专利名称：：一种溶血剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种血液细胞分析用试剂，特别是涉及到一种可用于白细胞分类检测及血红蛋白含量测定的溶血剂。
背景技术：
：溶血剂是血液细胞分析仪最常用的试剂之一，也是白细胞及各分群计数、HGB含量测定的关键试剂。被稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂中相关成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白检测系统，在特定波长(一般在530550nm)下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比，仪器便可显示其浓度；同时，不同类型的白细胞(淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等)经溶血剂作用后形成明显的差异，根据这些差异，仪器可以将血液样本中的白细胞分成几个类群，并对白细胞总数及各类群的数量进行统计。1996年，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白(ffiCN)测定法作为国际HGB测定标准方法，其主要物理指标为在波峰A二540nm，波谷A二504nm时，具有明显的波峰、波谷。该法虽然能够较精确地测量HGB，但不能同时测定WBC，无法应用于临床检测仪器。此外，KCN有剧毒，不仅严重危害实验室工作人员的身体健康，同时对环境污染也极为严重。目前，国内外临床检验中常用无氰化溶血剂替代KCN使用，现有相关技术如下现有技术一主要使用十六烷基三甲基溴化铵、聚乙二醇辛基苯基醚、医用级乙醇和水组成无氰溶血剂；现有技术二主要使用有机季铵盐、盐酸羟胺、磷酸氢二钾组成无氰溶血剂；3现有技术三主要使用阳离子表面活性剂用于溶解红细胞并使血红蛋白变性，同时使用包括磺基水杨酸、含氮和羧基的水溶性螯合剂以及哌嗪在内的至少一种血红蛋白稳定剂；现有技术四主要使用季铵盐、吡啶盐中的至少一种用来溶解红细胞，释放血红蛋白；同时使用一种抗氧化剂，选自磷酸、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、重亚硫酸钠、硫代硫酸钠、其他硫的含氧酸碱金属盐。以上现有技术大多关注常温条件下血红蛋白测量的准确性，不能保证在使用温度范围发生较大变化后仍获得稳定准确的测量结果。
发明内容本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种能够在温度发生较大变化时仍然保证血红蛋白含量测定结果的准确性及一致性的溶血剂。为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案本发明公开了一种溶血剂，所述溶血剂含有至少一种有机酸，并且所述有机酸的含量为120g/L。在本发明的具体实施方式中，所述有机酸优选为抗坏血酸或对氨基苯磺酸。本发明的溶血剂优选含有至少一种可以溶解红细胞并释放血红蛋白的表面活性剂。所述表面活性剂优选为阳离子表面活性剂，更优选为季铵盐类阳离子表面活性剂。进一步地，所述表面活性剂优选为十二垸基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵或十六烷基三甲基溴化铵。在本发明具体的实施方式中，所述表面活性剂在所述溶血剂中的含量优选为24%，所述为重量百分含量。本发明的溶血剂中进一步含有缓冲剂，所述缓冲剂调节溶血剂的pH为59。其中，所述缓冲剂优选为磷酸盐缓冲液。由于采用了以上技术方案，使本发明具备的有益效果在于本发明的溶血剂与血样混合后，可用于测定白细胞总数、各分类计数及血红蛋白含量等参数。其中由于添加了与血红蛋白衍生物特异性结合的化合物有机酸，形成了更为稳定的血红蛋白复合物。该复合物除了在正常使用的常温条件下保持稳定外，在使用温度发生了较大变化，如1040°C更加广泛的使用范围内仍然保持稳定。本发明的试剂在104(TC温度范围内均能保持血红蛋白测试结果的温度效应很小，l(TC及4(rC与常温25'C之间相对偏差保持在3%以内。改变了血红蛋白在普通溶血剂作用下形成的复合物随温度变化、其吸光值随之发生明显变化的现状，从而保证了血红蛋白含量测定时仪器测量结果的准确及一致性。