二醇和二元酸的酯。作为对丁-l，4-二醇的替代方案，可以使用戊-l，5-二醇或己-l，6-二醇。优选地，疏水单元包含对苯二甲酸和/或丁二酸作为二元酸。在优选实施方案中，对苯二甲酸与丁二酸的摩尔比为1:2~2:1，合适地为1:1。作为可替代方案，疏水单元仅包含对苯二甲酸作为二元酸。其它合适的二元酸如上所述。作为可替代方案，共聚物的疏水单元可以包含甲基丙烯酸甲酯(MMA)的寡聚物、聚氨酯和/或聚酰胺(例如尼龙-6、寡聚-N-叔丁基丙烯酰胺或寡聚-N-异丙基丙烯酰胺)。当疏水单元包含MMA时，在聚合物中提供可生物降解的连接(例如酯连接，例如对苯二甲酸酯连接)以增加可生物降解性。优选的聚合物具有通式aPEG(T/S)bPB(T/S)c，其中"a，，表示PEG链的分子量，"b，，表示PEG(T/S)(聚对苯二曱酸乙二醇酯/聚丁二酸乙二醇酯)在所得的聚合物中的重量份数，"c"表示PB(T/S)(聚对苯二甲酸丁二酯/聚丁二酸丁二酯)在所得的聚合物中的重量份数。该聚合物的例子为600PEGT80PBT20、1000PEGT80PBT20、2000PEGT80PBT20、4000PEGT80PBT20、1000PEGT50PBT50和1000PEG(T/S)60PB(T/S)40(T/S50%)。聚合物是可生物降解的、具有高的葡萄糖渗透率，并在大约25000Da时具有分子量截留性能。在US6383220和EP1247522中公开了一些这些聚合物。共聚物的包膜优选具有1~50jim的厚度。在第二方面，本发明涉及一种制备在此描述的传感器的方法。制备聚合物微嚢的化学方法包括相分离(凝聚)、溶剂蒸发和/或萃取。制备聚合物微嚢的合适的物理方法包括喷雾千燥、喷涂、喷雾骤冷、转盘雾化、流化床涂覆、共挤出(例如固定喷嘴共挤出、离心头共挤出、或浸入式喷嘴共挤出)和平盘涂覆(pancoating)。传感器的使用第三方面，本发明涉及一种使用在此描述的传感器检测葡萄糖的方法，包括将传感器植入哺乳动物皮肤中并使用外部光学装置检测或测量葡萄糖。第四方面，本发明涉及一种使用上述要求保护的传感器检测葡萄糖的方法，包括使用外部光学装置照射存在于哺乳动物皮肤中或皮肤下的所述传感器来检测或测量葡萄糖。优选地，本方法还包含可生物降解材料在传感器中的降解。可以通过注射将传感器引入皮肤内，优选使用注射器，或者通过其它方法，特别是通过W000/02048中描述的任何方法。传感器优选具有适于通过窄规格针注射的尺寸以最小化患者的不适。传感器优选具有20nmlmm的最大尺寸。但是，可以使用具有更大尺寸的杆形传感器。可以将传感器引入到真皮厚度内、或真皮下，或者可以引入到表皮，虽然在后面的情况下，其可能在可生物降解材料降解之前可能由于表皮的生长被排出皮肤。由于传感器位于皮肤内，优选经皮(即，通过皮肤的较上层)检测传感器内产生的光学信号，由此避免可能导致感染的传感器和外部环境之间的任何直接接触的需要。但是，作为替代方案，检测可以通过中空的或透明的装置(例如针或光学纤维)发生，其使传感器被外部光学装置照射而不通过皮肤传递光。一旦传感器置于皮肤内的位置，则可以进行所需次数的葡萄糖测量而没有副作用。这对于糖尿病患者的长期护理是特别有利的，这是因为如果葡萄糖测量越频繁，越可以严格地控制血液中的葡萄糖水平的控制，并且将降低与血糖调节不良相关的病症发展的风险，例如视网膜病、肾病、神经病、普通的微血管损坏和大血管损坏和循环不良。由于本发明的传感器本身不包含讯问检测物读出所需的任何光学元件(这些优选单独提供并位于体外)，所以传感器可以很容易地以具有对患者最小不适感的可注射的形式提供。可以通过供给在能量供体部分的吸收光镨内波长的入射辐射、并测量发射的荧光强度或激发态的寿命，来讯问引入使用FRET技术的检测物的传感器。通常已知的方法为1.稳态测量2.时域寿命测量a.单光子计数b.超高速扫描照相机c.门控检测(Gateddetection)(脉冲取样)d.上转换3.频域寿命测量a.相调制荧光测定法(外差检测)b.相敏检测(零差检测)在Lakowicz,J.R."PrinciplesofFluorescenceSpectroscopy,SecondEdition",1999中可以发现原理的进一步描述。