分析装置的制作方法

专利名称：分析装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于在扩大的浓度范围内测定分析物的存在或程度的 分析装置、试剂盒和方法。
背景技术：
为了检测流体样品中的分析物，已经开发和商业化了简单的侧流
免疫分析装置，参见例如EP291194。这样的装置一般包含多孔的载体， 该载体含有能够与目标分析物结合的干燥的、可移动的、标记结合试 剂，固定化的结合试剂也能够结合在标记结合试剂下游的检测区中提 供的分析物。检测在检测区固定化的、标记的结合，为样品中分析物 的存在提供了指示。
或者，当目标分析物是半抗原时，免疫分析装置可以利用竞争性 反应，其中标记的分析物或分析物类似物与样品中存在的分析物竞争 检测区中固定化的结合试剂。或者，分析装置可以利用抑制反应，其 中在检测区提供了固定化的分析物或分析物类似物，分析装置含有针 对分析物的可移动的标记结合试剂。
在检测分析物时，夹心免疫分析是通常选择的分析。但是，夹心 分析不总是可行的，例如在小分子例如半抗原的情况下，它们不够大， 不能在其上同时结合两种不同的结合配偶体。使用利用夹心分析方法
的典型侧流装置制备的剂量响应曲线显示出，信号的水平随着分析物 的增加而增加，直到较高的分析物水平的点时曲线趋于平稳。在更高 的分析物水平时，由于在检测区优选捕获还没有与标记的试剂结合的 分析物，信号开始降低。这种现象被称为钩状效应(hook effect)。因 此，由于在较高的分析物水平下观察到的信号量或强度可能与在较低
6分析物水平下观察到的相同或甚至更低，夹心免疫分析表现出了有限 的分析范围。
竞争或抑制分析方法一般在零或低水平分析物时提供了高信号。 当分析物水平升高时，依赖于存在的标记结合物类的量与分析物的量 的比率，信号水平仍然可能是高的。当分析物水平继续增加时，信号 开始降低，因为未结合的分析物或者与标记的分析物或分析物类似物 竞争固定化的结合试剂，或者与标记结合试剂结合，降低了标记结合 试剂在检测区的结合。
因此，使用夹心分析测量扩大范围内的分析物，可能会遇到有关 钩状效应的问题。高的分析物浓度开始产生分析信号的降低。竞争或 抑制分析在高的分析物浓度下导致分析信号的损耗，从而使分析物可 以被测量的范围受到限制。
因此，上述的分析方法不适合于在扩大的分析物范围内测量分析 物水平。
US2005/0112780公开了分析装置和用于扩展分析装置的动态检测 范围的方法，包括检测区和提供在检测区下游的补偿区的流过性多孔 载体。检测涉及第一种结合试剂，该试剂与检测探针结合，产生强度 与分析物的量成正比的检测信号，补偿区含有第二种捕获试剂，该试 剂与检测探针结合，产生与检测信号的强度成反比的信号。分析可以 进一步包含第三个产生信号的校准区。第一种结合试剂可以选自抗原、 半抗原或链亲和素。第一种和第二种结合试剂可以从许多物类中选择， 包括抗原、半抗原或链亲和素。
US2004/0197820公开了含有检测区的用于减小钩状效应的流过性 多孔载体分析装置，其中所述装置可以包含下游的校准区。US2006/0019404公开了具有扩展的动态范围的分析装置，含有侧 流测试条，该测试条含有多个检测区，它们对分析物浓度具有逐渐降 低的灵敏度。分析装置可以含有两种各具有多个检测区的载体。检测 多个检测区中存在的标记物/信号的量，以确定分析物的浓度。
EP462376公开了含有捕获位点和结合物回收位点的分析装置，其 中结合物回收位点接收和结合迁移通过所述捕获位点的所述结合物或 结合物复合物，并且其中通过检测位于结合物回收位点和捕获位点的 固定化的结合物，来确定目标分析物的量。
本发明人已经表明，对于其中在同一个多孔载体上提供了多个用 于检测分析物的检测区的分析装置来说，上游检测区的结合可以改变 下游检测区的结合特征，并且上游检测区结合的任何变化可以引起下 游检测区结合的联动变化。在较高分析物浓度水平下尤其如此，并可 能导致分析的精确性差。此外，已经发现，在测试的运行过程中，检 测区中存在的相应结合试剂之间可能发生交叉交合，在装置的制造以 及将它们在干燥状态下保存期间，也观察到了交叉结合。这显示出对 分析的精确性和灵敏性水平有影响。在现有技术中，这些问题以前似 乎还没有被认识到。
本发明的目标是提供改进的分析装置、试剂盒和方法，以扩大所 述分析的分析物范围。

发明内容
第一个方面，本发明提供了用于在扩大的浓度范围内测定液体样 品中分析物的存在和/或程度的分析装置，包含第一种分析和第二种分 析，其中分析物的第一种分析包含第一个流径，具有能够固定标记结 合试剂的唯一的第一个分析检测区，所述分析物的第二种分析包含第 二个流径，具有能够固定标记结合试剂的唯一的第二个分析检测区，
其中检测区中存在标记结合试剂，为所述液体样品中分析物的存在和/或程度提供指示。
第一种分析可以为第一种浓度范围内的分析物水平提供指示，第 二种分析可以为第二种浓度范围内的分析物水平提供指示。
第一种和第二种浓度范围彼此不同。第一种和第二种浓度范围可 以交叠，以便提供连续的浓度范围。
分析装置可以相对于一个或多个阈值为分析物水平提供指示。分 析装置可以为低于或高于多个阈值的分析物水平提供指示。例如，阈 值的数量可以是两个、三个、四个、五个或更多。分析装置可以含有 一个或多个储存的阈值，每个储存的值均对应于分析物的水平。
第一种和第二种分析可以独立地或合在一起为某个范围内的分析 物水平提供指示。
第一种分析可以为小于或等于第一个阈值的分析物水平提供指 示，第二种分析可以为高于第三个阈值的分析物水平提供指示。第一 个和第二个分析一起可以为大于或等于第一个阈值但小于第三个阈值
的分析物水平提供指示。
针对分析物或分析物类似物的结合试剂可以以固定化的形式提供 在检测区中。结合试剂可以从针对目标分析物的结合试剂、分析物或 分析物类似物中选择，这取决于分析是夹心类型的分析还是竞争类型 的分析。同样地，标记结合试剂可以包括针对目标分析物的标记结合 试剂、标记的分析物或标记的分析物类似物。
或者，试剂可以以固定化的形式提供在能够结合标记结合试剂-分 析物-第二种结合试剂的复合物的检测区中。例如，第二种结合试剂可 以提供成可移动的形式，与结合物类例如生物素结合或以其它方式连接，固定在检测区的试剂是互补的结合配偶体，例如链亲和素或抗亲 和素抗体，使得在检测区形成固定化的标记结合试剂-分析物-第二种结 合试剂复合物-生物素-链亲和素复合物。
