专利名称：：降糖中成药中非法添加格列齐特的检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种中成药中非法添加化学药物的检测方法，更具体地说，本发明涉及一种降糖中成药中非法添加降糖化学药物的检测方法。
背景技术：
：降糖中成药一般含人参、黄芪等中药而不含降糖西药，但有的降糖中成药中非法添加了磺酰脲类西药，如格列齐特，患者在不知情之下服用了添加有降糖西药的降糖中成药后，增大了副作用和风险性。目前，降糖中成药中所含的降糖西药通常采用薄层色谱法或高效液相色谱法进行检测，但这些方法需要额外的仪器设备，而且耗时长(薄层色谱法需时12小时，高效液相色谱法需时34小时)，因此在现场监督检查时并不适用。为此，建立一种快速、简单、灵敏、可靠、特异性强的降糖中成药中非法添加降糖化学药物的检测方法，具有十分重要的社会意义。本发明利用磺酰脲类降糖西药——格列齐特的理化性质，建立了一种全新的降糖中成药中所含格列齐特的检测方法，具有快速、简单以及特异性强等优点，克服了上述色谱法的各种缺陷。
发明内容本发明的目的在于提供一种降糖中成药中非法添加格列齐特的检测方法。本发明是通过以下技术方案实现的一种降糖中成药中非法添加格列齐特的检测方法，包括以下步骤1)待测样品的处理；2)经处理的待测样品用有机溶剂进行提取，得到待测样品的提取液；3)所得到的提取液中加入碱溶液进行萃取，取碱溶液层萃取液作为供试品溶液；4)取部分供试品溶液，滴入三硝基苯酚饱和水溶液，进行化学反应I;5)另取部分供试品溶液，滴入碘化汞钾试液，进行化学反应II;6)检测结果的判断化学反应I和n均产生沉淀或浑浊，则判断为待测样品中含有格列齐特。步骤1)所得到的经处理的待测样品用有机溶剂进行提取前，先滴入少量碱溶液。3本发明所述的有机溶剂为与水不相互溶并且对格列齐特具有良好溶解性的有机溶剂，包括三氯甲垸、二氯甲烷、环己烷等，其中优选的是三氯甲烷。本发明所述的碱溶液选自NaOH溶液或KOH溶液。所述碱溶液的浓度为0.14mol/L0.18mol/L，其中优选的是0.15mol/L。步骤1)所述的待测样品的处理包括以下方法-片剂压碎，取粉末；丸剂捣碎，取粉末；胶囊剂直接取内容物；颗粒剂研细，取粉末。步骤2)所得到的提取液在加入碱溶液进行萃取前，先用孔径为0.45pm的有机系微孔滤膜进行过滤。在步骤3)中加入碱溶液进行萃取时，碱溶液与有机溶剂的体积比为l:1。步骤3)所得到的供试品溶液在进行步骤4)和步骤5)所述的化学反应前，先用孔径为0.45pm的有机系微孔滤膜进行过滤。在步骤4)中，供试品溶液与三硝基苯酚饱和水溶液的体积比为l:1.251:3，其中优选的是l:21:3。在步骤5)中，供试品溶液与碘化汞钾试液的体积比为l:0.31:1，其中优选的是l:0.6。由于中成药中含有大量色素，其成分多为水溶或醇溶，用水提、醇提均有色素干扰，而本发明优选三氯甲垸进行提取，既能有效地提取出格列齐特，又能除去大量色素的干扰。此外，由于多数降糖中成药都含有地黄等粘性成分，直接用三氯甲烷进行提取，提取液难以与药粉分离，但滴入少量碱溶液可使提取液易于与药粉分离。磺酰脲类降糖西药，如格列齐特、格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等，由于分子中含有脲的结构，可与三硝基苯酚反应，形成黄色混浊或沉淀，而其它非磺酰脲类降糖西药，如盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、盐酸吡格列酮、盐酸罗格列酮、瑞格列奈、罗格列酮、马来酸罗格列酮等，并不能与三硝基苯酚试剂反应形成混浊或沉淀。因此，当步骤4)所述的化学反应I产生黄色沉淀或浑浊时，即可判断待测样品中含有磺酰脲类降糖西药。再者，由于格列齐特为含N杂环化合物，可与碘化汞钾反应，产生白色混浊或沉淀，而其它常见的磺酰脲类降糖西药，如格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等，均不能与碘化汞钾反应形成混浊或沉淀。因此，当步骤5)所述的化学反应II产生白色沉淀或浑浊时，即可进一步判断待测样品中含有格列齐特。本发明所述的降糖中成药中非法添加格列齐特的检测方法既能有效地提取出格列齐特，又能除去大量色素的干扰；既形成了有颜色的沉淀反应，又可在短时间内完成，符合"快检法"的要求，可作为现场监督检査时使用。此外，本发明采用了两个特异性强的化学反应作为检测手段，具有灵敏、可靠等优点。另外，《中国药典》2005年版第二部第595页"格列齐特"项下的鉴别方法是将格列齐特溶解于吡啶中，再滴加CuS04试液，使形成络合物产生蓝紫色。但该鉴别方法存在两个缺点1、吡啶有特殊的嗅气，污染实验室空间使实验人员难以承受；2、筛选性不强，格列本脲、格列喹酮、格列吡嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲等也可与CuS04试液产生蓝紫色。