专利名称：伏格列波糖中间体的分析检测方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，更具体的说，是涉及伏格列波糖中间
体(IS)-(1 (羟基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧基)-甲 基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-l， 2， 3， 4-环己四醇及其非对映异构体的分 离和分析检测方法。
背景技术：
伏格列波糖中间体(1S) -(1 (羟基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-苄基 -1-C-[(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-l， 2， 3， 4-环己四醇作为
伏格列波糖的重要中间体，其在构型上存在光学异构体，即 (1R)-(1(羟基)，2，4/1，3)_2，3，4-三-0-苄基-1-C-[(苄氧基)-甲 基]-6，6-二硫甲基-5-氧_1，2，3，4-环己四醇。因此，对(lS)-a(羟 基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-节基-1-C-[(节氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲 基-5-氧-l， 2， 3， 4-环己四醇的质量控制效果直接影响到最终成品的 质量。
文献US5004838禾口Synthesis of a Branched-Chain Inosose Derivative, J. Org. Chem. Vol 57， No. 13, 1992报道了伏格列波糖中间 体(IS) - (1 (羟基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧基)—甲 基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2, 3， 4-环己四醇及其异构体的制备方法 以及熔点、旋光度等文献参数。该质量控制存在以下不足1、旋光度对手性中间体的质量控制较为粗略，不能准确反映出产品的绝对光 学纯度。2、该方法不能准确控制异构体的限量，对后续合成的产品 质量影响很大。
发明内容
本发明的目的目的在于提供一种伏格列波糖中间体的分析检测
方法，是 一 种应用反相高效液相色谱法分析(is)-(i (羟 基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-O-节基-1-C-[(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲 基-5-氧-l， 2， 3， 4-环己四醇及其非对映异构体的方法。该方法可以准 确分析出(IS)-(I (羟基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-苄基-1-O[(苄氧 基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2, 3， 4-环己四醇的光学纯度，也可 以准确的检测非对映异构体(1R)-(1(羟基)，2， 4/1，3)-2， 3， 4-三-0-节基-1-C-[(节氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-l， 2， 3， 4-环己四醇 的限度，并且该方法具有灵敏度高、精密度好、快速、稳定和简便等 优点。
本发明采用如下技术方案 一种伏格列波糖中间体的检测方法， 用于(1S) - (1 (羟基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧基)-甲 基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2， 3， 4-环己四醇及其非对映异构体的检 测，采用以十八烷基硅垸键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈-醋酸铵 溶液体系或乙腈-磷酸盐溶液体系作为流动相，以检测波长为200niL 300nm，进行反相高效液相色谱法检测。
所述的检测波优选为210nmi2nm。
所述的乙腈-醋酸铵溶液体系是由乙腈和O.lmol/1的醋酸铵溶液按体积比80: 20比例形成的流动相。
本发明的这种分析检测方法，能够用普通的C18柱同步分离 (1S)-(1(羟基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧基)-甲 基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2， 3， 4-环己四醇及其非对映异构体，分离 度高达3.7，能完全基线分离。利用反相高效液相色谱法进行检测分 析，灵敏度高，R型异构体检出限为10ng。能准确检、灵敏地测出 (1S)-(1(羟基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧基)-甲 基]-6，6-二硫甲基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇及其R型异构体的光学 纯度，有效控制R型异构体的限度，为最终成品质量提供有效保证。 本发明所述反相髙效液相色谱法使用的色谱柱可以是不同厂家生产 的、不同型号的十八烷基硅垸键合硅胶为填料的色谱柱。
图l S型异构体高效液相色谱图。
图2 R型异构体高效液相色谱图。
图3 S型+ R型异构体高效液相色谱图。
图4基线噪音高效液相色谱图。
图5 R型异构体检出限高效液相色谱图。
具体实施例方式
下面的实施例是为了有助于更好的理解本发明，而不是以此为 限。就本领域的技术人员而言，在本发明的教导下，对其进行修改或 替代仍属于本发明的保护范围。
实施例l:仪器与条件
日本岛津高效液相色谱仪；浙江大学N2000色谱工作站；色谱柱
采用十八垸基硅烷键合硅胶柱；紫外检测波长210nm;以乙腈 -0. lmo1/1的醋酸铵溶液(80 : 20)为流动相。 实验步骤
取中间体(1S) - (1 (羟基),2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-苄基-l-C- [(苄 氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2， 3， 4-环己四醇适量，用流动相 溶解并稀释成每lml约含lmg的溶液。取此溶液20 u 1注入液相色谱 仪，记录色谱图，由图1可知，中间体(1S)-(l(羟 基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-节基-卜C-[(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲 基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇主峰的保留时间为21.5min。取中间体 (1S)-(1(羟基)，2， 4/1，3)-2，3，4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧基)-甲 基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1, 2, 3， 4-环己四醇的R型异构体适量，用流 动相溶解并稀释成lml约含lmg的溶液。