专利名称：一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种RhoGDI2基因的原位杂交 ;险测试剂盒及其检测方法和应用。
背景技术：
根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数170万， 死亡人数近160万，患者600多万，全球每年新增癌症患者800万，死亡 人数接近800万，患者约有8400多万人，到2020年以上人数将翻一番， 这是一组可怕的数字。2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个 年度报告，"认为人类在抗癌大战中是失败"，也就是说癌症死亡率没有降 低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是1、肿瘤细胞异质性；2、 肿瘤细胞耐药性；3、抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提 出应重新审视现有诊治癌症的措施。本发明人在研究中发现，导致癌症死 亡率不降的另二个重要原因是1、不能做到真正的早期诊断；2、转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影4象及和其它生化(如蛋白标记物)指标 来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些 有时无症状体征)，这一临床概念值得认真讨论。影1象医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，l公分的肿块约有一亿个胂瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿 个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病 理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，4艮难证实的是在 这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实一 旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长； 一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此， 在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例， 在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时 已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的 深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌 变前期或癌细胞形成(单克隆)时或癌细^^包突-皮血管壁早期转移时，就能 做到早期预测诊断。弗吉尼亚大学的泌尿学与分子生理学教授Dan Theodorescu 博士领导的科学小组研究表明，RhoGDI2基因与膀胱癌细胞转移 有关系，当RhoGDI2基因在癌细胞中有活性时，细胞就产生一种 能够阻止癌细胞浸入到其他器官的蛋白。目前对RhoGDI2基因的研究都釆用高通量基因芯片技术，而这些方法 多用于科研方面，不适应临床应用，特别是个性化的应用在我国现阶段条 件尚不成熟。原位杂交技术Un situ hybridization)是将分子生物学与细月包化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是〗吏含有特异序列、经过标记的核酸单链(即揮: 针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即耙核貌义生杂交，再 以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DM或RNA分子。原位杂交的探针是已知序列的分子或序列未知但分子已知的核酸分 子(虽不明确该分子全部序列，但已知其针对何靶分子)，探针的种类按 核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸 探针。为了便于示踪，探针必须用一定的手段加以标记，以利于以后的抬r 测。常用的标记物包括》文射性核素和非;^文射性标记物两大类。常用的同位 素标记物有3H、 35S、 125I和32P。同位素标记物虽然有灵敏性高、背底 较为清晰等优点，但是由于放射性同位素对人和环境均会造成伤害，近来 有被非同位素取代的趋势。非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地 高辛和荧光素三种。；险测这些标记物的方法都是极其灵敏的。根据所用探针及所要检测核酸的不同又可分为 DNA-DNA，RNA-DNA， RNA-RNA杂交。但不论哪一种形式的杂交，都必须经过 五大过程，即组织细胞的固定，预杂交、杂交、沖洗和显示。中国专利文献CN1556410公开了 "一种鱼类病毒的检测试剂盒及其 检测方法"。中国专利文献CN1680597公开了 "一种用于定量检测丙型肝 炎病毒(HCV)的荧光定量PCR试剂盒"。