专利名称：用于定量分析的声致荧光检测装置及其检测方法
技术领域：
本发明属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域，具体涉及到材料在其中经受化学反应的装置，测试反应的进行或结果的化学发光。
背景技术：
早在上世纪30年代，科伦大学的H.Frenzel和H.Schultes发现水溶液在声场的作用下有光发射的现象，由此认知了一种崭新的发光现象—声致发光。已报道的有关声致发光研究应用，主要集中在物理化学、物理学以及医学领域当中，在物理化学方面的研究集中在研究声致荧光的机理、影响声致发光的因素，物理学研究中用声致发光成像技术测量液体中的声场、空化场的动态分布。医学领域用声致发光研究声动力学肿瘤成像并获得了非常清晰的在体肿瘤图像，并且研究设计了声致发光层析扫描成像系统。迄今为止，尚未发现采用声致荧光对物质进行定量检测方法的报导或专利，亦未发现用于声致荧光分析法的仪器。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题在于提供一种设计合理、分析频率高、分析速度快、使用寿命长、生产成本低，用于定量分析的声致荧光检测装置。
本发明所要解决的另一个技术问题在于提供一种灵敏度高、检测精度高，用于定量分析的声致荧光检测方法。
解决上述技术问题所采用的技术方案是它包括超声波发生器、高压电源、电化学分析恒电位仪、数据采集分析仪、定时控制器、进样恒流泵、废液恒流泵、化学发光仪、计算机，经过进样恒流泵的进样管与化学发光仪相联通，经过废液恒流泵的废液管与化学发光仪相联通，超声波发生器通过导线与化学发光仪相连接，高压电源和电化学分析恒电位仪通过导线与化学发光仪相连接，数据采集分析仪通过导线与化学发光仪和计算机相连接。
本发明的化学发光仪为在发光仪壳体中部光窗上设置有滤光片，发光仪壳体内的左侧为传感器腔、右侧为化学反应腔，发光仪壳体的右端盖有发光仪封盖，在化学反应腔内支座上设置有通过导线与超声波发生器相连接的超声换能器，在超声换能器的上表面设置有发光反应池，在发光反应池的上端设置安装有进样管、通气管、废液管的反应池上盖，进样管经进样恒流泵与发光反应池内相联通，废液管经废液恒流泵与发光反应池内相联通，在传感器腔内设置有通过导线与高压电源和电化学分析恒电位仪以及数据采集分析仪相连接的光电传感器。
本发明的发光反应池为透明的无机材料发光反应池，在无机材料发光反应池的外表面涂或镀或粘开有与光窗在同一条轴线上的透光窗的反光膜。
本发明的透明的无机材料发光反应池为硅玻璃发光反应池。
本发明的光电传感器为光电倍增管。
用于定量分析的声致荧光检测装置的检测方法包括下述步骤1、配制溶液(1)配制储备溶液按照常规方法将作为测定对象的荧光物质，或对荧光物质的荧光能够产生增强或猝灭作用的其它物质，配制成浓度为2.6×10-6mol/L～1×10-2mol/L储备溶液。
(2)配制pH控制液按照常规方法配置浓度为0.01mol/L～1.0mol/L的pH控制液，该pH控制液为化学领域常规调整pH值所用的有机或无机酸性物质或碱性物质或缓冲溶液。
(3)配制增敏试剂按照常规方法配置浓度为1×10-3mol/L Al3+，浓度为1×10-3mol/L十二烷基苯磺酸钠溶液。
(4)配制空白溶液和标样溶液由不包含待测物质的pH控制液、荧光物质、增敏试剂溶液，按照体积分别为0～10ml、0～1.0ml、0～1.0ml，不足量加入二次水配制成10ml空白溶液，由pH控制液、荧光物质、增敏试剂溶液、待测物质标样溶液按照体积分别为0～10ml、0～1.0ml、0～1.0ml、0.01～6.0ml，不足量加入二次水配制成10ml标样溶液。
(5)配制待测溶液按常规方法配制待测溶液。
2、检测方法与结果将透过波长与被测物质的最大发光波长相同的滤光片安装在化学发光仪的光窗上，用导管接通流路，打开恒流泵的电源开关，由恒流泵分次将预先定容均为1～10ml的空白溶液、标样溶液、待测溶液送入化学反应池；依次打开化学发光仪、超声波发生器、高压电源、电化学分析恒电位仪、数据采集分析仪、定时控制器、计算机的电源开关。调整定时控制器的工作时间为0.1～1秒，延时时间为20～40秒，光电倍增管的工作电压为-400～-500v。超声发生器所提供的电能经超声波换能器转换成声能，在超声作用下荧光物质产生声致荧光。声致荧光被化学发光仪的光电倍增管接收转换成电信号输出到数据采集分析仪，数据采集分析仪将输入的电信号进行放大转换成数字信号输出到计算机，计算机对输入的信号进行数据处理，显示为空白溶液或标样溶液或待测溶液的声致荧光强度；依次检测不同浓度的标样溶液和待测溶液的声致荧光强度。
依据所获得的不同浓度标样溶液声致荧光强度数据，由计算机得到下述线性回归方程ΔI＝kC+b式中ΔI表示声致荧光强度，C表示待测物质标样溶液的浓度，k、b为常数由试验数据确定。根据待测样品溶液的声致荧光强度，计算机按上述线性方程分别计算出待测样品的含量。
