专利名称：玉屏风口服制剂及其制备和检测方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂领域，具体地，本发明涉及玉屏风口服制剂及其制备和检测 方法。
背景技术：
现代玉屏风制剂均是源自于元代名医朱震亨所著《丹溪心法》的玉屏风散，由黄 芪、白术、防风三味药组成，有益气、固表、止汗之功效，为虚人易感冒者的常用方。研究表 明，玉屏风散具有调节人体免疫功能，增加抵抗力的作用。常用于表虚自汗，易感风邪的病 症，是中医用于扶正的经典名方之一。玉屏风上市品种有丸剂、茶剂、口服液、颗粒剂和胶囊 剂等，其中玉屏风口服液为传统的中国药典收载品种，记载于《中国药典》2005年版一部中。玉屏风各组分成分黄芪、白术和防风的检测方法，以及有效成份黄芪甲苷的含量， 一般都是按照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)进行测定，对黄芪甲苷含 量的检测标准一般为不低于0. 12mg/g。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种玉屏风口服制剂。本发明的另一个目的在于，提供上述玉屏风口服制剂的制备方法。本发明的又一个目的在于，提供上述玉屏风口服制剂的检测方法，包括鉴别玉屏 风口服制剂中的三种组方黄芪、白术和防风以及测定制剂中的有效成分黄芪甲苷含量。本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。一方面，本发明提供一种玉屏风口 服制剂，该制剂优选为颗粒剂，其由黄芪、白术和防风制成，上述三种原料药材的重量份数 配比为3 1 1，该制剂中黄芪甲苷的含量为0.7mg/g以上。另一方面，本发明提供制备上述述玉屏风口服制剂的方法，该方法包括以下步骤 取提取挥发油后的防风药渣，与黄芪、白术加水提取两次，所得煎液浓缩至适量，加乙醇使 含醇量为70%，搅拌，静置；滤过，滤液减压回收乙醇，加提取挥发油时的水蒸馏液，搅勻， 静置，取上清液滤过，滤液浓缩至相对密度1. 30 1. 33(70°C )，加甘露醇、糊精和矫味剂适 量，制成颗粒，干燥，放冷，喷加防风挥发油，混勻，即得。优选地，其中所述矫味剂选自蔗糖、 阿司帕坦、甜菊素、甜蜜素和食用香精中的一种或几种。又一方面，本发明提供上述玉屏风口服制剂的检测方法，该方法采用薄层色谱分 别检测制剂中的黄芪、白术和防风，该方法包括以下制备对照样品的步骤(1)制备黄芪的对照样品取黄芪对照药材3 10g，加水煎煮二次(每次100 500ml)，每次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约5ml，加乙醇3倍量使沉淀，静置，滤过， 滤液蒸干，残渣加水IOml溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，滤液与洗液合并，用三氯甲烷 振摇提取2次(每次5 50ml)，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解；(2) 制备白术的对照样品取白术对照药材1 5g，加水250ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至 约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C )振摇提取2次(每次10 50ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解；和/或 ⑶制备防风的对照样品取防风对照药材1 5g，加水250ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓 缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C )振摇 提取2次(每次10 50ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解。优选地，所述方法包括以下步骤(1)鉴别黄芪的薄层色谱方法取制剂5g，加水 20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，滤液与洗液合并，用三氯甲烷振摇提取二次(第 一次25ml，第二次15ml)，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为黄芪供 试品溶液；取黄芪对照药材6g，加水煎煮二次(第一次250ml，第二次150ml)，每次30分 钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约5ml，加乙醇3倍量使沉淀，静置，滤过，滤液蒸干，残渣 加水IOml溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，滤液与洗液合并，用三氯甲烷振摇提取二次 (第一次25ml，第二次15ml)，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为黄 芪对照药材溶液；吸取所述黄芪供试品溶液8 μ 1、黄芪对照药材溶液4 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)-乙酸乙酯(2 1)为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以铁氰化钾三氯化铁试液(1 1)的混合溶液，日光下检视；(2)鉴别白术的薄 层色谱方法取制剂5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，洗液与滤液合并， 用石油醚(30 60°C )振摇提取2次(25ml，20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加 甲醇0. 