专利名称：：调节诊断测试校准的方法调节诊断测试校准的方法本发明涉及调节试剂的预定义的校准的直接或间接方法，所述试剂适合在医学生物学领域，更特别地在止血领域中，进行诊断测试。止血被认为是一组涉及预防和阻止出血的生理学机制。止血经常被比作天平(scale)，因为血液流动性通过凝血因子激活剂与抑制剂之间的平衡而得以维持。这种平衡的任何破坏将会使天平向病理过程倾斜容易由抑制剂缺乏引起的血块形成而导致的血栓形成，或容易由凝血因子缺乏引起的出血(bleeding)而导致的出血(haemorrhaging)0因此，分析和测定凝血激活因子或抑制因子使得诊断各种临床表现中的血栓形成或出血(haemorrhaging)的诱因或风险成为可能。这些测试主要在测试实验室或医院中，以半自动化或自动化的方式常规地进行。通常，取决于进行的测试和所用的仪器，结果由仪器测量的信号组成，或由仪器计算的生物活性组成。对于在测试系统上进行的大多数生物测试，当进行自动化止血测试时，校准对于直接计算研究中因子的水平或活性是必需的。通常利用具有靶测试物质的良好特征活性或浓度的校准器来获取这些校准数据，而且在此基础上，可定义校准曲线来对特定的信号强度指定浓度或活性。然而，就经常在不同范围的系统中进行的相同测试而言，经常观察到仪器间的变异性(variability)。对于相同的测试，这种变异性并不总是允许结果的直接比较，所述结果总是利用相同标准校准，在不同装置上获得的。而且，因为大量的试剂为液体形式的，所以它们比冷冻干燥形式的试剂更易受老化现象影响。由于这个原因，即使这些试剂在一定时间内保持功能性，但是其灵敏度可能部分地下降或随时间而改变。这使得难以解释利用相同试剂获得，但是产生于不同时期进行的测试的结果。US2007/0020765申请描述了将样品的凝固时间标准化的方法，其中使用了至少两个校准器，对该样品，已经在与应用于样品的测试系统相同的测试系统中预定了标准凝固时间，而且在此基础上，在预定的标准时间与对相同校准器测量的实际时间之间定义了所用测试中的校准曲线。利用定义的校准曲线来将样品中测量的凝固时间转换为标准化的凝固时间。因此，每当将新试剂盒用于测量止血测试中的凝固时间时，这种方法由局部地产生校准组成。本发明的目的是提供调节测试仪器和相关的预校准的试剂的方法，所述方法使得可能限制或避免获得的结果随时间和/或根据用于测试的仪器的类型的波动。因此，本发明涉及用于医学生物学诊断测试的、调节通过仪器或预定义的校准曲线(预校准曲线)测量的信号或计算的活性的方法，所述方法利用预校准的试剂在仪器上进行，所述方法包括以下步骤(i)为具有测试中化合物的预定浓度或活性的单个或两个校准调节物定义信号值或活性值，所述信号值或活性值称为标准值，为所述调节物测量在标准信号值或活性值与仪器测量的信号值或利用预校准曲线计算的活性值之间的差异，如果测量的差异具有可接受的值，(ii)调节通过仪器测量的信号或通过仪器计算的活性值，或调节预校准曲线的值，从而单个或两个调节物的预校准曲线的测量的信号值或计算的活性值被还原到与步骤(i)中为单个调节物或两个调节物的每一个确定的标准信号值或活性值相同的信号值或活性值，(iii)将如(ii)所述的相同调节应用到所有测试的样品，该样品的信号或活性用所述预校准的试剂来测量。优选地，本发明方法用于血液凝固研究测试。术语具有“可接受的值”的测量差异意指对于所用试剂和仪器，值的范围的两个值之间保留的差异，该差异被本领域技术人员认为是容许的。这种差异可根据所用测试的灵敏度和测量的信号的数量级而改变。由于这个原因，必须根据测试类型和所用的仪器来定义限制，高于该限制的预校准的调节不再是可接受的。当进行测试时，本领域技术人员习惯于分析由自动化装置可容易检测值的测试给出的结果，根据该值，结果被认为是异常的，而不管这是由所用的试剂还是仪器导致的。