建立针对生物来源之起始材料中多种分析物的标准品的方法

专利名称：建立针对生物来源之起始材料中多种分析物的标准品的方法
技术领域：
本发明一般地涉及分子生物学领域。更特别地，其涉及建立可用于多元测定之标 准品的方法。在一些具体实施方案中，本发明涉及从多种起始材料建立基本上均一之标准 品的方法。B.相关技术描述近来出现的多元测定在制备用于这些测定的标准品时引发了特有的问题。在分析一种分析物的单一测定中(即，在单测定中)，含有已知浓度之分析物的一 系列标准品被用于建立“标准曲线”，据此测量未知样品。一般使用两种方法来建立标准品 a)找到或建立不含靶标分析物的基质，将纯化的分析物(标准品)掺入其中，或b)具有已 知高水平分析物的样品被用作“高，，标准品，通过用基质稀释该高标准品来建立较低的水 平(其中不含或含有低水平的靶标分析物)。在多元测定中，当易于获得允许进行“掺入”的纯分析物时，常使用上面所列的方 法a)。当可以获得每种纯靶标分析物并且可以对其进行掺入操作时，该方法是完全适用的。 对于多元模式中的每个分析物，简单重复这一方法，从而，如果需要分析物x、y和ζ的话，则 将每一种掺入到同一基质中以确保单一标准品具有测定所需的、合适水平的所有分析物。当分析物只能通过生物学方式获得和/或不容易进行纯化或其它操作时，便出现 了特别复杂的问题。在这种情况下，人们通常设法鉴定具有不同水平之目的分析物的大量 不同样品，然后混合所述材料以使所有分析物均达到给定的目标值。这意味着，如果选取针 对一种分析物的高标准品，则构成多元测定之其它分析物可能具有或不具有合理的水平， 导致标准品不能容易地进行重复和/或不具有期望的目标值。因此，需要一种用于多元测 定的、稳定地建立基本均一之标准品的方法。发明概述在一些方面中，本发明提供了从起始样品建立针对多种分析物之多元标准品的方 法，其包括获取包含多种目的分析物的样品；测定每种目的分析物的浓度；建立一种或多 种特定缺乏样品(specifically deficient sample)；确定建立多元标准品(其中每种分 析物的浓度基本均一)所需的起始样品和每种特定缺乏样品的量(如果有的话)；以及混 合所述量的所述起始样品和特定缺乏样品来建立多元标准品。所述起始样品可以是含有目的分析物的任何组合物。起始样品可以包含浓度基本 均一或高度不同的多种目的分析物。在本发明的一些方面中，样品可以是体液(包括但不 限于全血、血清、唾液、尿液、精液)。在一些具体实施方案中，起始样品是血液样品。分析物 可以是待测量的任何物质。在一些具体实施方案中，分析物是蛋白质、抗体或蛋白酶。
在一些实施方案中，建立一种或多种特定缺乏样品可包括处理起始样品之一部分 或特定缺乏样品以去除至少第一目的分析物。可以去除目的分析物从而建立不含该特定分 析物或至少含有低浓度之该特定分析物的生物样品。通常，进行该操作时，尽可能减少对其 它分析物之水平的影响，但是，该方法并不需要100%的特异性。在一些实施方案中，另一分 析物的非特异性减少低于5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或40%。目的分析物不必 完全去除。当至少约 50%,60%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%,99% 或100%的分析物被去除时，则分析物被“基本上去除”。可以用基本上去除靶标分析物的任 何方式来处理样品。在一些具体实施方案中，所述处理包括中和分析物、物理去除分析物、 破坏分析物或隔离分析物。在一些实施方案中，分析物可以是抗体。本文使用的术语“抗体”泛指任何免疫结 合剂，如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。例如，在一些实施方案中，抗体可以是b型流感嗜血杆菌 (Haemophilus influenza type b,Hib)多糖、破伤风杆菌(Clostridium tetani,Tet)禾口白 喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae,Dip)之类毒素、月市炎链球菌(Streptococcus pneumonoiae)、脑膜炎球菌、脊髓灰质炎、白喉、破伤风、HIV、HBV、HCV的抗体。本领域技术 人员会了解，存在多种方法去除起始样品或特定缺乏样品中的抗体。在一些具体实施方案 中，去除样品或标准品中的抗体通过中和抗体来实现，例如通过向样品中加入目的抗体之 特异性抗原来实现。在另一些实施方案中，去除样品或标准品中抗体通过物理方式去除抗 体来实现，例如通过将抗体固定在具有特异性针对该抗体之抗原的柱上来实现。在另一实 施方案中，去除样品或标准品中的抗体通过破坏抗体来实现，例如通过使用破坏性试剂或 技术(如蛋白酶处理或热处理)处理样品来实现。在另一些实施方案中，去除样品或标准 品中的抗体通过隔离抗体来实现，例如通过将抗体包含在脂质体中来实现。在一些实施方案中，分析物可以是蛋白质。在一些实施方案中，所述蛋白质可以是 例如胰岛素、TSH、破伤风毒素或类毒素、白喉毒素或类毒素、垂体激素、胰蛋白酶或胰蛋白 酶原。本领域技术人员会了解，存在多种方法将起始样品或特定缺乏样品中的该蛋白质去 除。在一些具体实施方案中，去除样品或标准品中的蛋白质通过中和蛋白质来实现，例如通 过向样品中提供特异性针对该目的蛋白之靶标来实现。在另一些实施方案中，去除样品或 标准品中的蛋白质通过物理去除蛋白质来实现，例如通过将蛋白固定在具有结合该蛋白质 之靶标的柱上来实现。在另一实施方案中，去除样品或标准品中的蛋白质通过破坏蛋白质 来实现，例如通过使用破坏性试剂或技术(如蛋白酶处理或热处理)处理样品来实现。在 另一些实施方案中，去除样品或标准品中的蛋白质通过隔离蛋白质来实现，例如通过将蛋 白质包含在脂质体中或将蛋白质吸附至固体表面(如硅胶、分子筛等)上来实现。在一些实施方案中，分析物可以是蛋白酶。本文使用的术语“蛋白酶”泛指进行蛋 白质水解的任何酶。在一些实施方案中，蛋白酶可以是胰蛋白酶(trypsion)和胰凝乳蛋白 酶。本领域技术人员会了解，存在多种方法将起始样品或特定缺乏样品中的蛋白酶去除或 失活。