一种疏肝理气,活血化瘀的中药组合物及质量检测方法

专利名称：一种疏肝理气,活血化瘀的中药组合物及质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物及制备方法和质量检测方法，特别涉及一种疏肝理 气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物及制备方法和质量检测方法。
背景技术：
乳腺增生为妇科常见病，发病率30% 50%，有一定的致癌倾向，其产生与内分 泌失调尤其是卵巢功能失调有关，对乳腺增生的治疗方法目前主要采用性激素替代疗法或 手术切除。但性激素不良反应较大，手术也往往不易为患者接受。祖国传统医学认为，乳腺 增生属于“乳癖”、“乳中结核”范畴，其发病与冲任二脉关系至为密切。本发明组合物制剂 有丹参、橘叶等药物可使雌激素分泌受到抑制来调节内分泌系统使之平衡，达到提高免疫 功能，强化机体功能，从而治疗乳腺疾病。

发明内容

本发明第一个目的在于提供一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物；本 发明的第二个目的在于提供该中药组合物制剂的制备方法。本发明的第三个目的在于提供 该中药组合物制剂的质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物制剂的原料组成为橘叶275 550重量份、丹参275 550重量份、皂角刺137. 5 412. 5重量份、 王不留行137. 5 412. 5重量份、川楝子137. 5 412. 5重量份、地龙137. 5 412. 5重量 份。本发明一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物制剂的原料组成优选 为橘叶412. 5重量份、丹参412. 5重量份、皂角刺275重量份、王不留行275重量份、 川楝子275重量份、地龙275重量份。本发明一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物制剂的制备方法为除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮1-4次，每次0.5-2小时，合并煎 液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1. 10 1.40(85°C )，放冷；地龙、王不留行用50-95% 乙醇回流提取1-4次，每次0. 5-3小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中，调整乙醇量 达50-95%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，按照常规工艺，制成临床或药学上可 接受的剂型，包括但不限于滴丸、片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏 剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂、注射制剂或外用制剂。本发明一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物颗粒剂的制备方法优选 为除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤 过，滤液浓缩至相对密度为1. 25 1. 30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用70%乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中，调整乙醇量 达70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500重量份与淀粉、糊精适量，混 勻，制成颗粒，干燥，制成即得。本发明一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物片剂的制备方法优选 为以上六味，除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合 并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25 1.30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用 70%乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中， 调整乙醇量达70 %，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥成干浸膏，粉碎，加辅料 适量，混勻，制成颗粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得。本发明一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物胶囊剂的制备方法优选 为以上六味，除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合 并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25 1.30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用 70%乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中， 调整乙醇量达70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500g与淀粉、糊精适 量，混勻，制成颗粒，干燥，装胶囊，即得。本发明提供该中药组合物制剂的质量控制方法，该方法包括步骤A、含量测定色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； (30-50 50-70)比例的甲醇-0. 01 0. 03mol/L磷酸溶液(0. 01 0. 03mol/L磷酸溶液 1000ml，用三乙胺调节pH至2. 5 3. 5)为流动相；检测波长为280 290nm。对照品溶液 的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含2 10 y g的溶液。