中国专利文献CN2918435，公开了 "一种检测肥胖相关基因SNP的寡核苷酸芯片及试剂盒"。但是，关于 RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒及其4企测技术未见报道。发明内容本发明的目的在于 (1 )、提供一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒；(2) 、提供一种RhoGDI2基因的原位杂交检测方法；(3) 、提供一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒的应用。 本发明的目的是通过以下技术方法来实现的本发明人在对大量样本广泛性腺癌(肝、肺、肾、胃、子宫、卵巢、乳房、直肠 等血液细胞)检测中观察到，癌症病人伴有转移者，RhoGDI2基 因表达量降低或大部分是零表达，该指标有重要的临床价值。我 们检测了近800例各种类型癌症患者(大部分已转移)血液标本， 近800例正常对照组人群，经统计学分析，癌症患者体内RhoGDI2 基因表达量为8%左右，正常人群表达量平均为50%,病例组中有 600多例该基因是零表达。同时^r测两个家族性癌症好发家属的 直系亲属，该基因的表达量比正常人表达量都低。本发明提供的 肺瘤转移抑制基因RhoGDI2是人类同源基因，位于染色体12P12. 3的一个 Rho家族基因，它们与GTP和GDP-1功能和细胞内移动有关。RhoGDI2在 正常人体组织或器官中广泛表达,但在人类各种类型肺瘤及肺瘤转移患者 中表达明显下降，甚至缺失。这是它与其它肿瘤转移抑制基因不同之处， 具有广谱的癌症转移抑制作用。本发明的检测试剂盒是采用核酸杂交技术 和组化免疫方法相结合，以RhoGDI2基因为检测对象，合成探针是RhoGDI2 基因的DNA或RNA序歹。，检测的底物是人体血液标本白细胞或组织细胞的RNA的表达量。原位杂交技术的显示方法能提供RhoGDI2基因的半定量或 定量表达程度判定。根据杂交后免疫组化显色判定以上基因的表达量，癌 症病人RhoGDI2基因表达低或不表达，即不显色，正常人有50°/。的表达量， 显色深。本发明的核酸杂交基本过程包括下列几个步骤。(l)制备样品 首先需要从待检测组织样品提取RNA。 RNA样品则可直接在变性条件下电 泳分离，然后转印并交联固定。(2)制备探针探针是指一段能和待检测 核酸分子^Utt配对原则而结合的核酸片段。在核酸杂交实验中，探针需 要被标记上可直接检测的元素或分子。这样，通过检疫与恩印膜上的核酸 分子结合上的探针分子，既可知道被检测的核酸片段在膜上的位置，也就 是在电泳凝胶上的位置，也就知道了它的分子大小。本试剂盒中探针用地 高辛标记。(3)杂交首先要进行预杂交，即用非特异的核酸溶液封闭膜 上的非特异性结合位点。由于转印在膜上的核酸分子已经是变性的分子， 所以杂交过程中只需变性标记好的探针,再让探针与膜在特定的温度下反 应，然后洗去未结合的探针分子即可。(4)检测用相应的免疫组织化学 的方法进行4全测。具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂交、免疫组化染 色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括1)、将待测标本》t^反应槽中；2)、仪器自动弃去液体，自动力口消化液；3)、仪器自动弃去液体，自动后固定；4)、仪器自动弃去液体，自动预杂交(42。C);5)、仪器自动弃去液体，l)动清洗；6)、仪器自动弃去液体，自动杂交(42°C );7) 、仪器自动弃去液体，自动清洗；8) 、仪器自动弃去液体，自动与DIG抗体培养(室温)；9) 、仪器自动弃去液体，自动清洗，显色；10) 、取出去于片4竟斗企。 本发明的技术方案如下一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记 物、杂交液、增效剂，其中，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1 所示。所述的标记物选自；^射性核素或非》文射性标记物。 所述的放射性核素选自3H、 35S、 1251或32p中的一种。 所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根 过氧化酶或荧光素中的 一种。所述的非放射性标记物优选自地高辛。 所述的杂交液增效剂是碱性磷酸酶抗体。 一种RhoGDI2基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤a、 将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；b、 检测a步骤得到的杂交复合体。a步骤中形成杂交复合体的条件为核酸杂交的温度为42 °C;核酸杂交的时间为16 - 24小时，所述的底物选用血液单核 细胞标本。一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症早期转移、 复发疾病药物中的应用。所述的癌症是肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、子宫 癌或胰腺癌。本发明所公开一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法 和应用，其优点表现在本发明提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的 特点。