本发明所述的检测方法同样可以用于格列齐特的常规鉴别将格列齐特溶解于0.15mol/LNaOH溶液中，分别滴入三硝基苯酚饱和水溶液和碘化汞钾试液，两者均产生沉淀或浑浊即可鉴别为格列齐特。这一方法能够克服目前的鉴别方法的缺陷，有利于完善《中国药典》载录的鉴别方法。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。试验~":取下述表1中样品编号为112的降糖西药各一片，压成粉末后分别置10m该ij度试管中，各加入2ml0.15mol/L的NaOH溶液。振摇或超声处理10分钟，然后静置5分钟，必要时可进行离心。分别用注射器吸取上清液，然后用0.45pm的有机系微孔滤膜进行过滤。各取0.8ml滤液，分别滴入lml三硝基苯酚饱和水溶液，进行化学反应I。试验结果显示表1中样品编号为16的药品均产生明显的黄色沉淀，样品编号为712的药品均未产生任何沉淀。这是因为表2中样品编号为16的药品属于磺酰脲类药物，可与三硝基苯酚反应形成黄色沉淀，而样品编号为712的药品均不属于磺酰脲类药物，所以不会产生任何沉淀。取0.15mol/LNaOH溶液2ml，置试管中，然后滴入lml三硝基苯酚饱和水溶液，未产生任何沉淀，说明试剂本身对试验无干扰。试验二取下述表1中样品编号为16的降糖西药各一片，压成粉末后分别置10m该lj度试管中，各加入2ml0.15mol/L的NaOH溶液。振摇或超声处理10分钟，然后静置5分钟，必要时可进行离心。分别用注射器吸取上清液，然后用0.45tim的有机系微孔滤膜进行过滤。各取0.8ml滤液，分别滴入0.4ml碘化汞钾试液，进行化学反应II。试验结果显示表l中样品编号为l的药品(格列齐特片)产生明显的白色沉淀，样品编号为26的药品均未产生任何沉淀。这是因为格列齐特是含N杂环化合物，可与碘化汞钾反应形成白色沉淀。取0.15mol/LNaOH溶液2ml，置试管中，然后滴入0.4ml碘化汞钾试液，未产生任何沉淀，说明试剂本身对试验无干扰。表1降糖西药样品<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>试验三分别取下述表2中样品编号为116的降糖中成药，按以下方法进行处理片剂取l片(0.3g0.5g)，除去包衣，压碎，取粉末；丸剂取0.5g，捣碎，取粉末；胶囊剂取l粒(0.3g0.5g)，除去囊壳，直接取内容物；颗粒剂取0.5g，研细，取粉末；将经过处理的待测样品分别置于10ml具塞刻度试管中，各滴入l滴0.15mol/L的NaOH溶液，再加入6ml三氯甲烷。塞紧试管塞，用力振摇或超声处理10分钟，然后静置35分钟。分别用注射器吸取4ml提取液，经0.45pm的有机系微孔滤膜过滤后，分别置于另一支10ml具塞刻度试管中，各加入4ml0.15mol/L的NaOH溶液，振摇35次，静置5分钟。分别用注射器吸取上层的NaOH溶液层萃取液，然后用0.45Mm的有机系微孔滤膜进行过滤，所得滤液作为供试品溶液。分别取上述的供试品溶液1.6ml，平均分置于两支试管中，每支试管0.8ml。在其中一支试管中滴入1.5ml2ml三硝基苯酚饱和水溶液，进行化学反应I。若未产生浑浊或沉淀，则可判断样品中不含磺酰脲类降糖西药；若产生明显的黄色浑浊或沉淀，则可判断样品中含有磺酰脲类降糖西药。在另一支试管中滴入0.5ml碘化汞钾试液，进行化学反应II，滴入过程和滴完后不能振摇试管。若未产生浑浊或沉淀，则可判断样品中不含格列齐特；若产生明显的白色浑浊或沉淀，则可判断样品中含有格列齐特。试验结果显示表2中样品编号为116的药品在化学反应I和II中均未产生任何沉淀，说明阴性反应均呈阴性，无假阴性。试验四分别取下述表2中样品编号为116的降糖中成药，人为添加40mg的格列齐特片(北京京丰制药有限公司生产，规程为80mg/片，批号为080302)，然后按照试验三所述的方法对样品进行处理。将经过处理的待测样品分别置于10ml具塞刻度试管中，各滴入l滴0.15mol/L的NaOH溶液，再加入6ml三氯甲烷。塞紧试管塞，用力振摇或超声处理10分钟，然后静置35分钟。分别用注射器吸取4ml提取液，经0.45pm的有机系微孔滤膜过滤后，分别置于另一支10ml具塞刻度试管中，各加入4ml0.15mol/L的NaOH溶液，振摇35次，静置5分钟。分别用注射器吸取上层的NaOH溶液层萃取液，然后用0.45pm的有机系微孔滤膜进行过滤，所得滤液作为供试品溶液。分别取上述的供试品溶液1.6ml，平均分置于两支试管中，每支试管0.8ml。在其中一支试管中滴入1.5ml2ml三硝基苯酚饱和水溶液，进行化学反应I。若未产生浑浊或沉淀，则可判断样品中不含磺酰脲类降糖西药；若产生明显的黄色浑浊或沉淀，则可判断样品中含有磺酰脲类降糖西药。