因此，本领域技术人员能够定义标准信号值或活性值与通过仪器测量的信号值或在根据本发明方法的步骤(i)的预校准曲线上计算的活性值之间的差异，该差异足够小以至于不隐藏所用试剂或装置的异常。优选地，测量的差异不超过20%至30%。根据一优选的可选实施方案，本发明的方法用单个调节物来进行。根据本发明的一具体实施方案，根据本发明方法的步骤(i)和(ii)，通过单个调节物，作为预定测试一部分的测量的信号的调节，可如下进行-对定义标准值的步骤(i)，应用以下的程序(procedure)基于在确定所考虑的产品的预校准步骤期间所确定的结果，计算指定给调节物的标准信号值。预校准的确定由在一组多台仪器上利用已知水平的测定中的测试物质(测试化合物)来运行标准组成。每个标准一式两份、一式三份或一式四份地在每台仪器上运行。同时，对信号而要被滴定的调节物也一式两份、一式三份或一式四份地在相同的仪器上运行。然后，单独地对每个标准和调节物，在仪器外计算所有获得的信号值的算术平均{t、i^i^{t(truncatedmean)g中{t(median)。通过各种对(平均或中值信号；标准浓度)上的最小二乘回归，在仪器外计算预校准等式的确定。根据所选择的计算方法，调节物的标准信号值分别对应于作为预校准确定的一部分的这个调节物上测量的所有信号值的算术平均值、截断平均值或中值。对这个调节物计算的标准信号值只对预校准的产品的特定批(batch)有效。因此，调节物或多个调节物的标准信号值或活性值(见下文)因而能够在诊断测试之前独立地进行。因此，能够将调节物(或多个调节物)的标准信号(或活性)值给予利用要使用的试剂批和调节物(或多个调节物)的诊断测试的使用者。-对调节为调节物和测试样品测量的值的步骤(ii)和(iii)，遵循以下的程序指定给调节物以用于其预校准的产品批的标准信号值被引用为S。当这个调节物与这个预校准的产物批一式两份地、一式三份地或一式四份地在仪器上运行时，根据所选择的确定S的计算方法，所述仪器计算信号T，该信号T对应于这些各种测量信号的算术平均值、截断平均值或中值。如果S与T之间的差异满足仪器所知的验收标准(acc印tancecriteria)，则仪器计算调节系数C，其等于S比T的比率(C=S/T)。通过将仪器为调节物测量的信号T乘以等于S/T的这个调节系数C，使调节物信号的被调节的值等于S。类似地，当测定中的样品在相同仪器上运行时，通过将这些测量值乘以调节系数C来对获得的信号测量值进行调节。然后，测定中的测试物质的浓度或活性通过将预校准应用到这种调节的信号值来进行计算。根据本发明的另一具体实施方案，根据本发明方法的步骤(i)和(ii)，通过单个调节物，在通过测试仪器计算的活性上进行调节，如下所述_对定义标准值的步骤(i)通过滴定将标准活性值指定给调节物。为此目的，在各种系统上，利用一种或各种预校准的试剂批进行多个测试。确定的数量可随所考虑的参数而改变，但总是大于或等于3。这种滴定与预校准确定是独立的。在每个确定期间，一式两份地、一式三份地或一式四份地测试调节物(其是，例如，对照/校准器类型的、冷冻干燥的、基于血浆并含有赋形剂的试剂)，并且其标准活性通过读取预校准上测量的信号来推断。然后，对每个调节物，对用每个自动化装置上的每个预校准的试剂批获得的所有活性，在仪器外计算算术平均值、截断平均值或中值。根据所采用的计算方法，调节物的标准活性值或滴定度对应于作为这种滴定的一部分的调节物上测量的所有活性值的算术平均值、截断平均值或中值。为这个调节物计算的标准活性值可对一个或多个的预校准的产品批有效。调节物的滴定尽可能地与参数的国际标准相关联。除了所考虑的系统中的均一性外，这保证了与国际系统的一致性。-对调节测量的活性的步骤(ii)和(iii)指定给调节物的滴定度被引用为S。当这个调节物和与其对应的预校准的产品批或多个批，一式两份地、一式三份地或一式四份地在仪器上运行时，基于测量的信号，所述仪器计算活性T，该活性T根据选择的确定S的计算方法，对应于这些各种测量的信号的算术平均值、截断平均值或中值。