第二种结合试剂可以提供成可移动的形式，它能够在检测区中固 定标记结合试剂-分析物复合物。例如，第二种结合试剂可以与颗粒例 如琼脂糖或白色乳胶结合，检测区可以含有孔隙尺寸小于颗粒但大于 标记结合试剂的粒度的滤器，使得滤器能够截获存在的任何标记结合 试剂-分析物-第二种结合试剂的复合物，而任何没有与捕获试剂复合的 标记结合试剂能够通过滤器。
第一种和/或第二种分析可以包括标记结合试剂，其在使用装置之 前，以可移动形式提供在干燥状态的第一种和/或第二种分析检测区的 上游。
第一种和第二种分析可以各自在每个检测区上提供的固定化的未 标记的结合上游，提供有可移动的标记结合试剂。
分析装置可以含有两种以上的分析，每种都能够检测特定浓度范 围或者高于或低于一个或多个阈值的分析物。
第一种和第二种分析可以独自或合起来，为特定水平的分析物、 或分析物是否高于或低于某个阈值提供指示。
分析装置可以具有与多个流径流体连通的共同的样品施加区域。 因此，施加到装置的共同样品施加区域的流体样品能够沿着相应分析 的流径运送到对应的检测区。
作为在单一分析装置中提供第一种和第二种分析的替代方案，分 析可以被提供成分开的分析装置，来自各个装置的结果合在一起能够为分析物的水平提供指示或测量。
因此，第二方面，本发明提供了用于在扩大的浓度范围内测定分 析物的存在和/或程度的分析试剂盒，含有第一个分析装置和第二个分 析装置，其中第一个和第二个分析装置分别含有本发明第一方面的第 一种和第二种分析。
第三方面，本发明提供了用于在扩大的分析物范围内测定分析物 的存在和/或程度的方法，包括下列步骤
a) 将液体样品加入到提供在唯一的第一个分析检测区上游、含有 可移动的标记结合试剂的第一种分析以及提供在唯一的第二个分析检 测区上游、含有可移动的标记结合试剂的第二种分析中，所述检测区 能够固定标记结合试剂，其中在检测区检测标记的试剂，为液体样品 中分析物的程度和/或存在提供了指示。
b) 读取分析结果。
在已知分析物的水平作为时间的函数变化的情况下，例如妊娠激 素hCG，分析装置可以为使用者提供基于时间的指示，例如以天或周 为单位的妊娠的程度。
出于本发明的目的，术语"流径"是指能够将液体从第一个位置 输送到第二个位置的基体，可以是例如毛细通道、微流体路径，或多 孔载体例如侧流多孔载体。多孔载体可以包含一种或多种多孔载体材 料，它们以线性或堆叠排列的方式交叠，或者是流体连通的。多孔载 体材料可以相同或不同。第一个和第二个流径可以提供在分开的基体 上，或者它们可以提供在共同的基体上，使得沿着第一种分析的流径 输送的液体不能穿过第二种分析的流径。例如，第一种和第二种分析 可以提供在同样的多孔载体上，使得第一个和第二个流径彼此隔离。 这可以通过例如激光切割多孔载体的部分使其变得无孔、从而将第一 个和第二个流径分离开来实现。作为另一种替换方案，第一个和第二个检测区可以基本上并排排列，提供在同样的流径上，使得任何一个 都不被提供在另一个的下游。
具体来说，流径可以包括侧流多孔载体。每个分析的标记结合试 剂和检测区可以分别提供在不同的载体材料上。可以用作多孔载体以 提供检测区的适合的材料包括硝酸纤维素、乙酸纤维、纤维素或纤维 素衍生物、聚酯、聚烯烃或玻璃纤维。多孔载体可以包含硝酸纤维素。 它具有的优点是结合试剂不需要事先化学处理就能够被牢固地固定。 如果多孔固相材料包含例如纸，抗体在第二个区域中的固定需要使用
例如CKBr、羰二咪唑或三氟代乙垸磺酰氯，通过化学连接来进行。
分析方法可以以分析测试条的形式提供，其中液体样品沿着该测 试条流动。
术语"结合试剂"是指结合对的成员，即两种不同的分子，其中 一种分子通过化学或物理方式与第二种分子特异性结合。这两种分子， 在它们彼此结合是使得它们能够将它们的结合配偶体与具有相似性质 的其它分析组分区分开来的意义上，是相关的。特异性结合对的成员 被称为配体和受体(反配体)、结合对成员和结合对配偶体，等等。
分子也可以是分子集合体的结合对成员；例如，针对第二种抗体的免 疫复合物而产生的抗体及其相应的抗原可以被认为是免疫复合物的结 合对成员。结合试剂可以包含抗体或能够与抗原结合的抗体片段。
除了抗原和抗体结合对成员之外，其它的结合对包括例如但不限 于生物素和亲和素，碳水化合物和凝集素，互补核苷酸序列，互补肽 序列，效应子和受体分子，酶的辅因子和酶，酶的抑制剂和酶，肽序 列和特异性针对该序列或完整蛋白的抗体，聚合的酸和碱，染料与蛋 白结合物，肽和特异性蛋白结合物(例如核糖核酸酶、S-肽和核糖核酸 酶S-蛋白)，等等。此外，特异性结合对可以包括原始特异性结合成 员的类似物的成员。"标记物"当用在标记结合试剂环境中时，是指能够产生可以通过视觉或仪器手段检测的信号的任何物质。适合用于本发明的各种标记物包括通过化学或物理方式产生信号的标记物，例如可以通过光学检测。这样的标记物包括酶和底物、发色团、催化剂、荧光化合物、化学发光化合物、电活性物类、染料分子、放射活性标记物和颗粒标记物。分析物本身可以固有地能够产生可检测信号。标记物可以与结合试剂共价结合。
标记物可以包括颗粒例如金、银、胶体非金属颗粒例如硒或碲，染色的或着色的颗粒例如掺有染料或染料溶胶的聚合物颗粒。染料可以具有任何适合的颜色，例如蓝色。染料可以是荧光的。染料溶胶可
以从可商购的疏水染料例如Foron Blue SRP (Sandoz)和Resolin BlueBBLS (Bayer)制备。适合的聚合物标记物可以从合成聚合物的范畴选择，例如聚苯乙烯、聚乙烯基甲苯、聚苯乙烯-丙烯酸和聚丙烯醛。使用的单体通常是不溶于水的，在水性表面活性剂中乳化以便形成单体胶团，然后通过在乳化剂中加入引发剂来诱导聚合。产生基本上球形的聚合物颗粒。按照示例性的实施方案，标记物是蓝色聚合物颗粒。
液体样品可以源于任何来源，例如工业、环境、农业或生物来源。样品可以源于或生理来源或由其构成，包括血液、血清、血桨、组织间隙液、唾液、痰液、晶状体液、汗液、尿液、乳汁、粘液、滑膜液、腹膜液、经皮渗出液、咽部渗出液、支气管肺泡灌洗液、气管吸出液、脑脊液、精液、子宫颈粘液、阴道或尿道分泌液和羊膜液。具体来说，来源是人类，具体来说，样品是尿液。
分析物包括但不限于毒素、有机化合物、蛋白、肽、微生物、细菌、病毒、氨基酸、核酸、碳水化合物、激素、类固醇、维生素、药物(包括由于治疗目的施用的和由于违禁目的施用的药物)、污染物、杀虫剂、以及任何上述物质的代谢物或抗体。术语分析物还包括了任何抗原性物质、半抗原、抗体、大分子，及其组合。