在另一支试管中滴入0.5ml碘化汞钾试液，进行化学反应II,滴入过程和滴完后不能振摇试管。若未产生浑浊或沉淀，则可判断样品中不含格列齐特；若产生明显的白色浑浊或沉淀，则可判断样品中含有格列齐特。试验结果显示表2中样品编号为116的药品在化学反应I中均产生明显的黄色沉淀，而且在化学反应II中均产生明显的白色沉淀，说明阳性反应均呈阳性，无假阳性。7表2降糖中成药样品<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>试验结果的统计对上述试验一至四的试验结果进行统计，如下表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>灵敏度(Se):Se=A/(A+C)X100%=16+16X100%=100%特异度(Sp):Sp=D/(B+D)X100%=16+16X100%=100%漏检率(OT):OT=C/(A+C)X100°/。=0+16X100°/o=0误检率(MT):MT=B/(B+D)X100%=0+16X100%=0正确率(AR):AR=(A+D)/(A+B+C+D)X100%=32+32X100%=100%正确指数(AI):AI=l—MT-OT=1—0-0=1最低检测限取表2中的任一样品，分别添加2mg、4mg、6mg、8mg和10mg的格列齐特(素片)，按照试验四所述的方法进行试验。结果显示格列齐特的添加量为6mg时，化学反应I和化学反应II刚好能产生浑浊。因此，本发明所述检测方法的最低检测限为每毫升的碱溶液含0.80mg格列齐特。权利要求1、一种降糖中成药中非法添加格列齐特的检测方法，包括以下步骤1)待测样品的处理；2)经处理的待测样品用有机溶剂进行提取，得到待测样品的提取液；3)所得到的提取液中加入碱溶液进行萃取，取碱溶液层萃取液作为供试品溶液；4)取部分供试品溶液，滴入三硝基苯酚饱和水溶液，进行化学反应I；5)另取部分供试品溶液，滴入碘化汞钾试液，进行化学反应II；6)检测结果的判断化学反应I和II均产生沉淀或浑浊，则判断为待测样品中含有格列齐特。2、根据权利要求l所述的检测方法，其特征在于步骤1)所得到的经处理的待测样品用有机溶剂进行提取前，先滴入碱溶液。3、根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述的有机溶剂为与水不相互溶并且对格列齐特具有良好溶解性的有机溶剂。4、根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于所述的有机溶剂选自三氯甲垸、二氯甲烷或环己烷。5、根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于所述的碱溶液选自NaOH溶液或KOH溶液。6、根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于所述碱溶液的浓度为0.14mol/L0.18mol/L。7、根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于步骤2)所得到的提取液在加入碱溶液进行萃取前，先用孔径为0.45pm的有机系微孔滤膜进行过滤；在步骤3)中加入碱溶液进行萃取时，碱溶液与有机溶剂的体积比为l:1。8、根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于步骤3)所得到的供试品溶液在进行步骤4)和步骤5)所述的化学反应前，先用孔径为0.45pm的有机系微孔滤膜进行过滤。9、根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于在步骤4)中，供试品溶液与三硝基苯酚饱和水溶液的体积比为l:1.251:3。10、根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于在步骤5)中，供试品溶液与碘化汞钾试液的体积比为l:0.31:1。全文摘要本发明公开了一种降糖中成药中非法添加格列齐特的检测方法，该方法包括以下步骤1)待测样品的处理；2)经处理的待测样品用有机溶剂进行提取，得到待测样品的提取液；3)所得到的提取液中加入碱溶液进行萃取，取碱溶液层萃取液作为供试品溶液；4)取部分供试品溶液，滴入三硝基苯酚饱和水溶液，进行化学反应I；5)另取部分供试品溶液，滴入碘化汞钾试液，进行化学反应II；6)检测结果的判断化学反应I和II均产生沉淀或浑浊，则判断为待测样品中含有格列齐特。该方法具有快速、简单、灵敏、可靠以及特异性强等优点，可作为现场监督检查时使用。文档编号G01N31/02GK101581710SQ20091004012公开日2009年11月18日申请日期2009年6月10日优先权日2009年6月10日发明者黄文峰申请人:黄文峰