HAuCl₄分光光度法检测痕量金纳米粒子的制作方法

专利名称：HAuCl₄分光光度法检测痕量金纳米粒子的制作方法
技术领域：
本发明涉及金纳米粒子的检测，具体是用HAuCU分光光度法检测痕量金纳 米粒子的方法。
背景技术：
由于纳米金容易制备、高电子密度、独特的光学和电学性质及生物相容性 而被广泛应用于生物芯片、生物传感器和生物分子标记研究。近来，纳米金微
粒可作为晶种形成大粒径的复合物引起了科学家的极大兴趣。Dansher建立了 用银显影液增强光镜下金颗粒可见性的金银染色法(GSS)。银增强方法检测分枝 杆菌抗原浓度可以达到100pg mL—、 1999年Hainfeld建立了与银增强法相似 反应模式的金增强法，大大地提高了检测信号并且克服了银增强法带来的问题。 Ma使用混合的HAuCl4—NH20H溶液增大固定在硝酸纤维素膜免疫金微粒，用人眼 检测h-IgG，其检测限达10pg mL—、 Jagotamoy D等利用纳米金标记鼠-IgG对 硝基苯酚与硼氢化钠反应的催化作用，用电化学可检测lfg mL—1鼠-IgG。这些 增强法大多先将被分析物固定在载体上，然后标记纳米金与其反应，再催化增 大标记纳米金粒径进而增强分析信号，其实质是通过检测纳米金颗粒浓度来间 接检测分析物浓度，因此研究纳米金颗粒催化性能及其高灵敏检测纳米金的新 方法具有重要意义。
本发明HAuCU分光光度法检测痕量金纳米粒子，方法灵敏、快速、研究了 Au纳米粒子对NH20H—HAuCl4微粒反应的催化效果，发现纳米金具有强的催化作 用。

发明内容
本发明的目的是要提供一种设备简单、灵敏度高、操作简便、快速的测定 痕量金纳米粒子的方法。
本发明的目的采用下述技术方案来实现
本发明通过研究Au纳米粒子对丽20H—HAuCl4微粒反应的催化效果，发现纳 米金具有强的催化作用，根据金纳米粒子能催化HAuCU和NH20H'HC1反应， 随着催化剂金纳米微粒浓度的增大，296nm (此为HAuCl4吸收峰)处的吸光强度 减小，且催化剂金纳米微粒浓度与296nm处的吸光度呈线性关系。据此，建立 了 HAuCU分光光度法测量痕量金纳米粒子的方法。
HAuCU分光光度法检测痕量金纳米粒子的方法包括如下步骤
① 在0.2 0.4mL pH为2.27 2.97的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中，加入一定 量粒径为5 50nm的金纳米粒子，0.3 1.0mL 0.59m mol/L HAuCU和0.2 0.8mL 8.0m mol/L NH20H'HC1于5.0mL刻度试管，然后定容到2.0mL;
② 将上述试管溶液置于28 34。C恒温水浴4 8min;
③ 上述反应完成后，取适量溶液于石英池中，置于双光束紫外可见分光光度 计上，测出296nm处的吸光度，绘制标准工作曲线，根据工作曲线，即可求得 纳米金的浓度。
本发明的优点是
(1) 设备简单，仅需紫外可见分光光度计，操作简便快速、灵敏度高，检 测限低，达到0.25 nmol/L。
(2) 试剂易得，成本低廉，此法为定量分析痕量纳米金微粒提供了一个有 价值的方法，该法与免疫反应结合，对于提高纳米免疫标记的分析灵敏度有较 好的应用价值。


图1为本发明实施例粒径为5nm的纳米金微粒催化氯金酸和盐酸羟胺反应 的紫外可见吸收光谱图； 图2为本发明实施例纳米金催化原理图。
具体实施例方式
下面结合附图和实施例对本发明的实施方式作进一步的阐述 图1为本发明实施例粒径为5nm的纳米金催化氯金酸和盐酸羟胺反应紫外 可见吸收光谱图，其操作过程如下依次移取0.20mL pH为2.62的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液，加入O(a) 、10(b)、20(c)、30(d)uL0.5umol/L纳米金、60mL 0.59m mol/L HAuCU和0.40mL 8.0m mol/L NH20H'HC1于5.0mL刻度试管，然后定容 到2.0mL置于34t:恒温水浴6min，反应完成后，取适量溶液于石英池中，置于 双光束紫外可见分光光度计上扫描光谱。从图1中可见，金钠米粒子能催化
HAuCU和NH20H.HCl反应，随着催化剂金纳米微粒浓度的增大，296nm (此为 HAuCU吸收峰)处的吸光强度减小，且催化剂金纳米微粒浓度与296nm处的吸 光度呈线性关系，如5 nm的为Aabs=—0.017c(nmol/L)+0.22,线性范围为0.25 10.15 nmol/L，根据工作曲线，可求得钠米金的浓度。
虽然以上通过实例对本发明实施方式进行了描述，但本领域的技术人员应 该知道，上述仅为举例，可以对实施方式做出多种变更和修改，本发明的范围 仅由所附权利要求书限制。
权利要求
1.HAuCl4分光光度法检测痕量金纳米粒子的方法，其特征是检测方法包括步骤如下①在柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中，加入金纳米粒子、HAuCl4和NH2OH·HCl于刻度试管，然后定容；②将试管置于温水浴中反应；③上述反应完成后，取适量所得溶液于石英池中，置于双光束紫外可见分光光度计上，测出296nm处的吸光度，绘制标准工作曲线，根据工作曲线，可求得纳米金的浓度。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤1所述的刻度试管为5.0 mL 的刻度试管，加入的柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液pH为2.27 2.97，用量为0.2 0.4mL，加入的金纳米粒子粒径为5 50nm， HAuCU浓度为0.59mmol/L，用量 为0.3 1.0mL， NH20H.HC1浓度为8.Ommol/L，用量为0.2 0.8mL，定容体积 为2.0mL。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤2所述的恒温水浴温度为 28 34°C，反应时间为4 8min。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征是步骤3所述的吸光度测量波长 为296 nm。
全文摘要
本发明公开了HAuCl₄分光光度法检测痕量金纳米粒子的方法，它是在柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液中，加入一定量的金纳米粒子，氯金酸溶液和NH₂OH·HCl，水浴反应一定时间，取适量于石英比色池中，置于双光束紫外可见分光光度计上，测出296nm处的吸光度，根据工作曲线，求得纳米金的浓度。本方法的优点(1)设备简单，仅需紫外可见分光光度计，操作简便快速、灵敏度高，检测限低，达到0.25nmol/L；(2)试剂易得，成本低廉，此法为定量分析痕量纳米金微粒提供了一个有价值的方法，该法与免疫反应结合，用于纳米免疫分析将有广泛的应用价值，将有较好的应用价值。
文档编号G01N21/33GK101201318SQ20071004997
公开日2008年6月18日 申请日期2007年9月4日 优先权日2007年9月4日
发明者张声森, 蒋治良 申请人:广西师范大学