专利名称：蛋白质分析的制作方法
技术领域：
描述了用于在存在纤维蛋白原的情况下测葡 酶活性的方法或在存在凝
血酶的情况下观懂纤维蛋白原功能的方法。
背景技术：
纤维蛋白原和凝血酶是参与血管损伤后止血的关键蛋白，并且对于血 疑土央 的形成非常重要。纤维蛋白原和灌裇酶可以以粉末形式或以非水性悬浮液混合， 而不会引起典型的凝i央反应，从而阻止纤维蛋白凝块的形成，直到蛋白在水性 介质或其它在其中蛋白是可溶的液体环境中形成水化合物。这些呈粉末形式的 蛋白的混合物具有各种潜在的生物医学应用，包括局部止血、组织修复、药物 递送等。此外，可以将这些蛋白的混合物以教、末形式装载至载体或基质或其它 医学装置中，以形成可以例如用作止血装置的产品。
灌ML酶的凝i央活性通常M3i将溶液中的凝血酶与溶液中已知的纤维蛋白原
量混合来测量。在合适的条件下，在两种蛋白混合后灌赵央形成的速率取决于凝 血酶的活性。将具有未知量凝血酶的样本的灌妙央形成的速率与達l血酶参照或達走
血酶标准品的凝i央形成的速率相比较以确定样本的活性。
IHfiL酶的活性是任何^血,纤维蛋白原产品的重要属性，并且将决定其官 育^度。尽管游离凝血酶的测量是简单的，但当凝血酶和纤维蛋白原在未反应的 混合物中时测量凝血酶的活性是具有挑战性的，因为其须懂一般需要将蛋白质 混合物进行水合及^#解，而溶解的凑M酶和纤维蛋白原之间的纤维蛋白凝±央形 成在7jC合后即马上开始。此外，由于已知凝血酶与立即形成的纤维蛋白凝±央特 异性地结合并相互作用，凝血酶变得结合在纤维蛋白凝块上且不再是游离地可 溶解于水合溶液中并且使得无法用于随后的 疑血酶测量。因此，通过水合和凝 ±央形成的任何達|161隞纤维蛋白原产品凝血酶活性的倒可结果测量都仅仅是部分 的，因此是不精确的。
此外，当蛋白质在未反应的混合物中被装载至载体、基质或医学装置中时， 需要将蛋白质从基质中移出来以精确地测量凝血酶活性，例如，如果载体、基质或医学装置由于物理化学或光学干扰测量检测系统而对蛋白厕舌性或功能测 量产生不利影响的话。为了克月tt自载体、基质或医学體的干扰，蛋白质的 移出或提取需要在不将混合物暴露于水性条件盼瞎况下进行，7K性^fl^导致 妨碍随后测量的凝块的形成。
纤维蛋白原最常M3it初由Clauss描述的方法测量，其基于凝±央形成的速 率观懂纤维蛋白原的官能度。在典型的Clauss分析中，将未知量的可溶解的纤 维蛋白原与过量^疑血酶混合。这样的纤维蛋白原和〗疑血酶比例f吏得纤维蛋白原 成为限制速率的反应物，并且凝块形成速率是纤维蛋白原浓度的函数。快的凝 固时间是高纤维蛋白原浓度的指标。反之，更长的凝固时间是低浓度的功能纤 维蛋白原的指标。功能纤维蛋白原的量可以通过将样本的凝固时间与用来建立 标准曲线的标准品系列的凝固时间相比较而量化。样本中纤维蛋白原的浓度可 以基于衍生自标准品凝固时间的方程式以数学方式计算而确定。
尽管溶液例如人类血桨中的纤维蛋白原的测量可以通过已建立的方法进 行，然而当纤维蛋白原与凝血酶一起存在时评估纤维蛋白原的官能度则是一个 难题。混合物的水合将导致凝血酶介导的纤维蛋白原至不可溶纤维蛋白凝块的 转变。 一旦产生纤维蛋白，任何随后的纤维蛋白原的测量不再是可能的，因为 导致纤维形成的纤维蛋白肽从纤维蛋白原的释放实质上是不可逆的。
因此，仍然有这样的需求，即在存在纤维素原的情况下精确测量凑Ml酶活 性以及在存在凝血酶的情况下测量纤维蛋白原的官能度。
附图详述
图1显示了失活溶液中pH对恢复凝血酶活性的影响。
发明简述