同时，本发明的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍 使用和推广。克服了目前对RhoGDI2基因的研究都釆用高通量基因芯片方 法，而这些方法多用于科研方面，不适应临床应用的缺陷。本发明的临床 意义是更早期跟踪检测癌症发生和病理演变过程中癌细胞发生转移的情 况。本发明的诊断试剂盒与临床上其它检测癌胚蛋白标志物，以及影像医 学检查有显著不同。本发明可以在基因水平上检测RhoGDI2基因异常表 达，在影像医学检查未发现占位性癌病灶复发之前，癌症生化指标未产生 异常之前，亦未形成肺瘤之前，能及早做到以上基因表达异常的信息采集， 给临床癌症病患一个真正的早期诊断以及治疗后转移复发及早预测。这样 才有可能实施癌症的早期诊断、早期预防、早期治疗，有可能从源头上彻 底根治癌症恶疾。
图1:正常人血液RhoGDI2原位杂交结果。 图2:癌症病y^jk液RhoGDI2原位杂交结果。图3:正常人及各年龄段的RhoGDI2基因表达量方块图(统计学分析)。图4:正常人及各年龄段的RhoGDI2基因表达量曲线图(统计学分析)。 图5:各类癌症患者及各年龄段的RhoGDI2基因表达量方块图(统计 学分析)。图6:各类癌症患者及各年龄段的RhoGDI2基因表达量曲线图(统计 学分析)。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应该理解，下面的实 施例用于说明而非限定本发明内容，任何形式上的改变或变通将落入本发 明的保护范围。实施例1一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒一种RhoGDI2基因的原位杂交4全测试剂盒，包括杂交纟果针、标记 物、杂交液、增效剂，其中，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO. 1 所示。杂交探针用地高辛标记。试剂盒中的其它液体和标本组成 如下消化液100n 1/管l管/盒无色透明液体保护液100|a 1/管l管/盒无色透明液体预杂交液1300ja 1/管2管/盒无色透明液体正义杂交液10ju 1/管l管/盒无色透明液体反义杂交液10pl/管l管/盒无色透明液体封闭液lOOOp 1/管l管/盒无色透明液体石威性-舞酸酶抗体l"/管l管/盒无色透明液体显色剂A175)il/管l管/盒黄色液体显色剂B320|u 1/管l管/盒无色透明液体緩沖液I 10x90ml/瓶l瓶/盒浅黄色或无色透明液体緩冲液II 10x80ml/瓶1瓶/盒浅黄色或无色透明液体緩沖液m iox20ml/瓶3瓶/盒浅黄色或无色透明液体緩冲液IV 10x90ml/瓶l瓶/盒浅黄色或无色透明液体固定液90ml/瓶l瓶/盒无色透明液体阳性对照标本6片/盒上述试剂成分说明(所有试剂购自SIGMA)1、 消化液20mg/ml蛋白酶K， 100mg蛋白酶K,力卩DEPC-H20 5ml;2、 保护液0. 2g的glycine加入lml的1 x |￡沖液I ;3、 预杂交液lx緩沖液II 7. 5ml 50 xD 3ml10mg/ml yest t-RNA 750ul llmg/ml SALMON TESTES DNA 682ul 0. 04M EDTA 3ml 50% formamide 15ml;4、 封闭液0. 03g的bloking (购买自罗氏公司)加入lml lx緩 冲液III;5、 lOx緩冲液I: (PH7, 1-7. 4)NaCl 80gNa2HP04. 12H20 360g KC1 2g KH2P04 2g加三蒸水至ll,并高压灭菌；6、 lOx緩冲液II: (PH7. 0) NaCl 175. 3g柠檬酸钠 88. 2g HC1 几滴加三蒸水至ll，并高压灭菌；7、 緩沖液III: (PH7. 9) Tris 121. lgNaCl 87. 66g HC1 60ml左右 加三蒸水至ll,并高压灭菌；8、 緩沖液IV:1M Tris-HCl (PH9. 5) Tirs 121.1g加HCl 3ml左右，加水900ml，调 PH至9. 5,加水至ll，并高压灭菌；1M NaCl: NaCl 58. 44加水至11,并高压灭菌；0. 5MMgCl2: 101. 65g MgC12. 6&0加水至11，并高压灭菌；9、 固定液多聚甲醛40g加lx緩冲液l至ll,稍加热(约50-60度) 搅拌至溶解；1310、 显色剂A: NBT lg加70%DMF11. 44ml;11、 显色剂B: BCIP lg加100°/。DMF30ml。 本发明的试剂盒可以多人份使用或一人份使用。实施例2一种RhoGDI2基因的原位杂交4企测方法一、 标本处理1、 用10ml的离心管，装4. 5ml淋巴细胞分离液，再将3 ml抗凝血緩 慢加入含有淋巴细胞分离液(血淋巴细胞分离液=1: 1. 5)的离心管 中，2000r/min离心10 min;2、 吸取中间层白细胞至另一离心管中，再在此管中加入约两倍的lx 緩沖液I，混匀，1500g/min离心10 min;3、 弃上清.沉淀加入约两倍的lx緩冲液1,混匀，1500g/min离心10min;4、 弃上清，并把试管口多余的液体用擦手纸吸去。再将沉淀制成悬液， 滴在玻片上推片，自然干燥。(有条件的医院可以用制片机制片。)