5ml使溶解，作为白术供试品溶液；取白术对照药材2g，加水250ml，煎煮30分钟， 滤过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 600C )振摇提取二次(第一次25ml，第二次20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加 甲醇0. 5ml使溶解，制成白术对照药材溶液；吸取所述白术供试品溶液10 μ 1、白术对照药 材溶液3μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7 3)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液，于105°C加热约7 10分钟，置 紫外光灯(365nm)下检视；和/或(3)鉴别防风的薄层色谱方法取制剂5g，加水20ml使 溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，洗液与滤液合并，用石油醚(30 60°C )振摇提取二 次(第一次25ml，第二次20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解， 作为防风供试品溶液；取防风对照药材2g，加水250ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约 10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C )振摇提取二次 (第一次25ml，第二次20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解，制 成防风对照药材溶液；吸取所述防风供试品溶液10μ 1、防风对照药材溶液2μ 1，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾 干，置紫外光灯(365nm)下检视。还一方面，本发明提供上述玉屏风口服制剂中黄芪甲苷的检测方法，该方法采用 高效液相色谱法检测黄芪甲苷的含量。优选地，所述方法中供试品溶液制备首先采用甲醇索氏提取，其次采用饱和正丁 醇萃取，最后采用氨液进行洗涤。优选地，所述供试品溶液制备包括以下步骤取制剂研细，取约1 1Og优选2. 5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇10 300ml优选100ml，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水20ml，微 热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次10 1OOml优选40ml，合并正丁醇液，用氨液充分洗涤2次，每次10 IOOml优选40ml，合并氨液并用水饱和正丁醇振摇提取2次， 每次5 50ml优选20ml，弃去氨液，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液。优选地，所述甲醇索氏提取的时间为3小时以上，优选为6小时。优选地，所述方法的色谱条件为填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-水(20 50 50 80，优选 32 68)；检测器为蒸发光散射检测器；漂移管温度为103°C ；载气流量为2. 8L/min ；和/ 或柱温为35 °C。优选地，所述方法测定的黄芪甲苷含量范围为每克颗粒含黄芪甲苷0.35mg 2. 75mg。再一方面，本发明提供上述方法在玉屏风口服制剂生产中质量控制方面的应用， 所述口服制剂优选为颗粒制剂。由此可见，本发明所提供的玉屏风颗粒制剂，其性状为浅黄色至棕红色的颗粒，味 涩而后甘。本发明改善了玉屏风颗粒制剂的组方成份的检测方法，具体如下(1)取本品5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，滤液与洗液合并， 用三氯甲烷振摇提取2次(第一次25ml，第二次15ml)，合并三氯甲烷提取液，蒸干。残渣加 甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材6g，加水煎煮二次(第一次250ml， 第二次150ml)，每次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约5ml，加乙醇3倍量使沉淀，静
置，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml溶解，自“滤过，滤器用5ml水分次洗涤......”起同法
制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液8 μ 1、对照药材 溶液4μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C)_乙酸乙酯(2 1)为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以铁氰化钾-2%三氯化铁试液(1 1)的混合溶液。供试品 色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，洗液与滤液合并， 用石油醚(30 60°C )振摇提取2次(25ml，20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加 甲醇0. 5ml使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材2g，加水250ml，煎煮30分钟，滤 过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，自“用石油醚(30