在一些具体实施方案中，去除样品或标准品中的蛋白酶通过中和蛋白酶来实现，例如 通过向样品中提供特异性针对该目的蛋白酶的抑制剂来实现。在另一些实施方案中，去除 样品或标准品中的蛋白酶通过物理去除蛋白酶来实现，例如通过将蛋白酶固定在具有结合 该蛋白酶之抑制剂的柱上来实现。在另一实施方案中，去除样品或标准品中的蛋白酶通过 破坏蛋白酶来实现，例如通过被另一更易被失活或破坏的蛋白酶进行蛋白水解来实现。在另一些实施方案中，去除样品或标准品中的蛋白酶通过隔离蛋白酶来实现，例如通过将蛋 白酶包含在脂质体中来实现。在一些具体实施方案中，本发明提供了用于建立针对多元分析物之标准品的方 法，其包括获取包含多种目的分析物的样品；测定每种目的分析物的浓度；处理样品之一 部分以基本上去除第一分析物，从而建立第一特定缺乏样品；处理所述第一特定缺乏样品 之一部分以基本上去除第二分析物，从而建立第二特定缺乏样品；重复该过程，以从后续的 特定缺乏样品中基本上去除下一种分析物，从而产生一系列特定缺乏样品；确定建立标准 品(其中每种分析物具有所需浓度)所需的起始样品和特定缺乏样品系列的量；以及混合 所述量的所述特定缺乏样品系列来建立标准品。在一些实施方案中，处理起始样品以去除第一目的分析物，从而建立第一特定缺 乏样品。接着，可以处理所述第一(或前一)特定缺乏样品以去除第二目的分析物，并建立 第二(或后一)特定缺乏样品或特定缺乏样品。可重复该过程，即处理每种前一特定缺乏 样品以去除目的分析物，从而建立后一特定缺乏样品。例如，在一些实施方案中，本发明提供了用于建立针对起始样品中三种目的分析 物之多元标准品的方法，其包括获取包含三种目的分析物的样品；确定每种目的分析物的 浓度；处理起始样品之一部分以去除第一目的分析物，从而建立第一特定缺乏样品；处理 所述第一特定缺乏样品之一部分以去除第二目的分析物，从而建立第二特定缺乏样品；确 定对于建立多元标准品(其中每种分析物的浓度基本均一)所需的起始样品和每种特定缺 乏样品的量；以及混合所述量的起始样品和特定缺乏样品来建立多元标准品。在另一些实施方案中，起始样品包含五种目的分析物。在这样的实施方案中，所述 方法包括获取包含五种目的分析物的样品；测定每种目的分析物的浓度；处理起始样品之 一部分以去除第一目的分析物，从而建立第一特定缺乏样品；处理所述第一特定缺乏样品 之一部分以去除第二目的分析物，从而建立第二特定缺乏样品；处理所述第二特定缺乏样 品之一部分以去除第三目的分析物，从而建立第三特定缺乏样品；处理所述第三特定缺乏 样品之一部分以去除第四目的分析物，从而建立第四特定缺乏样品；确定对于建立多元标 准品(其中每种分析物的浓度基本均一)所需的起始样品和每种特定缺乏样品的量；以及 混合所述量的起始样品和特定缺乏样品来建立多元标准品。所述目的分析物可以任意顺序从标准品中去除。在一些实施方案中，所去除的分 析物是起始样品中的任一分析物。在另一些实施方案中，所述第一目的分析物是起始样品 中浓度最高的分析物，所述第二目的分析物是所述第一特定缺乏样品中浓度最高的分析 物，所述第三目的分析物是所述第二特定缺乏样品中浓度最高的分析物，所述第四目的分 析物是所述第三特定缺乏样品中浓度最高的分析物。本发明方法提供了确定对于建立多元标准品(其中每种分析物的浓度基本均一) 所需的起始样品和每种特定缺乏样品的量。这可以通过本领域技术人员已知的任何方法来 实现。例如，测定对于建立多元标准品(其中每种分析物的浓度基本均一)所需的起始样 品和每种特定缺乏样品的量可如下确定选择每种分析物的期望浓度，并基于该期望浓度 或目标值确定所需的起始样品和每种特定缺乏样品的量。可以对每种分析物的分析物实际 值与分析物目标值的比值(“实际值与目标值的比值”)取平均值以得到混合多元标准品的 平均比值，其是标准品均一性的指示。例如，完全均一的多元标准品(其中每种分析物具有与期望浓度完全相同的浓度)的实际值与目标值的平均比值为1.0，其实际值与目标值的 比值范围为1.0 1.0。均一性较低的多元标准品的实际值与目标值之平均比值为0.74， 其实际值与目标值的比值范围为0. 30 1.90。在涉及浓度的一些具体实施方案中，基本均 一的多元标准品的实际值与目标值的比值范围为0. 50 1.50。在另一些实施方案中，基本 均一的多元标准品的实际值与目标值的比值范围为0. 75 1. 25。所述期望浓度应当根据有待研究或测量之分析物的生物学相关浓度以及待进行 的测定来确定。例如，在一些示例性的实施方案中，多元标准品中每种分析物的期望浓度可 以为25，000yg/ml。在这样的实施方案中，多元标准品中每种分析物可以例如具有1，000 至大于50，000 μ g/ml的浓度。这提供了实际值与目标值的平均比值为0. 04至大于2. 0。在 每种分析物浓度基本均一的多元标准品中，各分析物的浓度可以为20，000 30，OOOyg/ ml。这提供了实际值与目标值的平均比值为0. 80 1.20。在另一些实施方案中，多元标准 品中每种分析物的期望浓度可以为5，000 μ g/ml。在这样的实施方案中，多元标准品中每 种分析物可以具有1，000 50，000 μ g/ml的浓度。这提供了实际值与目标值的平均比值 为0. 20至大于10。在每种分析物浓度基本均一的多元标准品中，各分析物的浓度可以为 3，000 7，000 μ g/ml。这提供了实际值与目标值的平均比值为0. 60 1. 40。在一些具体的实施方案中，本发明的方法还包括鉴定具有离群值浓度(outlier concentration)的目的分析物。离群值是统计观察数据，其数值与给定样品中的其它值明 显不同或差距很大。举例来说，离群值浓度可以通过与期望浓度进行比较来确定。例如，可 能期望将浓度显著高于或低于期望浓度的样品鉴定为离群值浓度。在一个示例性的实施方 案中，离群值浓度显著高于或低于期望浓度，并且可具有小于0. 50或大于1. 50的实际值与 目标值之比值。在另一些实施方案中，离群值可具有实际值与目标值之比值小于0. 75或大 于1. 25的浓度。在另一些实施方案中，离群值可以通过与本领域技术人员已知的任何标准 品进行比较而确定。在这样的实施方案中，所述起始样品或样品可被处理以仅去除具有离群值浓度的 分析物。