本发明检测方法中常规调整pH值所用的有机或无机酸性物质或碱性物质或缓冲溶液为氢氧化钠、硫酸、盐酸、碳酸氢钠、磷酸缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲溶液、醋酸—醋酸钠缓冲溶液、氯乙酸缓冲溶液。
本发明用于定量分析的声致荧光检测装置采用超声换能器产生超声波，激发具有荧光的被测物质产生声致荧光，光电倍增管接收到的光信号转换成电信号输出到数据采集分析仪，数据采集分析仪对输入的电信号进行放大转换成数字信号输出到计算机，计算机进行数据处理计算出样品中被测物质的含量。采用本发明用于定量分析的声致荧光检测装置重复次检测同一样品的相对标准偏差为0.2％～5％，检测一个样品只需要2～4分钟。本发明用于定量分析的声致荧光检测装置具有设计合理、分析频率高、分析精度高、检测速度快、生产成本低、使用寿命长等优点。本发明检测方法与传统荧光分析方法相比，具有灵敏高、分析精度高、分析频率高等优点。本发明用于定量分析的声致荧光检测装置及检测方法可用于测定具有荧光特性的有机物、生物物质以及药物的含量。
图1是本发明用于定量分析的声致荧光检测装置一个实施例的结构示意图。
图2是图1中化学发光仪10的结构示意图。
具体实施例方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1在图1中，本实施例的用于定量分析的声致荧光检测装置由数据采集分析仪1、电化学分析恒电位仪2、高压电源3、超声波发生器4、定时控制器5、进样恒流泵6、进样管7、废液恒流泵8、废液管9、化学发光仪10、计算机11联接构成。经过进样恒流泵6的进样管7与化学发光仪10相联通，经过废液恒流泵8的废液管9与化学发光仪10相联通，超声波发生器4通过导线与化学发光仪10相连接，超声波发生器4为市场销售产品，超声波发生器4为化学发光仪10提供超声波。高压电源3通过导线与化学发光仪10相连接，高压电源3的型号为MPI-M，高压电源3为化学发光仪10提供电源。电化学分析恒电位仪2通过导线与化学发光仪10相连接，电化学分析恒电位仪2的型号为MPI-A，电化学分析恒电位仪2用于控制化学发光仪10的工作电压。数据采集分析仪1通过导线与化学发光仪10相连接，数据采集分析仪1的型号为MPI-A，数据采集分析仪1通过导线与计算机11相连接，数据采集分析仪1将化学发光仪10输出的声致荧光电信号进行放大并转换成数字信号输出到计算机11，计算机11进行数据处理输出计算结果。
本实施例的化学发光仪10由光电倍增管10-1、滤光片10-2、发光反应池10-3、反应池上盖10-4、通气管10-5、反光膜10-6、发光仪封盖10-7、超声换能器10-8、支座10-9、发光仪壳体10-10联接构成。本实施例的发光仪壳体10-10为不透光的壳体，发光仪壳体10-10中部开有光窗，在光窗上安装有滤光片10-2，滤光片10-2的波长应按照被检测物质的最大发射波长选择，发光仪壳体10-10内的左侧为传感器腔、右侧为化学反应腔，发光仪壳体10-10的右端盖有发光仪封盖10-7，在化学反应腔内支座10-9上安装有超声换能器10-8，在超声换能器10-8的上表面用胶粘接有发光反应池10-3。本实施例的发光反应池10-3为硅玻璃发光反应池10-3，在发光反应池10-3的侧面留有透光窗其余部分用胶粘接有一层反光膜10-6，透光窗正对着的光窗，透光窗与光窗在同一条轴线上，在发光反应池10-3的上端盖有反应池上盖10-4，反应池上盖10-4上安装有进样管7、通气管10-5、废液管9，进样管7经进样恒流泵6与发光反应池10-3内相联通，废液管9经废液恒流泵8与发光反应池10-3内相联通，通气管10-5与发光反应池10-3内相联通，通气管10-5使发光反应池10-3内的压力为大气压。在传感器腔内安装有光电倍增管10-1，光电倍增管10-1为光电传感器的一个实施例，也可采用其它光电传感器，光电倍增管10-1通过导线与数据采集分析仪1相连接，光电倍增管10-1通过导线与高压电源3和电化学分析恒电位仪2相连接，高压电源3为光电倍增管10-1提供高压电，电化学分析恒电位仪2按照被检测物质调节光电倍增管10-1的工作电压，空白溶液或标样溶液或待测溶液经进样管7由进样恒流泵6输送到发光反应池10-3，在超声换能器10-8所产生超声波的作用下，产生声致发光反应，光电倍增管10-1接收到的光信号转换成电信号输出到数据采集分析仪1，数据采集分析仪1将输入的电信号进行放大转换成数字信号输出到计算机11，计算机11对输入的信号进行数据处理计算出被检测物质的含量。化学反应后的废液经废液管9由废液恒流泵8排出化学发光仪10外。
