专利名称：灵芝孢子破壁率的测定方法
技术领域：
本发明涉及真菌孢子破壁率的测定方法，尤其是灵芝孢子破壁率的测定 方法。
背景技术：
灵芝孢子有两层十分坚实的孢壁，不容易受化学和外力破坏，对孢子内 部有一定的保护作用，因而不利于人体的消化和有效功能成分的吸收，甚至 服用后，部分孢子在粪便中仍然完整无缺。为了提高灵芝孢子粉的保健、药 效功能，破壁处理是灵芝孢子产品加工过程中的一项非常重要的工序，孢子 的破壁率已经成为灵芝孢子产品质量鉴定的必要指标之一。目前常用的方法 是用一定浓度孢子的水悬浮液，点滴于血球计数板上，在显微镜下读出破壁 前后完整孢子的数量，然后计算出单位重量所含完整孢子的数量，利用公式
破壁后完整的孢子
孢子破壁率(％) - (l— -■ ) X100%
破壁前完整抱子数
计算出孢子的"破壁率"。在检测中，孢子在悬浮液中的分散均匀度对测定 数据的准确性有极大的影响。 一个分布不均、结块太多的孢子悬浮液，不仅 难以读出孢子数量，更无法保证读数的精确性和代表性。目前只能通过增加 孢子的水悬浮液的密度和黏度，来改进孢子的悬浮性(如在孢子的水悬浮液 中加蔗糖、食盐或硫酸锌等)，以及使用高速剪切搅拌来达到均匀分散孢子 的目的。尽管如此，孢子平均分散的程度和可靠性还是不能保证，这可从图
1、图2中看出。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处，提供一种使孢子平 均分散的程度较高，能较为精确的测定灵芝孢子破壁率的方法。
本发明为一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其要点在于(1)取适量同 一批次的灵芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B，在未破壁孢子粉及破壁孢 子粉B分别加入固体分散剂充分混合，用液体溶剂分别稀释上述两种混合物， 定容后，混合均匀；
(2)分别取上述两份灵芝孢子粉悬浮液点滴在血球计数板上，在显微 镜下，读出孢子粉破壁前后所含完整孢子的数量，计算出单位重量所含完整 孢子的数量，利用公式
破壁后完整孢子数
孢子破壁率(％) = (l— - ) xioo%
破IL前完整抱子数
计算出孢子破壁率。
本发明利用"干物颗粒间的均匀混合"原理，在孢子粉与溶剂混合成悬 浮液之前先与固体分散剂进行均匀混合，避免孢子结团以及不能均匀分散的 缺陷，达到了计数精确、检测结果具有代表性的目的。
在未破壁孢子粉A或破壁孢子粉B中所加的固体分散剂量为所取未破壁 孢子粉A或破壁孢子粉B量的0. 5倍至它在溶剂中的饱和浓度量。液体溶剂 一般选用蒸馏水，.固体分散剂为颗粒微小、不结块、并可以完全溶解于所选 用的液体溶剂的固体粉未或晶体，如蔗糖、食盐、硫酸锌等，可以由一种物 质构成，也可由多种物质混合而成，大小为20-200目之间，最好是50-100 目的细糖粉。当它们溶解在水里后，也有增加水的密度和黏度的作用，有利 于孢子在悬浮液中的物理稳定性，但这不是本专利所采用的"固体分散剂" 最重要的原因。为了计量准确最好将灵芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B在与固体分 散剂混合前先进行烘干。烘干温度为5(TC-8(TC，烘千时间大约3-5小时即 可。
为了增加孢子在水中的分散性和减少孢子重新聚集，在定容前往混合液 中加入表面活性剂，所加的量占未破壁孢子粉A重量的0. 05%—5%之间。表 面活性剂可为土温80，也可以使用其他类同的水溶性表面活性剂或清洁剂， 如家用洗涤剂、清洁剂、或乳化剂TERGIT0L等。