例如，所述方法可包括获取包含多种目的分析物的样品；测定每种目的分析物的浓 度；鉴定出具有离群值浓度的目的分析物；通过处理起始样品或特定缺乏样品以去除至少 一种被鉴定为具有离群值浓度之分析物来建立一种或多种特定缺乏样品；确定对于建立多 元标准品(其中每种分析物的浓度基本均一)所需的起始样品和每种特定缺乏样品的量； 以及混合所述量的起始样品和特定缺乏样品来建立多元标准品。或者，可以处理起始样品 或特定缺乏样品以首先去除具有离群值浓度的分析物，然后再处理起始样品或特定缺乏样 品以去除所期望的任何其它分析物。在一些实施方案中，建立一种或多种特定缺乏样品包括建立一系列N-I种特定缺 乏样品，其中每一种后一特定缺乏样品已基本上去除了前一起始样品或前一特定缺乏样品 中浓度最高的目的分析物。在一些实施方案中，本发明还包括制备所述多元标准品的一系列稀释物。该系列 稀释物可用于生成分析未知样品的标准曲线。标准曲线通过对测定数据绘图而生成，其将 分析物的已知浓度与经验数据建立联系，并用于确定物质(特别是蛋白质和DNA)的浓度。在另一些实施方案中，本发明提供了为多种起始样品中的多种分析物建立多元标 准品的方法，其包括获取包含多种目的分析物的多种起始样品；测定每种起始样品中每种
7目的分析物的浓度；建立一种或多种特定缺乏样品；确定建立多元标准品(其中每种分析 物具有期望的浓度)所需的每种特定缺乏样品的量；以及混合所述量的起始样品和特定缺 乏样品以建立多元标准品。在一些实施方案中，建立一种或多种特定缺乏样品包括处理至 少一种起始样品之一部分以基本去除至少一种目的分析物。本发明还允许使用多种起始样品建立多元标准品。在一些实施方案中，本发明允 许使用 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或更多种(或其中可推
出的任何范围)起始样品。在一个具体的实施方案中，所述多元标准品从5种起始样品建 立。在这一实施方案中，建立一种或多种特定缺乏样品可包括处理第一、第二、第三、第四和 /或第五起始样品之一部分以从起始样品中去除至少一种目的分析物，从而建立第一、第 二、第三、第四和/或第五特定缺乏样品。在另一实施方案中，所述多元标准品从10种起始 样品建立，其中建立一种或多种特定缺乏样品包括处理第一、第二、第三、第四、第五、第六、 第七、第八、第九和/或第十起始样品之一部分以从起始样品中去除至少一种目的分析物， 从而建立第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和/或第十特定缺乏样品。可以想见，本文所述的任一方法或组合物可以利用本文所述的任何其它方法或组 合物来实施。除非明确指出仅表示供选方案或者替代方案是互斥的，否则权利要求中使用的术 语“或”用于指“和/或”，但是本公开内容支持“仅表示供选方案”和“和/或”的定义。在本申请通篇中，术语“约”用于表示数值包括由用于测定该数值之装置或方法产 生的误差的标准差。按照长期以来的专利法，除非特别注明，当与权利要求书或说明书中的词语“包括 /包含”一起使用时，无数量词修饰的名词表示一个(种)或多个(种)。以下详细描述会使本发明的其它目的、特征和优点显现出来。然而，应当理解，指 示本发明具体实施方案的详细描述和具体实施例仅作为举例而给出，对于本领域技术人员 来说，在本发明精神和范围内的多种变动和修改将是很明显的。


图1.使用PS-I亲和柱的结果。PS-I抗体的信号降低到小于原始信号的30%。图2.使用PS-4亲和柱的结果。PS-4抗体的信号降低到小于原始信号的20%。图3.使用PS-9亲和柱的结果。PS-9抗体的信号降低到小于原始信号的15%。图4.使用PS-12亲和柱的结果。PS-12亲和柱非特异性地减少了所有PS抗体。图5.使用PS-23亲和柱的结果。PS-23亲和柱非特异性地减少了所有PS抗体。图6.使用PS-57亲和柱的结果。PS-57抗体的信号降低到小于原始信号的10%。图7.对照检测抗体水平的百分比。将样品与相应的多糖一起孵育。对示例性实 施方案的描述I.本发明本发明提供了制备在靶标分析物不能通过合成产生或者这些靶标分析物不能容 易地在生产设备中进行纯化和/或操作的情况下用于为生物测定建立标准曲线之材料的 方法。一个实例是血清学测定，其中针对多种分析物的抗体水平须在活的生物体(如人) 中产生，但是这样产生的每种抗体之水平无法受到控制或调节。本发明利用去除靶标分析物而产生特定缺乏的溶液，然后可使用该溶液来制备包含特定的、水平基本均一的分析物 的混合物。在一些实施方案中，本发明提供了用于为多元测定建立标准品的方法。本文使用 的短语“多元”或语法上等同的短语是指平行检测、分析或扩增每个样品中多于一种目的靶 标分析物。可以同时进行对多种不同分析物(多元分析物)的分析。可利用多种平台进行 检测，包括但不限于微阵列和珠阵列。II.产生特定缺乏样品在一些方面中，本发明允许建立一种或多种特定缺乏样品，其包括处理起始样品 或特定缺乏样品之一部分以基本去除目的分析物。所述分析物可以是待测量的任何物质， 例如蛋白质、抗体或蛋白酶。从样品中去除蛋白质、抗体或蛋白酶的方法是本领域技术人员 众所周知的，包括但不限于如下所述的那些方法。在去除特定分析物以建立特定缺乏样品 之前，可以知晓/定量所述目的分析物的浓度。A.对目的分析物的定量本发明的方法允许确定每种目的分析物的浓度。本领域技术人员会了解，存在多 种用于定量任何目的分析物的方法，包括但不限于如下所述的那些方法。1. ELISA仅举几例，免疫检测方法包括酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、放射性免疫测定(radioimmunoassay，RIA)、免疫放射分析测定、免疫荧光测 定、化学发光测定、生物发光测定和Western印迹。多种有用的免疫检测方法的步骤已描 述于科学文献中，如 Doolittle 和 Ben-Zeev，1999 ；Gulbis 和 Galand，1993 ；De Jager 等， 1993 ；以及Nakamura等，1987，每篇参考文献均通过引用并入本文中。