为临床使用拓宽了适用温度范围，降低了使用仪器测量时对实验室环境温度的要求，使得一般中小检验科室在不能提供较为恒定的温度条件时仍能够获得准确的检测结果。本发明溶血剂还能用于白细胞的正常分类检测，在溶解红细胞释放血红蛋白的同时对白细胞进行修饰，使白细胞各类群产生体积差异，实现白细胞的三分群检测，并保证检测结果的准确性。具体实施例方式本发明涉及一种多用途溶血剂，可用于自动血液分析，在保持白细胞正常分类的同时能够准确测试血红蛋白。其中重点解决血红蛋白检测值随温度发生变化的问题。本发明溶血剂中添加了血红蛋白衍生物的稳定剂，避免衍生物随反应温度的变化而发生变化，保证在仪器正常使用温度范围内均能够获得准确、稳定的测试结果。本发明中的溶血剂主要用于溶解红细胞，保持白细胞各类群特性，并与血红蛋白特异性结合，形成稳定的化合物，在540nm左右形成特异性吸收峰，依据吸光度的变化得到HGB测量值。本发明中的溶血剂含有阳离子表面活性剂，主要用于溶解红细胞、释放血红蛋白，并通过对白细胞的修饰，使白细胞各类群产生体积差异，从而可以通过电阻抗法实现白细胞三分群，即分为淋巴细胞(Lymph)、中间型细胞(单核细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞，Mid)以及中性粒细胞(Gran)三个类群。在本发明中，本领域常用的、可溶解红细胞并释放血红蛋白的阳离子表面活性剂均可适用。其中，优选使用季铵盐类阳离子表面活性剂，其添加量在24%左右，所述为重量百分含量，如十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵等。本发明中的溶血剂含有特定成分有机酸，用于与血红蛋白衍生物结合，形成稳定的复合物，在外界温度发生变化时，仍然能够保持血红蛋白复合物的结果稳定，从而获得准确、稳定的HGB测量结果。本发明中的有机酸优选以下两种有机酸——抗坏血酸(AscorbicAcid)，结构式如下对氨基苯磺酸(p-aminobenzenesulfonicacid),结构式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>经实验验证，所述有机酸可以与血红蛋白衍生物特异性结合，起到稳定剂的作用，从而保证血红蛋白衍生物在1040'C的范围内均能够维持形态特征稳定，吸光值无显著变化，即保证HGB测量值的稳定。本发明中，还含有调整PH用的缓冲剂。对于缓冲剂没有特定的要求，可以为常用缓冲体系如甲酸、邻苯二甲酸、乙酸、磷酸、TRIS、硼酸、碳酸等，优选使用磷酸盐缓冲液。本发明中PH范围对分类没有绝对影响，通常调整到59范围内。使用量为10200niM。本发明经临床验证，可以提供准确的WBC及三个分群的准确计数，以及稳定、真实的HGB测量结果，同时保证测量结果不随温度波动发生变化，保证了在1040度之间HGB结果的稳定可靠。本发明通过溶血剂中的阳离子表面活性剂实现红细胞的快速溶解，释放出血红蛋白；通过有机酸与血红蛋白特异性结合并形成稳定的复合物，使得溶血剂的作用不受环境温度变化的影响；通过有机缓冲剂和/或无机缓冲剂保证稀释液体系有稳定的pH值环境。其中，首次使用有机酸作为血红蛋白稳定剂，可以改变血红蛋白在普通溶血剂作用下形成的复合物随温度变化，其吸光值随之发生明显变化的现状。为临床使用拓宽了适用温度范围，降低了使用仪器测量时对实验室环境温度的要求，使得一般中小检验科室在不能提供较为恒定的温度条件时仍能够获得准确的检测结果。下面通过具体的实施例对本发明做进一步详细的描述。实施例l一种溶血剂，具有以下组成-十二烷基三甲基氯化铵40g抗坏血酸10g磷酸盐缓冲溶液0.05M补水到1LpH5.6使用迈瑞公司生产BC-3000Plus血液细胞分析仪，使用厂商提供的配套稀释液，并使用以上配方的溶血剂，进行自动分析。具体过程按照厂商提供的方法进行，具体包括全血和稀释液混合，形成第一浓度的稀释后样品。将第一浓度稀释后样品分成两部分。取部分第一浓度稀释后样品与稀释液混合，形成第二浓度的样品，用于红细胞和血小板的计数测量。剩下的第一浓度稀释后样品与溶血剂混合，形成第三浓度的样品，用于白细胞的计数测量及血红蛋白浓度测定。分别于10°C、室温25'C及4(TC条件下按上述步骤进行测定，每一温度条件选取六支不同的新鲜血样本进行测试，结果见下表1所示。