取此溶液20 u 1注入液相色 谱仪，记录色谱图，由图2可知，中间体(IS)-(I (羟 基)，2， 4/1, 3)-2， 3， 4-三-0-节基-l-O[(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲 基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇的R型异构体主峰的保留时间为 18. 3min 。另取中间体(1S) - (1 (羟基)，2， 4/1, 3) -2， 3， 4-三_0-节基 -l-O[(节氧基)-甲基]-6，6-二硫甲基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇的R 型异构体适量，用流动相溶解并适量稀释后与中间体(1S)-(l(羟 基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-苄基-1-C-[(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲 基-5-氧-l， 2, 3， 4-环己四醇溶液混合，取此溶液20 u 1注入液相色谱仪，记录色谱图。由图3可知，中间体(IS)-(I(羟 基)，2， 4/1, 3)-2， 3， 4-三-O-苄基-l-C-[(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲 基-5-氧-1, 2， 3， 4-环己四醇和其R型异构体的分离度良好。
由此可见，此色谱条件可用于伏格列波糖中间体(1S)-(1(羟 基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-节基-l-C- [(苄氧基)-甲基]-6， 6_二硫甲 基-5-氧-1, 2， 3， 4-环己四醇的R型异构体分离和检査。
实施例2:
按上述色谱条件，记录基线噪音0. 22mv、 0.20mv、 0. 15mv、 0. 14mv、 0. 15mv，平均值为0. 17mv。基线噪音的3倍峰高为0. 17mv X3二0. 51mv。
精密称取伏格列波糖中间体(1S)-(l(羟基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三 -0-节基-1-C-[(节氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1，2， 3， 4-环己 四醇的R型异构体0. 0123g置25ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释 至刻度，摇匀。精密量取上述溶液lml分别置100ml量瓶中，加流动 相稀释至刻度，摇匀；精密量取lml分别置10ml量瓶中，加流动相 稀释至刻度，摇匀；得浓度为0. 49u g/ml的溶液，取20 u 1注入液 相色谱仪，记录色谱图得峰高为0.41mv，与3倍基线噪音基本一致。
中间体(1S) - (1 (羟基)，2, 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-苄基-l-C-[(苄氧 基)-甲基]-6，6-二硫甲基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇的R型异构体检 出限为0. 49 u g/ml X 20 u 1X 103 X 10_3二9. 8ng。
故中间体(1S)-(1(羟基)，2， 4/1, 3)-2， 3， 4-三-O-苄基-1-C-[(苄 氧基)-甲基]-6，6-二硫甲基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇的R型异构体的最低检出限量为10ng。说明本仪器能够满足检测的灵敏度要求。
见图4 5。
实施例3:
取中间体(1S) - (1 (羟基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-苄基-1-C-[(苄 氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2， 3， 4-环己四醇样品适量，加流 动相溶解并稀释成每lml约含lmg的溶液，作为供试品溶液。另取中 间体(IS)-(I (羟基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-苄基-1-C-[(苄氧基)-甲 基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2， 3， 4-环己四醇的R型异构体适量，加流 动相溶解并稀释成每lml含g的溶液，作为对照品溶液。按上述 色谱条件，取供试品溶液和对照品溶液各20ul注入液相色谱仪，记 录色谱图，按面积归一化法计算，即得本品的含量；供试品溶液色谱 图中若有与R型异构体保留时间相同的色谱峰，其峰面积不得大于对 照品溶液的主峰面积(0. 5%)。见表1 。 表1 中间体(1S) — (1 (羟基)，2， 4/1， 3) -2， 3， 4-三-0-节基-l-O [(苄氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-l， 2， 3， 4-环己四醇测定结果
表
批号性状熔点rc )比旋度含量(％)R型异构体
040601白色结晶性固体恥.4-97. 1 --36. 5°97. 3未检出
040602白色结晶性固体96. 8-97. 4 --37. 4°96. 3未检出
040603白色结晶性固体恥.9-97. 6 --36. 0°97. 6未检出
040604白色结晶性固体96. 4-96. 9 --36. 5。97. 1未检出
由此可见，该分析方法能准确定量(is)-(i(羟
基)，2， 4/1， 3)-2， 3， 4-三-0-节基-l-C-[(节氧基)-甲基]-6， 6-二硫甲基-5-氧-1， 2， 3， 4-环己四醇及其R型异构体的纯度(
权利要求
1、一种伏格列波糖中间体的分析检测方法，用于(1S)-(1(羟基)，2，4/1，3)-2，3，4-三-O-苄基-1-C-[(苄氧基)-甲基]-6，6-二硫甲基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇及其非对映异构体的分析检测，其特征在于采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈-醋酸铵溶液体系或乙腈-磷酸盐溶液体系作为流动相，检测波长为200nm～300nm，进行反相高效液相色谱法检测。
2、 如权利要求1所述的伏格列波糖中间体的分析检测方法，其 特征在于所述的检测波长为210nm土2nm。
3、 如权利要求1或2所述的伏格列波糖中间体的分析检测方法， 其特征在于所述的乙腈-醋酸铵溶液体系是由乙腈和O.lmol/1的醋 酸铵溶液按体积比80: 20的比例形成的流动相。
4、如权利要求1或2所述的伏格列波糖中间体的分析检测方法， 其特征在于所述色谱柱为C18柱。
全文摘要
本发明一种伏格列波糖中间体的分析检测方法，用于(1S)-(1(羟基)，2，4/1，3)-2，3，4-三-O-苄基-1-C-[(苄氧基)-甲基]-6，6-二硫甲基-5-氧-1，2，3，4-环己四醇及其非对映异构体的分析检测，其特征在于采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈-醋酸铵溶液体系或乙腈-磷酸盐溶液体系作为流动相，检测波长为200nm～300nm，进行反相高效液相色谱法检测。本发明的方法分离效果好，检测灵敏度高。
文档编号G01N30/00GK101566610SQ20081009367
公开日2009年10月28日 申请日期2008年4月21日 优先权日2008年4月21日
发明者杜昌勇, 王晓琳, 肖玉梅 申请人:重庆鼎联制药有限公司