采用本实施例的声致荧光检测装置及检测方法检测钙片中钙离子的步骤如下1、配制溶液(1)配制储备溶液Ca2+标准溶液称取0.0555g CaCl2(分析纯)于100ml烧杯中，加水溶解于100ml容量瓶中，配成5×10-3mol/L的Ca2+储备溶液。Ca2+对荧光物质的荧光起增强作用。
荧光物质钙黄绿素储备溶液称取0.0622g钙黄绿素(3，3-双-[甲氨基二乙酸]荧光素，为荧光物质)于100ml烧杯中，加入0.1ml 1mol/L氢氧化钠溶液，加水溶解，定容至100ml容量瓶中，浓度为1×10-3mol/L，，冰箱保存，2周内稳定。
(2)配制pH控制液称4.005gNaOH用二次水定容于100ml容量瓶中，浓度为1mol/L的NaOH pH控制液。
(3)配制空白溶液和标样溶液取1.5ml浓度1mol/L的氢氧化钠、0.5ml浓度5×10-4mol/L钙黄绿素溶液，用二次水稀释至10ml制成空白溶液；分别取0.2ml、0.6ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml浓度5×10-3mol/L的Ca2+溶液，分别加入1.5ml浓度1mol/L的氢氧化钠、0.5ml浓度1×10-3mol/L的钙黄绿素用二次水稀释至10ml作为1×10-5mol/L、3×10-5mol/L、5×10-5mol/L、7×10-5mol/L、1×10-4mol/L的钙黄绿素标样溶液。
(4)配制Ca2+待测溶液取规格为150mg/片、120mg/片、30mg/片、50mg/片的四种钙片各10片于研钵中分别研细，称重。各称取十分之一作为一片的剂量于50ml烧杯中，加入10ml1mol/L HCl使之充分溶解，用氢氧化钠调节pH值至中性，二次水定容于100ml容量瓶中，按照标样溶液的配制方法制成Ca2+待测溶液。
2、检测方法与结果将与Ca2+-钙黄绿素最大发光波长相同的535±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上，用导管接通流路，打开进样恒流泵6的电源开关，由进样恒流泵6分次将预先定容均为5ml的空白溶液、Ca2+标样溶液、Ca2+待测溶液送入发光反应池10-3，依次打开化学发光仪10、超声波发生器4、高压电源3、电化学分析恒电位仪2、数据采集分析仪1、定时控制器5、计算机11的电源开关，调整定时控制器5的工作时间为0.1秒，延时时间为20秒，光电倍增管10-1的工作电压为-400v。超声波发生器4所提供的电能经超声换能器10-8转换成声能，在超声作用下荧光物质产生声致荧光。声致荧光被化学发光仪10的光电倍增管10-1接收转换成电信号输出到数据采集分析仪1，数据采集分析仪1将输入的电信号进行放大转换成数字信号输出到计算机11，计算机11对输入的电信号进行数据处理，显示为空白溶液或标样溶液或待测溶液的声致荧光强度；依次检测浓度为1×10-5mol/L、3×10-5mol/L、5×10-5mol/L、7×10-5mol/L、1×10-4mol/L的Ca2+标样溶液和Ca2+待测溶液的声致荧光强度。
由计算机11得到下述线性回归方程ΔI＝409.03C+162.27式中ΔI表示声致荧光强度，C表示Ca2+的浓度。由Ca2+待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述线性方程分别计算出四种钙片待测样品中Ca2+的含量为162mg/片、124mg/片、30.1mg/片、51.6mg/片。
实施例2在本实施例中，发光反应池10-3为硅玻璃发光反应池10-3，在发光反应池10-3的侧面留有透光窗其余部分化学镀膜有一层银反光膜10-6，透光窗正对着光窗，透光窗与光窗在同一条轴线上。其它零部件以及零部件的联接关系与实施例1相同。
实施例3在本实施例中，发光反应池10-3为硅玻璃发光反应池10-3，在发光反应池10-3的侧面留有透光窗其余部分真空蒸镀一层氧化铝反光膜10-6，透光窗正对着光窗，透光窗与隔板上的光窗在同一条轴线上。其它零部件以及零部件的联接关系与实施例1相同。
实施例4采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测Fe2+离子的步骤如下1、配制溶液(1)配制储备溶液配制Fe2+标准溶液称取0.2800g FeSO4·7H2O(分析纯)，以0.001mol/L硫酸水溶液溶解并用二次水定容于100ml，制成浓度为0.01mol/L的Fe2+储备溶液。
配制邻菲啰啉标准溶液称取荧光物质邻菲啰啉0.0100g(分析纯)，用30ml二次水溶解并定容于50ml容量瓶中，配制成1×10-3mol/L的邻菲啰啉储备溶液，暗室保存。
(2)配制pH控制液按常规方法配制0.01mol/L的硫酸水溶液。