讯问检测物的优选方法为相调制焚光测定法。用于讯问检测物的合适的光学装置(图7)由发光二级管(LED)11组成，其在能量供体部分的发射光镨内发射光。通过激励电路13操作LED,所述激励电路在导致充分相移的频率下调制LED,优选在45。范围内。对于具有3ns寿命的荧光团，优选的频率为50MHz。LED发射的光通过激发滤光片15过滤，并通过二向色分光镜17导向到传感器16，并通过透镜19聚焦在注射的传感器16上的传感器/皮肤上。传感器发射的荧光通过透镜19收集。光经过二向色分光镜并通过发射滤光片21过滤。滤过的光通过透镜23聚焦在检测器25上，在这种情况下为雪崩光电二极管(APD)。APD通过APD偏压电源27反偏压，所述偏压电源通过信号处理和控制单元29控制。来自第一APD的信号通过跨阻放大器31放大，通过带通滤光片33过滤，并通过模拟-数字转换器(ADC)35采样。相应地，LED的调制驱动信号通过第二ADC37采样。在第一ADC35上采集的信号为Yi(t)-Ai*sin(2*7i:*fAt+cpn+cpjAj为从检测物检测的信号的振幅，f为调制频率，他为由供体荧光团引起的相位滞后，^为由电子和光学装置引起的固定相位滞后。在第二ADC37上采集的信号为Y2(t)-A2*sin(2*^*f*t+q>2)A2为LED的调制驱动信号的振幅，且92为由电子装置引起的固定相位滞后。通过比较两个采集的信号并补偿通过电子和光学引入的固定的和已知的相位滞后，信号处理和控制单元驱动由能量供体部分引起的相位滞后通过使荧光计接近皮肤并与传感器对准进行测量。通过使用相位-分析物-校准功能，将相位滞后转换为分析物浓度，例如分析物浓度=A+Bx/(k+x),其中A是不存在分析物时的相位，B是最大响应时的相位，x是所测量的相位，并且k是受体和分析物类似物之间的解离常数。可替代的测量技术为测量荧光强度。在这种情况下，光学装置应该提供在能量供体部分的吸收光镨内波长的第一束入射辐射，和优选提供在能量受体部分的吸收光镨内波长的第二束入射辐射(这适用于能量受体部分也是荧光团的情况)。此外，光学装置应该优选能够在两个不同的波长处测量在传感器中产生的光信号；波长1在能量供体部分的发射光镨内(产生的信号与分析物的测量有关)，并且波长2在能量受体部分的发射光谱内(其可能是分析物信号或内参比或校准信号)。荧光计分别测量下列参数在波长1处(能量供体部分)激发光强度，1(1，0)环境光强度，1(1，1)荧光和环境光结合的强度，1(1，2)在波长2处(能量受体部分)激发光强度，1(2,0)环境光强度，1(2，1)荧光和环境光结合的强度，1(2,2)再次，通过使荧光计接近皮肤并与传感器对准进行测量。当对在传感器中产生的荧光信号进行经皮测量时，必须考虑皮肤对信号的吸收。通过实验发现在400nm~900nm范围内人类皮肤的吸收率最小。提供的最终输出为来自两个荧光团的荧光强度之间的归一化的比，由下列关系式定义(方程1):最终输出=(1(1，2)陽1(1，1))*1(2，0)/(1(2，2)画1(2,1))*1(1，0)(1)优选通过使用校准数据的计算机将如上述方程1给出的来自光学装置(例如荧光计)的最终输出转换为分析物浓度，所述校准数据可以基于在WO00/02048中所述的原理得到。将参照实施例和附图进一步说明本发明，在附图中图1表示人类MBL和HSA甘露糖ELLA检测物体系的葡萄糖剂量响应(实施例1);图2表示人类MBL和高碘酸盐处理的葡聚糖ELLA检测物体系的葡萄糖剂量响应(实施例2)。图3表示人类MBL和合成聚合物ELLA检测物体系的葡萄糖剂量响应(实施例3)。图4表示人类MBL和合成甘露糖共聚物ELLA检测物体系的葡萄糖剂量响应(实施例3)。图5表示人类MBL和合成聚合物FRET检测物体系的葡萄糖剂量响应(实施例9)。图6表示人类MBL和70kDa葡聚糖FRET检测物体系的葡萄糖剂量响应(实施例10);图7表示讯问检测物的合适的光学装置。