专利名称：中药材农药残留样品测定前的处理方法
技术领域：
本发明属于中药材测定技术领域，涉及中药材样品中农药残留快速检测的方法。 更具体的说，是利用加速溶剂萃取方法对中药材中的60种农药多残留的样品前处理的方法。
背景技术：
随着中药事业的不断发展、中药及其制剂在世界范围内防病、治病作用被重新认 识、提高中药制剂的内在质量，控制中药材农药残留，制订合理的质控标准是非常必要的。 众所周知，中药材是防病，治病，保健的特殊用品，人们服用的中药材首先应对人体无毒、无 害。如果中药材农药残留超标，患者及体弱者服用且服用时间长时，就易因农药残留造成蓄 积中毒，严重影响其治病功效的发挥。在提高中药制剂内在质量方面不仅需对其有效成分 (活性成分)的质和量进行有效控制。而且应对中药制剂中有毒、有害成分(杂质)予以必 需的了解和限制。中药产业是天津市优势产业之一。随着国际“回归自然热”的升温，中草药被很多 国家和地区看好，中药在国际市场的影响逐渐增大。随之而来，很多中药进口国家的检测机 构对于中药在种植、生产加工过程中产生的农药残留等有害物质控制也越来越严格。我国 2005年修订颁布的新版《中华人民共和国药典》，对国内中药产品的无公害标准作出强制性 规定，要求中药产品中农药残量等有毒有害物质不得超标。这一强制规定将有力促进我国 中药出口水平的提高，促使更多的中药生产企业向国际市场进军。从近年来海关统计来看， 出口中药材因有害残留物超标频遭扣留和退运，已经成为我国中药出口和中药发展的一只 “拦路虎”，对中药的国际声誉产生了极大的负面影响，是制约中药走向世界的“瓶颈”之一。目前，我国中药中农药残留的检测方法落后，发达国家经常采用先进的农药残留 检测技术加强农药残留监测工作，所用检测技术如气相色谱与质谱联用技术，液相色谱与 质谱联用技术，毛细管电泳与质谱联用，以及气相、液相色谱与多级质谱联用技术等，这些 技术的应用大大提高了农药残留检测的定性能力和检测的灵敏度、检测限和检测覆盖范 围。我国当前的中药农残分析方法研究仍以气相或液相色谱配不同的检测器为主，较少采 用各种色质联用技术，研究仍然集中在个别品种中药中的某类农药的检测方法研究。这严 重影响了检验工作的准确程度，在一定程度上也降低了我国检验机构的公正性与权威性。我国从上世纪90年代初开始研究和利用多残留分析方法，并相继推出了一系列 国家标准。GB/T 19649-2006 “粮谷中475种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱一 串联质谱法”，GB/T 19648-2006 “水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留量的测定”; 英国中央科学实验室(CSL)开发了 104种农药残留量同时检测的方法；德国科学研究协会 开发了 320种农药残留的多残留检测方法；美国FDA农药分析手册(PAM)的多残留方法可 检测300多种农药；日本杂贺研究所开发了 205种农药同时测定法；美国CDFA和荷兰卫生 部都有较好的多残留同时检测方法和系统分析方法。目前我国还没有中药中多残留分析的 相关标准。
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在样品前处理方面，现代仪器分析样品制备技术的发展趋势就是使处理样品的过 程要简单、处理速度快、使用装置要小、引进的误差要小、对欲测定组分的选择性和回收率 要高。目前，国际上较多使用固相萃取(SPE)技术，其他微波提取技术、凝胶层析(GPC)、基 质分散固相萃取(MSPD)、超临界萃取(SFE)、固相微萃取技术等也用于多残留分析。而我国 目前多数分析单位仍采用传统的溶剂萃取，液液分配，柱层析净化，前处理方法自动化程度 低、提取净化的效率不高，速度慢，环境污染严重。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种自动化程度高，提取净 化简便、速度快、无环境污染的处理方法。特别是利用加速溶剂萃取方法对中药材农药多残 留的样品前处理的方法。本发明的另一个目的在于公开了中药材农药残留样品测定前的处理方法在检测 中药材农药残留方面的应用。特别是在检测中药材60种农药残留样品中的应用。为达到 上述目的，本发明提供如下的技术方案一种中药材农药残留样品测定前的处理方法，包括如下的步骤(1)将待测中药材样品粉碎，过60-100目筛，60-80°C烘干，放于干燥器内存放；(2)准确称取2. 0g样品，加0. 5-2g硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纤维 素滤膜，然后从底部装入混合好的样品进行加速溶剂萃取；(3)在温度 80-100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，压力 1500psi-2000psi 条件下 静态萃取5-10min，萃取2-4个循环；(4)用相当于萃取池60% -80%的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提 取物，浓缩至近干，吹氮至干，加有机溶剂溶解待净化，有机溶剂的量一般为2-4ml。所述的有机溶剂为乙腈、正己烷、丙酮的一种或两种的混合液。优选的有机溶剂为 丙酮，正己烷，乙腈。也可以是丙酮与正己烷的混合液。尽管甲苯也可以作为有机溶剂加以 使用，但甲苯有毒性，尽量不采用。(5)净化称取0. 2g PSA(N-丙基乙二胺)，0. 2g C18 (十八碳硅烷化物)，0. 3g无 水硫酸镁，置于具塞离心管中，在旋涡混合器上净化混合，以3000r/min的转速离心5min， 移取上清液lml，定容待测。本发明所述的中药材农药残留样品测定前处理方法，其步骤(1)中的将待测中药 材样品粉碎，优选过60目筛，60°C烘干2-4小时备用。本发明所述的中药材农药残留样品测定前处理方法，其步骤(2)中所述硅藻土的 加入量优选为0. 5-2g。本发明所述的中药材农药残留样品测定前处理方法，其步骤(3)中所述的萃取温 度优选为100°c，萃取压力优选为1500psi，静态萃取时间优选为5min，优选萃取2个循环。本发明所述的中药材农药残留样品测定前处理方法，其步骤(5)中所述净化混合 的时间为l_5min。下面是本发明中药材农药残留样品测定前的处理方法在检测中药材农药残留方 面的应用。特别是在检测中药材60种农药残留样品完整的测定方法1.仪器与试剂