具体来说，分析物是人类绒毛膜促性腺素(hCG)。分析物可以具有唯一的结合区或表位，或者可以具有一个以上的结合区。例如，
分析物hCG含有与促黄体生成激素(LH)、卵泡剌激素(FSH)和促甲状腺激素(TSH)相同的a亚基，以及hCG独有的p亚基。针对a和|5亚基的抗体可以在夹心免疫分析形式中用来结合hCG。
本发明的分析装置可用于在扩大的浓度范围内测量hCG的程度或存在。范围可以在大约10mlU到大约250,000mlU之间变化。
根据实施方案，装置能够测量流体样品中hCG的量，并根据储存的参比值以基于时间的单位指示使用者怀孕的程度。装置还可以通过确定hCG的水平是高于还是低于基础阈值，来指示对象是否怀孕。参比值和阈值一般储存在装置中作为算法的一部分。基础阈值一般可以在10-25mIU/ml的范围内。
根据实施方案，第一种分析可以根据检测到的hCG水平是高于还是低于基础阈值来分别指示对象是否怀孕，和/或如果怀孕了，指示在小于或等于第一个阈值的第一个范围内的hCG水平，第二种分析为在
大于或等于第二个阈值的第二个范围内的hCG水平提供了指示，其中第一种和第二种分析合在一起，为大于第一个阈值但小于第二个阈值的第三个范围内的hCG水平提供了指示。
第一种和/或第二种分析可以进一步包含对照区，用于指示分析测试的运行是令人满意的，即试剂存在于测试装置中，并且它们在运行测试的过程中变为移动并沿着流径运输。对照区也可以指示装置中的试剂能够发生免疫化学相互作用，证实了装置的化学完整性。在考虑装置在干燥条件下在一定温度范围内储存和运输时，这是非常重要的。对照区一般位于检测区的下游，可以包含例如针对标记结合试剂的固
14定结合试剂。标记结合试剂可以以可移动的形式存在于对照区和检测 区的上游。标记结合试剂与针对分析物的标记结合试剂可以相同或不 同。
分析装置可以包含与第一个和第二个流径流体连通并位于它们上 游的多孔样品接受器。多孔样品接受器对于两种分析来说可以是共用 的。因此，施加到装置的共同样品施加区域的流体样品能够沿着相应 分析的流径运输到相应的检测区中。多孔样品接受器可以提供在机壳 的内部，或可以至少部分伸出所述机壳，可以用于例如收集尿流。多 孔样品接受器可以用作流体储存器。多孔样品接收元件可以由任何能 够快速吸收液体的吸水性强的多孔或纤维材料制成。材料的孔隙性可 以是单方向的(即孔或纤维的走向完全或主要平行于元件的轴)，或 多方向的(全方向的，使得元件具有无定形的海绵状结构)。可以使 用多孔塑料材料，例如聚丙烯、聚乙烯(优选具有非常高的分子量)、 聚偏氟乙烯、乙烯乙酸乙烯、丙烯腈和聚四氟乙烯。其它适合的材料 包括玻璃纤维。
如果需要，可以在载体材料的远端提供吸收"槽"。吸收槽可以
由例如Whatman 3MM层析纸构成，应该提供足够的吸附能力，以允许 任何未结合的标记结合试剂从检测区洗脱出来。作为这样的槽的替代 方案，多孔固相材料的长度延伸到检测区之外就足够了。
在将结合试剂施加到检测区之后，可以对其余的多孔固相材料进 行处理，以阻断任何剩余的结合位点。阻断可以通过例如用蛋白(例 如牛血清白蛋白或乳蛋白)或用聚乙烯醇或乙醇胺或其组合进行处理 来实现。为了帮助标记结合试剂在多孔载体被样品润湿时自由移动， 多孔载体还可以含有糖例如蔗糖或乳糖，和/或其它的物质，例如聚乙 烯醇(PVA)或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。这样的材料可以例如作为水 性溶液沉积在要施加标记结合试剂的区域中。这样的材料可以作为第 一种施加物施加到多孔载体上，然后施加标记物；或者，这样的材料也可以与标记物混合并施加到多孔载体上，或者二者相组合。这样的 材料可以沉积在标记结合试剂处或其上游。
或者，多孔载体可以不在制造时被阻断；而是将阻断多孔载体的 工具包含在多孔载体上游的材料中。在测试条被润湿时，阻断多孔载 体的工具被移动，阻断工具流入并通过多孔载体，在流动进行时进行 阻断。阻断工具包括蛋白例如BSA和酪蛋白，以及聚合物例如PVP、 PVA，以及糖类和去污剂例如Triton-X100。阻断工具可以存在于大孔 载体材料中。
硝酸纤维素多孔载体可以具有至少大约1微米的孔隙尺寸，例如 大于大约5微米，以及例如大约8-12微米。
硝酸纤维素多孔载体可以衬有例如塑料片，以增加其操作强度。 这通过在一片背衬材料例如Myla^上形成一薄层硝酸纤维素，可以容 易地制造。
干燥的结合试剂可以提供在含有检测区的多孔载体材料上游提供 的多孔载体材料上。上游的多孔载体材料可以是大孔的。大孔的载体 材料应该蛋白结合低或没有，或者应该可以容易地通过试剂例如BSA 或PVA进行阻断，以最小化非特异性结合并便于在大孔主体被液体样 品润湿后标记的试剂的自由移动。如果需要，大孔载体材料可以用表 面活性剂或溶剂预处理，以赋予其更多的亲水性并促进液体样品的快 速摄入。适合的大孔载体材料包括塑料材料例如聚乙烯和聚丙烯，或 其它材料例如纸或玻璃纤维。在标记结合试剂用可检测的颗粒标记的 情况下，大孔主体可以具有比颗粒标记物的最大粒度大至少IO倍的孔 隙尺寸。较大的孔隙尺寸能够更好地释放标记的试剂。作为大孔载体 的替代方案，标记结合试剂可以提供在检测区上游提供的无孔基体上， 所述无孔基体形成了流径的一部分。第一种和/或第二种分析可以包含提供在硝酸纤维素多孔载体的 上游并且远端与硝酸纤维素多孔载体交叠的玻璃纤维大孔载体。
分析装置或试剂盒还进一步含有一种或多种用于确定存在的标记 物类的程度和/或量的工具。例如，光学工具包括光学检测工具，例如 光检测器和一个或多个光源例如LED，光源的位置使得可以对检测区 进行光学照明，以确定存在的标记物类的程度和/或量。分析装置还可 以包含一个或多个电源、计算工具、信号传导工具、算法、显示工具、 存储工具和数据输入/输出端口。分析装置可以含有机壳，用于容纳第 一种和第二种分析以及装置的其它部件。装置可以含有储存的阈值。
分析装置一般含有包含分析的机壳。机壳可以是不透流体的，并
用适合的塑料材料例如ABS构建。分析还可以包含用于接收流体样品
的样品接受元件。样品接收元件可以从机壳中延伸。
机壳可以用不透流体的材料构建。机壳还适宜隔绝周围的光。如