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结果1(TC较25r的HGB偏差为0.37%;40。C较25X:的HGB偏差为2.8%实施例2一种溶血剂，具有以下组成十二垸基三甲基溴化铵对氨基苯磺酸磷酸盐缓冲溶液补水到40g10g0.05M1LpH7.6另取血样，并使用本实施例的溶血剂，其余按实施例1所述的方法进行测定，结果如表2所示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>结果1(TC较25-C的HGB偏差为0.36%;4(TC较25E的HGB偏差为2.7%实施例3一种溶血剂，具有以下组成十六烷基三甲基氯化铵20g抗坏血酸lg磷酸盐缓冲溶液0.05M补水到1L-pH5.6另取血样，并使用本实施例的溶血剂，其余按实施例1所述的方法进行测定，结果如表3所示。，表3温度血样编号WBC(X109/L)Lymph%Mid%Gran%HGB(g/L)17.71480.35.79425.32367.99.193315.611.784.14.211010°C46.83360.26.8107510.615.677.66.811367.815.676.18.3120均值918.874.46.8106.217.713.981.44.79125.32666.27.892315.610.384.55.210625°C4731.659.29.210610.615.278.56.311367.815.976.67.5117均值918.874.46.8104.217.816.975.77.48825.129.562.28.388315.71380.76.310340°C47.137.949.212.9106510.819.671.58.911067.824.561.813.7114均值9.123.666.99.6101.5结果1(TC较25X:的HGB偏差为1.9%;4(TC较25-C的HGB偏差为2.6%10实施例4一种溶血剂，具有以下组成十六烷基三甲基溴化铵20g对氨基苯磺酸20g磷酸盐缓冲溶液0.05M补水到1LpH7.6另取血样，并使用本实施例的溶血剂，其余按实施例1所述的方法进行测定，结果如表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>结果10。C较25。C的HGB偏差为1.5%;4(TC较25-C的HGB偏差为2.9%以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。权利要求1.一种溶血剂，其特征在于所述溶血剂含有至少一种有机酸，并且所述有机酸的含量为1～20g/L。2、根据权利要求1所述的溶血剂，其特征在于所述有机酸为抗坏血酸或对氨基苯磺酸。3、根据权利要求1或2所述的溶血剂，其特征在于所述溶血剂含有至少一种可以溶解红细胞并释放血红蛋白的表面活性剂。4、根据权利要求3所述的溶血剂，其特征在于所述表面活性剂为阳离子表面活性剂。5、根据权利要求4所述的溶血剂，其特征在于所述表面活性剂为季铵盐类阳离子表面活性剂。6、根据权利要求5所述的溶血剂，其特征在于所述表面活性剂为十二垸基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵或十六烷基三甲基溴化铵。7、根据权利要求46仟意一项所述的溶血剂，其特征在于所述表面活性剂在所述溶血剂中的含量为24%，所述为重量百分含量。8、根据权利要求3所述的溶血剂，其特征在于所述溶血剂含有缓冲剂，该缓冲剂调节溶血剂的pH为59。9、根据权利要求8所述的溶血剂，其特征在于所述缓冲剂为磷酸盐缓冲液。全文摘要本发明公开了一种溶血剂，所述溶血剂含有至少一种有机酸，并且所述有机酸的含量为1～20g/L。本发明涉及一种多用途溶血剂，可用于自动血液分析，在保持白细胞正常分类的同时能够准确测试血红蛋白，本发明溶血剂中添加了血红蛋白衍生物的稳定剂，避免衍生物随反应温度的变化而发生变化，保证在仪器正常使用温度范围内均能够获得准确、稳定的测试结果。文档编号G01N33/48GK101464453SQ200710125208公开日2009年6月24日申请日期2007年12月18日优先权日2007年12月18日发明者刘牧龙,张利娜,许文娟申请人:深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司