实施例概要使用下列原料对氨基苯基-a-D-吡喃甘露糖基异硫氰酸酯，牛血清白蛋白-a-D-吡喃甘露糖基异硫氰酸酯(每BSA23摩尔当量甘露糖)，人血清白蛋白，高碘酸钠(Nal04),生物素-N-羟基琥珀酰亚胺，邻亚苯基二盐酸盐(o-phenylenedihydrochloride)，千胺，氨，氰基硼氢化钠(NaBH3CN)(Sigma-Aldrich);NuncF96MaxiSorp板(Nunc，Denmark);PD-10柱，Streptavidin-HRP(AmershamBioscience);葡聚糖(Pharmacosmos,Denmark);甘露聚糖缀合凝集素(由几种来源得到)；透析管Spectra/Por(SpectrumLaboratories,Inc.,California,USA)。烯丙基a-D-吡喃葡萄糖苷，烯丙基2-乙酰氨基-2-脱氧-a-D-吡喃葡萄糖香(GlyconBiochemicals，Germany)。烯丙基a誦D-吡喃半乳糖苦(Sigma画Aldrich)。PBS为20mM的磷酸盐、150mM的NaCl，pH值为7.4，且TBS为20mM的TRIS、150mM的NaCl、1.25mM的CaCl2，除非另作i兌明pH值为7.4。缩写MBL，甘露聚糖缀合凝集素；PBS,磷酸盐緩冲盐水；TBS，TRIS緩冲盐水；ELLA，酶联凝集素检测物。生物素化的MBL的制备将生物素-NHS(20fiL，在DMSO中的7mgmL-1，每MBL单体约10~15摩尔当量)加到MBL(0.530mg)的PBS(3mL)溶液中。轻轻地搅拌溶液2h，并且然后转移到透析管(MWCO10-12k)中，并用TBS(2xlL)渗析24h。不需要进一步纯化，使用所得的生物素化的MBL(在TBS中0.2mgmLT1)。MBLELLA检测物在此4吏用的TBS緩冲液为TRIS(20mM)、NaCl(150mM)、CaCl2(20mM)，pH值为7.4。用每个都具有在TBS中的抗原(例如HSA-甘露糖，氨基葡聚糖等)(100fiL，20ngmL,的两个柱(column)在5。C下包被96孔微量滴定板过夜。然后通过加入在TBS(150jiL)中的l%(w/v)HSA阻挡剩余的结合位点。将葡萄糖(从100mM到OmM)在生物素化的MBL(2ngmL")中的稀释液加到100nL的总体积。培养2h后，清空并清洗(2x200jiL的TBS)该板。然后洗孔(2x200^L的TBS)。加入在TBS中的0.1。/。(v/v)的Streptavidin-HRP(lOOnL)。随后培养lh，清空并清洗(3x200jiL的TBS)该板。通过加入培养基溶液(lmg的邻亚苯基二盐酸盐)使HRP的存在可见，并在2分钟后用1N的H2S04淬灭。通过在630nm处消除背景，读取在490nm处的吸光率来确定显色。实施例1:甘露糖基化的HSA以如下方式制备四种缀合物。将溶于20mM碳酸盐緩冲液(0.4mL，pH值为9.2)的HSA(10mg)加到四个2mLEppendorf小瓶的每个中。通过制备四种溶液以15x、30x、60x和120x的摩尔过量加入对氨基苯基-(i-D-吡喃甘露糖基异硫氰酸酯(Man-ITC，1.6mL)。将Man國ITC(11.9mg)溶于DMSO(0.1mL)和pH值为9.2的20mM碳酸盐緩冲液(3.9mL)中。将该溶液(对应于120x的摩尔过量)的等分检测物(1.6mL)加到含有HSA(0.4mL)的Eppendorf小瓶中。将剩下的Man-ITC溶液稀释到两倍体积，并且将来自稀释体积的等分检测物(1.6mL)加到另一个Eppendorf小瓶中。重复该步骤直到制备四种不同HSA:Man-ITC的混合物。四种反应混合物在室温下在震动器中培养过夜。所得的糖缀合物(glycoconjugates)在PD-10柱上纯化。在纯化过程中，将緩冲液变为TBS。使用MALDI-TOF-MS确定缀合度。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表l:使用MALDI-TOF-MS确定缀合度。在半高度附近测定峰高度估计值。使用下式测定甘露糖单元的数目(在MS-66500中的峰)/313。当在竟争结合检测物中使用时，发现不同的糖缀合物对MBL具有不同的亲合力，并且因此在不同的葡萄糖浓度范围的存在下竟争地结合。