果少于10%、优选少于5%、最优选少于1%的入射到装置外部的可见 光穿透到装置的内部，则机壳或外壳被认为是基本上隔绝周围光线的。 含有适当的光阻断色素的不透光合成塑料材料例如聚碳酸酯、ABS、聚 苯乙烯、通用聚苯乙烯(polystyrol)、高密度聚乙烯或聚丙烯，是用 于制造机壳的合适选择。在机壳的外部可以提供孔眼，与提供在机壳 内部空间中的分析连通。或者，孔眼可用于允许多孔样品接收器从机 壳中延伸到机壳外部的位置。
第一种和第二种分析可以以例如并排排列提供，或者以其中一种 分析被设置在另一种分析上方的面对面排列提供。装置可以含有单个 光检测器，用于检测二者的检测区。
除了测量相应分析的检测区以及存在情况下的对照区之外，光学 工具也可以测量参比区，即流径中不含干燥状态的结合试剂的部分。参比区的目的是提供信号值，在检测区获得的信号值可以与其进 行比较。参比区的测量能够测量来自流径的反射或透射光的背景水平。 背景水平可以是由于例如多孔载体的光反射、液体样品或分析的组分 例如标记结合试剂的存在。因此，在检测区测量到的光水平可以相对 于背景光的水平进行校正，以提供补偿过的信号指示检测区存在的标 记结合试剂的量。在参比区的测量也可以针对施加到分析装置上的流 体样品之间的任何偏差进行补偿，例如尿液样品在颜色上可能差别很 大。
用于测量液体样品中分析物水平的分析装置，可以包含安装的光 学检测工具，用于测量从分析装置的检测区、对照区和参比区反射的 光的强度。光学工具可以包含一个或多个光源例如LED和一个或多个
光检测器o
分析通常可以经过一段时间发生，在此期间，标记结合试剂积累
在测试和对照区上。用于测定尿液中hCG的分析测试的典型时间是3 分钟。分析测试时间可以自动开始，例如当通过光学元件测定到液体 样品已经到达了流径或多孔载体的一部分时。
适合的光源是LED。 LED的颜色由标记结合试剂的颜色决定。对 于蓝色标记物来说，适合的LED的颜色是红色。LED可以以特定的频 率进行照射，以便照射分析装置的特定区域。光从所述区域反射或传 送到光检测器上，光检测器记录下电信号。记录的电信号的数量将取 决于LED的运行频率，因此可以随时间记录一个或多个信号。信号一 般被表示成％吸光度(°/。A)。可以在分析测试的全部时间后测定信号， 或可以较早进行测定，例如在超过了特定信号阈值后。
每个测量区一般由单一LED照明。光检测器可以检测来自一个以 上测量区域的光，因此可以检测来自一个以上LED的反射光。这可以通过顺序实行照射过程来实现，使得装置能够知道从哪个区域反射的 光到达了光检测器。在分析期间，顺序的照射过程可以以固定的或改 变的频率进行重复，使得可以监测每个区域中信号水平随时间的水平。 分析条可以并列排列地放置，光检测器和光源位于条平面的上方，使 得检测对照和参比区朝向光源和光学检测器。
装置可以包含检测向分析装置中加入液流的工具。例如，可以监 测从一个或多个区域检测到的光水平的变化，来确定流体样品是否和 何时施加到装置上。分析测试的计时可以自动开始，例如当液体样品 达到特定区域时。
装置可以包含流动控制工具，其中从一个或多个区域检测到的光 水平的变化可用于确定流体样品是否和何时施加到装置上，以及通过 测量一个或多个被测量区域之间的流动来确定液体样品沿着装置的流 速。流速的确定可以用作另一个质量控制检验，例如如果流速大于或 小于设定水平，分析可以作废。计算电路可以对信号作出响应，计算 流体沿着载体流动的流速，将计算出的流速与上限和下限进行比较， 如果计算出的流速在上限和下限之外，则分析结果作废。
典型的光学检测系统将包含至少一个光源和至少一个光检测器 (例如光电二极管)。优选的光源是发光二极管或LEDS。通过光检测 器可以测量反射光和/或透射光。出于本公开内容的目的，反射光是指 来自光源的光从多孔载体或其它液体运输载体反射到光检测器上。在 这种情况下，检测器通常被设在在载体的与光源相同的一侧上。透射 光是指穿过载体的光， 一般检测器被设在载体的与光源相反的一侧上。
为了进行反射测量，可以给载体提供背衬，例如白色反射性MYLAR 塑料层。因此，来自光源的光将落在载体上，某些将从其表面反射， 某些将穿透到载体中并在任何深度反射，直到并包括提供有反射层的 深度。因此，反射类型的测量实际上包含了光透射过多孔载体的至少 部分厚度。分析装置一般包含一个或多个孔隙或窗口，光可以通过它们从一 个或多个照射源照射在分析或分析条的特定区域上。窗口用于限定落 在特定区域上的光的面积，并确定分析或测试条的哪个部分被照射。 每个被照射的区域可以具有相应的窗口。因此，具有4个测量区域的 装置将具有4个窗口。从窗口反射的光被一个或多个光检测器收集。 对于含有具有多个区域的流径的分析装置来说，可以测量液体样品在
区域之间移动所需的时间。
可以定期(例如大致每秒两次)测量从每个窗口反射的光，可以 使用低通数字滤波器来排除噪音并使数据平滑。过滤过的值可用于检 测流动和确定分析结果。
对于每个窗口来说，通过用流径中的特定测量区域干燥时、即在 任何液体样品到达所述区域之前的测量值("校准值")，除以当测 量区域被润湿和线可能己经开始显现时的测量值，可以计算出比率。 该比率等于作为液体样品沿着流径通过的结果导致流径的反射性质发 生变化后，反射的光的比例。例如，当流径包含多孔载体例如硝酸纤 维素时，反射性质的变化可能相当显著。
对于每个窗口来说，在参比、对照和测试窗口的窗口比率，等于 多孔载体干燥时t=0 (在加入样品之前)的测量值，除以加入样品后t 时间的测量值
对于每个时间点t，每个窗口的窗口比率可以如下评估
参比比率，=
测试比率，=
过滤过的参比窗口值,=。 过滤过的参比窗口值,=,
过滤过的测试窗口值,=。 过滤过的测试窗口值W^
20对照比率，
过滤过的对照窗口值,>() 过滤过的对照窗口值,>
过滤过的"/。A值的计算
对于每个时间点t来说，可以使用测试线和对照线的这些比率， 使用参比比率作为在所有没有显现出线的窗口中可能发生的背景基 线，来计算Q/。A。
獄 ^^^x腿 参比比率，
对照,(。棒^S^^掘 参比比率，
分析装置可以含有储存的对照阈值(CLT)，其中如果对于对照 测定到的信号值〈CLT，由于对照线没有充分显现，结果将被舍弃，而 如果所述值〉CLT，将确定对照是令人满意的。
按照实施方案，分析装置可以含有两个分析测试条，每个都含有 多孔载体，其中一个分析是高灵敏度(HS)分析，即分析对低分析物 浓度下的分析物水平是灵敏的，另一个是低灵敏度(LS)分析，即分 析对于较高分析物浓度下的分析物是灵敏的。具体来说，分析物是 hCG。