供试品溶液 的制备取该组合物制剂研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇约20 80ml，超声处 理20 40分钟，放冷，滤过，滤液置25 100ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤1 3次， 每次3 10 ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 20 yl，注入液相色谱仪，测定，即得，相当 于原药材16-22g的组合物制剂含橘叶以橙皮苷(C28H34015)计，不得少于3. Omg ；B、鉴别取该组合物制剂10g，研细，加水30 50ml使溶解，加稀盐酸调节pH值 为3 4，用醋酸乙酯振摇提取1 3次，每次20 50ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲 醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1 3mg的溶 液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2 10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 (4-12 4-7 0.8)比例的苯-醋酸乙酯-甲酸混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显 相同颜色的斑点。C、鉴别取该组合物制剂10g，研细，加氯仿10 30ml，密塞，超声处理15 30分 钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶 液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 10 y 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 (13-6 1)比例的苯-醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
上述质量控制方法优选包括如下含量测定含量测定色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲 醇-0. 025mol/L磷酸溶液(85%磷酸溶液1. 70ml，用水稀释至近1000ml，用三乙胺约1. 8ml 调节pH至2. 9 3. 1，加水至1000ml) (40 60)为流动相；检测波长为284nm。理论板数 按橙皮苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇 制成每1ml含g的溶液，即得。供试品溶液的制备取该组合物制剂，研细，取0. 5g，精 密称定，置锥形瓶中，加甲醇约40ml，超声处理(功率250W，频率33KHZ) 30分钟，放冷，滤 过，滤液置50ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲 醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10iU，注入液相色谱仪，测定，即得。上述质量控制方法中优选包括如下鉴别法丹参薄层鉴别取该组合物制剂10g，研细，加水40ml使溶解，加稀盐酸调节pH值 为3 4，用醋酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使 溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照 品溶液。吸取上述两种溶液各5 u 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸 (8:5: 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。地龙薄层鉴别取该组合物制剂10g，研细，加氯仿20ml，密塞，超声处理20分钟， 滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液，另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液。吸 取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9 1)为展开 剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的荧光斑点。上述质量控制方法中药组合物制剂优选原料组成为橘叶412. 5g、丹参412. 5g、 皂角刺275g、王不留行275g、川楝子275g、地龙275g的颗粒剂，并通过如下方法制备以上 六味，除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤 液浓缩至相对密度为1. 25 1. 30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用70%乙醇回流提 取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中，调整乙醇量达 70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500g与淀粉、糊精适量，混勻，制成 颗粒，干燥，即得。本发明中药组合物具有很好的疏肝理气，活血化瘀，消散乳块作用。本发明中药组合物制剂的质量检测方法，经实验证明本发明含量测定方法检测 专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的 安全、有效、可靠。下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。本发明所有实验例所选用的制剂均为根据本发明实施例1制得的本发明颗粒剂， 但是本发明实验结果并不仅限于该颗粒剂。实验例1 本发明组合物制剂抗实验性大鼠乳腺增生作用研究1.实验材料药物与试剂本发明组合物制剂；苯甲酸雌二醇注射液；黄体酮注射液；激素测定用各种放免试剂盒。动物SD大鼠，雌性，体重200 250g。仪器M0TIC生物显微图像采 集分析系统。2.实验方法10周龄SD雌性大鼠60只，体重200_250g，随机留取10只作为正常对照，其余50 只大鼠复制乳腺增生模型，首先肌内注射苯甲酸雌二醇0. 5mg kg"1 cf1，每天一次，连续 20d，继而改为肌内注射黄体酮5mg kg"1 cf1，每天一次，连续5d。造模后大鼠随机再分为 5组，每组10只，分别灌胃本发明组合物制剂高、中、低剂量(分别为10，5，2. 5g生药化―1)， 正常对照组和模型对照组以等体积自来水灌胃，给药体积均为20mL kg—1，连续35d。末次 给药后次日，大鼠乙醚麻醉，心脏取血，2000r min_1离心分离血清，放免法测定垂体促乳素 (PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P)等雌、孕激素水平，用游标尺测量大鼠第2、3对乳头高度及直 径，并取第二对乳腺固定于10%福尔马林中，石蜡包埋后病理切片(每侧乳腺切纵横两张 切片)，HE染色后镜检，按表1评级标准进行评级。表1乳腺增生评分标准 3.实验结果3. 1对乳腺增生大鼠乳头高度和直径的影响造模后大鼠第2，3对乳头高度及乳头直径明显增加，与正常对照组相比有明显 差异(P< 0.05)，本发明组合物制剂中、高剂量用药后乳头高度明显低于模型对照组(P <0.05)，乳头直径也有降低趋势。见表2。表2本发明组合物制剂对乳腺增生大鼠乳头高度的影响 注与正常对照组比较，*P < 0. 05 ；与模型对照组比较，**P < 0. 053. 