3ml血， 可以做4张片子；5、 用40ml 4°/。固定液,在玻璃缸中，固定30min,再用lx緩沖液I洗 5min。每釭可以》文16片；6、 标本可保存在-20。C，或继续啦支实马企。二、 将实施例1制得的试剂盒中试剂配制成使用浓度1、 将10 x緩冲液I用三蒸水按1: 10稀释成1 x緩冲液I ;2、 将20x緩冲液n用三蒸水按1:10稀释成2x緩冲液n;按1: 100稀释成0. 2 x緩冲液II;按1: 200稀释成0. 1 x緩沖液II;3、 将10 x緩沖液III用三蒸水按1: 10稀释成1 x緩冲液III;4、 10x緩沖液IV用三蒸水按1: 10稀释成x緩冲液IV (取1#, 2#, 3#各10ml,加水至100ml既可)。三、实验步骤1、 取每位待检者标本两张，(另外两张留作复查用)及阳性对照标本 两张(每次实验做一对阳性对照)；2、 在玻璃缸里加消化液(消化液100ul力。1 x緩冲液199. 9ml，即为使 用浓度)20ml。 37。C水浴预热IO分钟。放进16张玻片，37。C处理12min， 再用1 x緩冲液I洗5min;3、 用0. 2%的保护液(保护液lml力口 1 x緩沖液199ml即为使用浓度) 洗10min，三蒸水洗5min，以上过程都在玻璃缸进行。玻片自然干燥；4、 将玻片放入保湿盒内，加预杂交液20ul/片.盖上盖玻片，盖紧保湿 盒，》文在42。C恒温水浴箱中3h以上；5、 取出玻片，弃去盖玻片，将玻片放入玻璃缸内，用70%, 90%,95%的乙 醇各洗2min ,自然干燥；6、 将玻片放入保湿盒内，每位病人标本两张， 一张加正义杂交液20u1/ 片，另一张加反义杂交液20ul/片，盖上盖玻片，盖紧保湿盒，放在42。C 恒温水浴箱中16-24h;7、 取出玻片，弃去盖玻片，将玻片放入玻璃缸内，在42。C恒温水浴箱中用2 x i爰冲液II洗两次，每次15min， 在42。C恒温水浴箱中用0. 2 x緩冲液II洗一次，每次15min,在42。C恒温水浴箱中用0. 1 x緩冲液II洗两次，每次15min，8、 用lx緩沖液in洗30s，取出玻片，自然干燥；9、 将玻片方t7vf呆湿盒内，力口 0. 5%1封闭液(lml封闭液加5mll x緩冲 液III) 100ul/片，盖紧保湿盒，在室温下作用30min;10、 取出玻片，用1 x緩冲液ni洗30s，自然干燥；11、 将玻片放入保湿盒内，加碱性磷酸酶抗体(加入1. 8ml1 x緩沖液 in)100ul/片，盖紧保湿盒在室温下作用30min;12、 取出玻片，用1 x緩沖液III洗3次，每次15min;13、 1 x緩冲液iv洗2min，加显色剂(显色剂A73. 3ul，显色剂B157. 5ul 加到30mll x緩冲液IV中，混匀)，室温避光12h以上；14、 用三蒸水洗5min，自然干燥，(用甘油加10%的1 x緩沖液I混匀) 封片镜检。四、结果判断在光镜下计数100-300个细胞，计算染上紫色细胞的百分比。阳性对 照标本加反义杂交液的应该80。/。以上染上紫色。所有加正义杂交液的阴性 内对照应无色。地高辛标记的cDNA、 RNA和寡核苷酸纟采针，不但纟笨针的具 有生物素标记优点，还克服了生物素标记的探针在原位杂交过程中受组织 内源性生物素干忧等缺点，将该杂交探针与人体血液白细胞的待测RNA 核酸进行杂交，再用免疫组化的方法显色，在光镜下观察mRNA的存在和 定位,根据染色的细胞数，判断目的基因的表达量。本发明方法是目前常 用的核酸原位杂交技术，该方法通过检测底物细胞中的RhoGDI2基因表达 量，用来确定癌症是否发生和/或转移。临床研究表明，RhoGDI2基因并基因在正常人中高表达(正常人血液RhoGDI2 原位杂交结果见图1,正常人及各年龄段的RhoGDI2基因表达量见图3, 图4 )。如果RhoGDI2基因表达低或零表达(癌症病Ajk液RhoGDI2原位 杂交结果见图2,各类癌症患者及各年龄段的RhoGDI2基因表达量见图5, 图6),说明癌症已经复发、转移、扩散，从而获得癌症的诊断信息。当 检测到RhoGDI2基因的表达低于正常对照时，则可预测受试者为癌症早期 转移或癌症转移易感者，这些癌症包括肺癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌、前 列腺癌、子宫癌、胰腺癌。SEQUENCE LISTING<110> 芮屈生物技术(上海)有限公司<120> —种RhoGDI2基因的原位杂交4全测试剂盒及其检测方法和应用<130> /<160> 1<170> Patentln version 3.1<210> 1<211> 1216<212> DNA<213> 智人(Homo sapiens)<400> 