60°C)振摇提取2次......”同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取
上述供试品溶液10 μ 1、对照药材溶液3 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烧-乙 酸乙酯(7 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液， 于105°C加热约7 10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)取上述(2)项下供试品溶液作为供试品溶液。另取防风对照药材2g，照上述 (2)项下同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液 10 μ 1、对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )-乙酸乙 酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与 对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。此外，本发明还确定产品有效成份的检测方法及控制指标，具体如下照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水 (32 68)为流动相；蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含黄芪 甲苷0. 12mg的溶液，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取约2. 5g，精密称定，置索氏 提取器中，加甲醇IOOml，加热回流至提取液无色(约64、时)，提取液回收溶剂并浓缩至干， 残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨 试液充分洗涤2次，每次40ml，合并氨液并用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，弃去 氨液，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOml量瓶中，用甲醇稀释至刻度， 摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液10μ 1、20μ 1，供试品溶液10 μ 1，注入液相色 谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。本品每袋5克，含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计，不得少于3. 5mg。经实验验证，本检测方法重复性良好、中间精密度良好、专属性强、对数线性关系 良好，在0.35mg/g 2.75mg/g的范围内样品的回收率较好，适合含量测定的要求。由此可 见，本发明所提供的方法，可应用于玉屏风相关制剂的质量控制，可有效控制相关产品的产 品质量，保证产品的有效性。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中图1为黄芪的薄层色谱鉴别图，其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒，4为 黄芪对照药材液，5为黄芪阴性对照。图2为白术的薄层色谱鉴别图，其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒，4为 白术对照药材液，5为白术阴性对照。图3为改进方法得到的白术薄层色谱鉴别图，其中1、2及3分别为不同批次的玉 屏风颗粒，4为白术对照药材液，5为白术阴性对照。图4为防风的薄层色谱鉴别图，其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒，4为 防风对照药材液，5为防风阴性对照。图5A至图5C分别为黄芪甲苷不同试样的色谱图对照品(图5A)、样品(图5B) 及阴性样品(图5C)。图6为黄芪甲苷含量测定的校正曲线图。图7A至7C为黄芪甲苷在不同C18色谱柱下的色谱图依利特0DS-2HyperSil (图 7A)、Thermo 0DS-2Hypersil (图 7B)、Agilent ZORBAX SB (图 7C)。
具体实施例方式以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅 用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。实施例1玉屏风颗粒制剂的制备方法本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂的制备方法，具体如下取黄芪、白术(炒)、防风按重量份数3 1 1配方，将防风酌予碎断，提取挥发油，蒸馏后的水溶液另 器收集；药渣与黄芪、白术加水提取两次，每一次1. 5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过， 滤液浓缩至适量，加乙醇至含醇量为70%，搅拌，静置，滤过，滤液减压回收乙醇，加上述蒸 馏后的水溶液搅勻，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至相对密度1. 30 1. 33 (700C )，加甘 露醇、糊精和矫味剂适量，槽型混合机混合，摇摆式颗粒机摇摆制粒，干燥，放冷，选粒，喷加 上述防风挥发油，混勻，即得。实施例2玉屏风颗粒制剂的制备方法本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂的制备方法，具体如下取黄芪、白术(炒)、防风按重量份数3 1 1配方，将防风酌予碎断，提取挥 发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与黄芪、白术加水提取两次，每一次1. 