分析装置可以包含两个测试(检测)区，每个分析测试条都含有 测试区、参比区和对照区。HS和LS区的信号都可以测量，并可以定 义如下
过滤过的/^测试窗口值,>()
过滤过的/^测试窗口值^j-,—过滤过的i^测试窗口值w^。 '—过滤过的LS测试窗口值,^
HS和LS区的过滤过的WA值可以定义如下:
丄，參参比比，，试比率'"醇。 参比比率，
通过用参比(ref.)窗口比率和所考虑的(对照或测试窗口)的窗 口比率的差除以参比窗口比率并乘以100%，给出了归一化的相对衰减 百分率(％A)。
y。A值通常将是在完整的分析显色时间(FDT)中获得的值。
流动检测和确认 流动检测
每个窗口的窗口比率可用于检测经过窗口的流体流动。当比率降 低了流动检测阈值百分率(FDT%)时，流动被归类为已经到达窗口。 这相当于过滤过的值高于其校正值同样的比例。
对于时间t来说，窗口比率- 1
1 +尸￡>"/0
过滤过的值wn,
过滤过的值
i + FDr0/。
时间=0
对于每个窗口来说，记录当标准首次满足时的时间，用于流动确认。
流动确认与流动相对应的各种参数可以储存在装置中，并用于对液体样品 沿着分析装置的多孔载体的流动进行分类。装置可以显示任何由于使 用装置而造成的流动误差。
装置可以含有一个或多个储存的最小流动检测时间(MinFDT)、 最大流动检测时间(Max FDT)、最小窗口通过时间(Min MTT)和 流动检测阈值(FDT)。
装置可以包含许多储存的阈值，例如对照线阈值。高于或等于该 阈值的值可以被确定为是有效的对照，而低于该阈值的值可以被确定 为是无效的对照，即测试将被舍弃。
分析装置还可以包含一个或多个储存的测量值溢出参数，其中如 果任何测量值大于或远小于预期值，结果将被舍弃。这能够使分析装 置排斥例如硬件故障，例如线路板的中断或短路、电池没电、光学窗 口被挡、LED故障等等。
分析装置可以含有其它阈值，例如早期决定闺值(EDT)，其中 如果信号在测试过程中任何时间超出该阈值，则给出早期结果，即早 于测试运行所花的额定时间(完整的信号显现时间)。在进行hCG测 量的情况下，将通过显示工具给出怀孕的指示。分析装置还可以含有 对应于最低显现时间(MDT)的储存值，其中当MDT—旦被超过时， 分析装置将只提供早期结果。
各种储存的阈值可以被储存在装置中，作为一种或多种算法的部分。
根据实施方案，提供了在尿液中检测hCG分析物的分析装置，其 中所述装置包含
用于照射和检测检测区中的标记结合试剂的光学照明和检测工具；用于计算hCG水平或对应于hCG水平的值的计算工具；用于显示 分析测试结果的显示工具；储存的基础阈值，其中hCG水平对应于低 于储存的基础阈值的值指示没有怀孕，其中hCG水平对应于等于或高 于储存的基础阈值的值指示怀孕；另外两个第一个和第二个储存的阈 值，其中hCG水平对应于高于基础阈值但低于或等于第一个阈值的值 指示怀孕水平处于第一个范围内，hCG水平对应于高于基础阈值并高 于第二个阈值的值指示怀孕水平处于第三个范围内，hCG水平对应于 高于基础阈值并高于或等于第一个阈值但低于第二个阈值的值指示 hCG水平处于第三个范围内，其中显示工具能够指示未怀孕状态或怀 孕状态和怀孕的程度。
第一种分析与第二种分析不同，使得相应的分析能够测量不同水 平的分析物。
例如，第一种和第二种分析可以使用不同的分析结构，例如第一 种分析使用夹心结合反应，第二种分析使用竞争或抑制反应。第一种 分析可以包含提供在检测区上游的针对分析物的可移动的标记结合试 剂，所述检测区含有针对分析物的未标记的固定化结合试剂，第二种 分析可以包含针对分析物的可移动的结合试剂，提供在针对可移动结 合试剂的固定化未标记结合试剂的上游。或者，第二种分析可以包含 可移动的标记分析物或分析物类似物试剂，提供在针对分析物或分析 物类似物的固定化未标记结合试剂的上游。例如，夹心分析可以是高 灵敏度分析，即它能够测量处于较低浓度范围的分析物，而抑制或竞 争分析可以是低灵敏度分析，即它能够测量较高浓度程度的分析物。
分析装置可以，例如，含有第一种和第二种分析，其中第一种分 析的未标记结合试剂与第二种分析的未标记结合试剂不同，和/或第一 种分析的标记结合试剂与第二种分析的标记结合试剂不同。例如，这 可以是浓度不同，或对分析物、分析物类似物或结合试剂的亲和性不 同。高亲和性结合试剂将比较低亲和性的结合试剂的分析物灵敏度高。
24同样地，低浓度结合试剂将比高浓度结合试剂的分析物灵敏度低。第一种分析和第二种分析可以通过这种方式变化，使得它们能够测定不同浓度程度的分析物。
因此，分析装置可以含有高分析物灵敏度的第一种分析，它含有提供在检测区上游、具有一定浓度或亲和性的可移动标记结合试剂，以及低分析物灵敏度的第二种分析，它含有提供在检测区上游、具有较低浓度或亲和性的可移动的标记结合试剂。供选或附加地，第一种分析在检测区含有一定浓度或亲和性的固定化结合试剂，第二种分析可以在检测区含有具有较低浓度或亲和性的固定化结合试剂。
分析灵敏度可以通过改变结合试剂与标记物的比率来操控。如果使用颗粒作为标记物，那么可以改变施加到标记物上的结合试剂的量。操控分析灵敏度的另一个杠杆是改变在分析测定中使用的标记物的量。例如，可以通过减小结合试剂与用于标记结合试剂的标记物类的比率，来降低分析灵敏度。因此，分析装置可以包含第一种高分析物灵敏度的分析和第二种低分析物灵敏度的分析，其中第一种分析包含了提供在检测区上游的可移动颗粒标记结合试剂，它们具有结合试剂与颗粒标记物的比率，而其中第二种分析包含提供在检测区上游的可移动颗粒标记结合试剂，它们具有低于第一种分析的结合试剂与颗粒标记物的比率。
操控分析灵敏度的另一种手段是改变标记物的光密度。通过使用
光密度低的标记物，分析灵敏度可以降低。这可以通过例如提供具有
低浓度染料的聚合物颗粒标记物、或通过使用对光学检测器灵敏度较
低的有色标记物来实现。因此，分析装置可以含有第一种高分析物灵
敏度的分析和第二种低分析物灵敏度的分析，其中第一种分析包含提
供在检测区上游的可移动颗粒标记结合试剂，所述标记物具有光密度，而其中第二种分析包含提供在检测区上游的可移动颗粒标记结合试