所谓的机械搅拌是指可以使用如超声震荡器、乳化机、磁振荡机或旋涡 混合器等来促进悬浮液的均匀混合。
由于孢子破壁后，单位重量中所含完整的未破壁的孢子数较少，为了计 量准确，所取的破壁孢子粉B的量为未破壁孢子粉A的1. 5—3倍。
本发明的优点在于利用"干物颗粒间的均勻混合"原理，在孢子粉与水 混合成悬浮液之前先与固体分散剂进行均匀混合，避免孢子结团以及在悬浮 液中不能均匀分散的缺陷，从而达到了计数精确、检测结果具有代表性的目 的。
图1显微镜下在加糖的水溶液里的孢子分布状态。
图2显微镜下在加糖和土温的水溶液里的孢子分布状态
图4显微镜下在用本专利方法处理后破壁孢子分布状态。
具体实施例方式
为了充分公开本发明的灵芝孢子粉破壁率的测定方法，以下结合实施例 加以说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1 :芝孢子粉破壁率的测定，具体步骤如下 1.制备孢子悬浮液(1 )取适量的破壁前后的灵芝孢子粉A(未破壁孢子)和B(破壁孢子)， 在烘箱60。C下烘干5小时。
(2)精确定量称取经烘干的孢子粉A(W.、=Q. 20g)和破壁孢子粉B (WB=0. 40g)。
(3 )分别称取5g经过研磨、过60目筛的蔗糖粉末与孢子粉A及破壁 孢子粉B充分混合，使混合后的干粉外观颜色均匀。
(4)用蒸馏水分别溶解上述两个混合千粉，在孢子粉和破壁孢子粉样 品溶液中各加0. lmL表面活性剂土温80 (Tween80)，并用蒸馏水定容到100ml 的容量瓶中，再以超声震荡30min，使孢子在水溶液中充分分散。
2. 观察与计数
(1 )用吸管吸取一滴上述检测用孢子悬浮液，置于盖玻片的边缘，使 液体緩緩渗入，多余的液体用吸水纸吸除。稍等片刻后，在显微镜下观察孢 子。如图3、图4所示，孢子平均分散。
(2 )在16 x 40倍数的显微镜下，分别读取血球计数板4个对角与中 央的中格(共5个中格)里所含有完整的孢子数。重复上述步骤(1)、 (2) 三次，然后计算它们的平均数，NA和NB。
3. 数据计算
每毫升溶液灵芝孢子数卜(每个中格平均数n/16 ) x 400x 10000 分别算出NA和NB
(2)每克干重孢子粉含完整灵芝孢子的平均数 NA=NAxl00/WA ; NB=NBxiOO/WB
(3 )灵芝孢子破壁率X- ( 1- NB/ NA) xioo% 实施例2 芝孢子粉破壁率的测定具体步骤如下 1制备孢子悬浮液
(1) 取适量的破壁前后的灵芝孢子粉A (未破壁孢子)和B (凌壁孢 子)，在烘箱60。C下烘干3小时。
7(2)精确定量称取经烘干的孢子粉A(WA=Q. 2Qg)和破壁孢子粉B (WB=0. 40g)。
(3 )分别称取5g的硫酸锌与孢子粉A及破壁孢子粉B充分混合，使混 合后的干粉颜色均匀。
(4 )用蒸馏水分别溶解上述两个混合干粉，在孢子粉和破壁孢子粉样 品溶液中各加0. lmL表面活性剂土温80 (Tween 80)，并用蒸馏水定容到 100ml的容量瓶中，再以旋涡混合器搅拌lmin，使孢子在水溶液中充分分散。 2.观察与计数-同实施例1 3数据计算-同实施例1
实施例3 芝孢子粉破壁率的测定具体步骤如下 1制备孢子悬浮液
(1) 取适量的破壁前后的灵芝孢子粉A (未破壁孢子)和B (破壁孢 子)，在烘箱80。C下烘干5小时。
(2) 精确定量称取经烘干的孢子粉A (WA=Q. 20g)和破壁孢子粉B (WB=0. 40g).