上述MBLELLA检测物用来确定甘露糖基化程度对葡萄糖抑制的动态范围的作用，并且结果如图l所示。对于图1中的特定的缀合糖类，在剂量响应曲线为线性的葡萄糖浓度范围对应于包含糖缀合物的竟争结合检测物变化形式可以精确地检测葡萄糖的葡萄糖浓度范围。由图l可以看出，在本发明传感器内的三种竟争检测物变化形式中使用的三种糖缀合物HSA-Man15、HSA-Man30和HSA-Man60，可以在0~50mM葡萄糖的范围内精确测量葡萄糖的浓度。实施例2:用于ELLA检测物的高碘酸盐氧化的葡聚糖高碘酸盐氧化的葡聚糖的制备将70k的葡聚糖(200mg，2.86mmol)溶于水(2.8mL)中并加到在水(2.8mL)中的NaIO4(100mM，100x摩尔过量)中。混合物在室温下在黑暗中搅拌lh。将所得的混合物转移到透析管(MWCO10-12k)中，并用5L水透析过夜。渗析后，将体积调整到8mL。将高碘酸盐氧化的葡聚糖分成两个等分检测物(每个4mL，100mg)并分别用28。/。氨水(200nL)和千胺(300nL)处理30min。然后在室温和pH值大约为10下用NaBH3CN(45mg)还原亚胺和亚胺镥衍生物过夜。第二天用2xlL的20mM的TRIS透析反应混合物。使用元素分析法测定引入高碘酸盐氧化的葡聚糖中的胺的程度。MBLELLA检领'J物除了用含有1.25mM的CaCl2(生理Ca浓度)的TRIS緩冲液之外，使用上述分析。包含氨基葡聚糖、在10x摩尔过量的高碘酸盐存在下氧化的和使用节胺还原胺化的葡聚糖、和在100x摩尔过量的高碘酸盐存在下氧化的和使用千胺还原胺化的葡聚糖的ELLA检测物比较结果如图2所示。由图2的观察可以看出，当结合使用三种竟争结合检测物时可以精确地测量葡萄糖浓度的范围为035mM葡萄糖，每个所述三个竟争结合检测物包含三种氨基葡聚糖中的一个。发现氨基葡聚糖对MBL的缀合基本上是不依赖于Ca"的，并且因此可以在生理Ca^浓度下使用这些检测物。实施例3:在ELLA检测物中使用的合成聚合物烯丙基a-D-吡喃甘露糖苷基本上如在Pekari等人(2004)J.Org.Chem,66(22)，7432-7442中所述。在BF3-OEt2(0.58ml)存在下，在干燥的烯丙基乙醇(140ml)中回流D-甘露糖(12.1g，67mmol)过夜。第二天用Et3N(1.8ml)中和反应混合物，并蒸发溶剂。干柱减压色镨(id6cm;100ml份；在DCM(v/v)中的0~45%的MeOH-ll份，5%增量+100%)得到为无色糖浆的9.38g(63。/o)产物。TLC(DCM國MeOH，9:l)Rf0.3;iH-NMR(300MHz，128次扫描，在700^1的D20中4mg)S3,27(s，2H，烯丙基)，3.52國4.21(m，6H)，4.84(bs，1H，aH)，5.16-5.34(m,2H，烯丙基)，5.82國5.98(m，1H，烯丙基)。共聚合下列实施例说明甘露糖50%共聚物是如何制备的。所有其它共聚物的制备参见表2和3。在PBS(50mM，pH值为7.4)中制备烯丙^J^(AS)和N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐(NAMH)的原液(100mg/ml)。在螺旋盖塑料试管中将过二硫酸钾(PPS)(150mg)溶于PBS緩冲液(50mM，pH值为7.4;7.8ml)中。按照下列顺序向该溶液中加入烯丙基a-D-吡喃甘露糖香(烯丙基糖；AS)(2.20ml;220mg)、丙烯酸2-羟乙酯(HEA)(llOjil),N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐(NAMH)(卵nl)和N，N，N，，N，-四甲基乙二胺(TMEDA)(lOOjil)。用氮气吹扫混合物5分钟以除去溶解的氧。在定轨振荡器中在RT下聚合过夜。过滤反应混合物并在甲醇(100ml)中沉淀。通过离心法(4000rpm，3分钟)收集聚合物，并且然后用甲醇(3xl0ml)洗。在脱水器中干燥最终得到的聚合物粒过夜。