1ctcattgacttccttcctgttctaactgccagtactcagaagtcagagttgagagacaga60ggc歸ccggacagagacgtgaagcactgaataaatagatcagaatgactgaaaaagccc120cagagccacatgtggaggagg"gatgatg3tgagctggacagcaagctcaattataagc180ctccaccacagaagtccctgaaagagctgcagg謹tggacaaagatgatgagagtctaa240ttaagtacaagaaaacgctgctgggagatggtcctgtggtgacagatccgaaagccccca300atgtcgttgtcacccggctcaccctggtttgtgagagtgccccgggaccaatcaccatgg360accttactggagatctggaagccctcaaaaaggaaaccattgtgttaaaggaaggttctg420aat"agagtcaaaattcacttcaaagtgaacagggatattgtgtcaggcctgaaatacg480ttcagcacacctacaggactggggtg扁gtggataaagcaacatttatggttggcagct540atggacctcggcctgaggagtatgagttcctcactccagttgaggaggctcccaagggca600tgctggcgcgaggcacgtaccacaacaagtccttcttcaccgacgatgacaagc汪agacc660acctcagctgggagtggaacctgtcgattaag卿gagtggacagaatgaatgcatccac720ccctttccccacccttgccacctggaagaattctctcaggcgtgttcagcaccctgtccc780tcctccctgtccacagctgggtccctcttcaacactgccacatttccttattgatgcatc840ttttcccaccctgtcactcaacgtggtccctagaacaaga ggcttaaaaccgggctttca900cccaacctgctccctctgatcctccatcagggcc柳tcttccacgtctccatctcagta960taatatttccctgtcttacccctattcaagcaactagaggccagaaaatg1020ggcaaattat cactaacagg tctttgactc aggttccagt agttcattct aatgcctaga 1080ttcttttgtg gttgttgctg gcccaatgag tccctagtca catcccctgc cagagggagt 1140tcttcttttg tgagagacac tgtaaacgac acaagagaac aagaataaaa caataactgt 1200gtgtgttctg gctgag 121权利要求
1、一种RhoGDI2基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物、杂交液、增效剂，其特征在于所述的杂交探针序列如SEQ IDNO.1所示。
2、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的标记物 选自放射性核素或非放射性标记物。
3、 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的放射性 核素选自3H、 35S、 1251或32P中的一种。
4、 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的非放射 性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的 一种。
5、 根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述的非放射 性标记物优选自地高辛。
6、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的杂交液 增效剂是碱性磷酸酶抗体。
7、 一种RhoGDI2基因的原位杂交4全测方法，其特4正在于，该方 法包括以下步骤a、 将权利要求1所述试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接 触，形成杂交复合体；b、 检测a步骤得到的杂交复合体。
8、 根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于a步骤中形 成杂交复合体的条件为核酸杂交的温度为42°C;核酸杂交的时间为16-24小时，所述的底物选用血液细胞标本。
9、 根据权利要求1-6任一所述的试剂盒在制^^企测癌症早期转移、复 发疾病药物中的应用。
10、 根据权利要求9所述的应用，所述的癌症是肝癌、肺癌、胃癌、乳 腺癌、结肠癌、前列腺癌、子宫癌或胰腺癌。
全文摘要
本发明涉及一种RhoGDI2(Rho GDP dissociation inhibitor beta)基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用。所述的试剂盒包括杂交探针、标记物、杂交液、增效剂，其中所述的杂交探针序列如SEQ ID N0.1所示。一种RhoGDI2基因的原位杂交检测方法包括以下步骤a.将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；b.检测a步骤得到的杂交复合体。所述的试剂盒在制备检测癌症早期转移、复发疾病药物中的应用。本发明提供的试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点。同时，本发明的检测方法操作方便、简单，能在区级以上医院普遍使用和推广。
文档编号G01N33/53GK101328499SQ20081004082
公开日2008年12月24日 申请日期2008年7月22日 优先权日2008年7月22日
发明者张云福, 裘建英 申请人:芮屈生物技术(上海)有限公司