专利名称：一种用于分析dna的聚丙烯酰胺凝胶显带的快速方法
技术领域：
本发明涉及一种简单快速的对聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)进行 DNA显带的方法。
背景技术：
分子生物学实验中，DNA显带通常使用的技术为Southern杂交、 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)电泳技术。Southern杂 交由于步骤繁琐、耗时长和使用同位素具有放射性污染等缺点，使用 较少。琼脂糖凝胶电泳技术同聚丙烯酰胺凝胶相比，分辨率不高。聚 丙烯酰胺凝胶由于其高分辨率，因而广为使用。DNA区带染色较常用 的有银染和溴化乙锭(EB)染色，EB染色的原理是结合到DNA分子上 的EB被紫外照射激发产生荧光而达到观测目的，尽管这种方法操作简 便快速，并且能够满足大多数实验要求的灵敏度，但是它有两点不足 之处(1) EB对操作人员有很强的致癌作用，对环境也造成了很大 程度的污染，从而使得对凝胶的操作与处理变得复杂起来(2)需要 合适的紫外照射对核酸还具有二聚体化和畏縮作用。
通常，DNA的PAGE胶的银染过程包括固定、银染、洗脱、显色和
终止。电泳完毕后，首先用固定剂将核酸或者蛋白质固定到凝胶上， 然后是银染剂中的银离子与之牢固结合，再通过还原剂将银离子还原 从而发生银棕色显色反应。根据银染所用的银试剂，可分为以酸性形 式存在的硝酸银染色方法和以碱性形式存在的银氨染色方法，其中又 以硝酸银染色方法更为普遍。
DNA的PAGE胶的银染显带方法已有很多人做过研究，但其方法较
为复杂，重复性较差，不够规范，灵敏度较低，更大的缺点是显色液中使用甲醛，对人体和环境均有较大的危害。发明内容本发明目的在于，为解决目前存在的问题，经过大量的试验研究，研制出一种用于分析DNA的聚丙烯酰胺凝胶显带的简单快速方法，该 方法为染色、漂洗、显色和终止四步骤完成，其中，显色液中将常规 的甲醛改做乙醛，乙醛相对甲醛的毒性较小，在得到清晰的DNA条带 的同时， 一定程度上减轻了对人体和环境的危害。其次，具有DNA带 型和背景对比度高，分辨率高，操作步骤少，耗时短，使用试剂少， 重复性好等优点。适用于植物分子生物学中多聚酶链式反应(PCR 反应)及随机扩增技术等扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)显 色。本发明所述的一种用于分析DNA的聚丙烯酰胺凝胶显带的简单 快速方法，该方法为染色、漂洗、显色和终止步骤完成，具体操作按 下列步骤进行-a、 染色将聚丙烯酰胺凝胶加入到染色液中染色5-10分钟；b、 漂洗用双蒸水漂洗步骤a中经染色的聚丙烯酰胺凝胶2次， 每次5-20秒钟；c、 显色将步骤b中处理的凝胶用显色液显色5-8分钟至条带清 晰，所述的显色液为乙醛和氢氧化钠的水溶液；d、 终止将步骤C显色的凝胶用终止液终止显色l-5分钟即可得到清晰的DNA条带。步骤a所述的染色液为0. 1-0. 3wty。硝酸银水溶液。步骤c所述的显色液用量为0. 4-lv9&甲醛和2-4wty。氢氧化钠水溶液，其中乙醛浓度为400/0。步骤d所述的终止液为8-10vy。乙酸。
图1为本发明小麦761幼苗期总RNA RT-PCR扩增后的PAGE胶显带效果图。
具体实施方式
实施例l:a、 染色将电泳完毕的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)取出后，双 蒸水快速冲洗一遍，加入到0. lwt。/。染色液中染色10分钟；b、 漂洗用双蒸水快速漂洗步骤a中经染色的PAGE凝胶2次，每次5秒钟；c、 显色将步骤b中处理的凝胶用含0.4v。/o乙醛和2wtQ/()氢氧化钠 水溶液的显色液显色8分钟至条带清晰，其中乙醛浓度为40%;d、 终止将步骤C显色的凝胶用8V。/。乙酸终止液终止显色1分钟即可得到清晰的DNA条带。