(3)配制空白溶液和标样溶液取1ml浓度0.01mol/L的硫酸、1ml浓度1×10-3mol/L的邻菲啰啉溶液二次水稀释至10ml作为空白溶液；分别取0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、1ml浓度0.01mol/L的Fe2+储备溶液，分别加入1ml浓度0.01mol/L的硫酸、1ml浓度1×10-3mol/L的邻菲啰啉溶液二次水稀释至10ml作为1×10-5mol/L、3×10-5mol/L、5×10-5mol/L、7×10-5mol/L、1×10-4mol/L标样溶液。
(4)配制Fe2+待测溶液配制葡萄糖酸亚铁样品溶液将规格为30mg/片的葡萄糖酸亚铁片10片，去包衣，称取平均片芯重量，研细混匀，称取样品0.3000g，于200ml烧杯中加入30ml2mol/L的HCl溶解，振摇，过滤，加去离子水定容于250ml容量瓶，按照标样溶液的配制方法制成葡萄糖酸亚铁待测溶液。
2、检测方法与结果将波长为365±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为3ml的空白溶液、Fe2+标样溶液、Fe2+待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为1秒，延时时间为40秒，光电倍增管10-1的工作电压为-500v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成Fe2+标样溶液，Ca2+待测溶液替换成Fe2+待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程
ΔI＝0.2005C+0.0002式中ΔI表示声致荧光强度，C表示Fe2+的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述的线性方程计算出三次测量待测样品中Fe2+的含量分别为30.5mg/片、30.0mg/片、30.9mg/片，平均值为30.4mg/片。
实施例5采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测荧光素钠的步骤如下1、配制溶液(1)配制储备溶液称取荧光物质荧光素钠2.0000g，置于100ml烧杯中，用二次水溶解并定容到100ml容量瓶中，配制成浓度为5.3×10-2mol/L荧光素钠溶液，暗室保存。使用时取荧光素钠溶液0.04ml用二次水稀释至100ml，配成浓度为2×10-5mol/L的荧光素钠标准储备溶液。
(2)配制pH控制液称取0.5300g NaHCO3(分析纯)，以二次水溶解并用定容于100ml，配制成浓度为0.05mol/L的碳酸氢钠pH控制液。
(3)配制空白溶液和标样溶液取2ml浓度0.05mol/L的碳酸氢钠溶液二次水稀释至10ml作为空白溶液，分别取0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、1ml浓度2×10-5mol/L的荧光素钠水溶液、分别加入2ml浓度0.05mol/L的碳酸氢钠溶液，分别用二次水稀释至10ml作为2×10-7mol/L、6×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1.4×10-6mol/L、2×10-6mol/L的标样溶液。
(4)配制荧光素钠待测溶液取荧光素钠注射液1ml，用二次水稀释至10ml，按照标样溶液的配制方法制成荧光素钠待测溶液。
2、检测方法与结果将波长为510±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为10ml的空白溶液、荧光素钠标样溶液、荧光素钠待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为1秒，延时时间为30秒，光电倍增管10-1工作电压为-400v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成荧光素钠标样溶液，Ca2+待测溶液替换成荧光素钠待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程线性方程为ΔI＝18.08C-0.002式中ΔI表示声致荧光强度，C表示荧光素钠的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述的线性方程计算出三测测量待测样品中荧光素钠的含量结果0.12μg/ml、0.09μg/ml、0.11μg/ml。
实施例6采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测血卟啉的步骤如下1、配制溶液(1)配制储备溶液称取荧光物质血卟啉0.0200g，用10ml无水乙醇溶解并用磷酸缓冲溶液定容至100ml棕色容量瓶中，配成3×10-3mol/L的血卟啉溶液，置于冰箱4C保存。取0.1ml浓度3×10-3mol/L的血卟啉溶液，二次水稀释至10ml，配成3×10-5mol/L的血卟啉溶液，取1ml浓度3×10-5mol/L的血卟啉溶液，二次水稀释至10ml，配制成3×10-6mol/L的血卟啉储备溶液。