本文描述了用于确定第一反应组分和第二反应组分的混合物中第一反应组 分或第二反应组分的活性或官能度的方法，其包括步骤(a)可逆地抑制第一反 应组分以产生具有失活的第一反应组分和第二反应组分的混合物；(b)当评估第 一反应组分活性时，往混合物中加入过量的第二反应组分，或当评估第二反应 组分的活性时，加入过量的第一反应组分；(C)可逆地活化第一反应组分；(d)允
许第一反应组分与混合物中的第二反应组分和过量的第二反应组分反应，或允
许第一反应组分与混合物中的第二反应组分和过量的第一反应组分反应；以及(e) 确定最初存在于干混合物中的第一或第二反应组分的活性或官能度。
7发明详述
如在上面讨论的那样，为了确定;ML酶和纤维蛋白原的未反应混合物(例 如以粉末形式或非7K性悬浮液，诸如乙醇悬浮液的形式)中凝血酶的活性，需要 使蛋白质再水合化并且对于凝血酶和纤维蛋白原来说需要溶解于7K化介质中， 以得到灌f血酶活性的精确测量。然而， 一旦混合物与水化介质 劍虫，任何^l军 的凝血酶和纤维蛋白原将反应而形成即刻的凝块，并且任何可利用的^疑血酶将 结合至凝块并不離离地供其测量利用。
在一个实施方案中，暂时抑制性的溶液或可逆地抑制未反应混合物中凝血 酶活性，从而避免纤维蛋白凝块的形成，直到凝血酶和纤维蛋白原完全溶解。 通过抑制凝血酶活性，避免了即刻的凝块形成并且凝血酶可以游离地溶解于水 性水合介质中并保持供测量利用。
例如可以通过调节凝血酶的碱性环境来达到对凑ML酶活性的暂时或可逆的 抑制。例如，这可以通过在抑制性的溶液或失活溶液，即具有约8.5至11.5、优 选约9.5至10.5、以及更雌约10的pH范围的碱性溶液中重构或水合未反应 的MffiL酶和纤维蛋白原以形成第一溶^^完成。表1显示了 pH对咴复的達恤酶 活性的影响。当失活溶液的碱性是pH 10时，观察到最大的经咴复的凝血酶活 性。在9.5至10.5的pH范围内，达到了最大恢复的凑恤酶活性的至少80%。在 低于9.5和大于10.5的pH 7jC平时，最大恢复的凌恤酶活性随着pH水平更偏离 IO而斷氏。在9,25的pH水平或更低时，在水合过程中观察到了凝i央形成的证 据并且可以解释在接近中性劍牛的更低pH值时观测到降低的最大恢复凝血酶 活性。在酸性剝牛下，例如pH4或5时，最大恢复的; 酶活性显著地低于在 碱性劍牛下所观察到的，这可能是凝血酶不可逆失活的指示。
抑制性的溶液或失活溶液可以是碱性溶液或缓冲的碱性溶液，包括但不限 于碳麟、TRIS碱、硼酸盐、甘氨酸、磷麟、甲胺、2-(环BS氨萄乙磺酸 (CHES)、 H环己基氨基)-1-丙磺酸(CAPS)或3-(环己基氨萄-2-羟基-1-丙磺酸 (CAPSO)溶液。
一旦凝血酶和纤维蛋白原完封也溶解于抑帝雌的溶液或失活的溶液中，可 将第一溶液或其部分与含有已知量纤维蛋白原(优选具有过量纤维蛋白原)的 第二溶^夜混合以形成第三溶液，同时4吏pH保持在约8.5至11.5、伏选约9.5至 10.5、以及更 约10。由于利用了过量的纤维蛋白原，因此混合物中凝血酶的量是纤维蛋白凝±央形成的限制速率的反应物，从而确保IML酶的活性与凝土央 形成速率强相关。如果纤维蛋白原不是过量的，凝固速率会取决于凝血酶和纤 维蛋白原两者。
此后，例如可以iBl将第三溶液的pH调节至其中凝血酶活性不再穀柳 制的范围，即约6.0至小于8.5、雌约7.0至小于8.5、以及更 约7.5鄉 转凝血酶活性。或者，可将具有溶解蛋白或其部分的失活溶液即第一溶液与在 第二^#液中的已知量的纤维蛋白原、，过量的纤维蛋白原混合，以形成第三 溶液，由此同时逆转凝血酶活性的抑制。第二溶液的实例包括但不限于 TRIS-HC1、咪唑、4-(2-羟乙基)哌眷1-乙磺酸(HEPES)、磷酸盐、巴比妥、4-吗啉基丙磺酸(MOPS)、 3-吗啉-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、 1,4-哌嗪二乙磺酸 (PIPES)、 N,N-双(2-羟乙萄-2-氨基乙磺酸(BES)、柠檬離或碳酉敏的缓冲溶液。
