专利名称：根据对抗Globo H及其片段的抗体量的癌症诊断的制作方法
根据对抗Globo H及其片段的抗体量的癌症诊断相关申请本案已向美国临时申请案第61/061，968号作过申请的优先权(2008年6月16日 申请)，其内容在此以其全文并入作为参考资料。
背景技术：
含有六糖抗原表位的Globo H在各种癌症中表达，也在正常上皮细胞及腺体组织 表达。参见 Huang et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103 15-20 (2006)，Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 33 :11661-11666 (2008)，以及 Chang et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 33 11667-11672 (2008)。已有报导指出来自乳癌病患的血清含有高量的抗-Globo H抗体。然而，单以该些抗体的量无法作为乳癌的可靠指标。
发明内容
本发明是根据无法预见的发现对抗Globo H、其片段恥2、恥3、或Bb4的抗体量与 对抗(Λ5的抗体量的比例在乳癌病患中显著地比在无癌症人类中高。因此，本发明提出一种癌症诊断的方法，其包括(i)提供一来自疑似患有癌症 (如，乳癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤、皮肤癌、肝癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、胃癌、肺癌、 及胰脏癌)者的含有抗体的样本(如，血清样本)，(ii)将该样本与(Λ5以及Globo H,Bb2, 恥3、或Bb4其中一种或其中多种共同培养以容许该样本中的抗体与该些分子结合，(iii) 测量(Λ5-结合抗体以及GloboH-结合、Bb2-结合、Bb3-结合、或恥4_结合抗体此两者的 量，并且(iv)根据Globo H-结合、恥2_结合、恥3_结合、或恥4_结合抗体的量与(Λ5-结 合抗体的量的比例决定该对象是否患有癌症。较高的比例则暗示该对象患有癌症。Globo !1、(^5、恥2、恥3、或恥4可被固定在支持装置上以形成聚糖阵列。在一实例中，该阵列含有 Gb5以及Globo !1、恥2、恥3、及Bb4其中一种。在另一实例中，该阵列含有全部的该些分子。以Gb5以及Globo H、Bb2、Bb3、及Bb4其中一种或其中多种作为癌症诊断以及生 产用于癌症诊断的医疗装置的用途也在本发明范围的中。本发明的各种具体实例于下文详述。本发明的其它特征将可由下文有关该等各种 具体实例的详细叙述及附图以及权利要求范围而清楚呈现。在不须进一步说明的情形下，相信所属技术领域的技术人员根据本文的叙述可将 本发明应用至其最广范围。因此，下文的叙述应仅被视为说明而不以任何方式限制本发明 的范围。附图简要说明图式首次被描述。
图1是描述Globo H(GH)中的六糖抗原表位及其片段的结构的图式。栏A:六糖 抗原表位的结构。栏B 六糖抗原表位及七种其片段的结构。图2显示聚糖阵列用途的示意图，其模拟癌细胞的表面，用以侦测抗-聚糖抗体。
具体实施例方式除非此处另有说明，否则与本发明有关的科学和技术名词与所属技术领域的技术 人员通常所了解的意义相同。如此处所述，除非另有说明，否则下列名词具有其所属的意 义。除非内文需要，否则单数名词应包括复数的涵意以及复数名词应包括单数的涵 意。此处所使用的冠词"a"和"an"指该冠词的一或多于一个(即，至少一个)的语法 受词。例如，“一组件”意指一个组件或多于一个的组件。已发现抗-GloboH/ 抗-Gb5、抗 _Bb2/ 抗 _Gb5、抗 _Bb3/ 抗 _Gb5、或抗 _Bb4/ 抗-GId5抗体量的比例在乳癌病患中显著地比在无癌症个体中高。因此，任一该些比例可作 为癌症诊断中的可靠指标。因此，本文中描述一种通过侦测在疑似患有癌症的对象(如，基因上癌症敏感的 人类)中对抗(Λ5以及Globo H、恥2、恥3、或Bb4其中一种或其中多种的抗体的量，并且 根据任一上述的量的比例决定该个体是否患有癌症。上述抗体可为IgG、IgM、IgE、IgA、或 I gD、或其混合。Globo H是含有六糖抗原表位(示于图1，栏A)，并视情形含有一非糖分子部分的 聚糖。其片段(如，(^5、恥2、恥3、及恥4)是含有该六糖抗原表位以及，如适用，该非糖分 子部分的片段的聚糖。七种六糖抗原表位的片段示于图1，栏B。该些寡糖可由常规方法制 备。参见，如，Huang et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103 15-20 (2006)) 较佳地，其可 与非糖分子键接者诸如烷基胺(如，(CH2)5NH2),或烷基叠氮(如，(CH2)5N3)复合，其可共价 键结至由各种物质(诸如，玻璃、塑胶、尼龙、金属、或硅)制成的支持装置(如，聚合物基 板)。