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表3-用于共聚合的四种不同的单糖MBLELLA检领'J物除了用含有1.25mM的CaCl2(生理Ca浓度)的TRIS緩冲液之外，使用上述检测物。结果如图3所示，其与由甘露糖、N-乙St^-葡糖胺、葡萄糖和半乳糖制成的20种共聚物比较。高吸收对应于MBL对配体的缀合。基线吸收对应于MBL对配体没有缀合。AmDex为150kDa的氨基葡聚糖(实施例5)。这表明在合成聚合物中使用的单糖单元与葡萄糖(ICs。~18mM)相比，需要对MBL具有更高的亲合力，并优选与甘^瞎(ICs。~8111]\1)或]\-乙酰基-葡糖胺(ICs。~6mM)。较低亲合力的糖单体单元例如萃乳糖(IC5Q36mM)在生理钙浓度下(1.25mM)没有得到MBL缀合。制备了一系列甘露糖共聚物(表4)并使用MBLELLA检测物来分析。发现35%的甘露糖共聚物是最佳的。在0mM葡萄糖时对MBL的缀合与氨基葡聚糖一样强，但比氨基葡聚糖更容易被抑制。由抑制曲线(图4)可以计算氨基葡聚糖和最优的共聚物(表5)的ICs。值。ICs。值仅对该特定的检测物有效。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>实施例4:MBL的染色将人类MBL緩冲变为(通过透析)含有150mM的NaCl和1.25mM的Ca2+、pH值为8.7的10mM的NaHC03。用于染色的染料为AlexaFluorTM594琥珀酰亚胺酯(AF594國SE)(MolecularProbes,Eugene,Oregon,USA),将染料溶于干燥的DMSO中，并緩慢地(IO分钟)加到在碳酸氢盐緩冲液中的MBL中。使反应进行lh。用15倍摩尔过量(对多肽单元)的染料进行染色。通过对pH值为7.4、150m麗aCI和1.25mMCa2+的10mM的Tris緩冲液透析进行纯化。通过UV光镨测定得到的染色蛋白的标记度为每MBL子单元2.3个染料。实施例5:氨基葡聚糖的制备将150kDa葡聚糖(6.00g,0.4jimol)溶于pH值为11.5的250mM的K2HPO4(600mL)+。加入硼氲化钠(3g，0.08mol),随后加入二乙烯基砜(15ml，0.15mol)。在用浓盐酸中和到pH值为7.2之前，反应混合物在RT下搅拌30分钟。搅拌30分钟后，所得的混合物在水(3x25L)中透析(MWCO10-12kDa)。将内含物转移到Erlenmeyer烧瓶中并加入24。/。氨水(200mL)。2h后，将pH值调到10.5，并搅拌反应过夜。通过在水(8x25L)中透析(MWCO10-12k)除去过量的氨，并且冻干全部内含物，以得到为白色绒毛状物质的氨基葡聚糖5.75g(78。/。，基于MW185kDa的氨基葡聚糖)。使用元素分析法进行分子量、胺引入、和引入二乙烯基讽的量的粗略估计。(发现C39.86;H6.26;N0.16;S3.08%葡聚糖150k，~22DVS-NH2，~160DVS-OH,和~7201120，理论C39.55;H6.60;N0.16;S3.07%)。实施例6:六曱氧基-结晶紫琥珀酰亚胺酯(HMCV-l)的制备HMCV-1的合成摩尔质tB阵):711摩尔质量(CI-):757合成路线l:1)4-(N-甲基M)-丁酸盐酸盐(1当量)、二异丙基乙胺，在乙腈中，20。C，20h。II)二甲胺(过量)。III)TSTU、二异丙基乙胺，在乙腈中，20。C，2h。4a(BF4):将4-(甲基氨基)丁酸盐酸盐(1.36g;8.8mmol)、1(5.0g;8.3mmo1)、和二异丙基乙胺(5mL)溶于乙腈(120mL)中。在千燥的氮气氛下在3035。C下搅拌反应混合物22h。加入二甲胺水溶液(40mL的40%溶液)并再搅拌反应混合物四天。在真空下除去溶剂和过量的二甲胺，并将剩下的物质溶于氯仿。在蒸发溶剂和由CH2Ch/乙醚再沉淀产物之前，用盐水洗氯仿溶液两次并用MgS04干燥。产量4.4g(70。/。)深蓝色粉末。MS(FAB+):m/z624(M+)iH-NMR(400MHz，DMSO-d6):88.34(1H，bs)，6.03(2H,s)，5.83(4H，s)，3.49(2H，m)，3.46(6H，s)，3.44(12H，s),3.12(3H，s(掩蔽的))，3.08(12H,s),1.94(2H，t)，1.70(2H，m)。