在有效条件下使所选生物样品与抗体接触一段足以允许形成免疫复合物(初始 免疫复合物)的时间，这通常可以是简单地向样品中加入抗体组合物并将该混合物孵育对 于抗体形成免疫复合物(即与任何存在的抗原结合)来说足够长的时间。此后，通常清洗 样品-抗体组合物(如组织切片、ELISA板、点印迹或Western印迹)以去除任何非特异性 结合的抗体种类，只允许检测那些特异性结合在初始免疫复合物中的抗体。通常，免疫复合物形成的检测是本领域众所周知的，并且可通过应用多种方法得 以实现。这些方法通常基于对标签或标记物的检测，如放射性标签、荧光标签、生物标签和 酶标签中的任何一种。涉及这些标签之应用的专利包括美国专利3，817，837,3, 850，752、 3，939，350,3, 996，345,4, 277，437,4, 275，149 和 4，366，241，每篇专利文献均通过引用并 入本文中。当然，可以通过使用第二结合配体(例如第二抗体)和/或生物素/抗生物素 蛋白配体的结合方案发现另外的优势，如本领域已知地。检测中采用的选择性抗体其本身可以连接至可检测的标签，然后就可以简单地检 测该标签，从而允许测定组合物中初始免疫复合物的量。或者，结合在初始免疫复合物中的 第一抗体可以通过使用对该抗体具有结合亲和力的第二结合配体进行检测。在这种情况 下，可以将第二结合配体连接至可检测标签。第二结合配体常常本身是抗体，因此其可以被 称为“第二”抗体。初始免疫复合物在有效条件下与经标记的第二结合配体或抗体接触一 段足以使第二免疫复合物形成的时间。然后，通常清洗第二免疫复合物，以去除任何非特异 性结合的经标记第二抗体或配体，然后检测第二免疫复合物中存留的标记物。
其它方法包括通过两步法检测初始免疫复合物。如前文所述，使用对抗体具有结 合亲和力的第二结合配体(如抗体)来形成第二免疫复合物。清洗后，可以再一次在有效 的条件下使第二免疫复合物与对该第二抗体具有结合亲和力的第三结合配体或抗体接触 一段足以允许形成免疫复合物(第三免疫复合物)的时间。所述第三配体或抗体通常与可 检测的标记物相连，从而允许检测如此形成的第三免疫复合物。需要时，该系统可采用信号 放大。如前文详细叙述地，用最简单和/或直接的话说，免疫测定就是抗体结合测定。一 些优选的免疫测定是本领域已知的各种类型的酶联免疫吸附测定(ELISA)和/或放射性免 疫测定(RIA)。在一个示例性的ELISA中，本发明的选择性抗体被固定于表现出蛋白质亲和力的 选定表面上，如聚苯乙烯微量滴定板的孔。然后，将怀疑含有抗原的测试组合物(如临床样 品)加至孔中。在结合和/或清洗以去除非特异性结合的免疫复合物之后，可以检测所结合 的抗原。通常通过加入另一种与可检测标记物相连的抗体来实现检测。这种类型的ELISA 是一种简单的“夹心ELISA法”。还可以通过加入第二选择性抗体、然后加入对该第二抗体 具有结合亲和力的第三抗体(该第三抗体与可检测的标记物相连)来实现检测。另一种ELISA(其中抗原被固定)涉及在检测中使用抗体竞争。在这种ELISA中， 将针对抗原的经标记抗体加至孔中，使其结合，和/或利用它们的标记物进行检测。然后， 通过在与经包被之孔孵育过程中将样品与针对所述抗原的经标记抗体混合，便可测定未知 样品中的抗原量。样品中存在抗原会减少可与孔结合的针对抗原的抗体的量，因而减少了 最终的信号。这一方法也适用于检测未知样品中针对抗原的抗体，其中未标记的抗体与经 抗原包被的孔结合并且也减少了可与经标记抗体结合的抗原的量。无论采用何种形式，ELISA具有一些共同特征，如包被、孵育和结合、清洗以除去非 特异性结合的种类以及检测结合的免疫复合物。这些方面描述如下。在用抗原或抗体包被板时，通常将板孔与抗原或抗体溶液孵育过夜或孵育特定的 小时数。然后清洗板孔以除去未完全吸附的材料。然后，使用对测试抗血清来说呈抗原中 性(antigenically neutral)的非特异性蛋白质“包被”孔中任何剩余可用的表面。这些 蛋白质包括牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白或奶粉溶液。该包被允许封闭固定表面上的非特异 性吸附位点，从而降低抗血清非特异性结合到表面上所造成的背景。在ELISA中，相比于直接方法，可能更惯常使用二级或三级检测方法。因此，在蛋 白质或抗体结合至孔中、用非反应性材料进行包被以降低背景以及清洗以去除未结合的材 料之后，在允许免疫复合物(抗原/抗体)形成的有效条件下，使固定表面与待测试之生物 样品相接触。然后，免疫复合物的检测需要经标记的第二结合配体或抗体以及与经标记之 第三抗体或第三结合配体相连的第二结合配体或抗体。“在允许免疫复合物(抗原/抗体)形成的有效条件下”是指优选地包括使用溶液 (如BSA、牛丙种球蛋白(BGG)或磷酸盐缓冲液(PBS)/吐温)稀释抗原和/或抗体的条件。 这些加入的试剂也有利于减少非特异性背景。“合适的”条件还指在足以允许有效结合的温度或时间内孵育。孵育步骤通常从约 1小时至2小时至4小时左右，温度优选地约为25°C至27°C，或者可以在约4°C孵育过夜。在ELISA中所有孵育步骤之后，清洗接触表面以除去未结合的材料。优选的清洗方法包括使用溶液(如PBS/吐温或硼酸盐缓冲液)清洗。在测试样品与最初结合材料之 间形成特异性免疫复合物并再次清洗之后，即使微量的免疫复合物的存在也可被检测到。为了提供检测方法，第二或第三抗体具有相关标记物以允许检测。优选地，其是 在与合适的生色底物孵育后显色的酶。因此，例如，期望将第一和第二免疫复合物与脲酶、 葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶或过氧化氢酶缀合之抗体在有利于进一步形成免疫复合物的条 件下接触或孵育一段时间(例如，在含有PBS的溶液(如PBS-吐温)中在室温下孵育2小 时)。在与经标记抗体一起孵育并清洗以去除未结合的材料之后，对标记物进行定量， 例如通过与生色底物(如尿素或溴甲酚紫或2，2' -二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸) (ABTS)或H2O2 (在使用过氧化物酶作为酶标记物时)一起孵育来实现。然后通过测量显色 程度实现定量，例如使用可见光谱分光光度计并将该值与使用已知量分析物获得的类似值 相关联。