2对乳腺增生大鼠血清性激素水平的影响造模后大鼠血清垂体促乳素(PRL)、雌二醇(E2)含量显著高于正常对照组，孕酮 (P)则显著低于对照组，睾酮(T)略有降低，本发明组合物制剂各剂量组对上述改变均有一 定的对抗作用，中、高剂量组PRL，E2及P含量与模型组相比均有显著性差异。见表3。3. 3对乳腺增生大鼠乳腺病理组织学的影响乳腺病理切片镜下可见正常对照组大鼠的乳腺小叶数量少，稀疏分布，小叶内腺 泡少，一般2-4个，腺泡上皮呈立方形，腺泡腔小，无分泌物或仅有少许分泌物。模型对照组 几乎所有大鼠的乳腺均增生小叶数量大大增加。正常对照组大鼠乳腺，腺体数量极少，稀 疏分布，小叶内腺泡少，一般2 4个，腺泡腔小，腺泡不扩张，腺泡上皮呈立方形，无分泌物 或仅有少许分泌物，处于静止期状态，导管未扩张，无分泌。本发明组合物制剂中、高剂量组大鼠乳腺小叶较模型组大大减少，仅比正常对照 组稍多，每个小叶内腺泡数也大大减少，未见分泌。具体评级结果见表4，经Ridit分析，本 发明组合物制剂中、高剂量组对大鼠乳腺增生有明显的治疗作用。实验结果表明，本发明组合物制剂对大鼠实验性乳腺增生模型有明确的治疗作 用。表3本发明组合物制剂合剂对乳腺增生大鼠血清生殖激素水平的影响 1、实验材料本发明组合物制剂；莫沙比利、0 -NADPH、N_BT、TritonX2100、Tris缓冲液、一氧 化氮试剂盒、乙酰胆碱酯酶测定试剂盒。动物SD系大鼠，体重(200 士 20) g，雌雄各半。仪 器医学彩色图象分析仪HPIAS2500型2、实验方法及结果2. 1本发明组合物制剂对大鼠胃窦组织中N0S阳性神经元分布面积及活性的影响 实验。动物分组取30只大鼠，随机分为3组本发明组合物制剂组、阳性对照组及空白对 照组，每组10只。本发明组合物制剂组、阳性对照组和空白对照组分别灌胃给予本发明组 合物制剂药液、莫沙比利药液及生理盐水。3组动物给药量均为5. 0ml/kg体重，本发明组合 物制剂加水使药物浓度为0. 486g/ml，莫沙比利研末，加水配为0. 27g/L，空白对照组给予 等体积的生理盐水。动物用药后第14天，在给药后60min后，处死动物，在胃窦区(距幽门 0. 5cm)取组织1mm3，用4%甲醛进行固定24h(4°C )，再入25% (4°C )蔗糖过夜。检测方法将组织标本用AO恒冷箱连续冰冻切片，厚度20 ii m, NADPH2黄递酶组化 法染色显示N0S阳性神经元，荧光显微镜下观察，医学彩色图象分析仪图象定量分析。各组数据均采用均数士标准差表示，用SPSS统计软件进行数据处理，单因素方差 分析，均采用组间两两比较。实验结果见表5。表5本发明组合物制剂对大鼠胃窦组织中N0S阳性神经元分布面积及活性的影 响实验 与空白对照组比较，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；与阳性对照组比较，AP < 0. 05，AAP < 0. 01 ；A 参数A表示测量窗内N0S阳性神经纤维的面积；M 参数M表示测量窗内N0S阳 性神经纤维的平均光密度；n = 102. 2本发明组合物制剂对大鼠胃窦组织中NO，Ach影响实验动物分组取30只大鼠，随机分为3组本发明组合物制剂组、阳性对照组及空白对 照组，每组10只。本发明组合物制剂组、阳性对照组和空白对照组分别灌胃给予本发明组 合物制剂药液、莫沙比利药液及生理盐水。3组动物给药量均为5. 0ml/kg体重，本发明组合 物制剂加水使药物浓度为0. 486g/ml，莫沙比利研末，加水配为0. 27g/L，空白对照组给予 等体积的生理盐水。动物取材用药后第14天，在给药60min后，处死动物，在胃窦区(距幽 门0. 5cm)取组织400mg,加4ml生理盐水，勻浆，3500r/min离心15min,取上清液于-20°C 冰箱中保存待测。
检测方法NO、Ach均按照相应试剂盒说明书提供的检测方法，进行检测。各组数据均采用均数士标准差表示，用SPSS统计软件进行数据处理，单因素方差 分析，均采用组间两两比较。实验结果见表6。表6本发明组合物制剂对大鼠组织中NO，Ach的影响 与空白对照组比较，*P < 0. 05，**P < 0. 01 ；与阳性对照组比较，Ap < 0. 05，AAP < 0. 01 ；实验结果显示，在荧光显微镜下初步观测，本发明组合物制剂组大鼠胃窦黏膜肌 内N0S阳性神经纤维减少、变细，染色减弱，在黏膜下层很少看到阳性神经元胞体及从内突 起，阳性对照组阳性产物与本发明组合物制剂组类似。但空白对照组胃窦部黏膜肌内N0S 阳性神经元较本发明组合物制剂组和阳性对照组明显增粗、增多，染色增强。从表1中我们 可以看到，本发明组合物制剂组和阳性对照组胃窦黏膜肌内N0S阳性神经纤维及其末梢的 面积较空白对照组明显减少，而其平均吸光度值较空白对照组也明显降低，具有非常显著 性差异(P < 0. 01)。从表2中我们可以看到，本发明组合物制剂组及阳性对照组大鼠胃窦 组织中NO含量明显减少，Ach含量增多，与空白对照组均有非常显著性差异(P < 0. 01)。由此我们分析，本发明组合物制剂促胃排空的功能，与其增加胃组织中兴奋性神 经递质Ach的含量，同时降低胃组织中抑制性神经递质NO含量相关。NO的含量降低与本发 明组合物制剂减少大鼠胃窦壁内N0S阳性神经元成分，降低其活性相关。实验例3 橘皮含量测定方法实验本发明制剂组合物由橘皮、丹参、地龙等6味中药组成。橙皮苷为橘皮的主要有效 成份。橙皮苷为橘皮化学成分中一种重要的黄酮类化合物，《中国药典》2005年版I部以橙 皮苷作为橘皮的高效液相色谱含量测定的对照品。测定本发明组合物中橙皮苷的含量有助 于控制本中成药制剂的质量，确保临床用药的安全、有效。本实验采用高效液相色谱法测定橙皮苷含量，分析速度快，灵敏度高，专属性强， 应用范围广，重现性与准确性均优于薄层色谱-紫外分光光度法、薄层色谱扫描法。1、测定波长的选择用流动相稀释后橙皮苷对照品溶液进行紫外全波长扫描，结果表明其最大吸收在 284nm，因此选择284nm波长作为本制剂组物中橙皮苷的测定波长，可有效提高测定的灵敏 度和准确度，减小其它杂质所带来的干扰。2、色谱条件的选择2. 1色谱柱的选择采用三种十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行实验，色谱柱型号如下， 结果表明，三种十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱均适用。