如果S与T之间差异满足仪器已知的验收标准，则仪器计算调节系数C，其等于S比T的比率(C=S/T)。这样，通过将仪器为调节物测量的信号T乘以等于S/T的调节系数C，使调节物信号的被调节的值等于S。类似地，当测定中的样品在相同仪器上运行时，通过试剂预校准等式将测量的信号转换为活性。然后，获得的活性通过同样地乘以所述调节系数C来进行调节。本发明方法范围内所用的调节物是用于以下用途的组合-在新试剂批使用期间，在利用预校准时，调节返回至用于进行测试仪器的测试结果。目的在于当对照系统性偏移(offset)时，将它们重排(realign)。_随着时间的推移，补偿例如由于试剂的老化而造成的其灵敏度的损耗。如上文所述，这一点尤其适用于随着时间的推移比冷冻干燥试剂更不稳定的液体试剂。根据进行的测试来定义与凝血因子或其它的组分相关的调节物组合。调节物必须包含至少测试中所用的研究化合物，该化合物的浓度或活性是预定的。就血液凝固研究测试而言，调节物优选由稳定的冷冻干燥的血浆，或稳定的冷冻干燥的血浆池(plasmapool)组成。调节物也可由纯化的或半纯化的血浆蛋白组成，所述蛋白提供进行作为进行的测试一部分而产生的反应所需因子的供应，并且还包含研究中的化合物(也称为研究中的因子)，该化合物浓度或活性是预定的。用于调节物的研究中的因子浓度(或活性水平)必须经过选择以使预校准的校正上潜在的背景噪音的影响降至最低。为此目的，调节物的测试化合物浓度或活性是被定义的，从而信号/背景噪音比率是高的。根据所用的测试类型，测量的信号与调节物的研究中化合物的活性或浓度之间的关系是不同的。由于这个原因，根据测试获得具有不同特征(profile)的曲线。例如，就诸如DiagnosticaStago销售的STA-StachromATIII试剂盒所建议的抗凝血酶(AT)测定而言，当ATIII浓度增加时DOD(Δ0D)降低。然而，因为ATIII浓度在病理状况下比正常状况下低，所以用于完成本发明的调节方法的调节物的AT浓度将经过选择，从而将调节物置于覆盖病理值的范围内(S卩，少量ΑΤΙΙΙ)。相反地，就诸如STA-Stachrom蛋白C(proteinC)试剂盒(DiagnosticaStago)所建议的蛋白C测定而言，将调节物将置于对应正常蛋白C浓度的范围内，因为测量的信号随蛋白C的量成比例地增加，而且通过蛋白C水平上限值来划定正常范围的界限。就诸如例如STA-LiatestD-Di试剂盒(DiagnosticaStago)所进行的D-二聚体(D-Dimer)测定而言，可观察到信号随D-Di的量而增加。然而，在正常状况下，D-二聚体的水平比病理状况下的水平低。因而本发明的调节物将经过选择，从而使观察到的信号置于病理范围内。就利用STA-Liatest试剂盒的测定而言，调节可具有STALiatest对照P(STALiatestControlP)或STALiatest对照N(STALiatestControlN)试剂的组合。本发明的方法可用于任何类型的血液凝固研究测试，例如APTT(活化部分凝血激酶时间(ActivatedPartialThromboplastinTime))，PT(凝血酶原时间(Prothrombintime)或Quick时间)，或TT(凝血酶时间(Thrombintime))，或任何基于光密度(OD)或时间测量的其它常规酶学测试。本发明的方法也可应用于基于微球体悬浮液浊度增加的光度测量的分散固相免疫学测定测试。下文的实施例示例了本发明。实施例1STALiatestD-Di预校准调节的研究试剂老化相关反应性损耗的一点(one-point)DOD校ιΗ的可行件。将本发明的方法应用于DiagnosticaStago销售的，名为STA-LiatestD-Di的测试ο本研究由利用包被了两种抗-D-二聚体的单克隆抗体的胶乳微球体的免疫比浊法(immunoturbidimetry)血浆D-二聚体(D-Di)测定试剂盒组成。