实施例2:a、 染色将电泳完毕的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)取出后，双 蒸水快速冲洗一遍，加入到0. 2w"/o染色液中染色8分钟；b、 漂洗用双蒸水快速漂洗步骤a中经染色的PAGE凝胶2次，每次15秒钟;c、 显色将步骤b中处理的凝胶用含0.8v9()乙醛和3wt。/。氢氧化钠 水溶液的显色液显色7分钟至条带清晰，其中乙醛浓度为40%;d、 终止将步骤c显色的凝胶用9vQ/。乙酸终止液终止显色3分钟即 可得到清晰的DNA条带。实施例3a、 染色将电泳完毕的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)取出后，双 蒸水快速冲洗一遍，加入到0. 3wt。/。染色液中染色5分钟；b、 漂洗用双蒸水快速漂洗步骤a中经染色的PAGE凝胶2次， 每次20秒钟;C、显色将步骤b中处理的凝胶用含lv。/。乙醛和4wt9()氢氧化钠水溶液的显色液显色5分钟至条带清晰，其中乙醛浓度为40%;d、终止将步骤C显色的凝胶用10v。/。乙酸终止液终止显色5分钟
即可得到清晰的DNA条带。 实施例4
a、 染色将电泳完毕的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)取出后，双 蒸水快速冲洗一遍，加入到0. 25wt呢染色液中染色7分钟；
b、 漂洗用双蒸水快速漂洗步骤a中经染色的PAGE凝胶2次，
每次IO秒钟；
C、显色将步骤b中处理的凝胶用含0.6v。/c)乙醛和2wtQ/。氢氧化钠 水溶液的显色液显色6分钟至条带清晰，其中乙醛浓度为40%;
d、终止将步骤C显色的凝胶用9W乙酸终止液终止显色2分钟即
可得到清晰的DNA条带。
权利要求
1、一种用于分析DNA的聚丙烯酰胺凝胶显带的方法，其特征在于该方法为染色、漂洗、显色和终止步骤完成，具体操作按下列步骤进行a、染色将聚丙烯酰胺凝胶加入到染色液中染色5-10分钟；b、漂洗用双蒸水漂洗步骤a中经染色的聚丙烯酰胺凝胶2次，每次5-20秒钟；c、显色将步骤b中处理的凝胶用显色液显色5-8分钟至条带清晰，所述的显色液为乙醛和氢氧化钠的水溶液；d、终止将步骤c显色的凝胶用终止液终止显色1-5分钟即可得到清晰的DNA条带。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a所述的染色 液为0. 1-0. 3wty。的硝酸银水溶液。
3、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤c所述的显色 液用量为0.4-lv。/。乙醛和2-4wty。氢氧化钠水溶液，其中乙醛浓度为 40%。
4、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤d所述的终止 液为8-10vQ/。乙酸。
全文摘要
本发明涉及一种用于分析DNA的聚丙烯酰胺凝胶显带的简单快速方法，该方法为染色、漂洗、显色和终止四步骤完成，其中，显色液中将常规的甲醛改做乙醛，乙醛相对甲醛的毒性较小，在得到清晰的DNA条带的同时，一定程度上减轻了对人体和环境的危害。其次，具有DNA带型和背景对比度高，分辨率高，操作步骤少，耗时短，使用试剂少，重复性好等优点。适用于植物分子生物学中多聚酶链式反应(PCR反应)及随机扩增技术等扩增产物的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)显色。
文档编号G01N21/77GK101294913SQ20081007289
公开日2008年10月29日 申请日期2008年6月5日 优先权日2008年6月5日
发明者平 何, 曹玉锦, 静 李, 赵民安, 靳先静 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所