剂，其中所述标记物具有比第一种分析低的光密度。测量高分析物水平的另一种方式是使用非颗粒的标记结合试剂。当通过夹心结合分析测量时，高水平的分析物需要高水平的结合试剂。在其中标记物是颗粒标记物的情况下，在多孔载体内部或其上提供高水平的分析物可能引起空间位阻，导致分析灵敏度差。相反，在较低分析物水平下，使用非颗粒标记结合试剂可能由于光密度低而产生低信号。但是，在高分析物水平下，非颗粒标记物可以以容易被检测的足够高水平存在。因此，分析可以包含第一种高分析物灵敏度分析，它含有提供在检测区上游、可光学检测的颗粒标记结合试剂，以及第二种低分析物灵敏度分析，它含有提供在检测区上游、可光学检测的非颗粒标记结合试剂。可光学检测的非颗粒标记物的例子可以是染料。染料可以是荧光的。
分析灵敏度可能受到多孔载体的流速的影响。降低分析灵敏度的方法是使用具有较高流速的多孔载体(例如硝酸纤维素)。因此，分析装置可以含有第一种高分析物灵敏度分析，它含有具有一定流速的多孔载体，以及第二种低分析物灵敏度分析，它含有流速比第一种分析更高或更快的多孔载体。
供选或附加地，可以通过改变标记结合试剂从其来源释放的速度来操控分析灵敏度。降低分析灵敏度的另一种方法是在与液体样品接触的过程中，提供标记结合试剂从多孔载体的快速释放。标记结合试剂的释放可以通过在装置中提供糖、蛋白或其它聚合物质例如甲基纤维素来改变。这样的物质可以提供在结合试剂的附近或其上游。
清除剂试剂的使用
降低分析物灵敏度的另一种方法是提供与分析物结合的清除剂结合试剂。清除剂结合试剂可以提供在检测区的上游，可以是固定化的、可移动的或二者。清除剂结合试剂可以提供在多孔载体上与可移动的结合试剂相同的区域，或其上游或下游。清除剂结合试剂可以结合分析物上与可移动的标记结合试剂相同的结合区域，或者分析物上与标记结合试剂不同的区域。任一种或这两种分析都可以使用清除剂结合试剂，清除剂结合试剂在它们的浓度、亲和性或二者上可以彼此不同。
出于本申请的目的，术语清除剂结合试剂是指能够结合分析物的其它结合试剂，术语"清除剂"的使用仅仅是为了将结合试剂与装置中存在的其它结合试剂区分开来。清除剂结合试剂一般是未标记的。
根据实施方案，分析装置包含第一种分析，它含有第一种多孔载体，含有提供在检测区上游的可移动的标记结合试剂，以及第二种分析，它含有提供在检测区上游的可移动的标记结合试剂，以及同样提供在第二种分析的检测区上游的清除剂结合试剂。第一种分析可以是高分析物灵敏度分析，而第二种分析可以是低分析物灵敏度分析。
清除剂试剂可以提供成可移动的形式。
清除剂试剂可以具有与第二种分析的可移动的标记结合试剂不同的分析物亲和性。在示例的实施方案中，清除剂结合试剂与第二种分析的可移动的结合试剂相比，具有较高的分析物亲和性。清除剂结合试剂的量可以改变，以改变第二种分析对分析物浓度的灵敏度。增加清除剂结合试剂的存在量降低了分析灵敏度，这是由于清除剂结合试剂能够结合较多的分析物，有效地降低了能够结合到检测区的标记结合试剂的比例之故。在第一种和第二种分析中标记结合试剂的量可以变化。增加标记结合试剂的量具有降低钩状效应的倾向，标记结合试剂的存在量、特别是在较低灵敏度的分析中，可以根据分析物的范围而变化。
清除剂结合试剂可能能够与分析物的相同或不同区域结合。在示例性实施方案中，清除剂结合试剂能够与分析物的不同结合区域结合。具体来说，当被测定的分析物是hCG时，清除剂结合试剂能够与|3亚基结合，而可移动的标记结合试剂能够与a亚基结合。
按照示例性的实施方案，分析装置包含第一种分析，它包含含有针对分析物的可移动颗粒标记结合试剂的玻璃纤维多孔载体材料，以及提供在玻璃纤维多孔载体材料下游的硝酸纤维素多孔载体材料，硝酸纤维素多孔载体材料具有检测区，检测区包含针对分析物的固定化结合试剂，以及第二种分析，它包含玻璃纤维多孔载体材料，该材料含有针对分析物的第一个结合区域的可移动颗粒标记结合试剂和针对分析物的第二个结合区域的可移动的清除剂结合试剂，以及提供在玻璃纤维多孔载体材料下游的硝酸纤维素多孔载体材料，硝酸纤维素多孔载体材料具有检测区，检测区含有针对分析物的第二个结合区域的固定化结合试剂。
应该认识到，上述的改变分析的分析灵敏度的方法不是穷举的，并且还可以组合使用。分析装置可以包含一种或多种上述特征以影响分析灵敏度。具体分析结构的选择取决于分析物及其浓度范围。
为了避免疑问，在此明确陈述，在本文中描述为"优选的"、"适宜的"、"有利的"等的任何特点，都可以独立地存在于本发明中，或者与这样描述的任何其它特点以任何组合的方式存在，除非上下文明确说明不是这样。
参考下面的图，对本发明的方面进行了进一步说明

图1显示了对于典型的分析测定观察到的典型信号响应与典型的竞争性分析的比较。
图2显示了实施例l和对比实施例1中的信号强度对hCG浓度的作图。
图3显示了实施例2的分析装置中的信号强度对hCG浓度的作图。图4显示了对于实施例2中的分析装置来说，改变清除剂抗体的量的影响。
28对比实施例1——包含单一多孔载体的分析装置的制备，所述载体 含有用于夹心分析的第一个上游检测区和用于抑制性分析的第二个下 游检测区
如下制备分析测试条，所述测试条含有用于夹心分析的第一个上 游检测区和用于抑制性分析的第二个下游检测区，以及提供在所述区 域上游的可移动的标记结合试剂
下游检测区的制备
将PBSA缓冲液中1.5mg/ml小鼠抗(3-hCG抗体(自制克隆3468) 和在PBSA/卵清蛋白中7.2KIU/ml的hCG(Scipac)的溶液混合1小时， 以提供抗-(3hCG-hCG结合物。得到的结合物在尺寸为350mm长x 40mm 宽的硝酸纤维素带(Whatman，孔隙尺寸为8微米，厚度在90-100微 米之间，被层压在175微米的背衬层上)上沉积为线。使用Biodot xyz3050分配平台，将上面产生的结合物以l|il/cm的速度在距离硝酸 纤维素带末端16mm处分配成大约1.2mm宽和大约300mm长的线。这 形成了用于抑制性分析的第二个下游检测区。
上游检测区的制备
用于夹心分析的第一个检测区(上游检测区)，通过将PBSA缓 冲液中浓度为3mg/ml的抗卩-hCG抗体(自制克隆3468)以lpl/cm的 速度在已经施加了抗-(3hCG-hCG结合物的同样硝酸纤维素带上涂线来 制备。抗(3-hCG抗体使用Biodot xyz3050分配平台在距离已经施加了 抗-(3hCG-hCG结合物的硝酸纤维素带的同一个末端10mm处，施加成 大约1.2mm宽和大约300mm长的线。
使用系列号#17494的Hedinair干燥炉来干燥NC带，设置为55°C
和速度为5 (单次通过)。