仪器ASE200加速溶剂萃取仪(Dionex公司)；Agilent6890/5973GC/MS 气质联用仪，HP-5MS 色谱柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)； RE-47旋转蒸发器；SHB-111循环水式多用真空泵。试剂PSA(固相萃取填料，N-丙基乙二胺)、C18 (固相萃取填料，为十八碳硅烷化 物)、无水硫酸镁(分析纯)、乙腈(分析纯)、丙酮(分析纯和色谱纯)、正己烷(分析纯和 色谱纯)。标准品60种农药混合标准品，20mg/l2.样品制备1)前处理条件样品处理中药材样品粉碎，过60目筛，60°C烘干，放于干燥器内存放。加速溶剂萃取准确称取2. 0g样品，加lg硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加 入一片纤维素滤膜，然后从底部装入混合好的样品。然后进行加速溶剂萃取，在温度100°C， 丙酮正己烷(1 9，v/v)，压力1500psi条件下静态萃取5min，萃取2个循环，用相当于 萃取池60%的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在旋转蒸发仪上浓缩至 近干，吹氮至干，加2ml乙腈溶解待净化。净化称取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g无水硫酸镁，置于10ml塑料具塞离心管中， 将上述溶解液移至此离心管中，旋涡混合器上混合lmin，以3000r/min的转速离心5min，移 取上清液lml，定容待测。2)仪器分析条件AgilentGC/MS 条件。PTV 进样口 70°C (0. 3min) 120°C /min280°C (lOmin)色谱柱(HP-5MS):30mX0. 25mmX0. 25 y m，柱压:llpsi炉温60°C (3min) 15 °C /minl80 °C (2min) 3 °C /min260 °C (2min) 20 °C / min280°C (lOmin)离子源230°C，四极杆180°C，进样体积2iU，载气氦气溶剂延迟10min3)60种农药保留时间和特征离子本发明公开的中药材农药残留样品测定前的处理方法与现有技术公开的内容相 比所具有的优点和特点在于现有的中药材中农药的提取方法通常有索氏提取、振荡提取和超声波提取等，他 们共同的缺点是要消耗溶剂量大、时间长、效率低、不能全自动进行，并且对实验员身体 有损伤、污染环境。本发明采用加速溶剂萃取技术测定中药材中的农药残留，检验流程 短，操作方便，萃取效率高，重复性好，用的溶剂少，对操作人员和环境的污染少。回收率 70-110%，方法灵敏度高，可以同时检测中药材中的60种农药残留量。特别是对于从事中 药生产、销售的部门，快速准确地检测药材农药残留量是十分必要的。对于各地药检部门打 击假冒伪劣药材，净化药材市场将是十分有效的。
图1为标样总离子流图图2为空白总离子流图图3为添加总离子流图。
具体实施例方式为了简单和清楚的目的，下文恰当的省略了公知技术的描述，以免那些不必要的 细节影响对本技术方案的描述。以下结合检测实例对本发明做进一步的说明。其中的纤维 素滤膜由仪器厂商提供的，PSA，C18均可以购买。实施例1(1)将薏苡仁样品粉碎，过60目筛，60°C烘干，放于干燥器内存放；(2)准确称取3份2. 0g薏苡仁样品，其中一份添加60种农药混合标准品0. lml, 放置10分钟，然后将样品与lg硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一片纤维素滤膜， 然后从底部装入混合好的样品进行加速溶剂萃取；(3)在温度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，压力1500psi条件下静态萃取 5min，萃取2个循环；(4)用相当于萃取池60%的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物， 在旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加2ml乙腈溶解待净化。(5)净化称取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g无水硫酸镁，置于10ml塑料具塞离心 管中，将上述溶解液移至此离心管中，旋涡混合器上混合lmin，以3000r/min的转速离心 5min，移取上清液1ml，定容待测。实施例2(1)将苍术样品粉碎，过100目筛，80°C烘干，放于干燥器内存放；(2)准确称取3份2. 0g苍术样品，其中一份添加60种农药混合标准品0. 