在测试物质(D-二聚体)存在下，抗原/抗体类型反应诱导胶乳颗粒凝集，这诱导反应混合物浊度的增加。根据试剂盒包装说明书(insert)，在STA范围分析器(DiagnosticStago)上，以动力学模式，在540nm处测量140秒。吸光度的增加与测试中样品的D-二聚体的浓度是成比例的。试剂盒试剂为液体，随时可用。对每个试剂批，预校准由条形码标签提供。因而，将所用批的预校准系数通过简单地扫描条形码标签直接发送到仪器。将对照血浆(阳性对照和阴性对照)用于验证校准及测定的运行。用STALiatestD-Di的特定批，对4个血浆样品在T=O(表1)进行首次D-Di浓度测量，并且用相同批，相同样品在20个月(在T=20个月)后进行第二次D-Di浓度测量(表2)。所用的血浆为标准血浆，其具有测量的参数的被定义靶值(D-Di):(靶值=大量实验性测试确定的平均值)-RIN2是靶D-Di值为0.58μg/ml的血浆-PN2是靶D-Di值为0.83μg/ml的血浆-LCP是病理对照血浆(STALiatest对照P)，靶向2.40μg/mlD_Di_P2是另一种病理血浆。本实施例中所用的调节点为“STALiatest对照P”(LCP)。在10台STA范围仪器上测量DOD。每台仪器测量的DOD通过系数进行校正，该系数通过等于0.129的这种试剂的标准DOD比每台仪器上获得的四组(X4)的平均DOD的比率来计算。在所用STALiatestD-Di批的预校准的确定中，0.129的标准DOD对应于STALiatest对照P(本实施例中LCP)的批上获得的平均D0D。在于T=0时预校准的特定STALiatestD-Di批上，对4种浓度水平进行测试。表1和2给出分别在T=0(表1)和T=20个月(表2)获得的结果。表3中的结果，其为在LCP调节后T=20个月获得的那些结果，与最初在T=0获得的那些结果(表1)非常类似。总之，DOD的一点调节使得可能恢复在T=0预校准的试剂20个月后(表3)的平均浓度，该平均浓度相当于在T=0获得的那些平均浓度(表1)。因此，测量的DOD的一点调节可有效补偿STALiatestD-Di灵敏度的损耗。表1预校准的试剂在T=0获得的D-二聚体浓度(μR/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>_9]表2预校准的试剂在T=20个月获得的D-二聚体浓度(μg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表3预柃准的试剂在T=20个月及在毎台仪器卜.用LCP调节DOD后获得的D-二聚体浓度(μR/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例2STALiatest游离PS(STALiatestFreePS)的预校准调节研究利用DiagnosticStago销售的另一种试剂盒STALiatest游离PS.进行本研究。这种试剂盒与之前的试剂盒是相同的类型，利用免疫比浊法进行游离蛋白S的定量测定。在10台STA仪器上进行测量。该测量在不同的血浆批进行，即-正常对照血浆和病理对照血浆(LCN和LCP=STALiatest对照N+P-)。-53%血浆这是冷冻干燥的病理血浆。-冷冻单位血浆池(Stago池)。-冷冻单位血浆。表4给出了用具有内部校准器的每个装置的校准获得的游离蛋白S浓度(%)。表5给出了未进行调节而应用的商业预校准，即未调节的预校准，获得的游离蛋白S浓度(％)。表6给出了Stago池上的一点DOD调节后的商业预校准，即调节的预校准，获得的游离蛋白S浓度(％)。^^^^mt^a^^wa^mt^a^t^gas(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6Stag0池卜.