然后使用阻断缓冲液来阻断NC，阻断缓冲液含有5%乙醇(BDH Analar 104766P)力口 150mM氯化钠(BDH Analar 10241AP)力口 50mM氨基丁三醇(trizmabase， Sigma T1503)力卩XX Tween 20 ( Sigma P1379) 和l。/。(w/v)聚乙烯醇(PVA， Sigma 360627)的混合物。
将阻断缓冲液以1.75^1/mm的速度施加到带的近端。 一旦阻断溶 液吸入膜中之后，使用同样的仪器以1.6^/mm的速度施加2% (w/v)蔗 糖(Sigma S8501,在去离子水中)的溶液，并使其吸入到硝酸纤维素 膜中大约5分钟)。
然后使用系列号#17494的Hedinair干燥炉来干燥NC带，设置为 75。C，速度为5 (单次通过)。
标记结合试剂的制备 标记结合试剂按照下面的方案来制备 用抗-a hCG包被乳胶颗粒
1. 用100mMpH 8.5的四硼酸二钠缓冲液(BDH AnalaR 102676G) (DTB)，将来自Duke Scientific的蓝色乳胶颗粒(直径为400nm，
DB1 040CB ， 10%固形物(w/v))稀释到2%固形物(w/v)。
2. 通过将一定体积(2mls)的稀释乳胶在两个Eppendorf离心管 中在Heraeus Biofuge 17RS离心机上以17000rpm (25,848 rcf)离心10 分钟，清洗稀释的乳胶。取出并丢弃上清液，将沉淀重新悬浮在100mM DTB中，得到总体积lml的4V。固形物(w/v)。
3. 制备乙醇和乙酸钠的混合物(95%乙醇(BDH AnalaR 104766P 与5% w/v乙酸钠Sigma S-2889)。
4. 在步骤2的清洗过的乳胶中加入100pls乙醇-乙酸钠溶液(这 是乳胶体积的10%)。
5. 将抗体原液(自有(in-house)克隆3299)在DTB中稀释，给 出大约1200ng/ml的抗体。
6. 将体积为lml的来自步骤5的稀释抗体在设置为41.5。C的水浴 中加热大约2分钟。也将来自步骤4的清洗过的乳胶加乙醇-乙酸钠在 同样的水浴中加热2分钟。7. 在乳胶加乙醇-乙酸盐中加入稀释的抗体，混合均匀，并在设置 为41.5°C的水浴中温育1小时，同时使用磁力搅拌器和放置在混合物
中的磁性转子(magnetic flea)进行混合。
8. 制备40mg/mi的牛血清白蛋白(BSA)溶液(Intergen W22903, 在去离子水中)。通过在乳胶/抗体/乙醇-乙酸盐的混合物中加入等体积 的40mg/mi BSA，并在41.5°C的水浴中继续搅拌温育30分钟，对乳胶 进行阻断。
9. 按照步骤2，将混合物以17000rpm离心10分钟(将体积在 Eppendorf管中分成lml的批次)。移除和丢弃上清液，将沉淀重新悬浮 在100mMDTB中。按照步骤2重复离心，移除并丢弃上清液，将沉淀 重新悬浮在喷雾(Air Brushing)缓冲液中(20。/。(w/v)蔗糖Sigma S8501， 10% BSA (w/v)，在lOOmM氨基丁三醇Sigma T1503中，将pH调整 到9)。加入喷雾缓冲液，以给出4y。固形物(w/v)的乳胶。
结合的溶胶在BSA和蔗糖的混合物中，并以50g/hr禾B 110mm/s 的速度喷洒在玻璃纤维多孔载体上(F529-09， Whatman)，使用系列号 #17494的Hedinair链条式平炉进行干燥，设置为65°C，速度为5 (单
次通过)。
使用涂有透明粘合剂的层压薄膜(Ferrisgate， 38mm宽)，将带 有喷涂的乳胶的玻璃纤维材料粘附在硝酸纤维素膜上，其排列使得喷 涂的乳胶在最上面，而玻璃纤维与硝酸纤维素的表面沿着硝酸纤维素 膜带的长度(350mm)重叠大约2mm。将玻璃纤维粘附到硝酸纤维素 的末端，使其位于上游第一个检测区的上游。
然后将层压的板切成6mm宽的测试测试条。
实施例1
按照与对比实施例1相似的方式制备分析装置，只是第一个和第 二个检测区被分别提供在第一个和第二个测试条上，其中第一个和第
31二个检测区被提供在硝酸纤维素上，每个测试条含有提供在硝酸纤维 素上游、喷涂有可移动的乳胶标记的(X-hCG抗体的玻璃纤维。第一个和第二个检测区各提供在硝酸纤维素测试条上16mm的位置处。 运行测试条使用带有校准的hCG缓冲液标准品的自有读数器测试了实施例1 和对比实施例1的测试条，标准品的浓度为0、 25、 50、 100、 250、 500、 1000、 2500、 5000、 10000、 15000、 20000、 25000、 50000、 150000、 200000和250000mIU/ml hCG。在抑制检测区测量到的信号强度作为实施例1 (用- -表示)和对 比实施例1 (用-表示)的分析的hCG浓度的函数，显示在图2中， 为任意单位的信号对mlU/ml hCG。正如可以从该图中看到的，对比实施例1的抑制检测区在hCG的 范围为0-100 mlU/ml的水平下显示出起始平台，然后在较高的hCG水 平下强度如预期降低。但是，在较高的水平下，仍然观察到信号强度 的增加。相比之下，实施例1的信号强度在较高的hCG水平下降低， 而随后在更高的hCG水平下信号强度没有增加。正如所见，按照对比 实施例1构建的分析装置的抑制区可以测量hCG的范围更有限。实施例2-包含了含有第一种夹心分析的第一个测试条和除了夹心 分析之外还含有清除剂试剂的第二个测试条的分析装置的制备 第一个分析测试条的制备第一个分析测试条按照实施例1中的第一种(夹心)分析测试条 进行制备。第二种分析(清除剂)测试条的制备使用按照实施例2的第一种分析测试条的制备物，在硝酸纤维素 上制备了检测区。将与400nm蓝色聚苯乙烯乳胶(Duke Scientific)结合的小鼠抗人 a-hCG mAb(克隆3299)和3mg/ml的清除剂抗体mAb小鼠抗人卩-hCG 抗体(自有克隆3468)进行混合，得到蓝色乳胶的最终％为3%，最终 的3468浓度为0.075mg/ml,游离的抗卩-hCG抗体的浓度为0.06mg/ml。 将得到的混合物喷雾在Whatman玻璃纤维上(F529, 25mm宽的巻)， 使用BIODOT XYZS (系列号1673)在90g/hr下、以2.02叫/cm喷涂 在F529-09玻璃纤维上。
玻璃纤维使用系列号#17494的Hedinair链条式平炉干燥，设置为 65°C和速度为5 (单次通过)。，通过重复上述，但是距离喷涂的最 初位置偏移大约0.8mm (玻璃纤维的更下游)，乳胶在第二次通过时 沉积在玻璃纤维上。按照上面的描述对玻璃纤维进行干燥。