GloboH、Gb5、Bb2、Bb3、及Bb4可各别被点于支持装置上设定的地址以形成聚糖阵列。 该阵列，其模拟表达含于Globo Η、(Λ5、^2、^3、及恥4(参见图幻当中的寡糖抗体表位的 癌细胞表面，可使用来侦测结合至该等寡糖抗体表位的抗体的量。为实施本发明的方法，本文中描述的聚糖阵列与来自疑似患有癌症的对象的含有 抗体的样本共同培养。该样本的实例包括，但不限于，血清、唾液、及淋巴结液。清洗该阵列 以去除未结合抗体，然后与可特异性结合至所关注抗体的已标记的二级抗体共同培养，该 所关注抗体可为人类IgG、IgA、IgD、IgE、或IgM。再次清洗该阵列以去除未结合的二级抗 体分子，且结合的二级抗体所释放的信号对应于目标抗体的量。当在一对象中观察到较高 的抗-Globo H/抗-Gb5、抗-Bb2/抗_Gb5、抗_Bb3/抗_Gb5、或抗_Bb4/抗_Gb5抗体量比 例，该对象被诊断为患有癌症或具发展癌症的风险。在无进一步阐述之下，相信本领域技术人员可根据以上说明将本发明运用至其最 完全的程度。以下特定实例应被理解为仅是例示说明，而无论如何非以任何方式限制本说 明书中的其它部分。所有本文中引用的文献并入本文作为参考资料。实施例1结合抗体Vk9、Mbrl、及A488至聚糖阵列根据描述于Huang et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103 :15-20(2006))的程序 化一锅法(one-pot programmable protocol)制备示于图 1 的寡糖Globo H、Gb5、Gb4、Gb3、 Gb2、Bb4、Bb3、及 Bb2。该些寡糖通过描述于 Hung et al. and Blixtet al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 :17033-17038(2004)的标准微阵列机械排印技术被共价固定于NHS-涂 布的玻片(Nexterion H slide (SCH0TT NorthAmerica))上。更特定而言，各寡糖的来自储备溶液(80 μ M)的等分试样被以16-列(每一寡糖两列)的形式排置于玻片上。在此研究中使用下列三种抗体· Mbrl,小鼠IgM抗-Globo H单克隆抗体，· VK-9,小鼠IgG抗-Globo H单克隆抗体，及· Α488,抗-小鼠/人类Gb5单克降抗体。各抗体在加湿室中与上述玻片(上黏附有寡糖)于0.05% Tween 20/PBS缓冲液 (pH 7. 4)中共同摇晃培养lh。玻片接着(轮流)以0. 05% Tween 20/PBS缓冲液(pH 7. 4) 清洗三次、以PBS缓冲液(pH 7.4)清洗三次、以及以水清洗三次。接着，该玻片在同一室中 与Cy3-复合山羊抗-小鼠IgM (针对MBrl)或IgG (针对VK-9及A488)抗体共同摇晃培养 lh。玻片再次以0. 05% Tween 20/PBS缓冲液(pH 7. 4)清洗三次、以PBS缓冲液(pH 7. 4) 清洗三次、以及以H2O清洗三次并干燥的。最后，使用微阵列萤光芯片视读器(ArrayWorx microarray reader)在 595nm(针对 Cy3_ 复合二级抗体)及 488nm(针对 A488 抗 SSEA-3 抗原抗体)扫描玻片。三种抗体全部与上述的聚糖阵列结合。VK9特异性地与Globo H及Bb4结合；Mbrl 特异性地与Globo H及恥4结合并且也与Bb3有低亲和力的结合；以及A488特异性地与 Gb5结合。这些结果表明该聚糖阵列能够捕获与GloboH及/或其片段结合的抗体。实施例2用以在乳癌病患中侦测对抗Globo H及其片段的抗体的聚糖阵列的用途来自乳癌病患及健康个体的血浆样本以0. 05% Tween20/3% BSA/PBS缓冲液(pH 7.4)1 20稀释，然后在加湿室中与描述于上实施例1中的聚糖阵列玻片共同摇晃培养 lh。以0. 05% Tween 20/PBS缓冲液(pH 7. 4)、PBS缓冲液(ρΗ7· 4)、以及水各清洗三次后， 该玻片在加湿室中与Cy3-复合山羊抗-人类IgM或IgG抗体共同摇晃培养lh。该玻片接 着以0. 05% Tween 20/PBS缓冲液(pH7. 4)清洗三次、以PBS缓冲液(pH 7. 4)清洗三次、 以及以H2O清洗三次。干燥后，以微阵列萤光芯片视读器(ArrayWorx microarray reader) 在595nm(针对Cy3_复合二级抗体)扫描玻片。如下表1 及表 2 所示，Globo H-结合 IgG/Gb_5_ 结合 IgG (GH/Gb5IgG)以及 Globo H-结合IgMAib-5-结合IgM(GH/(ib5IgM)的量的比例在乳癌病患的血浆样本中较在健康个 体的血浆样本中高很多。如也示出于该两表中，癌症病患的m32/(ib5IgG、Bb4/(;b5IgM、Bb3/ (ib5IgM、及m32/(ib5IgM的比例显著地比健康个体高。这些资料表明上列的比例是诊断癌症 的可靠标记。表1.在乳癌病患(n = 58)及健康个体(n = 47)中Globo H及其片段Bb2、Bb3、 及Bb4与Gb5的IgG量的比例