第二溶液的体积和缓冲能力应该是当加入至嘴一溶液时足以得到具有约 6.0至小于8.5、雌从7.0至小于8.5、以及更雌约7.5的PH的第三溶液的。 例如，当第二溶液的摩尔浓度是约25mM至500 mMTRIS-HCl缓冲液以及， 约100mM至150 mM TRIS-HC1缓冲，夜时，例如，第一和第二溶液的体积比典
型地是约l: l至l: 20、以^&tm在约l: 4至1: 10的范围。
可以应用具有机械端点检测系统的凝结物分析仪诸如Diagnostica Stago ST4凝结物分析仪来检测凝块的形成，或检测由于纤维蛋白凝i央形成而致的混 浊度变化的装置来确定凝血酶活性。在失活溶液中的溶解蛋白可以在这些装置 之一中与第二溶液混合，并且测量;疑固的时间，然后将其与已知凝血酶活性的 凝固时间相关联。
另一种可以测量凑m酶活性的方法是应用凝血酶的发色或发荧光的蛋白底 物。在这一方法中，将溶解的凝血酶与过量的发色或发荧光的底物混合。凝血 酶将切害臓物，从而释放可在分光光度计或荧光光度计中监测的发色团或荧光 团。发色或发荧光的底物的实例分别包括P-Ala-Gly-Arg-p-硝基苯胺双醋酸酯和 Z-Gly-Pro-Arg-AMC[Z=^m 、 AMC:7-氨基-4-甲基香豆素。可将释放发色 团或荧光团的速率与凝血酶的话性相关联。
在另一个实施方案中，可以ffl31调节凝血酶的碱性环境抑制灌她酶活性来 测量未反应混合物中纤维蛋白原的官能度。例如，这可以通过在抑制性的溶液 或失活溶液，即具有约8.5至11.5、雌约9.5至10.5、以及更雌约10的pH
9范围的减性溶液中重构或水化凝血酶和纤维蛋白原的混合物以形成第一溶液来 完成。抑制性的溶液或失活溶液可以是碱性溶液或缓冲碱性溶液，包括但不限
于碳麟、TRIS(3(羟甲基)氨基甲夠碱、硼鹏、甘氨酸、磷麟、甲胺、2<环 aS氨基)乙磺醆CHES)、 3-(环己基氨基)-l-丙磺敏CAPS)或3-(环己基氨萄-2-羟基-l-丙磺敏CAPSO)溶液。此外或任选地，可将凝血,制剂，诸如比{妒 定CAngiomax)加入到抑制性的溶^夜或失活溶液或第一溶液中以达到最大的灌是血 酶活性抑制，从而允许大多数纤维蛋白原溶解，以用于随后的测试。凝血酶抑 律跻啲其它实例包括抗凑ML酶、肝素、低舒量肝素、低分子量肝素类似物、 阿戈托班、美拉加群、依非加群、伊诺加群、达比加群、水蛭素(hirudan)及 水蛭素(hirudan)衍生物，诸如重组的7K蛭素和地西卢定。
一旦凝血酶的活性受至柳制，纤维蛋白原的活性可以通过如下确定将第 一溶液或其部分与具有已知量凑ML酶、tt^过量的凝血酶的第二溶液混合，以 形,三溶液，同时使pH保持在约8.5至11.5、 im约9.5至10.5、以及更优
选约10。禾,了过量的凝血酶，因此混合物中纤维蛋白原的量是纤维蛋白凝i央 形成的限制速率的反应物，从而确保纤维蛋白原的浓度与凝i央形成速率强相关。 如菊 酶不是过量的，贝,固速率会取决于凑ML酶和纤维蛋白原两者。
此后，例如可以通过将第三溶液的pH调节至其中凝血酶活性不再受到抑 制的范围，艮卩约6.0至小于8.5、,约7.0至小于8.5、以及更1，约7.5而逆 转凝血酶活性。或者，可将具有溶解蛋白的失活溶液或其部分即第一溶液与具
有已知量凝血酶、im过量的凝血酶的第二溶液混合，以形成第三溶液，由此