对比实施例2
构建了其中两个检测区都被提供在同一多孔载体上的分析装置， 它不能使得在扩大的分析物程度内测量分析物浓度。
使用自有的检测区光学读数器，和范围在0- 250000mIU/ml hCG 的12个浓度的校准的hCG缓冲液标准品，测试了实施例2的分析装置。 对每个浓度水平的IO个重复样品进行了测量，给出了总数为120个的 被测试的分析装置。
按照实施例2构建的第二种分析的信号强度对hCG浓度显示在图3中。
实施例2的第一种分析测试条，在分析曲线变平之前能够测定高 达大约400mIU/ml的hCG存在量。实施例2的第二种分析测试条能够 检测大于大约1000mlU/ml的hCG水平。在第一种和第二种分析测试条 上信号的测量能够测定在大约400mIU/ml和1000mlU/ml之间的hCG
33水平。
改变清除抗体的量的影响
制备了实施例2的第二种分析测试条，只是在测试条的制备过程 中清除抗体的存在量是变化的，给出了 3468的终浓度为0.12、 0.16、 0.2和0.24mg/ml。
如可图4所见，增加清除抗体的量降低了在检测区捕获的分析物 的量。
权利要求
1.用于在扩大的浓度范围内确定液体样品中分析物的存在和/或程度的分析装置，包括第一种分析和第二种分析，其中分析物的第一种分析包含第一个流径，所述流径具有唯一的第一个分析检测区，能够固定标记结合试剂，而所述分析物的第二种分析包含第二个流径，所述流径具有唯一的第二个分析检测区，能够固定标记结合试剂，其中检测区中存在的标记结合试剂，为所述液体样品中分析物的存在和/或程度提供指示。
2. 权利要求l的装置，其中第一个和/或第二个流径包含多孔载体。
3. 权利要求2的装置，其中多孔载体是侧流多孔载体。
4. 前述权利要求任一项的装置，其中第一种和/或第二种分析包含 提供在所述第一种和/或第二种分析检测区上游、针对分析物的可移动 的标记结合试剂。
5. 前述权利要求任一项的装置，其中第一种和/或第二种分析的检 测区含有针对分析物的固定化结合试剂。
6. 前述权利要求任一项的装置，其中第一种分析是夹心分析，和 第二种分析是竞争性或抑制性分析。
7. 权利要求l-5任一项的装置，其中第一种分析包含提供在第一种 分析检测区上游、针对分析物的可移动的标记结合试剂，其中所述检 测区包含针对分析物的固定化的结合试剂；和其中第二种分析包含提供在第二种分析检测区上游、针对分析 物的第一个结合区域的可移动的标记结合试剂和针对分析物的清除剂 结合试剂，其中所述第二种分析检测区能够结合标记结合试剂。
8. 权利要求7的装置，其中第二种分析检测区含有针对分析物的 固定化的结合试剂。
9. 权利要求7或8的装置，其中对于第二种分析来说，清除剂结合 试剂与固定化的标记结合试剂相比，对分析物具有更高的结合亲和性。
10. 权利要求7-9任一项的装置，其中第二种分析的可移动的标记 结合试剂和清除剂结合试剂分别与分析物的第一个和第二个结合区域 结合，第二种分析检测区含有针对分析物的第二个结合区域的固定化 的结合试剂。
11. 权利要求7-10任一项的装置，其中第二种分析的可移动的标记 结合试剂和清除剂结合试剂被提供在相同区域中。
12. 权利要求7-ll任一项的装置，其中清除剂结合试剂以固定化的 形式提供。
13. 前述权利要求任一项的装置，其中标记结合试剂用可光学检 测的颗粒进行标记。
14. 前述权利要求任一项的装置，含有共同的多孔样品接收器。
15. 用于确定液体样品中分析物的存在和/或程度的分析装置，包 含第一种分析和第二种分析，其中所述第一种分析包含具有检测区的 多孔载体，检测区含有针对分析物的固定化的结合试剂，并在检测区 的上游提供有针对所述分析物的可移动的标记结合试剂；和其中所述 第二种分析包含检测区，所述检测区含有针对分析物的固定化的结合 试剂，并在检测区的上游提供有针对分析物的可移动的标记结合试剂 和针对所述分析物的清除剂试剂，其中检测区中存在的标记结合试剂的检测，为所述液体样品中分析物的存在和/或程度提供指示。
16. 前述权利要求任一项的分析装置，其中第一种分析是高灵敏 度的分析物分析，和第二种分析是低灵敏度的分析物分析。
17. 前述权利要求任一项的装置，含有机壳，其中第一种和第二 种分析被提供在所述机壳中。
18. 前述权利要求的一项或多项的装置，用于检测尿液中的hCG分析物，其中该装置包含a) 用于照射和检测检测区中标记光学结合试剂的照明和检测工具；b) 用于计算hCG水平或对应于hCG水平的值的计算工具；c) 用于显示分析测试结果的显示工具；d) 储存的基础阈值，其中hCG水平对应于低于储存的基础阈值的 值指示没有怀孕，其中hCG水平对应于等于或高于储存的基础阈值的值 指示怀孕；e) 两个另外的第一个和第二个储存的阈值，其中对应于低于或等 于第一个阈值的值的hCG水平指示怀孕水平处于第一个范围内，hCG水平对应于高于第二个阈值的值指示怀孕水平处于第三个范围内，hCG 水平对应于高于或等于第一个阈值但低于第二个阈值的值指示hCG水 平处于第二个范围内，其中显示工具能够指示未怀孕状态或怀孕状态 和怀孕的程度。
19. 用于在液体样品中确定分析物的存在和/或程度的分析试剂 盒，包含第一种分析和第二种分析，其中所述第一种分析包含具有检 测区的多孔载体，所述检测区含有针对分析物的固定化的结合试剂， 并在检测区的上游提供有针对所述分析物的可移动的标记结合试剂； 和其中所述第二种分析包含检测区，所述检测区含有针对分析物的固定化的结合试剂，并在检测区的上游提供有针对分析物的可移动的标记结合试剂和针对所述分析物的清除剂试剂，其中检测区中存在的标 记结合试剂的检测，为样品中分析物的存在和/或程度提供指示。
全文摘要
本发明公开了用于在扩大的浓度范围内确定液体样品中分析物是否存在和/或存在的程度的分析装置，含有第一种分析和第二种分析，其中分析物的第一种分析包含第一个流径，所述流径具有能够固定标记的结合试剂的唯一检测区，和所述分析物的第二种分析包含第二个流径，所述流径具有能够固定标记结合试剂的唯一检测区，其中检测区中存在的标记结合试剂，为所述液体样品中分析物的存在和/或程度提供指示。
文档编号G01N33/558GK101663583SQ200880011652
公开日2010年3月3日 申请日期2008年4月9日 优先权日2007年4月10日
发明者埃兹拉·林利, 巴比尔·拉伊, 沙伊·伊彭 申请人:因韦尔尼斯医药瑞士股份有限公司