2.质谱质谱提供了一种通过在真空中电离分子并通过挥发使之“飞行”来“称量”各分子 的方法。在电场和磁场组合的影响下，离子沿着它们各自质量(m)和电荷(ζ)决定的轨道 飞行。质谱(MQ由于具有极好的选择性和灵敏度，已成为用于定量多种生物分析物(包括 药物、代谢物、肽和蛋白质)的有力工具。使用本领域技术人员已知的专门设计的技术来实现质谱定量。一个实例是使用掺 入对照(spike-in control)。将已知量的经同位素标记形式的所需分析物加入溶液中用作 对照，然后所述对照可用于将峰高与分子浓度建立关联。可将质谱仪设置为仅监测目的分 析物的质量和电荷，这称为选定离子监测(selected ion monitoring，SIM)。3. Western 印迹分析Western印迹分析是常用于分析和鉴定蛋白质的成熟技术。首先通过在聚丙烯酰 胺凝胶中电泳使蛋白质分开，然后转移(“印迹”)到硝酸纤维素膜上或经处理的纸上，在此 处它们以与胶中形成的相同模式进行结合。首先用抗体覆盖抗原，然后用经放射性同位素、 荧光染料或酶标记的抗免疫球蛋白抗体或蛋白A覆盖。本领域普通技术人员会熟悉该定量 样品中蛋白质的常用技术。B.改变目的分析物的水平从起始样品或特定缺乏样品中去除分析物的方法是本领域技术人员熟知的，其包 括但不限于以下描述的这些方法。1.中和目的分析物在一些具体的实施方案中，通过中和抗体将分析物从样品或标准品中去除。可通 过本领域技术人员已知的任何方法来中和或失活分析物，其包括但不限于向样品中加入与 分析物结合的分子。2.物理去除目的分析物在另一些实施方案中，通过物理去除目的分析物而将分析物从样品或标准品中去 除。可通过本领域技术人员已知的任何方法将分析物物理去除，其包括但不限于以下描述 的这些方法。在一些实施方案中，通过将分析物固定于具有结合该分析物之靶标的固体支持物上而将目的分析物去除。所述固体支持物可以是柱、珠或本领域技术人员已知的任何其它 固体支持物。另一些实例包括使用各种色谱法。有多种色谱法可用于本发明的实践中，包括毛 细管吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、分子筛色谱、反相色谱、柱色谱、纸色谱、薄层色谱 和气相色谱以及HPLC。特别地，可以通过将分析物吸附到固体表面(如硅或分子筛)以去 除目的分析物。色谱用于根据有机化合物的电荷、大小、形状和溶解性对其进行分离。色谱由流动 相(溶剂和待分离之分子)和流动相流过的固定相(纸(在纸色谱中)或玻璃珠(称为树 脂)(在柱色谱中))组成。由于化学性质不同，因此分子以不同速率通过固定相。可用于 本发明中的色谱类型包括但不限于高效液相色谱(HPLC)、离子交换色谱(IEC)和反相色谱 (RP)。其它种类的色谱包括吸附、分配、亲和、凝胶过滤和分子筛以及许多使用色谱的专门 技术(包括柱、纸、薄层和气相色谱)(Freifelder，1982)。a.高效液相色谱高效液相色谱(HPLC)类似于反相色谱，只是在该方法中，以高的速度和压降实 施。柱较短并且直径小，但它相当于拥有大量的平衡级。虽然有其它类型的色谱(如，纸和薄层色谱)，但大多数色谱应用采用柱色谱。在 柱中发生实际的分离。通常由具有足够强度的玻璃或金属管来承受可能施加于其上的压 力。柱包含固定相。流动相流过柱并吸附到固定相上。该柱可以是填充床或开口管柱。填 充床柱包含颗粒形式并被填充进柱作为均质床的固定相。固定相完全填满该柱。开口管柱 的固定相是柱壁上的薄膜或层。有一个通道穿过柱的中心。流动相包含注入了样品的溶剂。溶剂和样品一起流过柱；因此，流动相常被称为 “载液(carrier fluid)”。固定相是柱中的材料，其对待分离之组分具有不同的亲和力。包 含流动和固定相的材料根据所进行之色谱方法的一般类型而有所不同。液相色谱中的流动 相是低粘度液体，其流过固定相床。这种床可包含包被在多孔支持物上的不混溶液体、键合 至吸附剂表面的液相薄膜或具有限制孔径的吸附剂。高效聚焦色谱(high-performance chromatofocusing, HPCF)产生液体等电点 (Pl)级分作为第一维的蛋白质分离，然后对每种Pl级分进行高分辨率反相(RP)HPLC作为 第二维。现在了解了蛋白质的分布(如同凝胶)，而液体级分在更具选择性的基础上易于与 质谱(MS)联用以获得详细完整的蛋白质表征和鉴定(不同于凝胶)，而无需借助蛋白质消 化。反相色谱反相色谱(reversed phase chromatography, RPC)利用样品的溶解特性，在亲水 性和亲脂性溶剂间分配样品。样品组分在两相间的分配取决于它们各自的溶解特性。较不 疏水的组分最终主要留在亲水相中，而较疏水的组分留在亲脂相中。在RPC中，覆盖有化学 键合烃链O 18碳)的硅颗粒代表亲脂相，而该颗粒周围有机溶剂的水性混合物代表亲 水相。当样品组分通过RPC柱时，分配机制连续运行。取决于洗脱液的萃取能力，较多或 较少部分的样品组分会被颗粒脂质层(该情形中称为“固定相”)反相保留。保留在脂质层 中的级分越多，则样品组分沿柱流动越慢。亲水性化合物比疏水性化合物流动快，这是因为 流动相比固定相更亲水。
在高度水性流动相中，化合物粘附至反相HPLC柱，并使用高度有机流动相将其从 RP HPLC柱中洗脱。在RP HPLC中，化合物基于其疏水性质而被分离。可以通过运行线性梯 度的有机溶剂对肽进行分离。按照分配机制，吸附在流动相和固定相的界面处进行。吸附机制对于亲水性样品 组分来说更为显著，而对于疏水性样品组分来说，液体-液体分配机制更为普遍。因此，疏 水性组分的保留受脂质层厚度的影响较大。18碳层可以容纳比8碳层或2碳层更多的疏水 性材料。流动相可被认为是有机溶剂的水溶液，其类型和浓度决定萃取能力。用于增加疏 水性的一些常用有机溶剂包括甲醇、丙醇、乙腈和四氢呋喃。由于使用孔径很小的颗粒作为固定相，因此获得很窄的峰。在一些实施方案中，根 据从HPLC洗脱的峰强度，反相HPLC的峰表示为二维图像中不同强度的条带。在某些情况 下，收集液相中HPLC分离的洗脱剂作为峰。为了改善色谱峰形以及提供反相色谱中质子的 来源，常使用酸。这些酸是甲酸、三氟乙酸和乙酸。