Hypersil ODS C18(250mmX4. 6mm)；AQ-C18 5um 250mmX 4. 6mm(AICHR0M)；YMC-ODS-3 C18 5 u m 150mmX4.6mm。2. 2流动相的选择选择乙腈-水-磷酸(20 80 0.1)和甲醇-水-醋酸(35 61 4)为流动 相进行考察。实验结果表明，后者色谱图中橙皮苷峰对称性较前者差，同时保留时间较前者长。3、供试品溶液的制备为了确保测定结果真实、准确，本发明通过一系列考察，确保制备供试品溶液时将 本发明组合物颗粒中的橙皮苷提取完全。3. 1提取方法的选择取本发明组合物制剂研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇约40ml，称定 重量，照以下方法试验a 超声处理30分钟；b 加热回流30分钟；c 索式提取60分钟。放 冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中， 加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液1-3各 10 yl，注入液相色谱仪，测定。提取方法的选择见表7。表 7 以上数据表明，超声提取橙皮苷含量较高，且超声方法简便易行，故选择超声提 取。3. 2提取溶剂的选择取本发明组合物制剂研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，照以下方法试验，精密 加入a:甲醇；b :80%甲醇；c :50%甲醇各40ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml 量瓶中，滤渣及容器用分别用上述溶剂洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至 刻度，摇勻，滤过，取续滤液，滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液1-3各10 yl，注入 液相色谱仪，测定。提取溶剂的选择见表8。表 8 以上数据表明，甲醇为提取橙皮苷最佳溶剂，故选择甲醇作为提取溶剂。3. 3提取时间的选择取本发明组合物制剂研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇约40ml，照以 下方法试验分别超声处理15、30、45分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤渣及容器用 甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，滤液 作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液1-3各10 yl，注入液相色谱仪，测定。提取时间的 选择见表9。表 9 以上数据表明，超声30分钟基本可以将制剂中橙皮苷提取完全，故超声提取30分 钟。3. 4提取溶剂量的优选取本发明组合物制剂研细，取0.5g，精密称定，置锥形瓶中，照以下方法试验分 别精密加入甲醇25、40、50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤渣及容 器用洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，滤液 作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液1-3各10iU，注入液相色谱仪，测定。提取溶剂量 的优选见表10。表 10 以上数据表明，40ml甲醇可基本将制剂中的橙皮苷提取完全，故确定提取溶剂量为 40ml。综上试验最后确定本发明组合物颗粒剂中橙皮苷含量测定的色谱条件及对照品 和供试品制备方法为色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲 醇-0. 025mol/L磷酸溶液(85%磷酸溶液1. 70ml，用水稀释至近1000ml，用三乙胺约1. 8ml 调节pH至2. 9 3. 1，加水至1000ml) (40 60)为流动相；检测波长为284nm。对照品溶 液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含5 y g的溶液，即得。供试品溶 液的制备取本发明组合物制剂研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇约40ml，超声 处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液 滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品 溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测定，即得。实验例4 橙皮苷含量测定方法验证实验检测仪器(室温检测)TSP高效液相色谱仪；色谱柱HypersilODS C18(250mmX4. 6mm)；流动相乙腈-水-磷酸(20 80 0. 2)检测波长284nm流速1.0mL/min对照品来源橙皮苷(购自中国药品生物制品检定所)供试品批号04081201、04091302、04101403供试品制备取本发明组合物制剂研细，取0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇 约40ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤2次，每 次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含g的溶 液，即得。1.含量测定方法学考察1.1线性关系考察精密吸取对照品溶液2. 5,5,10，15，20 ii L，测定橙皮苷吸收峰面积。以橙皮苷吸 收峰面积的积分值对橙皮苷进样量绘制标准曲线，得回归方程:A = 2562. 8X+25. 7, r = 0.9999。结果表明，橙皮苷在0. 0125 0. 1 y g范围内具有良好的线性关系。1.2精密度试验精密吸取对照品溶液，重复进样6次，测定橙皮苷吸收峰面积，结果RSD为1. 0%。1.3重复性实验取同一批号(批号04081201)样品五份，对每份进行测定，求得相对标准偏差。结 果 RSD 为 1. 2%。1.4溶液的稳定性试验精密吸取同一(04081201)供试品溶液，每间隔2小时，测定橙皮苷吸收峰面积6 次，结果RSD为0. 4%，表明供试品溶液在8h内基本稳定。1.5回收率试验
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采用加样回收法，精密称取已知含量的本发明组合物制剂0.25g，精密称定，精密 加入橙皮苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，测定该方法橙皮苷回收率。回收率试 验结果见表11。表11 1. 6本发明组合物制剂测定结果见表12 表12 根据以上数据，将含量限度定为本发明组合物制剂每袋含橘皮以橙皮苷计，每袋 不得少于0. 3mg。实验例5 丹参薄层鉴别试验本发明组合物制剂中所含丹参药材中的有效成分为原儿茶醛等醛类化合物。本发 明利用薄层色谱鉴别制剂中的原儿茶醛，鉴定制剂中的丹参药材。1、薄层色谱方法的选择常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析等。硅胶薄层适用于低极性及中等极性 成分，适用范围较广；纸层析适用于大极性成分如多糖类成分。原儿茶醛为中等极性，选择 硅胶层析进行实验。2、供试品的制备2. 1制剂中原儿茶醛的提取方法考察方法1 直接萃取法取本发明组合物制剂10g，研细，加水40ml使溶解，用醋酸乙酯振摇提取二次，每 次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液1。方法2:酸水萃取法取本发明组合物制剂10g，研细，加水40ml使溶解，加稀盐酸调节pH值为3 4， 用醋酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液2。