专利名称：藁本内酯的定量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种以替代对照品对藁本内酯成分进行定量检测的方法。
背景技术：
对照品是药品质量评价和监督检验工作的关键。在实际工作中，因有些对照品本 身价格昂贵，检验成本很高，而有些对照品又由于不稳定而无法提供，这些都影响了对药品 含量的测定，导致药品质量难以控制，是影响药品质量的评价和监督检验的一个重要因素。藁本内酯是常用中药当归、川芎等挥发油的主要有效成分。藁本内酯纯品由于其 稳定性差，不能作为国家法定含量测定用对照品对藁本内酯进行定量检测。为解决类似问题，谢元超等人在“替代对照品法用于丹参和复方丹参片含量测 定的研究”中曾提出了一种采用替代对照品进行含量测定的方法(药物分析杂志，2007， 27(4) :497)。其基本原理是，采用测定替代对照品相对于对照品的“相对校正因子”的方法， 即用由真实对照品与替代对照品检测得到“相对校正因子”(f)
校正因子(./) 然后用替代对照品结合校正因子对被测样品成分的含量进行检测的方法进行药 品质量控制。上述式中Ai为替代对照品的峰面积为真实对照品的峰面积而为替代对 照品的浓度；C；为真实对照品的浓度。该方法用于检测丹参和复方丹参片中丹酚酸B含量 时，采用高效液相色谱方法，分别配制一定浓度的真实对照品和替代对照品的溶液，在一定 的色谱条件下，以进样量为横坐标，以峰面积A为纵坐标，分别测定二者的标准曲线，将标 准曲线的截距校正为0后，用两条标准曲线斜率K的比值求得校正因子(f)。实际测定样品 时，即可用替代对照品进行测定，被测成分浓度C
_7] c = 1 x-"'a77CT'-"式中A为被测成分峰面积，由被测成分的浓度即可计算出该成分在被测样品中的 含量。该研究结果还表明，在该方法用于检测丹参和复方丹参片中丹酚酸B含量时，校正因 子(f) 一般可不受色谱仪器、流动相条件及被测物溶液配制浓度等因素的影响，具有进一 步研究和探索的价值。
发明内容
针对上述情况，本发明经进一步研究和试验，提供一种以替代对照品进行藁本内 酯的定量检测方法，以解决由于藁本内酯纯品稳定性差不能作为国家法定含量测定用对照 品对藁本内酯进行定量检测的问题，实现对含藁本内酯成分药物的定量化检测和监控，保 证药品质量。经本发明人的研究发现，丁苯酞(butylphthalide)(式II )与藁本内酯 (Iigustilide)(式I )均属于苯酞内酯类成分，具有相似的化学结构、理化性质和色谱行为，且丁苯酞的结构稳定，已是国家法定的对照品，容易获得，价格低廉，因此，以丁苯酞作 为藁本内酯的替代对照品是合适的。
本发明的藁本内酯定量检测方法，是以丁苯酞为替代对照品，采用高效液相色谱 法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比(30 70) (70 30)的甲醇-水 或(30 60) (70 40)乙腈-水为流动相，检测波长为208 334nm，分别测定被测样 品中藁本内酯和替代对照品丁苯酞的峰面积A和Ai，根据丁苯酞的浓度Ci，用校正因子f 按下述公式计算被测成分藁本内酯的浓度C C - / X^T"其中，校正因子f = 0. 8572 1. 3283。在上述方法基础上，进一步的深入的研究还发现，本发明上述检测方法中优选方 式有流动相溶剂采用为所说的甲醇-水时，藁本内酯的检测波长可为208 334nm，丁 苯酞的检测波长可为228士4nm，校正因子f = 0. 8776 1. 3283。例如流动相溶剂采用体积比为50 50的甲醇-水，藁本内酯检测波长为330nm，丁苯 酞检测波长为228nm时，校正因子为f = 1. 0887 ；流动相溶剂采用体积比为30 70的甲醇-水，藁本内酯的检测波长为280nm，丁 苯酞的检测波长为228nm时，校正因子为f = 1. 3283。流动相溶剂采用为所说的乙腈-水时，藁本内酯的检测波长可以为208 334nm， 丁苯酞的检测波长可以为228士4nm，校正因子f = 0. 8572 1. 3009。例如流动相溶剂采用为体积比40 60的乙腈-水，藁本内酯的检测波长为330nm，丁 苯酞的检测波长为228nm时，校正因子f= 1.0811 ；流动相溶剂采用为体积比的30 70乙腈-水，藁本内酯检测波长为280nm，丁苯 酞检测波长为228nm时，校正因子为f = 1. 3009。大量的实验结果验证表明，对含藁本内酯成分样品的含量，采用本发明上述方法 与以新鲜制备的藁本内酯为对照品的方法检测结果一致，检测结果稳定。以下通过实施例的具体实施方式
再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但 不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想 情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明 的范围内。
具体实施例方式实施例1川芎药材中藁本内酯成分的定量检测