离子交换色谱离子交换色谱(ion exchange chromatography，IEC)适用于分离几乎任何类型的 带电分子，从大的蛋白质到小的核苷酸和氨基酸。在多种不同的条件下，其非常普遍地应用 于蛋白质和肽。在蛋白质结构工作中，凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography, GPC)与IEC的连续应用相当普遍。在离子交换色谱中，带电颗粒(基质)与样品分子(蛋白质等)可逆地结合。然 后通过增加流动相的盐浓度或通过改变流动相的PH来进行解吸附作用。在生物化学中最 常使用含有二乙氨乙基(diethyl aminoethyl, DEAE)或羧甲基(carboxymethyl，CM)基团 的离子交换。DEAE和CM的离子性质都取决于pH，但它们都能在进行大多数蛋白质分离的 PH 4至8的范围内带有足够的电荷从而很好地作为离子交换剂来使用。决定蛋白质与离子交换剂之吸附的蛋白质性质是净表面电荷。由于表面电荷是由 蛋白质的弱酸性和碱性基团所导致，因此分离是高度PH依赖性的。从低pH值到高pH值， 蛋白质的表面电荷从正电荷转变为负电荷。PH相对于净表面电荷的曲线是蛋白质的独特性 质，并构成了 IEC之选择性的基础。正如所有形式的液相色谱，所采用的条件允许样品组分以不同的速度通过柱。在 低离子强度下，所有对离子交换剂有亲和力的组分都将被紧紧地吸附到离子交换剂的顶 部，而不留在流动相中。当通过加入中性盐而提高流动相的离子强度时，盐离子会与蛋白质 竞争，更多的样品组分会部分地解吸附，并开始沿柱向下移动。更大程度地提高离子强度会 造成更大量的样品组分被解吸附，并且沿柱移动的速度将会增加。蛋白质的净电荷越高，则 引起解吸附所需的离子强度就越大。在一定的高离子强度下，所有样品组分均被完全解吸 附并以与流动相相同的速度沿柱向下移动。在全部吸附与全部解吸附之间的某处，能够找 到针对给定PH值之流动相的最佳选择性。因此，为了优化离子交换色谱的选择性，选出这 样的PH值，其使得样品组分之间产生足够大的净电荷差异。然后，选择离子强度，其通过使 组分部分地解吸附而充分利用这些电荷差异。每种组分沿柱向下移动的各自速度与该组分 在流动相中发现的级分成比例。样品组分在吸附离子交换剂方面常常差异很大，以致于单一离子强度值不能使慢组分在合理时间内通过柱。在这种情况下，应用盐梯度从而在流动相中形成持续增加的离 子强度。3.破坏目的分析物在另一实施方案中，分析物从样品或标准品中的去除通过破坏目的分析物来实 现。目的分析物可以通过本领域技术人员已知的降解分析物的任何方法来破坏。这样的方 法包括但不限于使用破坏性试剂或技术(如蛋白酶处理或热处理)处理样品。4.隔离目的分析物在另一些实施方案中，分析物从样品或标准品中的去除通过隔离目的分析物来实 现。目的分析物可通过本领域技术人员已知的任何方法被隔离，包括但不限于将分析物包 含在运载体(如脂质体)中。在本发明某些宽泛的实施方案中，可通过将分析物包封在脂质体中来隔离目的分 析物。脂质体是囊状结构，其特征为磷脂双层膜和内部水性介质。多层脂质体具有被水性 介质分隔的多个脂质层。当磷脂悬浮于过量的水性溶液中时，它们会自发形成。在形成 封闭结构前，脂质组分进行自我重排，并在脂质双层之间包封水和溶解的溶质tehosh和 Bachhawat, 1991)。还考虑到阳离子脂质-核酸复合物，如lipofectamine-核酸复合物。“脂质体”是一个统称，其涵盖通过形成封闭的脂双层而形成的多种单层和多层脂 质运载体。根据本发明，使用磷脂制备脂质体，并且可携带净正电荷、净负电荷或者是中性 的。可应用二鲸蜡醇磷酸酯来赋予脂质体以负电荷，可使用硬脂酰胺来赋予脂质体以正电 荷。根据本发明，适于使用的脂质可以从商业来源获得。例如，二肉豆蔻酰基磷脂酰 胆碱(dimyristyl phosphatidylcholine，“DMPC”)可从 Sigma Chemical Co.获得，二鲸 赌醇磷酸酯(dicetyl phosphate，“DPC”)可从 K& K Laboratories (Plainview, N. Y.)获 得，胆固醇(“Choi”)从Calbiochem (La Jolla, Calif.)获得，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油 (dimyristyl phosphatidylglycerol，"DMPG，，)和其它脂质可从 Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, Ala.)获得。氯仿、氯仿/甲醇或叔丁醇中的脂质储液可在约_20°C保 存。优选地，因为氯仿比甲醇更易于蒸发，所以使用氯仿作为唯一的溶剂。优选地，不使用天然来源的磷脂(如卵或大豆卵磷脂、脑磷脂酸、脑或植物磷脂肌 醇、心磷脂以及植物或细菌磷脂酰乙醇胺)作为主要的磷脂(即占总磷脂组成的50%或更 多)，因为这样得到的脂质体不稳定且易泄漏。可以通过不同的方法制备本发明所使用的脂质体。取决于合成方法，脂质体的大 小有所不同。悬浮在水性溶液中的脂质体通常采用球形囊泡的形式，其具有一个或多个脂 双层分子同心层。每层均由式XY所示之平行排列的分子组成，其中X是亲水部分，Y是疏 水部分。在水性悬浮液中，同心层排列成使得亲水部分趋于保持与水相接触，疏水区域趋于 自我结合。例如，当脂质体内外均存在水相时，脂质分子会形成ΧΥ- (排列的双层(称为片 层(lamella))。本发明范围内的脂质体可根据已知的实验室技术进行制备。在一个优选的实施方 案中，通过在容器(如玻璃培养瓶、梨形培养瓶)里的溶剂中混合脂质体脂质来制备脂质 体。该容器应具有比预期脂质体悬液体积大十倍的体积。使用旋转蒸发器，在负压下、在约 40°C除去溶剂。取决于所需的脂质体体积，溶剂通常在约5分钟至2小时内被除去。该组合物可以进一步在真空干燥器中干燥。干燥的脂质一般在约1周后被丢弃，因为其具有随 时间变质的趋势。干燥的脂质可以以约25 50mM磷脂在无菌、无热原的水中进行水化，通过振摇直 至所有脂质薄层均被重悬。然后，可将该水性脂质体分成等份，每份置于小瓶中，冷冻干燥 并在真空下密封。