方法3:固液萃取法取本发明组合物制剂10g，研细，用60ml醋酸乙酯超声提取，30min，合并醋酸乙酯 液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液3。取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸 (8:5: 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。实验结果如下供试品溶液1非常粘稠、混浊，点样困难，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上无相同颜色的斑点。供试品溶液2色谱中在原儿茶醛对照品色谱相对应的位置上显相同颜色的斑点， 斑点位置确定，显色清晰。供试品溶液3色谱中所含成分较多，在原儿茶醛对照品色谱相对应的位置上显相 同颜色的斑点，，但有杂质干扰；因此，选用酸水萃取法提取制剂中原儿茶醛。2. 2提取液pH值的考察制备供试品溶液过程中溶液的酸性会影响原儿茶醛的萃取率。取本发明组合物制剂10g三份，研细，加水40ml使溶解，分别加稀盐酸调节pH值 为1 2、3 4、5 6，分别用醋酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干， 残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液1-3。取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸 (8:5: 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。实验结果表明稀盐酸调节pH值为1 2供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显颜色较 弱的斑点；稀盐酸调节PH值为3 4供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同 颜色的斑点；稀盐酸调节PH值为5 6供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上无相 同颜色的斑点。几乎没有起到抑制转化的作用。因此，选用稀盐酸将提取液pH值调节为3 4。2. 3萃取方法的考察采用L93⑷正交实验设计，对乙酸乙酯萃取方法进行考察。见表13。表 13 通过上述实验方案制备了 9份供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸 (8:5: 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。实验结果如下采用石油醚做萃取溶剂时，萃取效率较低，在供试品色谱中与对照品色谱相应位 置上，无相应的斑点；采用正丁醇做萃取溶剂时，萃取能力过强，丹参中的很多其他成分也 被萃取出来，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上有显相同颜色的斑点，但杂质较 多，干扰鉴别；采用乙酸乙酯做萃取溶剂时，萃取能力适宜，比较用量、次数及水用量等因 素，发现加水40ml (4倍量)使溶解，加稀盐酸调节pH值为3 4，用醋酸乙酯振摇提取2 次，每次30ml，合并醋酸乙酯液。按该方法制备的供试品，在与对照品色谱相应的位置上显 相同颜色的斑点，清晰、无干扰。2. 4供试品溶液及对照药材溶液点样量的考察吸取供试品溶液及对照药材溶液2111、5111、10111，分别点于同一硅胶6薄层板 上，以苯-醋酸乙酯-甲酸(8 5 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶 液-1%铁氰化钾(1:1)。实验结果如下原儿茶醛对照品溶液点样量为2 iU时，斑点强度较低，不宜观察；点样量为5iU 时，原儿茶醛对照品溶液薄层上斑点清晰，大小适中；点样量为lOiil时，斑点太大，拖尾。确定原儿茶醛对照品溶液的最佳点样量为5 iU。供试品溶液点样量为2iU时，在原儿茶醛对照品相对应的位置上斑点强度较低， 不宜观察；点样量为5iU时，在原儿茶醛对照品相对应的位置上斑点明显，斑点大小适中， 前后无干扰；点样量为10yl时，在原儿茶醛对照品相对应的位置上斑点较大，明显拖尾， 与前后斑点相连。确定供试品的最佳点样量为5 iU。2. 5展开剂的选择吸取供试品溶液及对照药材溶液各5 iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别用 以下展开剂展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。实验方法及结果如下方法1 展开剂为苯-醋酸乙酯-甲酸(3 5 0.8)为展开剂，展开剂极性较大， 供试品色谱中原儿茶醛斑点与前后斑点未分开；
方法2 展开剂为苯-醋酸乙酯-甲酸(8 5 0.8)，极性适宜，原儿茶醛斑点Rf 值接近0. 45，供试品色谱中原儿茶醛斑点分离良好，前后无干扰；方法3:展开剂为苯-醋酸乙酯-甲酸(18 5 0.8)，极性偏低，供试品色谱中 原儿茶醛斑点与前后斑点未分开。确定分离中药组合物制剂中原儿茶醛的最优薄层展开剂为苯-醋酸乙酯-甲酸 (8 5 0.8)。2. 6显色剂的选择吸取供试品溶液及对照药材溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别用 以下展开剂展开，取出，晾干，用以下三种显色剂进行显色。实验方法及结果如下方法1 显色剂为碘蒸气熏，供试品色谱中原儿茶醛斑点与前后有很多斑点显色，不宜用于鉴别；方法2:显色剂为三氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)，供试品色谱中原儿茶 醛斑点清晰；方法3 显色剂为5%香草醛浓硫酸，105°C加热至斑点显色。虽然能够对醛类成分 显色，但由于原儿茶醛和原儿茶酸之间存在转化关系，此显色剂，显色后，需105°C加热破坏 了原儿茶醛的稳定性。供试品色谱中原儿茶醛斑点与前后斑点不清晰。确定分离中药组合物制剂中原儿茶醛的最优薄层显色剂为三氯化铁溶 液-1%铁氰化钾。综上试验最后确定中药组合物制剂中丹参的薄层色谱鉴别条件为取本发明组合物制剂10g，研细，加水40ml使溶解，加稀盐酸调节pH值为3 4， 用醋酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为 供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照 薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙 酯-甲酸(8 5 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾 (1:1)。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。实验例6 地龙薄层鉴别试验本发明组合物制剂中所含地龙药材中的有效成分为腺苷类成分。本发明利用薄层 色谱鉴别制剂中的地龙药材。1、供试品制备方法的选择1.1提取方法的选择实验方法及结果如下取本发明组合物制剂IOg三份，分别研细，加氯仿20ml，密塞，分别超声处理20分 钟、回流处理30分钟、振摇处理60分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液1-3。