同时逆转凝血酶活性的抑制。第二溶液的实例包括但不限于pH约为7.5的 TRIS-HC1、咪唑、4-(2-羟乙基)哌卩秦1-乙磺酸(HEPES)、磷酸盐、巴比妥、4-吗啉基丙磺酸(MOPS)、 3-吗啉-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、 1,4-哌嗪二乙磺酸 (PIPES)、 N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺斷BES)、禾封蒙fr雄或碳f趨的缓冲溶液。
可以应用具有机械端点检测系统的凝结物分析仪诸如Dmgnostica Stago ST4凝结物分析仪来检测凝i央形成，或检测由于纤维蛋白凝i央形成而致的混浊 度变化的装置来确定纤维蛋白原的官能度。在失活^#液中的溶解蛋白可以在这 些装置之一中与第二溶液混合，并且测量凝固的时间，然后将其与已知纤维蛋 白原官能度的凝固时间相关联。
或者，可以通过应用凝血,制剂诸如比伐卢定( )抑制凝血酶活性而确定纤维蛋白原的官能度。任选地，可以结合4OT;疑血酶的抑制剂来调节 凝血酶的碱性环境。凝血酶抑制剂的其它实例包括..抗凝血酶、肝素、低分子 量肝素、低分子量肝素类似物、阿戈托班、美拉加群、依非加群、糾若加群、
达比加群、水蛭素(hirudan)及水蛭素(hirudan)衍生物，诸如重组的水蛭素 和地西卢定。 一旦;疑血酶的活性受到抑制，可以ffiil能够作用于纤维蛋白原形 成凝土^f旦不受到凝血Wl]制剂影响的类凝血酶来确定纤维蛋白原的官能度。类 凝血酶的实例包括但不限于巴曲斷得自南美响尾蛇大具窍蝮蛇(Bothrops atrox) 的毒銜和安克洛瞰得自红口 ,的毒銜。
当蛋白质是以未反应混合物形式被加载至载体、基质或医学装置时，例如 混合物可以呈粉末形式，其中蛋白质是干燥的或经干燥的，可以通过用非水性 液体提取蛋白来完成7K合及溶解之前的蛋白的移出，戶/F述非水性液体包括但不 限于全氟化的碳氢化合物，诸如HFE-7000、 HFE7001、 HFE7003、 HFE-7300 和PF-5060(可从Mimiesota的3M商购得到)，以及可以禾U用蛋白质不会溶解于 其中的任何其它载 体，诸如乙醇、乙醚或其它有机液体。 一旦用非水性溶 剂提取了蛋白质，就可以如上面描述的那样测量凝血酶的活性或纤维蛋白原的 官能度。
或者，当蛋白质被装载至载体、基质或医学装置时，可以不用移出蛋白质 而如上面所描述的那样测量凝血酶的活性或纤维蛋白原的官能度。例如，可通 过将在其上具有蛋白质的载体、基质或医学^S直接置于抑制性的溶液或失活 溶液中而将蛋白质水合化，所述溶液可以用于作为如上面所描述那样测量凝血 酶活性或纤维蛋白原功能的样本。
权利要求
1.用于确定在第一反应组分和第二反应组分的未反应混合物中第一反应组分或第二反应组分的活性或官能度的方法，其包括以下步骤(a)可逆地抑制第一反应组分以产生具有失活的第一反应组分和第二反应组分的混合物；(b)当评估第一反应组分的活性时，往混合物中加入已知量的第二反应组分，或当评估第二反应组分的活性时，加入已知量的第一反应组分；(c)可逆地活化第一反应组分；(d)允许第一反应组分与最初存在于混合物中的第二反应组分和已知量的第二反应组分反应，或允许第一反应组分与最初存在于混合物中的第二反应组分和已知量的第一反应组分反应；以及(e)确定最初存在于混合物中的第一或第二反应组分的活性或官能度。
2. 才又利要求1的方法，其中第一反应组分是凝血酶并且第二反应组分是纤 维蛋白原。
3. ^l利要求2的方法，其中IElfiL酶是重组体或从动物或人类得到，并且纤 维蛋白原是重组体^;人动物或y^^得到。
4. ^^利要求2的方法，其中同时进^^骤(b)和(c)。
5. 权利要求4的方法，其中所述混合物呈粉末形式，并且可逆抑制第一反 应组分的步骤包括在具有8.5至11.5的pH范围的抑制性的溶液麟一溶液中 重构第一反应组分和第二反应组分的混合物。