1ml，放 置10分钟，然后将样品与lg硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一片纤维素滤膜，然 后从底部装入混合好的样品进行加速溶剂萃取；(3)在温度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，压力2000psi条件下静态萃取 lOmin，萃取4个循环；(4)用相当于萃取池75%的溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在 旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加2ml溶剂(丙酮与正己烷体积比1 1)溶解待净化。(5)净化称取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g无水硫酸镁，置于10ml塑料具塞离心 管中，将上述溶解液移至此离心管中，旋涡混合器上混合3min，以3000r/min的转速离心 5min，移取上清液1ml，定容待测。实施例31.加速溶剂萃取准确称取3份2. 0g人参样品，其中一份添加60种农药混合标准 品0. 1ml，放置10分钟，然后将样品与1. 5g硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一片 纤维素滤膜，然后从底部装入混合好的样品。然后进行加速溶剂萃取，在温度80°C，丙酮 正己烷(1 9，？/力，压力2000 ^静态萃取81^11，萃取3个循环，用相当于萃取池70%的 溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s。收集提取物，在旋转蒸发仪上浓缩至近干，吹氮至干，加2ml丙酮与正己烷的混合溶剂(1 1)溶解待净化。净化称取0. 2g PSA，0. 2g C18，0. 3g无水硫酸镁，置于10ml塑料具塞离心管中， 将上述溶解液移至此离心管中，旋涡混合器上混合lmin，以3000r/min的转速离心5min，移 取上清液lml，定容待测。将实施例1所得到的定容待测溶液经下述方法完成薏苡仁样品中农药残留量的 测定仪器分析条件AgilentGC/MS 条件。PTV 进样口 70°C (0. 3min) 120°C /min,280°C (lOmin)色谱柱(HP_5MS):30mX0. 25mmX0. 25iim，柱压llpsi炉温60°C (3min) 15 °C /minl80 °C (2min) 3 °C /min260 °C (2min) 20 °C / min280°C (lOmin)离子源230°C，四极杆180°C，进样体积2iU，载气氦气溶剂延迟10min。采用本发明实施例1方法获得的上清液经定容后测定的结果如下在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述 申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所 作的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明 书中所举实例实施方式的限制。
权利要求
中药材农药残留样品测定前的处理方法，按如下的步骤进行(1)将待测中药材样品粉碎，过60-100目筛，60-80℃烘干，放于干燥器内存放；(2)准确称取2.0g样品，加0.5-2g硅藻土混合均匀，在萃取池底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部装入混合好的样品进行加速溶剂萃取；(3)在温度80-100℃，丙酮∶正己烷1∶9，v/v，压力1500-2000psi条件下静态萃取5-10min，萃取2-4个循环；(4)用相当于萃取池60％-80％的有机溶剂冲洗萃取池，最后用氮气吹扫60s，收集提取物，浓缩至近干，吹氮至干，加有机溶剂溶解待净化；(5)净化称取0.2g PSA，0.2g C18，0.3g无水硫酸镁，置于具塞离心管中，在旋涡混合器上净化混合，以3000r/min的转速离心5min，移取上清液，定容待测。
2.如权利要求1所述的处理方法，其中步骤(3)中所述的萃取温度为100°C，萃取压力 为1500psi，静态萃取时间为5min，萃取2个循环。
3.如权利要求1所述的处理方法，其中步骤(4)所述的有机溶剂为体积比1 1的丙 酮与正己烷混合液。
4.如权利要求1所述的处理方法，其中步骤(5)中所述净化混合时间为l-5min。
5.权利要求1所述的处理方法在检测中药材农药残留方面的应用。
6.权利要求1所述的处理方法在检测中药材60种农药残留样品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药材农药残留样品测定前的处理方法。它是准确称取处理过的中药材样品与硅藻土混合均匀，在萃取池底部加入一片纤维素滤膜，然后从底部装入混合好的样品进行加速溶剂萃取，在温度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，压力1500psi条件下静态萃取5min，萃取2个循环，收集提取物浓缩至近干，吹氮至干，加丙酮，正己烷的混合液或乙腈有机溶剂溶解。然后经过净化处理得到上清液，定容待测。该方法采用加速溶剂萃取技术，检验流程短，操作方便，回收率达70-110％，方法灵敏度高，可以同时检测中药材中的60种农药残留量，具有很好的应用前景。
文档编号G01N1/34GK101852698SQ20091006833
公开日2010年10月6日 申请日期2009年4月2日 优先权日2009年4月2日
发明者刘磊, 宋淑荣, 张玉婷, 李辉, 程奕, 邵辉, 郭永泽 申请人:天津市农业科学院中心实验室;天津海世达检测技术有限公司