取地龙对照药材lg，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至Iml，制成对照药材溶液。吸取上述溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9 1)为 展开剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。结果表明振摇法不能提取完全，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，不显相同颜色的荧光斑点。超声法和回流法效果相差较小，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点。由于超声法比较简便，选用超声法提取制剂中地龙 成分。2. 2超声提取法的考察采用L93⑷正交实验设计，对影响提取的三个因素；提取溶剂的种类、提取溶剂用 量、提取时间进行考察。见表14。表14 通过上述实验方案制备9份供试品溶液。取地龙对照药材lg，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，制成对照药材溶液。吸取上述溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9 1)为 展开剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。实验结果如下采用石油醚做萃取溶剂时，由于溶剂中含有很少量的水，萃取效率降低。在供试品 色谱中与对照品色谱相应位置上，无相应的斑点。采用乙酸乙酯做萃取溶剂时，萃取能力过强，地龙中的很多其他成分也被萃取出 来，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上有显相同颜色的斑点，但杂质较多，干扰鉴 别。采用氯仿做溶剂时，萃取能力适宜，比较用量、次数及水用量等因素，发现加氯仿 20ml (2倍量)，超声处理20分钟提取完全。制备的供试品溶液点样后，在供试品色谱中，在 与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，斑点最清晰、无干扰。最终确定取地龙供试品溶液的制备方法为取本发明组合物制剂IOg研细，加氯 仿20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。3、供试品溶液点样量的考察分别吸取供试品溶液2、5、8μ 1点于同一硅胶G板上，展开、检识。实验结果如下供试品溶液点样量为2μ 1时，斑点强度较低，不宜观察；供试品溶液点样量为 5μ1时，薄层上斑点清晰，大小适中，无拖尾，前后无干扰；供试品溶液点样量为8μ 1时，供 试品溶液薄层上斑点较大，与前后荧光斑点相连。确定供试品溶液的最佳点样量为5 μ 1。4、展开剂的选择照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以一下三种方法展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。实验方法及结果如下
方法1 展开剂为苯-醋酸乙酯(2 1)为展开剂，极性过小，供试品及对照药材 色谱中斑点比移值较小，与前后斑点未分开。方法2:展开剂为苯-醋酸乙酯(9 1)为展开剂，供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点比移植适宜。方法3:展开剂为为苯-醋酸乙酯(1 1)为展开剂，极性过大，供试品及对照药 材色谱中斑点比移值较大，与前后斑点未分开。确定分离中药组合物制剂中地龙成分的最优薄层展开剂为苯-醋酸乙酯(9 1)。5、显色方法的选择吸取供试品溶液、对照药材溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，重复三块 薄层板分别展开，取出，晾干，以下三种方式显色。实验方法及结果如下方法1 显色剂为碘蒸气熏，供试品色谱中对照药材特征斑点前后有很多斑点，不 宜用于鉴别；方法2 显色方式至紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。方法3 显色剂为10%硫酸乙醇，105°C加热至斑点显色。供试品色谱中对照药材 特征斑点前后有很多斑点，不宜用于鉴别；确定分离中药组合物制剂中地龙成分的最优薄层显色方式为紫外光灯(365nm) 下检视。综上试验最后确定中药组合物制剂中地龙的薄层色谱鉴别条件为取本发明组合物制剂10g，研细，加氯仿20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液 浓缩至1ml，作为供试品溶液，另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱 法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(9 1) 为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
具体实施例方式实施例1橘叶412. 5g 丹参 412. 5g 皂角刺 275g王不留行 275g 川楝子 275g 地龙 275g以上六味，除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合 并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25 1.30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用 70%乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中， 调整乙醇量达70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500g与淀粉、糊精适 量，混勻，制成颗粒，干燥，制成lOOOg，即得。鉴别(1)取本品10g，研细，加水40ml使溶解，加稀盐酸调节pH值为3 4，用醋酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法 (中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸(8 5 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三 氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1 1)。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同 颜色的斑点。