按照中国药典2010年版一部附录VI D规定的高效液相色谱法测定。1. 1色谱条件和系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(50 50)为流动相；流速为 1. 0ml/ml ；柱温为35°C，藁本内酯检测波长为330nm，丁苯酞检测波长为228nm ；理论板数按 藁本内酯峰计算应不低于3000。1. 2溶液的配制对照品溶液配制精密称取新鲜制备的藁本内酯对照品11. 27mg(以藁本内酯 计)，置25ml量瓶，用无水乙醇溶解并定量稀释制成每ml中含藁本内酯45. OSyg的对照品 溶液。精密称取替代对照品丁苯酞10. 36mg，置25ml量瓶，用无水乙醇溶解并定量稀释制成 每ml中含丁苯酞41. 44 yg的替代对照品溶液。供试品溶液的配制取川芎药材粉末(过四号筛)约0. 2g，精密称定，置50ml量 瓶中，加甲醇约45ml，超声处理(功率100W，频率40kHz) 30分钟，放冷，加甲醇定容至刻度， 摇勻，滤过，取续滤液，即得。1.3线性关系考察取上述藁本内酯对照品溶液(0. 04508mg/ml)和丁苯酞替代对照品溶液 (O. 04144mg/ml)，按“1. 1”项下色谱条件用自动进样器分别进样1、2、4、6、8、10 μ 1，以进样 量X为横坐标，以峰面积Y为纵坐标，分别测定对照品和替代对照品的标准曲线。结果表明， 藁本内酯进样量X ( μ g)在0. 04508 0. 4508 μ g范围内与其峰面积Y线性关系良好，回归 方程为Y = 2694. 25Χ+2. 24，r = 0. 9999。丁苯酞进样量 Χ(μ g)在 0. 04144 0. 4144 μ g 范围内与其峰面积Y线性关系良好，回归方程为γ = 2947. 41Χ-2. 03，r = 0. 9999。1.4校正因子f值测定将上述标准曲线的截距校正为O后，得到标准曲线斜率K，替代对照品与对照品标 准曲线的斜率K值之比即得校正因子f= 1.0887。1. 5 f值测定方法的耐用性考察1. 5. 1仪器波长对f值测定的影响在液相色谱仪上分别在334、332、330、328、326nm波长处测定对照品藁本内酯标 准曲线的斜率K ；在232、230、228、226、224nm波长处分别测定替代对照品丁苯酞标准曲线 的斜率K，计算校正因子见表1。结果表明在同一台高效液相色谱仪上，测定波长在规定波 长处变化士2nm或士4nm，对f影响不大，RSD为0. 56%。表1仪器波长对f值测定的影响
权利要求
藁本内酯的定量检测方法，其特征是以丁苯酞为替代对照品，采用高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比(30～70)∶(70～30)的甲醇 水或(30～60)∶(70～40)乙腈 水为流动相，检测波长为208～334nm，分别测定被测样品中藁本内酯和替代对照品丁苯酞的峰面积A和Ai，根据丁苯酞的浓度Ci，用校正因子f按下述公式计算被测成分藁本内酯的浓度C <mrow><mi>C</mi><mo>=</mo><mi>f</mi><mo>×</mo><mfrac> <mi>A</mi> <mrow><msub> <mi>A</mi> <mi>i</mi></msub><mo>/</mo><msub> <mi>C</mi> <mi>i</mi></msub> </mrow></mfrac> </mrow>其中，校正因子f＝0.8572～1.3283。
2.如权利要求1所述的藁本内酯的定量检测方法，其特征是流动相溶剂为所说的甲 醇-水，藁本内酯的检测波长为208 334nm，丁苯酞的检测波长为228士4nm，校正因子f =0. 8776 1. 3283。
3.如权利要求2所述的藁本内酯的定量检测方法，其特征是所说的流动相溶剂为 50 50的甲醇-水，藁本内酯的检测波长为330nm，丁苯酞的检测波长为228nm，校正因子 f = 1. 0887。
4.如权利要求2所述的藁本内酯的定量检测方法，其特征是所说的流动相溶剂为 30 70的甲醇-水，藁本内酯的检测波长为280nm，丁苯酞的检测波长为228nm，校正因子 f = 1. 3283。
5.如权利要求1所述的藁本内酯的定量检测方法，其特征是流动相溶剂为所说的乙 腈-水，藁本内酯的检测波长为208 334nm，丁苯酞的检测波长为228士4nm，校正因子f =0. 8572 1. 3009。
6.如权利要求5所述的藁本内酯的定量检测方法，其特征是所说的流动相溶剂为 40 60的乙腈-水，藁本内酯的检测波长为330nm，丁苯酞的检测波长为228nm，校正因子 f = 1. 0811。
7.如权利要求5所述的藁本内酯的定量检测方法，其特征是所说的流动相溶剂为 30 70的乙腈-水，藁本内酯的检测波长为280nm，丁苯酞的检测波长为228nm，校正因子 f = 1. 3009。
全文摘要
藁本内酯的定量检测方法。以丁苯酞为替代对照品，采用高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比(30～70)∶(70～30)的甲醇-水或(30～60)∶(70～40)的乙腈-水为流动相，检测波长为208～334nm，分别测定被测样品中藁本内酯和替代对照品丁苯酞的峰面积A和Ai，根据丁苯酞的浓度Ci，用校正因子f按下述公式计算被测成分藁本内酯的浓度C，其中校正因子f＝0.8572～1.3283。实验结果表明，采用本发明方法与以新鲜制备的藁本内酯对照品对藁本内酯含量的检测结果一致，检测结果稳定。
文档编号G01N30/02GK101949899SQ20101025397
公开日2011年1月19日 申请日期2010年8月16日 优先权日2010年8月16日
发明者刘云华, 刘倩伶, 刘玉红, 易进海, 陈燕, 黄志芳 申请人:四川省中医药科学院