(2)配制pH控制液在800ml二次水中溶解8.000g NaCl、0.2000g KCl、1.4400g Na2HPO4和0.2400gKH2PO4，用HCl调节该溶液的pH值至7.4，加水定容至1L，配制成0.1mol/L的磷酸缓冲溶液。
(3)配制空白溶液和标样溶液10ml浓度20.1mol/L的磷酸缓冲溶液作为空白溶液；分别取0.05ml、0.125ml、0.25ml、0.5ml、1.0ml浓度3×10-6mol/L的血卟啉溶液，用0.1mol/L磷酸缓冲溶液稀释至10ml配制成为1.5×10-8mol/L、3.8×10-8mol/L、7.5×10-8mol/L、1.5×10-7mol/L、3.8×10-7mol/L的血卟啉标样溶液。
(4)配制血卟啉待测溶液取待测血卟啉样品1ml，按照标样溶液的配制方法制成血卟啉待测溶液。
2、检测方法与结果将波长为600±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为2ml的空白溶液、血卟啉标样溶液、血卟啉待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为1秒，延时时间为30秒，光电倍增管10-1的工作电压为-500v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成血卟啉标样溶液，Ca2+待测溶液替换成血卟啉待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程ΔI＝241.04C-3.5257式中ΔI表示声致荧光强度，C表示血卟啉的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述的线性方程计算出各血卟啉样品中血卟啉的含量分别为16.62μg/ml、12.08μg/ml、8.85μg/ml、8.38μg/ml。
实施例7采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测维生素B2的步骤如下1、配制溶液(1)配制标准样品储备溶液取维生素B2标准品25mg，置100ml烧杯中，加水70ml用60℃水浴温热溶解，放冷，加水定容500ml容量瓶中，配制成为1.3×10-4mol/L的维生素B2溶液。吸取2ml该溶液，用二次水稀释至100ml容量瓶中，配制成2.6×10-6mol/L维生素B2储备溶液。
(2)配制空白溶液和标样溶液10ml二次水作为空白溶液；吸取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml浓度2.6×10-6mol/L的维生素B2储备液，用二次水稀释至10ml容量瓶中配成2.6×10-7mol/L、5.2×10-7mol/L、7.8×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、1.3×10-6mol/L、1.6×10-6mol/L的维生素B2标样溶液。
(3)配制维生素B2待测溶液取规格为5mg/片的维生素B2片剂20片，称量，研细，称量相当于一片重量的粉末置于100ml烧杯中，加水70ml，用60℃水浴温热，溶解，滤过不溶杂质，加水溶解置200ml容量瓶中摇匀，按照标样溶液的配制方法制成维生素B2待测溶液。
2、检测方法与结果将波长为535±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为5ml的空白溶液、维生素B2标样溶液、维生素B2待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为1秒，延时时间为30秒，光电倍增管10-1的工作电压为-500v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成维生素B2标样溶液，Ca2+待测溶液替换成维生素B2待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程ΔI＝160.01C-1.02式中ΔI表示声致荧光强度，C表示维生素B2的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述的线性方程计算出待测样品中维生素B2含量三次测量结果分别为4.92mg/片、5.01mg/片、4.95mg/片，平均值为4.96mg/片实施例8采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测盐酸环丙沙星的步骤如下1、配制溶液(1)配制盐酸环丙沙星储备溶液称取荧光物质盐酸环丙沙星0.2500g，用10ml0.1mol/L盐酸溶解并用二次水定容于50ml容量瓶中，配制成浓度为1.2×10-2mol/L盐酸环丙沙星溶液，置于暗室保存。使用时取0.8ml盐酸环丙沙星溶液加二次水至10ml，配成1×10-3mol/L的盐酸环丙沙星储备溶液。