HMCV-l(Cr):将TSTU(2-琥珀酰亚氨基-l,l,3，3-四曱基脲四氟硼酸盐；0.8g，2.6mmol)加到4a(0.9g，1.26mmol)和二异丙基乙胺(0.55g，4.5mmol)在乙腈(15mL)中的溶液中。在将反应混合物倾入用HCl-水溶液(4mL,2M)酸化的冰冷却的接近饱和的NaCl溶液(大约150mL)中之前，在封闭的烧瓶中搅拌2h。用氯仿(2xl50mL)萃取水相。用盐水(2x50mL)洗合并的氯仿相并用MgS04干燥。蒸发溶剂并由CH2CV乙醚再沉淀，得到深蓝色粉末(0.80g,84%)。MS(FAB+):m/z721(M+)^-NMRiH画NMRbr.(400MHz,DMSO-d6):35.88(2H，s)，5.85(4H，s)，3.60(2H，s)，3.46(12H，s)，3.45(6H，s)，3.15(12H，s)，3.12(3H，s)，2.85(4H，s),2.80(2H，t)，1.95(2H,m)。实施例7:氨基葡聚糖的染色将通过与实施例2类似的方法制备的70kDa氨基葡聚糖(0.5mmo1的NH2/g葡聚糖，即，每摩尔葡聚糖35摩尔胺)用HMCV-1(实施例5)在pH值为8.5的10mM的NaHC03、150mM的NaCl中染色。将染料溶于干燥的DMSO中，并緩慢地(IO分钟)加入到在碳酸氢盐緩冲液中的葡聚糖中。使反应进行lh。用8倍摩尔过量的染料进行染色。通过用pH值为7.4、150mM的NaCl、1.25mM的Ca2+、2mM的NaN3的10mM的Tris緩冲液透析进行提纯。通过UV光谙测定得到的染色蛋白的标记度为每葡聚糖7.0个染料。实施例8:HMCV-1葡聚糖的葡萄糖测量在TBS緩冲液(同上)中混合AF外4染色的人类MBL(实施例1)和HMCVl-葡聚糖(如实施例7制备的)到10jiM的两种组分的浓度。将检测物的化学混合物吸入中空纤维(再生纤维素，直径为0.2mm)中。在KOALA自动采样室(ISS，ChampaignIL)中进行荧光寿命测量(频域)，并通过改变在含有检测物的化学品的中空纤维周围的緩冲液(TBS)来改变葡萄糖浓度。表6AF594-MBL和HMCV1-Dex70的绝对相移。PMT计数反映体系的强度增加。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>实施例9:合成聚合物的葡萄糖测量共聚物的合成通过如下的乳液聚合制备甘露糖共聚物(~40%)。将Span80表面活性剂(5.7g;HLB[亲水亲油平衡值4.3,基于曱苯的10%w/w)、AIBN(30mg)和甲苯(57.3g)加到配有机械搅拌器和氮气管的250ml三口圆底烧瓶中。密封烧瓶、用氮气吹扫并在整个聚合过程中保持在氮气氛下。将烯丙基a-D-吡喃甘露糖苦(3.52g)、丙烯酸2-羟乙酯(2.552g)、和N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺盐酸盐(0.178g)溶于水(12.7g)，并过滤以除去不溶解的物质。通过橡胶隔膜将该混合物加到在圆底烧瓶中的剧烈搅拌的混合物中。在室温下搅拌反应混合物直到形成稳定的乳状液(30分钟)，然后在60'C下4h。通过隔膜注入VA-044溶液(lml，60mg/ml),并且继续聚合过夜(17h)。将反应混合物冷却到室温，并加入丙酮破乳。这导致聚合物沉淀，收集沉淀、再溶于水、并加入丙酮沉淀。产物在真空下干燥过夜，以得到3.2g(50。/。)粗浅黄色聚合物。将部分粗聚合物(1.0g)溶于水(10ml),并在水中透析(MWCO[分子量截留]25,000)以除去低分子量物质。冷冻干燥得到0.46g(46V。)毛绒状的白色聚合物。类似地制备45%甘露糖共聚物。共聚物的染色通常地，共聚物的标记遵循由MolecularProbes(产品信息MP00143，Rev.June2001)提供的描述。将共聚物(88.6mg)溶于lOmM的NaHC03溶液(3ml;pH值为8.5)。