专利名称：流动分析法测定烟草中的纤维素的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用化学流动分析仪测定烟草中纤维素的方法，特别是实现—/烟草中纤维素酶水解成葡 萄糖的条件优化和检测条件的筛选。
背景技术：
纤维素是烟草细胞壁的重耍组成部分之-。细胞壁物质含量越高，烟叶的品质越差，特别是低次烟叶 中纤维素等细胞壁物质含量较高，其烟气会产生强烈的刺激性、呛咳、涩口、枯焦气。因此测定烟草中的 纤维素，对于评价烟叶品质具有重要意义。目前，国外报道的烟草中纤维素的测定主耍來用稀酸、稀碱与样品依次共煮后用有机溶剂处理，再经 烘干后称重的方法，这种方法操作繁琐，费力耗时，且由于操作人员的技术差异会带来很大的误差。近 年来，近红外(NiR)光谱分析技术也有用于烟草中纤维素含量的测定，但是因其数据模型的建i〉:需耍大量 的数据支撑，应用起来有相当的局限性。因为酶水解的转一性和高效性，另外流动分析仪在烟草行业内的应用己经很成熟了，所以应用流动分 析仪检测烟草中的纤维素具有很大的可行性。因此，根据纤维素水解后生成葡萄糖的性质，利用纤维素酶 酶解烟草中的纤维素得到葡萄糖后，用流动分析仪检测还原糖含虽，纤维素的含量以葡萄糖计。发明内容本发明的目的是建立一种利用纤维素酶酶解烟草中的纤维素得到葡萄糖后，用流动分析仪检测还原糖 含量来测定测定烟草中纤维素的方法。本发明采取的技术方案为1. 将烟草样品磨碎，并过40目筛，准确称取烟末0.25g (精确至0.0001g)置于100mL维型瓶中。2. 加入25毫升5%的醋酸溶液摇床上萃取30分钟。3. 用G4玻璃砂心漏斗抽滤，蒸馏水清洗滤渣3次(每次30毫升左右)，用含0.3g纤维素酶(活力 >15000DU)的柠檬酸/柠檬酸三钠缓冲溶液(PH4.75) 50毫升,将滤渣洗进100毫升锥型瓶中，然后将锥型瓶放 进恒温摇床上水解，水解的条件:温度37摄氏度；时间为24小时。再将水解后的样品用G4玻璃砂心漏斗抽 滤，收集滤液，用蒸馏水定容到IOO毫升。4. 用流动分析测定烟草中纤维素水解得到的葡萄糖，流动分析仪的参数设定为进样时间60秒清 洗时间60秒。5. 用测定的葡萄糖含量计算烟草中的纤维素含量。具体应用例1用葡萄糖配制标准溶液，然后按上述方法分别测定各浓度标准溶液的葡萄糖。通过记录的信号峰高(单 位为mv)对标准溶液的浓度(单位为mg/mL)作图，得到葡萄糖的工作曲线及其校正方程(表l)。由表 1可见，方程的相关性良好。表l.葡萄糖工作曲线绘制结果标液峰高(mv)葡萄糖(mg/mL)1663390.20121062630.40931476040,63241907050,83552308811.055校正方程Y = 5E-06x-0. 139R20.9996注E-06表示1(T6具体应用例2按上述测定方法进行3次加标平行实验，并根据测定ffijo加标S:计算其相应的回收率，结果见表2。由此可见，方法的准确性较高。
表2.葡萄糖加标回收率测定结果
样品含量(mg)检测含量(mg)回收量(mg)加入量(mg)回收率(％)平均回收率(％)15. 12127.34512. 22412. 170100. 4415. 10227.21712. 11512. 32598. 3099.5115. 10927. 22812. 11912. M699. 78
具体应用例3
按上述测定方法分别对3个烟草样品的纤维素含量进行5次平行测定，结果(表3)显示，其RSD均 小于5%，说明方法的重复性较好。
表3纤维素重复性测定结果
测定次数样品1样品2样品3
1126.132132.751120.5902130.876130.285123扁3124馬129.906122.5654126.870133.141122.9425131.036130.825121.631
平均值(mg/g)127.792131.382122.161
相对标准偏差(％)2.4011.1200.85权利要求
1. 本发明涉及一种用流动分析法测定烟草的纤维素的方法。
2. 根据权力1所述的方法，其特征在于烟草中可容性糖类物质去除的方法。
3. 根据权力1所述的方法，其特征在于烟草中纤维素酶水解的条件选择，涉及到纤维素酶的用量， 缓冲溶液种类、PH值及用量，水解的温度和时间。
全文摘要
本发明涉及一种流动分析法测定烟草中的纤维素的方法，特别是烟草中纤维素酶水解条件的选择。使用该方法测定样品的CV＜3％，回收率＞98％，所以该方法快速、重复性好、回收率高，适用于烟草中纤维素的分析。
文档编号G01N33/50GK101285831SQ20081009888
公开日2008年10月15日 申请日期2008年5月22日 优先权日2008年5月22日
发明者蓉 何, 吕祥敏, 军 尚, 鹏 文, 朱立军, 鹏 王, 黎洪利 申请人:重庆烟草工业有限责任公司