或者，可根据其它已知的实验室方法来制备脂质体=Bangham等人(1965)的方法， 其内容通过引用并入本文中；描述于Drug Carriers in Biology and Medicine (1979)中 的Gregoriadis的方法，其内容通过引用并入本文中；Deamer和^ter (1983)的方法，其内 容通过引用并入本文中；以及和Papahadj0p0ul0S(1978)所述的反相蒸发法。上述 方法的不同在于它们各自具有不同的包封水性材料的能力以及它们各自具有不同的水性 空间(aqueous space)与脂质的比。如上所述制备的干燥脂质或冻干脂质体可以在核酸溶液中重构，并可使用合适的 溶剂(如DPBQ稀释到适当的浓度。然后，将该混合物在旋涡混合器中剧烈振摇。通过以 29，OOOXg离心并清洗脂质体沉淀来除去未被包封的核酸。将清洗后的脂质体以适当的总 磷脂浓度(例如，约50 200mM)进行重悬。所包封的核酸的量可根据标准方法来确定。确 定了脂质体制备物中包封之核酸的量后，可以将脂质体稀释至适当浓度并在4°C保存备用。III.多元测定一经建立，可将特定缺乏样品以合适的比例进行混合，以产生包含预定浓度之目 的分析物的多元标准品溶液。在一些实施方案中，本发明还包括制备多元标准品的一系列 稀释物。该系列稀释物可用于为未知样品之多元分析建立标准曲线。标准曲线可通过对测 定数据(如经验测定的代表分析物之已知浓度的值)作图而生成。通过将类似得出的样品 中未知浓度之分析物的经验数值与标准曲线相关联，可以计算出样品中分析物(特别是蛋 白质和DNA)的浓度。所述测定数据可通过本领域技术人员已知的任何方法获得，包括但不 限于下面所提及的那些方法。A.阵列本发明可涉及使用阵列以得到供本发明使用的测定数据。阵列技术允许对基因表 达和分子相互作用进行高通量筛选。Pandey和Mann Q000)，MacBeath和khreiberQOOO) 对蛋白质阵列技术进行了详细论述，每篇参考文献均通过引用特别地并入本文中。这些阵 列(其通常包含点样在玻璃载玻片上或固定在小孔中的数以千计的不同蛋白质或抗体)允 许同时检测大量蛋白质的生化活性和结合特征。为了使用这样的阵列检测蛋白质相互作 用，将经标记的蛋白质与固定在阵列上的每种靶蛋白一起孵育。然后对该阵列进行分析，以 确定经标记分子与所述多种蛋白质中的哪些结合、该蛋白质的量或浓度或者蛋白质的其它 特征。本领域技术人员应知晓，有多种方法可用于分析所述阵列。1.蛋白质生物芯片测定一般地，生物芯片包含基底，其上附着有捕获分子之阵列。所述每种捕获分子位于 基底表面上分散且可识别的位置，从而可通过所选定的检测方法进行寻址。当捕获分子暴 露于分析样品时，样品中的分析物可以与表面上与其具有亲和力的捕获分子结合。分析物 分子与捕获分子之间的捕获或相互作用可通过多种方法的任意种进行检测或表征。此类检 测或表征方法是本领域技术人员已知的，包括但不限于检测荧光、发光、吸光度、反射率、透
15光率或折射指数(例如，表面等离子体共振、椭圆光度法、共振镜法、衍射光栅耦合器波导 法或干涉测量法)、免疫测定(如ELISA)、气相离子光谱法、原子力显微镜或质谱(特别是 SELDI)。对样品中分析物的定量可通过选择合适的检测方法来实现。2.珠阵列基于微球的测定也可以利用珠阵列平台来分析。一般地，珠阵列平台对分布于阵 列上的珠子和分析物成像。这样，对珠阵列成像类似于上文所述的基因芯片。然而，与基因 芯片中分析物通过其在阵列上的空间位置进行识别不同的是，珠阵列通常通过与分析物结 合的经编码微球来识别分析物。例如，Luminex(Austin, TX)描述了根据微球之荧光来编码微球的方法，如Fulton 等人1997，Clin. Chem. 43 :1749-1756以及美国专利No. 5，736，330所教导地，二者均通过引 用并入本文中。该方法基于这样的原理，即可以将具有独特荧光谱的荧光微球(珠)固定 至不同的分析物特异性结合物，并用于建立基于荧光的分析物特异性珠阵列，其中每种珠 子类型特异性针对独特的分析物。该技术应用了荧光染料的组合，这使得每种珠子得以被 独立识别。将分析物特异性微球混合在一起并与标记有不同荧光颜色的探针接触。探针与 经标记微球上的配体或受体结合，并用于确定每个珠子表面的特异性分子相互作用。在流 式细胞仪中对样品读数，这样可以分别识别每种微球以及可以读取相应的探针结合信号。所述微球可用于64个不同的组中，其通过每组中独特的橙色/红色发射光谱进行 分类。使用两种荧光染料(发橙光和发红光)之每一种的不同浓度来制备具有独特的橙 色/红色发射光谱的64组微球。微球通过表面羧酸基团可以与几乎任何含胺分子共价偶 联。或者，可使用抗生物素蛋白偶联的微球固定生物素化的分子(Fulton等，1997，Clin. Chem. 43 :1749-1756)。市售的其它珠阵列的实例包括Illumina’s BeadXpress Reader 和 BeacKtation 500 。3.抗体微阵列抗体微阵列是蛋白质微阵列的具体形式。抗体微阵列常用于检测细胞裂解物中 蛋白质表达的一般性研究，也可用于诊断应用(例如用于检测血清或尿中的特定生物标志 物)。IV.实施例以下实施例用于表明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解，下文实施 例中公开的技术代表了本发明人发现的在本发明实践中效果良好的技术，因此可认为构成 了本发明实践的优选方式。然而，本领域技术人员应理解，根据本发明的公开内容，可以在 不背离本发明精神和范围的前提下在所公开的特定实施方案中进行多种改动，并且仍得到 类似的或相近的结果。实施例1- 一种起始样品下面的实施例展示了建立针对具有14种分析物之测定的多元标准品。用于评估 14种分析物的多元标准品由单一样品(SO)建立，SO中每种分析物的水平见表1。表1分析物值(u g/ml)PS-5771，351PS-5150，210PS-0827，850PS-1423, 323PS-5617，904PS-1213, 607PS-1910，962PS-Ol9，402PS-268，134PS-097，325PS-686，737PS-035，315PS-234，095PS-042，793 为建立多元标准品，首先通过从样品中系统性去除目的分析物来建立一系例标准 品。