的一点POPi周节后的商予页柃准获得的游离蛋白SM<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>在10台STA上，为超过50%的浓度测量的仪器间变异性对于预校准的STALiatest游离PS(未调节的预校准)中非常显著。在未调节的预校准上，LCN的仪器间CV为9.16%，这与每台仪器校准上的CV2.87%及调节的预校准上的CV2.45%相反。类似地，当调节了预校准时，仪器间变异性在53%血浆(在决定性范围内)上和26%LCP上有改善53%血浆:CV仪器校准=3.40%,CV未调节的预校准=6.62%,CV调节的预校准=1.97%。26%LCP血浆:CV仪器校准=2.45%,CV未调节的预校准=2.45%,CV调节的预校准=2.22%。因此，在所有浓度水平中，一点预校准调节给出的仪器间CV值是-优于未调节的预校准获得的那些CV值，-至少与具有内部校准器的每个装置的校准获得的那些CV值相当。总之，通过本发明的一点DOD调节方法，显著地改善了STALiatest游离PS上的仪器间变异性。实施例3STA-Fib2预校准调节研究对照校整(alignment)上的水平校正(g/Ι)的可行性(最接近靶值的获得的值=对特定系统提供的范围的中心)。将本发明方法应用于DiagnosticsStago销售的，名为STA-Fib2的测试。本研究由利用克劳斯(Clauss)方法的血浆纤维蛋白原测定试剂盒组成。在过量的凝血酶的存在下，适当比例稀释的血浆的凝固时间与血浆纤维蛋白原水平成反比。试剂盒试剂为冷冻干燥的。对每一试剂批，由条形码标签提供预校准。因此通过简单地扫描条形码标签，将所用批的预校准系数直接发送到仪器。将对照血浆(正常和血纤维蛋白原减少(hypofibrinogenaemic))用于验证校准及测定的运行。在包括大约40台STA-R，大约10台STAc和大约STA-卫星(STA-Satellite)系统在内的71台机器的系统群(fleet)上，对各种对照血浆进行血浆纤维蛋白原水平的测量。所用的对照为标准血浆，其具有测量的参数的下列靶值-CCN是靶值为2.95g/l的血浆-CCP是靶值为1.30g/l的血浆-HYPER是靶值为5.27g/l的血浆充当调节物血浆是靶值为3.20g/l的AJP血浆。对于本研究，在每台测试的仪器上，以η=5测量水平。基于每个系统上获得的AJP血浆值对水平进行调节(利用本申请中所描述的，用于调节计算的活性的方法)。下表给出了相对于测试中对照的靶值和获得的总体标准偏差，进行调节和未进行调节获得的平均水平(通过预校准所考虑的批获得的水平)。未进行调节CCN靶标2.95g/lCCP靶标1.30g/lHYPER靶标5.27g/l平均值Z82L24δΓθ6SDOlθΓθ4Οθ进行调节CCN靶标2.95g/lCCP靶标1.30g/lHYPER靶标5.27g/l平均值2791L285Γ23<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>总之，进行的调节重排了在各种血浆中获得的相对于其靶值的水平，同时保留测试群上的均勻标准偏差。权利要求调节通过仪器或预定义的校准曲线(预校准曲线)测量的信号或计算的活性的方法，所述方法用于医学生物学诊断测试，所述方法利用预校准的试剂在仪器上进行，所述方法包括以下步骤(i)为具有测试中化合物的预定浓度或活性的单个或两个校准调节物定义信号值或活性值，所述信号值或活性值称为标准值，为所述调节物测量在所述标准信号值或活性值与所述仪器测量的信号值或利用所述预校准曲线计算的活性值之间的差异，如果测量的所述差异具有可接受的值，(ii)调节通过所述仪器测量的信号或通过所述仪器计算的活性值，或调节所述预校准曲线的值，从而所述单个或两个调节物的所述测量的信号值或所述预校准曲线上计算的活性值被还原到与步骤(i)中为所述单个调节物或所述两个调节物的每一个确定的标准信号值或活性值相同的信号值或活性值，(iii)将如(ii)所述的相同调节应用到所有测试的样品，所述样品的信号或活性用所述预校准的试剂来测量。