将聚合物溶液平均地分到三个E卯endorf小瓶中。将HMCV-1(实施例3)(19.6mg;26.1nmol)溶于干燥的DMSO(600fil)中。将染料以每30秒lOjtl等分检测物加到聚合物溶液中，以这样的方式使得第一小瓶总共得到lOOjil、第二小瓶总共得到200jil，第三小瓶总共得到300jil。在加入最后一份后，轻轻地搅拌小瓶lh,之后在10mM的TRIS緩冲液中透析溶液(MWCO10-12,000)，并几次换緩冲液，并且直到在透析緩冲液中看不见颜色(通常72h换6~8次500ml緩冲液)。FRET检测物在TBS緩冲液(同上)中混合AF594染色的人类MBL(实施例4)和HMCVl-共聚物到两种组分为10fiM的浓度(使用MBL-AF594糖类识别域的浓度、CRD、每个具有大约25kDa的Mw)。将检测物的化学混合物吸到中空纤维(再生纤维素，直径为0.2mm)中。在KOALA自动样品室(ISS,ChampaignIL)中进行荧光寿命测量(频域)。在水浴中将所有溶液预热到34'C，并且在34"C下记录在KOALA仪器中的所有测量值。将包含纤维和纤维固定器装置的荧光池置于KOALA的样品固定器中，并且荧光池充满含有葡萄糖的緩冲液。测量的相位是至少四十个相角记录的平均值。测量完成后，^L用吸液管清空荧光池，并再次充满含有下一浓度葡萄糖的緩冲液。在测量之间间隔20min以4吏检测物的化学达到平衡。为了生成葡萄糖剂量-响应曲线，在0、5、10、30、100和500mM葡萄糖处测量相位。在500mM葡萄糖处测量相角后，在60分钟时间内用10mM的TRIS緩冲液洗几次纤维。此时，对OmM葡萄糖得到相同的相角。这表明分析的可逆性。结果如表7和图5所示。表7AF594-MBL和HMCVl-共聚物的绝对相移。慮Glc□□@61MHz甘露糖40%共聚物□□@61MHz甘露糖化％共聚物00-00.051.80.4104.31.1309.53，810013.98.950015.214.2可以看出在05mM、5~10mM、10~30mM的Glc区域内，甘露糖40%共聚物的斜率比甘露糖45%共聚物更陡(更响应)。但是，在30~100mM和100~500mM的Glc区域内，甘露糖45%共聚物的斜率更陡。这使甘露糖40%共聚物在0~30mM的Glc内更灵敏，而甘露糖45%共聚物在30~500mM的Glc内更灵敏。实施例10:传感器的配制和植入通过将直径为700nm的玻璃棒浸入在二氯曱烷中的15%w/w的聚合物(1000PEGT80PBT20，申请no.P9738GB)溶液中，并4吏其在室温下干燥制造纤维。这得到外部尺寸为900jim且内径为700nm的中空纤维。该纤维充满希望浓度的检测物组分[例如5jiM的AlexaFluor594tm染色的MBL(关于糖类识别域表示浓度)和20pM的HMCV1染色的150kDa的氨基葡聚糖。加热聚合物使其熔化以封闭纤维末端。在测试和插入之前测试该焊接纤维的渗漏性。可以通过使用针将该类型纤维置于皮肤的上部。合适尺寸(足够大以包含湿纤维)的针以大约lmm深度平行于皮肤表面放置，使得针通过皮肤作为阴影可见。将纤维(仍然是湿的)置于针内并且移走针。在插入步骤完成之后，在插入位置处通常观察不到出血。当纤维在适当的位置时，将读取装置直接置于纤维上方并可以开始测量。可以使用时间分辨荧光光镨测量葡萄糖响应，相应于如图6所示的响应。虽然参照优选实施方案说明了本发明，但是应当理解可以在本发明范围内进行各种修改.权利要求1.一种用于感测分析物浓度的传感器，包含合适竞争结合检测物的至少两种不同的变化形式，通过该检测物的变化形式，所述传感器能够精确地感测所需范围的分析物浓度，其中所述检测物的变化形式的每一种都能够精确地感测所需分析物浓度范围的仅仅一部分，并且所述检测物的变化形式被选择用于感测覆盖所述整个所需范围的重叠或邻接浓度范围。2.权利要求l的传感器，其中所述分析物为糖类。3.权利要求2的传感器，其中所述分析物为葡萄糖。4.前述权利要求任一项的传感器，其中所述传感器产生与所述分析物浓度相关的可测量的光响应。5.