5小时，第二 次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇至含醇量为70 %，搅拌，静置，滤过，滤 液减压回收乙醇，加上述蒸馏后的水溶液搅勻，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至相对密度 1. 30 1. 33 (700C )，加甘露醇、糊精、矫味剂适量，湿法混合制粒机制粒，干燥，放冷，选粒， 喷加上述防风挥发油，混勻，即得。实施例3玉屏风颗粒制剂的制备方法本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂的制备方法，具体如下取黄芪、白术 (炒)、防风按重量份数3 1 1配方，将防风酌予碎断，提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器 收集；药渣与黄芪、白术加水提取两次，每一次1. 5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤 液浓缩至适量，加乙醇至含醇量为70 %，搅拌，静置，滤过，滤液减压回收乙醇，加上述蒸馏 后的水溶液搅勻，静置，取上清液，滤过，滤液浓缩至相对密度1. 30 1. 33(70°C )，加甘露 醇、糊精、矫味剂适量，沸腾制粒机喷雾制粒，干燥，放冷，选粒，喷加上述防风挥发油，混勻， 即得。以上实施例1、2和3中矫味剂选自蔗糖、阿司帕坦、甜菊素、甜蜜素和食用香精中 的一种或几种。以上实施例1、2和3中所制得的成品为每袋5克，每袋含黄芪按黄芪甲苷计算不 得少于3. 5mg。实施例4玉屏风颗粒制剂各组分成分的薄层色谱鉴别方法本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂各组分成分的薄层色谱鉴别方法。(1)黄芪的薄层色谱鉴别本方法细化了黄芪对照药材加水量及煎煮时间。经验证与复核，该方法基本可行， 阴性对照无干扰。黄芪的薄层色谱鉴别图见图1。供试品溶液制备取本品5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，滤 液与洗液合并，用三氯甲烷振摇提取2次(25ml，15ml)，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加 甲醇Iml使溶解。黄芪对照药材溶液的制备取黄芪对照药材(中检所提供，批号为 120974-200407) 6g，加水煎煮二次(250ml，150ml)，每次煎煮30分钟，合并煎液，滤过，滤液 浓缩至约5ml，加入乙醇3倍量，静置使沉淀，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml溶解，自“滤过， 滤器用5ml水分次洗涤......”起，同法制成对照药材溶液。黄芪阴性对照溶液制备取黄芪阴性样品(不含黄芪，其余处方与制备方法同成品)5g，同供试品溶液制备方法制备。薄层板自制硅胶G薄层板点样量供试品溶液、阴性对照液各8 μ 1，黄芪对照药材液4μ 1点样方式点状展开剂石油醚(60 90°C )-乙酸乙酯(2 1)展距8. 7cm显色及检视喷以铁氰化钾-2%三氯化铁试液(1 1)的混合液，日光下检视 (T = 27 0C RH = 76% )。(2)白术的薄层色谱鉴别本方法细化了白术对照药材加入水量和煎煮时间。经验证，阴性对照无干扰，方法 基本可行。白术的薄层色谱鉴别图见图2。供试品溶液制备取本品5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗涤，洗 液与滤液合并，用石油醚(30 60°C)提取2次(25ml，20ml)，合并石油醚提取液，蒸干，加 甲醇0. 5ml使溶解。白术对照药材溶液的制备取白术对照药材(中检所提供，批号为 120925-200407) 2g，加水250ml煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，加乙醇3倍量沉淀，
静置，滤过，滤液蒸干，残渣加IOml水使溶解，自“滤过，滤器用5ml水分次洗涤......”同
法制成对照药材溶液。白术阴性对照溶液制备取白术阴性样品(不含白术，其余处方与制备方法同成 品)5g，按供试品溶液的制备方法制成白术阴性对照溶液。薄层板自制硅胶G薄层板点样量供试品溶液、阴性对照各12μ 1，白术对照药材液3μ 1点样方式点状展开剂环己烷-乙酸乙酯(7 3)展距8·8cm显色及检视晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液，于130°C烘约10 分钟，置紫外光灯(365nm)下检视(T = 27°C, RH = 76% )0对该鉴别项目进行了验证和复核，将上述方法改进为取本品5g，加水20ml使溶 解，用石油醚(30 60°C)振摇提取2次(25ml，20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残 渣加甲醇0. 5ml使溶解。另取白术对照药材2g，加水250ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩 至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，自“石油醚(30 60°C )振摇
提取2次......”起，同法制成对照药材溶液。该改进方法得到的斑点有所改善，结果见图
3(其中点样量为供试品溶液、阴性对照各10μ 1，白术对照药材液3μ 1，检视T = 24V, RH =70% )。(3)防风的薄层色谱鉴别本方法细化了防风对照药材加水量和煎煮时间。经复核，阴性对照无干扰，方法基 本可行。防风的薄层色谱鉴别图见图4。供试品溶液制备具体方法同上述(2)白术的薄层色谱鉴别中的供试品溶液制备。