(2)取本品10g，研细，加氯仿20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至 lml，作为供试品溶液，另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国 药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以苯-醋酸乙酯(9 1)为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。含量测定照高效液相色谱法，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 齐U ；甲醇-0. 025mol/L磷酸溶液(85%磷酸溶液1. 70ml，用水稀释至近1000ml，用三乙胺约 1. 8ml调节pH至2. 9 3. 1，加水至1000ml) (40 60)为流动相；检测波长为284nm。理 论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含5μ g的溶 液，即得。供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.5g，精密称定，置 锥形瓶中，加甲醇约40ml，超声处理(功率250W，频率33KHZ) 30分钟，放冷，滤过，滤液置 50ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度， 摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入 液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含橘叶以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于3. Omg功能与主治疏肝理气，活血化瘀，消散乳块。用于肝气郁结，气滞血瘀，乳腺增 生，乳房胀痛。用法与用量开水冲服，一次1袋，一日3次或遵医嘱。规格每袋装IOg实施例2橘叶412. 5g 丹参 412. 5g 皂角刺 275g王不留行 275g 川楝子 275g 地龙 275g以上六味，除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合 并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25 1.30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用 70%乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中， 调整乙醇量达70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500g与淀粉、糊精适 量，混勻，制成颗粒，干燥，制成lOOOg，即得。含量测定照高效液相色谱法，色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 齐U ；甲醇-0. 025mol/L磷酸溶液(85%磷酸溶液1. 70ml，用水稀释至近1000ml，用三乙胺约 1. 8ml调节pH至2. 9 3. 1，加水至1000ml) (40 60)为流动相；检测波长为284nm。理 论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含5μ g的溶 液，即得。供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.5g，精密称定，置 锥形瓶中，加甲醇约40ml，超声处理(功率250W，频率33KHZ) 30分钟，放冷，滤过，滤液置 50ml量瓶中，滤渣及容器用甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度， 摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入 液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含橘叶以橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于3. Omg实施例3
橘叶412. 5g 丹参 412. 5g 皂角刺 275g王不留行 275g 川楝子 275g 地龙 275g以上六味，除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合 并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25 1.30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用 70%乙醇回流提取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中， 调整乙醇量达70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500g与淀粉、糊精适 量，混勻，制成颗粒，干燥，制成lOOOg，即得。鉴别(1)取本品10g，研细，加水40ml使溶解，加稀盐酸调节pH值为3 4，用醋酸乙 酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶 液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法 (中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸(8 5 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三 氯化铁溶液-1%铁氰化钾(1:1)。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同 颜色的斑点。(2)取本品10g，研细，加氯仿20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至 lml，作为供试品溶液，另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国 药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以苯-醋酸乙酯(9 1)为展开剂，展开，取出，晾干，至紫外光灯(365nm)下检视。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
权利要求