前述权利要求任一项的传感器，其中每个所述竟争结合检测物包含分析物结合剂；和包含至少一个分析物类似部分的分析物类似物；其中所述分析物结合剂结合所述分析物类似物的所述至少一个分析物类似部分以形成复合物，所述分析物可从所述复合物取代所述分析物类似物，和其中通过由所述分析物类似物包含的分析物类似部分的数目或性质来区别不同的检测物。6.权利要求5的传感器，其中用基于接近性的信号产生/调制部分对中的一个来标记所述分析物结合剂，用基于接近性的信号产生/调制部分对中的另一个来标记所述分析物类似物，和其中当所述分析物类似代所述分析物类似物时，在信号方面存在可检测的差异。7.权利要求5或6的传感器，其中所述分析物结合剂为凝集素。8.权利要求7的传感器，其中所述分析物结合剂为甘露糖缀合凝集素(MBL)。9.权利要求5~8任一项的传感器，其中所述至少一个分析物类似部分为糖类或糖类模拟部分。10.权利要求9的传感器，其中所述至少一个分析物类似部分为单糖或寡糖部分。11.权利要求5~10任一项的传感器，其中所述分析物类似物包含大分子。12.权利要求ll的传感器，其中所述大分子为蛋白质、树枝状高分子、多糖或合成聚合物。13.权利要求12的传感器，其中所述大分子为血清白蛋白。14.权利要求12的传感器，其中所述多糖被衍生以减少结合的分析物类似部分的数目。15.权利要求513任一项的传感器，其中在每个竟争结合检测物变化形式中，所述分析物结合剂为MBL，所述大分子为HSA且所述分析物类似部分为甘露糖，和其中所述竟争结合检测物的每个变化形式包含含有不同数目甘露糖部分的HSA-甘露糖缀合物。16.权利要求5~12和14任一项的传感器，其中所述分析物为葡萄糖，在所述竟争结合检测物的每个变化形式中，所述分析物结合剂为MBL,且所述大分子和分析物类似部分一起形成衍生的葡聚糖，和其中所述竟争结合检测物的每个变化形式包含如此衍生的葡聚糖使得引入所述葡聚糖中的所述分析物类似部分的数目是不同的。17.权利要求16的传感器，其中所述传感器包含两个竟争结合检测物的变化形式，一个变化形式能够感测在0~10mM范围内的葡萄糖浓度，另一个变化形式能够感测在0~25mM范围内的葡萄糖浓度。18.权利要求17的传感器，还包含第三竟争结合检测物的变化形式，其能够感测在1540mM范围内的葡萄糖浓度。19.前述权利要求任一项的传感器，其中所述不同的检测物变化形式包含在传感器内的分离的室内。20.前述权利要求任一项的传感器，其中所述传感器包含至少两类粒子，每类粒子包含不同的竟争结合检测物变化形式。21.权利要求19或20任一项的传感器，其中制造所述粒子或室的材料是可生物降解的。22.权利要求19-21任一项的传感器，其中所述粒子或室将检测物的组分保留在壳或基质材料内。23.权利要求1922任一项的传感器，其中所述粒子或室能透过所述分析物，并使所述分析物自由地扩散进和扩散出所述传感器并接触所述检测物组分，但是不能透过所述竟争结合检测物变化形式的组分。24.—种在活体中使用前述权利要求任一项的传感器的方法，其中将所述传感器植入到对象的皮肤表面之下，使其浸在组织液中；留出时间使得所述分析物浓度在所述组织液中和在所述传感器中平衡；给所述传感器提供光能；测量检测物的分析物浓度依赖性的荧光性能；将所述测量值转化为分析物浓度的读出值。25.—种在活体中使用权利要求1~23任一项的传感器的方法，其中留出时间使得所述分析物浓度在被植入到对象的皮肤表面之下的传感器中和组织液中平衡；给所述传感器提供光能；测量检测物的分析物浓度依赖性的荧光性能；将所述测量值转化为分析物浓度的读出值。全文摘要一种用于感测分析物浓度的传感器，包含合适的竞争结合检测物的至少两个不同的变化形式，通过该检测物的变化形式，所述传感器能够精确地感测所需范围的分析物浓度，其中所述检测物的变化形式的每一种都能够精确地感测所需分析物浓度范围的仅仅一部分，并且所述检测物的变化形式被选择用于感测覆盖所述整个所需范围的重叠或邻接浓度范围。文档编号G01N33/543GK101103273SQ200580046294公开日2008年1月9日申请日期2005年12月7日优先权日2004年12月7日发明者余艺华,克劳斯·格里戈里厄斯,卡斯珀·斯特鲁韦,耶斯佩尔·斯文宁·克里斯滕森申请人:帕瑞萨森思公司