防风对照药材溶液的制备取防风对照药材(中检所提供，批号为947-9302)2g， 按供试品溶液的制备方法制备。防风阴性对照溶液制备取防风阴性样品(不含防风，其余处方与制备方法同成 品)5g，按供试品溶液的制备方法制成防风阴性对照溶液。 薄层板自制硅胶G薄层板点样量供试品溶液、阴性对照各10μ 1，防风对照药材液3μ 1点样方式点状展开剂石油醚(60 90°C )-乙酸乙酯(1 1)展距8·8cm显色及检视晾干，置紫外光灯(365nm)下检视(T = 27°C，RH = 76% )实施例5玉屏风颗粒制剂主要成分黄芪甲苷的含量测定方法本发明采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量。根据十批的测定数据，限度由 原标准(薄层扫描法)的每Ig不得少于0. 12mg修订为每袋不得少于3. 5mg (高效液相色 谱法)。经验证与复核，该方法可行。(1)仪器与试药仪器高效液相色谱仪Agilent 1100系列；检测器Allteach ELSD 2000ES ； Chemstation 10. 02色谱工作站。色谱柱(I)Thermo 0DS-2Hypersil (150mmX4. 6mm, 5 μ m)， (2)依利特 0DS-2Hypersil(150mmX4.6mm，5ym)，(3) Agilent ZORBAX SB (150mmX 4. 6mm， 5 μ m)及 Millipore 纯水器:miIli-Q试剂乙腈为色谱纯；水为Millipore去离子水；正丁醇、甲醇均为分析纯。样品批号060204 ；黄芪阴性对照按玉屏风颗粒处方制备；对照品黄芪甲苷(批号110781_200512，中国药品生物制品检定所)(2)方法学验证1)准确度试验取已知含量(批号060204)的玉屏风颗粒(含量为0. 7369mg/g)6份，每份约 1.25g，精密称定，依次分别每组添加取黄芪甲苷对照品溶液(0. 1247mg/ml)8ml，依法制成 供试样品溶液，按色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。表1回收率试验结果(η = 6)
权利要求
一种玉屏风口服制剂，该制剂优选为颗粒剂，由黄芪、白术和防风制成，上述三种原料药材的重量份数配比为3∶1∶1，该制剂中黄芪甲苷的含量为0.7mg/g以上。
2.制备权利要求1所述玉屏风口服制剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤 取提取挥发油后的防风药渣，与黄芪、白术加水提取两次，所得煎液浓缩至适量，加乙醇使 含醇量为70%，搅拌，静置；滤过，滤液减压回收乙醇，加提取防风挥发油时的水蒸馏液，搅 勻，静置，取上清液滤过，滤液浓缩至相对密度1. 30 1. 33(70°C )，加甘露醇、糊精和矫味 剂适量，制成颗粒，干燥，放冷，选粒，喷加防风挥发油，混勻，即得；优选地，其中所述矫味剂 选自蔗糖、阿司帕坦、甜菊素、甜蜜素和食用香精中的一种或几种。
3.权利要求1所述玉屏风口服制剂的检测方法，该方法采用薄层色谱分别鉴别制剂中 的黄芪、白术和防风，其特征在于，该方法包括以下制备对照样品的步骤(1)制备黄芪的对照样品取黄芪对照药材3 IOg优选6g，加水煎煮二次(每次 100 500ml，优选第一次250ml，第二次150ml)，每次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩 至约5ml，加乙醇3倍量使沉淀，静置，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml溶解，滤过，滤器用 5ml水分次洗涤，滤液与洗液合并，用三氯甲烷振摇提取二次(每次5 50ml，优选第一次 25ml，第二次15ml)，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解；(2)制备白术的对照样品取白术对照药材1 5g优选2g，加水250ml，煎煮30分钟， 滤过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 600C )振摇提取二次(每次10 50ml，优选第一次25ml，第二次20ml)，离心，合并石油醚 提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解；和/或(3)制备防风的对照样品取防风对照药材1 5g优选2g，加水250ml，煎煮30分钟， 滤过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 600C )振摇提取二次(每次10 50ml，优选第一次25ml，第二次20ml)，离心，合并石油醚 提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(1)鉴别黄芪的薄层色谱方法取制剂5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次 洗涤，滤液与洗液合并，用三氯甲烷振摇提取二次(第一次25ml，第二次15ml)，合并三氯甲 烷提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为黄芪供试品溶液；取黄芪对照药材6g，加水煎 煮二次(第一次250ml，第二次150ml)，每次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约5ml，加 乙醇3倍量使沉淀，静置，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml溶解，滤过，滤器用5ml水分次洗 涤，滤液与洗液合并，用三氯甲烷振摇提取二次(第一次25ml，第二次15ml)，合并三氯甲烷 提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为黄芪对照药材溶液；吸取所述黄芪供试品溶液 8 μ 