一种疏肝理气，活血化瘀的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为橘叶275～550重量份、丹参275～550重量份、皂角刺137.5～412.5重量份、王不留行137.5～412.5重量份、川楝子137.5～412.5重量份、地龙137.5～412.5重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为橘叶412. 5重量份、丹参412. 5重量份、皂角刺275重量份、王不留行275重量份、川楝子275重量份、地龙275重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为除地龙、王不留行外，其余橘叶等四味加水煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤 液浓缩至相对密度为1. 25 1. 30(85°C )，放冷，备用；地龙、王不留行用70%乙醇回流提 取二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，加入上述浓缩液中，调整乙醇量达 70%，搅拌均勻，静置，回收乙醇并浓缩成稠膏，加蔗糖500重量份与淀粉、糊精适量，混勻， 制成颗粒，干燥，制成即得。
4.如权利要求1或2所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下步骤A、含量测定色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 30-50 50-70比例的甲醇-0. 01 0. 03mol/L磷酸溶液为流动相；检测波长为280 290nm ；对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含2 10 y g的 溶液；供试品溶液的制备取该组合物制剂研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇约 20 80ml，超声处理20 40分钟，放冷，滤过，滤液置25 100ml量瓶中，滤渣及容器用 甲醇洗涤1 3次，每次3 10ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤 液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 20 yl，注入液相色谱仪， 测定，即得，相当于原药材16_22g的组合物制剂含橘叶以橙皮苷计，不得少于3. Omg ；B、鉴别取该组合物制剂10g，研细，加水30 50ml使溶解，加稀盐酸调节pH值为 3 4，用醋酸乙酯振摇提取1 3次，每次20 50ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲 醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1 3mg的溶 液，作为对照品溶液；吸取上述两种溶液各2 10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 4-12 4-7 0.8比例的苯-醋酸乙酯-甲酸混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾1 1 ；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相 同颜色的斑点；C、鉴别取该组合物制剂10g，研细，加氯仿10 30ml，密塞，超声处理15 30分钟，滤 过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液，照薄 层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 10iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-6 1 比例的苯_醋酸乙酯混合溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，至365nm紫外光灯下检视；供试 品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.如权利要求4所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下步骤含量测定色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；40 60 的甲醇-0. 025mol/L磷酸溶液为流动相；检测波长为284nm ；理论板数按橙皮苷峰计算应不 低于5000 ；对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含g的 溶液，即得；供试品溶液的制备取该组合物制剂，研细，取0. 5g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇约40ml，功率250W，频率33KHZ超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤 渣及容器用甲醇洗涤2次，每次4ml，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续 滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测 定，即得；丹参薄层鉴别取该组合物制剂10g，研细，加水40ml使溶解，加稀盐酸调节pH值为 3 4，用醋酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶 解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶 液；吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以8 5 0.8的苯-醋酸 乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液-1%铁氰化钾1 1;供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；地龙薄层鉴别取该组合物制剂10g，研细，加氯仿20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过， 滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液，另取地龙对照药材lg，同法制成对照药材溶液；吸取上 述两种溶液各5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9 1苯-醋酸乙酯为展开剂，展开， 取出，晾干，至365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的荧光斑点。
全文摘要
本发明公开了一种疏肝理气，活血化瘀，消散乳块的中药组合物，该组合物由橘叶、丹参、皂角刺、王不留行等制成临床或药学上可接受的剂型，该中药组合物具有很好的消散乳块的作用；本发明中药组合物制剂的质量检测方法检测专属性好、稳定性高、重现性好、精密度高，更加适合工业化的生产，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠。
文档编号G01N30/36GK101856413SQ20091008176
公开日2010年10月13日 申请日期2009年4月10日 优先权日2009年4月10日
发明者付建家, 付立家 申请人:北京亚东生物制药有限公司