目的分析物可通过例如与固体支持物结合而被去除，从而使生物样品中缺乏或至少是 含有低浓度的特定分析物。一般地，这在不影响其它分析物水平的情况下进行，但是，该方 法在去除特定分析物时并不需要100%的特异性，也不需要100%有效，也就是说，一定残 留量是可以接受的。所述系列标准品可以通过从样品中依序去除14种分析物来建立。例 如，可以处理样品SO以去除一种分析物PS-57。这便建立了第一特定缺乏样品Si。然后， 处理Sl以去除第二分析物PS-51，并建立第二特定缺乏样品S2。然后，处理S2以去除第 三分析物PS-08，并建立第三特定缺乏样品S3。然后，处理S3以去除第四分析物PS-14，并 建立第四特定缺乏样品S4。然后，处理S4以去除第五分析物PS-56，并建立第五特定缺乏 样品S5。然后，处理S5以去除第六分析物PS-12，并建立第六特定缺乏样品S6。然后，处 理S6以去除第七分析物PS-19，并建立第七特定缺乏样品S7。然后，处理S7以去除第八分 析物PS-01，并建立第八特定缺乏样品S8。然后，处理S8以去除第九分析物PS-26，并建立 第九特定缺乏样品S9。然后，处理S9以去除第十分析物PS-09，并建立第十特定缺乏样品 SlO0然后，处理SlO以去除第十一分析物PS-68，并建立第十一特定缺乏样品S11。然后，处理Sll以去除第十二分析物PS-03，并建立第十二特定缺乏样品S12。然后，处理S12以 去除第十三分析物PS-23，并建立第十三特定缺乏样品S13。从而，该过程后获得了 14个标 准品，S0-S13，其中的分析物(ug/ml)水平见表2。
表 权利要求
1.用于从起始样品建立针对多种分析物之多元标准品的方法，其包括(a)获取包含多种目的分析物的样品；(b)测定每种目的分析物的浓度；(c)建立一种或多种特定缺乏的样品；(d)确定建立多元标准品所需的起始样品和每种特定缺乏样品的量，所述多元标准品 中每种分析物的浓度基本均一；以及(e)混合所述量的所述起始样品和所述特定缺乏样品来建立多元标准品。
2.权利要求1的方法，其中建立所述一种或多种特定缺乏样品包括处理所述起始样品 之一部分以去除至少70%的第一目的分析物。
3.权利要求1的方法，其中建立所述一种或多种特定缺乏样品包括(a)处理所述起始样品之一部分以去除第一目的分析物，从而建立第一特定缺乏样品；以及(b)处理所述第一特定缺乏样品之一部分以去除第二目的分析物，从而建立第二特定 缺乏样品。
4.权利要求3的方法，其中所述第一目的分析物是所述起始样品中浓度最高的分析 物，所述第二目的分析物是所述第一特定缺乏样品中浓度最高的分析物。
5.权利要求3的方法，其中建立所述一种或多种特定缺乏样品还包括(c)处理所述第二特定缺乏样品之一部分以去除第三目的分析物，从而建立第三特定 缺乏样品；以及(d)处理所述第三特定缺乏样品之一部分以去除第四目的分析物，从而建立第四特定 缺乏样品。
6.权利要求5的方法，其中所述第一目的分析物是所述起始样品中浓度最高的分析 物，所述第二目的分析物是所述第一特定缺乏样品中浓度最高的分析物，所述第三目的分 析物是所述第二特定缺乏样品中浓度最高的分析物，所述第四目的分析物是所述第三特定 缺乏样品中浓度最高的分析物。
7.权利要求2的方法，其中所述处理包括物理去除所述分析物或者中和所述分析物。
8.权利要求7的方法，其中所述物理去除所述分析物包括将该分析物固定在固体支持 物上。
9.权利要求7的方法，其中所述中和所述分析物包括向该分析物提供消除该分析物之 反应性的靶分子。
10.权利要求2的方法，其中所述起始样品包含至少3种目的分析物。
11.权利要求1的方法，其中所述起始样品是血液样品。
12.权利要求1的方法，其中至少一种目的分析物是抗体。
13.权利要求1的方法，其中所述多元标准品中的每种分析物具有0.5 1. 5的实际浓 度与目标浓度之比。
14.权利要求1的方法，其还包括制备所述多元标准品的一系列稀释物。
15.权利要求1的方法，其中建立一种或多种特定缺乏样品包括(a)鉴定出具有离群值浓度的一种或多种目的分析物；以及(b)处理所述起始样品之一部分以去除所述一种或多种具有离群值浓度的目的分析物的至少70%，从而建立一种或多种特定缺乏样品。
16.用于从多种起始样品建立针对多种分析物之多元标准品的方法，其包括(a)获取包含多种目的分析物的多种起始样品；(b)测定每种起始样品中每种目的分析物的浓度；(c)建立一种或多种特定缺乏样品；(d)确定建立多元标准品所需的每种特定缺乏样品的量，所述多元标准品中每种分析 物具有期望的浓度；以及(e)混合所述量的起始样品和特定缺乏样品以建立多元标准品。
17.权利要求16的方法，其中建立所述一种或多种特定缺乏样品包括处理至少一种起 始样品的一部分以去除至少一种目的分析物的至少70%。
18.权利要求16的方法，其中建立所述一种或多种特定缺乏样品包括(a)处理第一起始样品之一部分以去除第一目的分析物，从而建立第一特定缺乏样品；以及(b)处理第二起始样品之一部分以去除第二目的分析物，从而建立第二特定缺乏样品。
19.权利要求18的方法，其中所述第一目的分析物是所述第一起始样品中浓度最高的 分析物，所述第二目的分析物是所述第二起始样品中浓度最高的分析物。
20.权利要求16的方法，其中所述多元标准品从至少5种起始样品建立。
21.权利要求16的方法，其中建立所述一种或多种特定缺乏样品包括(a)鉴定出具有离群值浓度的一种或多种目的分析物；以及(b)处理至少一种起始样品的一部分以去除具有离群值浓度之一种或多种目的分析物 的至少70%，从而建立一种或多种特定缺乏样品。
全文摘要
本发明提供了用于建立针对多元分析物之标准品的方法，其包括处理样品之一部分使基本上去除目的分析物以产生一系列特定缺乏样品；以及确定和混合适当量的所述系列特定缺乏样品以建立标准品。所述分析物可以是待测量的任何物质。
文档编号G01N1/38GK102066899SQ200980123726
公开日2011年5月18日 申请日期2009年4月22日 优先权日2008年4月23日
发明者克尔德·索伦森, 帕特里夏·赫伯特 申请人:卢米耐克斯公司