2.如权利要求1所述的调节方法，特征在于所述调节方法用于血液凝固研究测试。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述调节物的测试化合物浓度或活性被定义，从而信号/噪音比率在所考虑的测试中是高的。4.如权利要求1或2所述的调节方法，特征在于使用单个调节物。5.如权利要求2所述的调节方法，特征在于所述根据步骤(i)测量的差异不超过20%至30%。6.如权利要求2至5中任一权利要求所述的调节方法，特征在于根据所述的凝固研究测试来定义与凝血因子有关的调节物的组合，所述调节物包含至少所述测试中所用的研究化合物，所述化合物的浓度或活性是预定的。7.如权利要求2至6中任一权利要求所述的方法，特征在于所述调节物由稳定的冷冻干燥的血浆或稳定的冷冻干燥的血浆池组成。8.如权利要求2至6中任一权利要求所述的方法，特征在于所述调节物由纯化或半纯化的血浆蛋白组成，所述蛋白提供进行作为进行的测试的一部分而产生的反应所需因子的供应并且还包含研究中的化合物，所述化合物的浓度或活性是预定的。9.如权利要求2至8中任一权利要求所述的方法，特征在于所述血液凝固研究测试为分散固相免疫学测定测试。10.如权利要求2至9中任一权利要求所述的方法，其中功能性研究测试为D-二聚体测定测试。11.如权利要求2至9中任一权利要求所述的方法，其中凝固研究测试为APTT、PT、TT测试或任何其它常规酶学测试。12.如权利要求1至11中任一权利要求所述的方法，其中所述调节物不用于制备所述预校准曲线。13.如权利要求1至12中任一权利要求所述方法的用途，用于校正各种试剂的影响，尤其是液体试剂的影响，尤其是由于所述试剂的保存期限所导致的影响，所述试剂用于在特定的自动化装置中完成医学生物学诊断测试。14.如权利要求1至12中任一权利要求所述方法的用途，用于校正医学生物学诊断测试所用仪器的影响。15.如权利要求13或14所述的用途，特征在于测试为血液凝固研究测试。16.血液凝固研究测试的校准调节物，特征在于所述校准调节物由稳定的冷冻干燥的血浆或稳定的冷冻干燥的血浆池组成，并且在凝固研究测试中，所述调节物的测试中的化合物浓度或活性是预定的。17.血液凝固研究测试的校准调节物，特征在于所述校准调节物由纯化或半纯化的血浆蛋白组成，所述述蛋白提供进行作为进行的测试的一部分而产生的反应所需因子的供应并且还包含研究中的化合物，所述化合物的浓度或活性是预定的。18.如权利要求16或17所述的校准调节物，特征在于所述测试中的化合物的浓度或活性在对应于高信号/噪音比率的范围内进行选择。全文摘要本发明涉及调节通过仪器或预定义的校准曲线(预校准曲线)测量的信号或计算的活性的方法，所述方法用于医学生物学诊断测试，所述方法包括以下步骤(i)为具有测试中化合物的预定浓度或活性的单个或两个校准调节物定义信号值或活性值，所述信号值或活性值称为标准值，为所述调节物测量在所述标准信号值或活性值与仪器测量的信号值或利用预校准曲线计算的活性值之间的差异，如果测量的所述差异具有可接受的值，(ii)调节通过所述仪器测量的信号或通过所述仪器计算的活性值或调节预校准曲线的值，从而所述单个或两个调节物的测量的信号值或所述预校准曲线上计算的活性值被还原到与步骤(i)中为所述单个调节物或所述两个调节物的每一个确定的标准信号值或活性值相同的信号值或活性值，(iii)将如(ii)所述的相同调节应用到所有测试的样品，该样品的信号或活性用所述预校准的试剂来测量。文档编号G01N33/96GK101821630SQ200880110313公开日2010年9月1日申请日期2008年10月2日优先权日2007年10月4日发明者弗雷德里克·埃斯蒂乌,莱德耶·尼康德申请人:斯塔戈诊断公司