(2)配制pH控制液按常规方法配制0.1mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液。
(3)配制增敏试剂称取3.7513g AlNO3·H2O(分析纯)，以二次水溶解并用定容于10ml，制成浓度为1mol/L的储备液。使用时取0.1ml上述储备液用二次水稀释至10ml，配制成1×10-2mol/L的Al3+溶液，再取1ml该Al3+溶液用二次水稀释至10ml，配制成1×10-3mol/L的Al3+增敏试剂溶液。
(4)配制空白溶液和标样溶液取溶液用0.1mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液稀释至10ml作为空白溶液；分别取0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、1.0ml浓度1×10-3mol/L的盐酸环丙沙星溶液，分别加入1ml浓度1×10-3mol/L的Al3+增敏试剂溶液，再分别用0.1mol/L醋酸-醋酸钠缓冲溶液稀释至10ml作为1×10-5mol/L、3×10-5mol/L、5×10-5mol/L、7×10-5mol/L、1×10-4mol/L标样溶液。
(5)配制盐酸环丙沙星待测溶液取规格为0.25mg/片的盐酸环丙沙星片10片，称重，研细，称取相当于一片的重量，用10ml浓度0.1mol/L盐酸溶解并用二次水定容于100ml容量瓶中。按照标样溶液的配制方法制成盐酸环丙沙星待测溶液。
2、检测方法与结果将波长为450±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为3ml的空白溶液、盐酸环丙沙星标样溶液、盐酸环丙沙星待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为1秒，延时时间为30秒，光电倍增管10-1的工作电压为-500v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成不同浓度盐酸环丙沙星标样溶液，Ca2+待测溶液替换成不同浓度盐酸环丙沙星待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程ΔI＝5.575C+5.190式中ΔI表示声致荧光强度，C表示盐酸环丙沙星的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述线性方程计算出待测样品中盐酸环丙沙星含量三次测量结果分别为0.2456g/片、0.2506g/片、0.2466g/片，平均值为0.2476g/片。
实施例9采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测土霉素的步骤如下1、配制溶液(1)配制土霉素储备溶液称取标准品土霉素0.0500g，用0.01mol/L HCl溶解并定容于100ml容量瓶中，配制成浓度为1×10-3mol/L土霉素储备溶液，暗室保存。
(2)配制pH控制液按常规方法配制pH值为3.5的0.5mol/L的氯乙酸缓冲溶液。
(3)配制增敏试剂所用的增敏试剂以及增敏试剂的配制方法与实施例8相同。
(4)配制空白溶液和标样溶液取用1ml浓度1×10-3mol/L的Al3+增敏试剂溶液，用0.5mol/L的氯乙酸缓冲溶液(pH＝3.5)稀释至10ml作为空白溶液；分别取0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml浓度1×10-3mol/L的土霉素储备溶液，分别加入1ml浓度1×10-3mol/L的Al3+增敏试剂溶液，分别用0.1mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液稀释至10ml作为1×10-5mol/L、2×10-5mol/L、4×10-5mol/L L、6×10-5mol/L、8×10-5mol/L、1×10-4mol/L的土霉素标样溶液。
(5)配制土霉素待测溶液取规格为0.25mg/片的土霉素片10片，称重，研细，称取相当于一片中重量的粉末，用10ml 0.01mol/L的盐酸溶解，用二次水定容于100ml容量瓶中。按照标样溶液的配制方法制成土霉素待测溶液。