权利要求
1.一种癌症诊断的方法，其包括提供一来自疑似患有癌症者的含有抗体的样本，将该 样本与(Λ5以及Globo H、Bb2,恥3、或Bb4其中一种或其中多种共同培养以容许该样本中 的抗体与(Λ5以及Globo H、恥2、恥3、或Bb4其中一种或其中多种结合，测量(Λ5-结合抗 体以及Globo H-结合、Bb2-结合、Bb3-结合、或恥4_结合抗体此两者的量，并且根据全部 的结合抗体的量决定该对象是否患有癌症，其中Globo H-结合、Bb2-结合、Bb3-结合、或 Bb4-结合抗体的量与(Λ5-结合抗体的量的比例比无癌症个体高的，暗示该个体患有癌症。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5及 Globo H混合以实行。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5及 Bb3混合以实行。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5及 Bb2混合以实行。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5、 Globo H、Bb2、Bb3、及Bb4混合以实行。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该样本为血清样本。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该(Λ5以及该GloboH、Bb2,肋3、或Bb4 其中一种或其中多种被固定于支持装置上。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该癌症选自由乳癌、黑色素瘤、神经母细 胞瘤、皮肤癌、肝癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、胃癌、肺癌、及胰脏癌所组成的组。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，该癌症为乳癌。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该(Λ5以及该Globo!1、恥2、恥3、或恥4 其中一种或其中多种被固定于支持装置上。
11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5 及Globo H混合以实行。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，该(Λ5及该GloboH被固定于支持装置上。
13.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5 及恥2混合以实行。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，该(Λ5及该恥2被固定于支持装置上。
15.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5 及Bb3混合以实行。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，该(Λ5及该Bb3被固定于支持装置上。
17.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该共同培养的步骤通过将该样本与(Λ5、 Globo H、Bb2、Bb3、及 Bb4 混合以实行。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，该(Λ5、GloboH、恥2、恥3、及Bb4被固 定于支持装置上。
19.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，该样本为血清样本。
全文摘要
本发明提供一种癌症诊断的方法，其使用含有Gb5以及Globo H、Bb2、Bb3、及/或Bb4的聚糖阵列。
文档编号G01N33/574GK102066940SQ200980123715
公开日2011年5月18日 申请日期2009年6月16日 优先权日2008年6月16日
发明者志辉·王, 忠义·吴, 爱丽丝·L·于, 王成池 申请人:中央研究院