6. 权利要求5的方法，其中所述抑制性的溶液麟一溶液具有9.5至10 的pH。
7. 权利要求6的方法，其中所述抑制性的溶液，一溶液具有约10的pH。
8. 权利要求5的方法，其中所述抑制性的溶液麟一溶液包含选自碳酉鄉、 TRIS(3(羟甲基)氨基甲烷)碱、硼酸盐、甘氨酸、磷酸盐、甲胺、2-(环BS氨萄 乙磺酸(CHES)、 3-(环战氨基)-l-丙磺敏CAPS)或3-(环己基氨基)-2-羟基-l-丙 磺敏CAPSO)中的至少一禾中组分的碱性溶液。
9. 权利要求8的方法，其中已知量的第二反应组分在第二溶液中，所述第 二溶液能够使具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第一溶液的pH降低至约6.0至小于8.5 。
10. 权利要求9的方法，其中已知量的第二反应组分在第二溶液中，所述 第二溶液能够使具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液， 一溶液的pH ^j氐至约7.0至小于8.5。
11. 权利要求10的方法，其中已知量的第二反应组分在第二溶液中，所述 第二溶液能够使具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液或第 一溶液的pH斷氐至约7.5。
12. 权利要求9的方法，其中倉辦降低抑制性的溶液麟一溶液pH的第 二溶液是选自TRIS-HC1、咪唑、4-(2-羟乙基)哌漆1-乙磺^HEPES)、磷酸盐、 巴比妥、4-吗啉基丙磺酸(MOPS)、 3-吗啉-2-羟基丙磺酸(MOPSO)、 1,4-哌嗪二 乙磺,IPES)、 N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、柠檬,雄 酸盐中的 至少一种组分的溶液。
13. 权利要求12的方法，其中能够降低抑制性的溶液麟一溶液pH的第 二溶液包含25mM至500mM的TRIS-HC1缓冲液。
14. 权利要求13的方法，其中能够降低抑制性的溶液麟一溶液pH的第 二溶液包含100mM至150mM的TRIS-HC1缓冲液。
15. ^X利要求9的方法，其中在步骤(b)中将已知过量的第二反应组分加入 到具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液麟一溶液中。
16. 权利要求2的方法，其中歩骤(b)包括将具有已知量的第二反应组分的 第二^t液加入到具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液， 一溶液中，以形成具有8.5至11.5的pH范围的第三溶液。
17. 权利要求16的方法，其中可逆地活化第一反应组分的歩骤(c)包括将第 三溶液的pH调节至约6.0至8.5 。
18. 权利要求9的方法，其中通il动力学凝固分析确定最初存在于混合物 中的第一職二反应组分的活性或官會渡，所述动力学凝固分析测量凝结时间， 该凝结时间与第一或第二活性组分的已知活性或官能度相关联。
19. 权利要求18的方法，其中将第一，二活性组分的活性或官能度转换 为活性单位或官能团数量。
20. 权利要求9的方法，其中应用比浊法、舰测浑法、粘度法和机械端 点分析方法确定最初存在于混合物中的第一或第二反应组分的活性或官能度。
21. !^利要求2的方法，其中第一反应组分和第二反应组分的混合物以粉末形式位于基质上，并且通过将具有失活的第一反应组分和第二反应组分混合物的基质置于具有已知量第二反应组分的第二溶液中来实施步骤(b)。