1、黄芪对照药材溶液4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90°C )-乙 酸乙酯(2 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以铁氰化钾-2%三氯化铁试液(1 1) 的混合溶液，日光下检视；(2)鉴别白术的薄层色谱方法取制剂5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次 洗涤，洗液与滤液合并，用石油醚(30 60°C)振摇提取二次(第一次25ml，第二次20ml)， 离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解，作为白术供试品溶液；取白术对 照药材2g，加水250ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤 过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C)振摇提取二次(第一次25ml，第二次20ml)，离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解，制成白术对照药材溶液；吸取所 述白术供试品溶液10 μ 1、白术对照药材溶液3 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己 烷-乙酸乙酯(7 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸 溶液，于105°C加热约7 10分钟，置紫外光灯365nm下检视；和/或(3)鉴别防风的薄层色谱方法取制剂5g，加水20ml使溶解，滤过，滤器用5ml水分次 洗涤，洗液与滤液合并，用石油醚(30 60°C)振摇提取二次(第一次25ml，第二次20ml)， 离心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解，作为防风供试品溶液；取防风对 照药材2g，加水250ml，煎煮30分钟，滤过，滤液浓缩至约10ml，加乙醇30ml振摇，静置，滤 过，滤液蒸至无醇味，用石油醚(30 60°C )振摇提取二次(第一次25ml，第二次20ml)，离 心，合并石油醚提取液，挥干，残渣加甲醇0. 5ml使溶解，制成防风对照药材溶液；吸取所述 防风供试品溶液10 μ 1、防风对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚 (60 90°C)_乙酸乙酯(1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。
5.权利要求1所述玉屏风口服制剂的检测方法，其特征在于，该方法采用高效液相色 谱法测定制剂中黄芪甲苷的含量。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法中供试品溶液制备首先采用甲 醇索氏提取，其次采用饱和正丁醇萃取，最后采用氨液进行洗涤。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液是通过以下步骤制备的取制剂研细，取约1 IOg优选2. 5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇10 300ml 优选100ml，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水20ml，微热使 溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次10 IOOml优选40ml，合并正丁醇液，用氨液充 分洗涤2次，每次10 IOOml优选40ml，合并氨液并用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次 5 50ml优选20ml，弃去氨液，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOml量瓶 中，用甲醇稀释至刻度，摇勻，滤过，取续滤液。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述甲醇索氏提取时间为3小时以上，优选为6小时。
9.根据权利要求5至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中的色谱条件为 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-水(20 50 50 80，优选32 68)； 检测器为蒸发光散射检测器；漂移管温度为103°C ；载气流量为2. 8L/min ；和/或柱温为 35 "C。
10.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法测定的黄芪甲苷含量范围为每克颗粒含黄芪甲苷0. 35mg 2. 75mg。
11.权利要求1至10中任一项所述方法在玉屏风口服制剂生产中质量控制方面的应用，所述口服制剂优选为颗粒制剂。
全文摘要
本发明提供一种玉屏风口服制剂及其制备和检测方法。本发明所提供的玉屏风口服制剂，优选为颗粒剂，由黄芪、白术和防风制成，上述三种原料药材的重量份数配比为3∶1∶1，该制剂中黄芪甲苷的含量为0.7mg/g以上。本发明通过薄层色谱法来鉴别玉屏风口服制剂中的三种组方黄芪、白术和防风，本发明还使用液相色谱法来测定制剂中的有效成分黄芪甲苷含量。本发明所提供的检测方法，可应用于玉屏风相关制剂的质量控制，可有效控制相关产品的产品质量，保证产品的有效性。
文档编号G01N30/90GK101987115SQ20091016158
公开日2011年3月23日 申请日期2009年8月4日 优先权日2009年8月4日
发明者向飞军, 朱颖虹, 黄掌欣 申请人:广东环球制药有限公司