(3 )分别称取5g经过研磨、过60目筛的食盐粉末与孢子粉A及破壁 孢子粉B充分混合，使混合后的干粉颜色均匀。
(4)用蒸馏水分别溶解上述两个混合干粉，在孢子粉和破壁孢子粉样 品溶液中各加一滴家用洗洁精，并用蒸馏水定容到100ml的容量瓶中，再以 乳化机搅拌5min，使孢子在水溶液中充分分散。 2观察与计数-同实施例1 3数据计算-同实施例1
三个实施例所得的镜检结果和孢子破壁率都很一致，表明本发明的实用 性和可^"性极高。 '
权利要求
1. 一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于(1)取适量同一批次的灵芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B，在未破壁孢子粉及破壁孢子粉B中分别加入固体分散剂充分混合，用液体溶剂分别稀释上述两种混合物，定容后，混合均匀；(2)分别取上述两份灵芝孢子粉悬浮液点滴在血球计数板上，在显微镜下，读出孢子粉破壁前后所含完整孢子的数量，计算出单位重量所含完整孢子的数量，利用公式计算出孢子破壁率。
2. 根据权利要求1所述的一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于， 在未破壁孢子粉A或破壁孢子粉B中所加的固体分散剂量为所取未破壁 孢子粉A或破壁孢子粉B量的0. 5倍至它在溶剂中的饱和浓度量。
3. 根据权利要求1所述的一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于， 固体分散剂为颗粒微小、不结块、并可以完全溶解于所选用的液体溶剂 的固体粉未或晶体。
4. 根据权利要求1所述的一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于， 固体分散剂的颗粒大小为20-200目。
5. 根据权利要求4所述的一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于， 固体分散剂为20-100目的细糖粉。
6. 根据权利要求1所述的一种测定灵芝孢子破壁率的方法，其特征在于， 灵芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B在与固体分散剂混合前先进行烘 千。
7. 根据权利要求1所述的一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于， 所述的定容后，混合均勻，是指使用机械搅拌来使混合液混合均匀'，使 用超声震荡器或乳化机或磁振荡机或旋涡混合器来促进悬浮液的均匀混 合。
8. 根据权利要求1所述的一种灵芝孢子破壁率的测定方法，其特征在于， 在混合液加入蒸馏水定容前加入表面活性剂，所加的量占未破壁孢子粉 A重量的0. 05--5%之间。
9. 根据权利要求8所述的一种测定灵芝孢子破壁率的方法，其特征在于， 表面活性剂为土温8 0或为其他类同的水溶性表面活性剂或清洁剂。
10. 根据权利要求1所述的一种测定灵芝孢子破壁率的方法，其特征在 于，破壁孢子粉B的量为未破壁孢子粉A的1. 5—3倍。
全文摘要
本发明涉及真菌孢子破壁率的测定方法，尤其是灵芝孢子破壁率的测定方法。本发明为一种测定灵芝孢子破壁率的方法，其要点在于取适量同一批次的灵芝未破壁孢子粉A和破壁后孢子粉B，在未破壁孢子粉及破壁孢子粉B分别加入固体分散剂充分混合，用液体溶剂分别稀释上述两种混合物，定容后，混合均匀，在显微镜下观察并计算出单位重量所含完整孢子数量，得出孢子破壁率。本发明的优点在于利用“干物颗粒间的均匀混合”原理，在孢子粉与水混合成悬浮液之前先与固体分散剂进行均匀混合，避免孢子结团以及不能均匀分散的缺陷，达到了计数精确、检测结果具有代表性的目的。
文档编号G01N33/48GK101446581SQ20081007186
公开日2009年6月3日 申请日期2008年10月6日 优先权日2008年10月6日
发明者晔 李, 柯斌榕, 黄晋之, 黎志银 申请人:福建仙芝楼生物科技有限公司