22. 权利要求2的方法，其中第一反应组分和第二反应组分的混合物是非 水性的悬浮液。
23. 权利要求22的方法，其中所述非水性的悬浮液包含醇、MlftL酶和纤维 蛋白原。
24. 权利要求23的方法，其中所述醇是乙醇。
25. 用于确定凑Ml酶和纤维蛋白原的未反应混合物中纤维蛋白原的官能度 的方法，其包括以下步骤(a) 通过在具有8.5至11.5的pH范围的抑制性的溶液或第一溶液中重构凝 血酶和纤维蛋白原的混合物来抑制凑ML酶而产生具有失活的凑是血酶和纤维蛋白 原的混合物；(b) 往混合物中加入含有已知量凝血酶的第二溶液，所述第二溶液會,使具 有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液麟一溶液的pH降低 至约6.0至小于8.5;(C)允许所述凝血酶与所述纤维蛋白原反应；以及 (d)确定最初存在于混合物中的纤维蛋白原的官肯巨度。
26. 权利要求25的方法，其中抑制第一反应组分的步骤还包括添加凑恤酶 抑制剂。
27. 权利要求26的方法，其中所述的凑Ml酶抑制剂选自抗凝血酶、肝素、 低分子量的肝素、低分子量的肝素类似物、磺达肝素、阿戈托班、美拉加群、 依非加群、伊诺加群、达比加群、比伐卢定、水蛭素及水蛭素衍生物例如重组 水蛭素和地西卢定。
28. 用于确定凌ML酶和纤维蛋白原的未反应混合物中纤维蛋白原官能度的 方法，其包括以下步骤(a) ilil在具有8.5至11.5的pH范围的抑制性的溶液或第一溶液中重构凝 血酶和纤维蛋白原的混合物来抑制甚Ml酶而产生具有失活的)疑血酶和纤维蛋白 原的混合物；(b) 往混合物中加入已知量的类凝血酶，以及任选地将具有失活的第一反应组分和第二反应组分的抑制性的溶液麟一溶液的pH斷氐至约6.0至小于8.5;(c) 允许类凝血酶与纤维蛋白原反应；以及(d) 确定最初存在于混^tl中的纤维蛋白原的官會渡。
29. 权利要求28的方法，其中抑制第一反应组分的步骤还包括添加凝血酶 抑制剂。
30. 权利要求28的方法，其中所述凝血,制齐腿自.-抑ML酶、肝素、 低分子量的肝素、低分子量的肝素类似物、磺达肝素、阿戈托班、美拉加群、 依非加群、伊诺加群、达比加群、比伐卢定、水蛭素及水蛭素衍生物例如重组 水蛭素和地西卢定。
31. 权利要求28的方法，其中所述类灌lJfe酶是巴曲酶或安克洛酶。
32. 用于确定Ml&L酶和纤维蛋白原的未反应混合物中凌ML酶活性的方法， 其包括以下步骤(a) 通过在具有8.5至11.5的pH范围内的抑制性的溶液，一溶液中重构 MifiL酶和纤维蛋白原的混合物来可逆i也抑制凝血酶而产生具有失活凝血酶和纤 维蛋白原的混合物；(b) 加入會,j妙;f述抑制性的溶液麟一溶液的pH斷氐至约6.0至小于8.5 的第二溶液；(c) 允许类纤维蛋白原与凝血酶反应；以及(d) 评估凝块的形成。
33. 用于确定灌Ml酶和纤维蛋白原的未反应混合物中Ml&l酶活性的方法， 其包括以下歩骤(a) 可逆地抑制凑ML酶而产生具有失活的凑ML酶和纤维蛋白原的混合物；(b) 往混合物中加入已知量的发色或发荧光的凝血酶底物； (C)可舰活化達她酶；(d) 允许Wl酶与所述发色戯荧光的凝血酶底物反应；(e) 确定最初存在于混合物中的;疑血酶的活性。
全文摘要
描述了用于在存在纤维蛋白原的情况下测量凝血酶活性的方法或在存在凝血酶的情况下测量纤维蛋白原功能的方法。
文档编号G01N33/86GK101680905SQ200880000199
公开日2010年3月24日 申请日期2008年5月22日 优先权日2008年5月22日
发明者A·德安格利斯, A·戈曼, I·努尔, L·巴, R·梅德勒 申请人:伊西康公司;奥姆里克斯生物药品公司