2、检测方法与结果将波长为490±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为10ml的空白溶液、土霉素标样溶液、土霉素待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为0.5秒，延时时间为20秒，光电倍增管10-1的工作电压为-400v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成不同浓度土霉素标样溶液，Ca2+待测溶液替换成不同浓度土霉素待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程ΔI＝0.238C+0.463式中ΔI表示声致荧光强度，C表示土霉素的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述的线性方程计算出土霉素片待测样品中土霉素的含量为0.25mg/片。
实施例10采用实施例1的声致荧光检测装置及检测方法检测牛血清白蛋白的步骤如下1、配制溶液(1)配制储备溶液用荧光物质丁基罗丹明B按常规方法配成1.0×10-3mol/L的丁基罗丹明B储备溶液，暗室保存。
按常规方法配制50mg/L牛血清白蛋白储备溶液，低温保存。
(2)配制pH控制液按常规方法配pH值为8.00的0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液。
(3)配制增敏试剂按常规方法配制1×10-3mol/L十二烷基苯磺酸钠水溶液作为增敏试剂。
(4)配制空白溶液和标样溶液取用1ml浓度1×10-3mol/L的十二烷基苯磺酸钠增敏试剂，1ml浓度1.0×10-3mol/L的丁基罗丹明B储备溶液，用0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液稀释至10ml作为空白溶液。分别取0.01ml、0.02ml、0.03ml、0.06ml、0.12ml浓度50mg/L的牛血清白蛋白储备溶液，分别加入1ml浓度1×10-3mol/L十二烷基苯磺酸钠增敏试剂、1ml浓度1.0×10-3mol/L的丁基罗丹明B储备溶液，再分别用0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲溶液稀释至10ml作为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、3.0mg/L、6.0mg/L标样溶液。
(5)配制牛血清白蛋白待测溶液三种牛血清白蛋白制剂分别取1ml，按照标样溶液的配制方法制成牛血清白蛋白待测溶液。分别测量三种牛血清蛋白制剂中的牛血清白蛋白含量。
2、检测方法与结果将波长为550±5nm滤光片10-2安装在化学发光仪10的光窗上。由进样恒流泵6分次将预先定容均为10ml的空白溶液、牛血清白蛋白标样溶液、牛血清白蛋白待测溶液送入发光反应池10-3，调整定时控制器5的工作时间为1秒，延时时间为30秒，光电倍增管10-1的工作电压为-500v。将实施例1中的钙黄绿素标样溶液替换成不同浓度牛血清白蛋白标样溶液，Ca2+待测溶液替换成不同浓度牛血清白蛋白待测溶液，其它检测方法与实施例1的检测方法相同。
由计算机11得到下述线性回归方程ΔI＝177.95C+2.3式中ΔI表示声致荧光强度，C表示牛血清蛋白的浓度。由待测样品溶液的声致荧光强度，计算机11按上述的线性方程计算出三个牛血清白蛋白待测样品中的牛血清白蛋白含量分别为5.6μg/L、3.1μg/L、10.5μg/L。
权利要求
1.一种用于定量分析的声致荧光检测装置，其特征在于它包括超声波发生器(4)、高压电源(3)、电化学分析恒电位仪(2)、数据采集分析仪(1)、定时控制器(5)、进样恒流泵(6)、废液恒流泵(8)、化学发光仪(10)、计算机(11)，经过进样恒流泵(6)的进样管(7)与化学发光仪(10)相联通，经过废液恒流泵(8)的废液管(9)与化学发光仪(10)相联通，超声波发生器(4)通过导线与化学发光仪(10)相连接，高压电源(3)和电化学分析恒电位仪(2)通过导线与化学发光仪(10)相连接，数据采集分析仪(1)通过导线与化学发光仪(10)和计算机(11)相连接。
2.按照权利要求1所述用于定量分析的声致荧光检测装置，其特征在于所说的化学发光仪(10)为在发光仪壳体(10-10)中部光窗上设置有滤光片(10-2)，发光仪壳体(10-10)内的左侧为传感器腔、右侧为化学反应腔，发光仪壳体(10-10)的右端盖有发光仪封盖(10-7)，在化学反应腔内支座上(10-9)设置有通过导线与超声波发生器(4)相连接的超声换能器(10-8)，在超声换能器(10-8)的上表面设置有发光反应池(10-3)，在发光反应池(10-3)的上端设置安装有进样管(7)、通气管(10-5)、废液管(9)的反应池上盖(10-4)，进样管(7)经进样恒流泵(6)与发光反应池(10-3)内相联通，废液管(9)经废液恒流泵(8)与发光反应池(10-3)内相联通，在传感器腔内设置有通过导线与高压电源(3)和电化学分析恒电位仪(2)以及数据采集分析仪(1)相连接的光电传感器。
3.按照权利要求2所述用于定量分析的声致荧光检测装置，其特征在于所说的发光反应池(10-3)为透明的无机材料发光反应池(10-3)，在无机材料发光反应池(10-3)的外表面涂或镀或粘开有与光窗在同一条轴线上的透光窗的反光膜(10-6)。
4.按照权利要求3所述用于定量分析的声致荧光检测装置，其特征在于所说的透明的无机材料发光反应池(10-3)为硅玻璃发光反应池(10-3)。
5.按照权利要求2所述用于定量分析的声致荧光检测装置，其特征在于所说的光电传感器为光电倍增管(10-1)。
6.一种使用权利要求1的检测方法，其特征在于它包括下述步骤(1)配制溶液①配制储备溶液按照常规方法将作为测定对象的荧光物质，或对荧光物质的荧光能够产生增强或猝灭作用的其它物质，配制成浓度为2.6×10-6mol/L～1×10-2mol/L储备溶液；②配制pH控制液按照常规方法配置浓度为0.01mol/L～1.0mol/L的pH控制液，该pH控制液为化学领域常规调整pH值所用的有机或无机酸性物质或碱性物质或缓冲溶液；③配制增敏试剂按照常规方法配置浓度为1×10-3mol/L Al3+，浓度为1×10-3mol/L十二烷基苯磺酸钠溶液；④配制空白溶液和标样溶液由不包含待测物质的pH控制液、荧光物质、增敏试剂溶液，按照体积分别为0～10ml、0～1.0ml、0～1.0ml，不足量加入二次水配制成10ml空白溶液，由pH控制液、荧光物质、增敏试剂溶液、待测物质标样溶液按照体积分别为0～10ml、0～1.0ml、0～1.0ml、0.01～6.0ml，不足量加入二次水配制成10ml标样溶液；⑤配制待测溶液按常规方法配制待测溶液；(2)检测方法与结果将透过波长与被测物质的最大发光波长相同的滤光片(10-2)安装在化学发光仪(10)的光窗上，用导管接通流路，打进样恒流泵(6)的电源开关，由进样恒流泵(6)分次将预先定容均为1～10ml的空白溶液、标样溶液、待测溶液送入发光反应池(10-3)；依次打开化学发光仪(10)、超声波发生器(4)、高压电源(3)、电化学分析恒电位仪(2)、数据采集分析仪(1)、定时控制器(5)、计算机(11)的电源开关，调整定时控制器(5)的工作时间为0.1～1秒，延时时间为20～40秒，光电倍增管(10-1)的工作电压为-400～-500v，超声波发生器(4)所提供的电能经超声波换能器(10-7)转换成声能，在超声作用下荧光物质产生声致荧光，声致荧光被化学发光仪(10)的光电倍增管(10-1)接收转换成电信号输出到数据采集分析仪(1)，数据采集分析仪(1)将输入的电信号进行放大转换成数字信号输出到计算机(11)，计算机(11)对输入的信号进行数据处理，显示为空白溶液或标样溶液或待测溶液的声致荧光强度；依次检测不同浓度的标样溶液和待测溶液的声致荧光强度。依据所获得的不同浓度标样溶液声致荧光强度数据，由计算机(11)得到下述线性回归方程ΔI＝kC+b式中ΔI表示声致荧光强度，C表示待测物质标样溶液的浓度，k、b为常数由试验数据确定。根据待测样品溶液的声致荧光强度，计算机(11)按上述线性方程分别计算出待测样品的含量。
7.按照权利要求6所述使用权利要求1的检测方法，其特征在于所说常规调整pH值所用的有机或无机酸性物质或碱性物质或缓冲溶液为氢氧化钠、硫酸、盐酸、碳酸氢钠、磷酸缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲溶液、醋酸—醋酸钠缓冲溶液、氯乙酸缓冲溶液。
全文摘要
一种用于定量分析的声致荧光检测装置，包括超声波发生器、高压电源、电化学分析恒电位仪、数据采集分析仪、定时控制器、进样恒流泵、废液恒流泵、化学发光仪、计算机，经过进样恒流泵的进样管与化学发光仪相联通，经过废液恒流泵的废液管与化学发光仪相联通，超声波发生器通过导线与化学发光仪相连接，高压电源和电化学分析恒电位仪通过导线与化学发光仪相连接，数据采集分析仪通过导线与化学发光仪和计算机相连接。检测方法包括配制溶液、采用本发明装置检测，检测不同浓度的标样溶液和待测溶液的声致荧光强度。由计算机得到线性回归方程，按线性方程计算出待测样品的含量。可用于测定具有荧光特性的有机物、生物物质以及药物的含量。
文档编号G01N1/28GK1815195SQ200610041789
公开日2006年8月9日 申请日期2006年2月16日 优先权日2006年2月16日
发明者吕家根, 聂迎春, 王娟, 吴丰魁, 齐昕, 齐慧丽 申请人:陕西师范大学