专利名称：一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法
技术领域：
本发明涉及一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法。
背景技术：
卡那霉素的发现的确在帮助人类战胜重大疾病方面有巨大的贡献，但药物都是双刃剑，卡那霉素也不例外，它的大范围滥用所导致的副作用已成为一个严峻的社会问题，是人类健康的一大隐患。因此，乳制品中卡那霉素残留一直是令人关注的焦点，各种检测乳制品中卡那霉素残留的方法随之出现，其中试纸条法由于检测时间短、成本低、对实验人员水平要求低，被广泛使用。制作生产检测乳制品卡那霉素试纸条的厂家越来越多，产品的水平参差不齐，但是一直没有一种可以评价试纸条检测有效性的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法，帮助乳制品检测选择合适的卡那霉素试纸条。本发明提供了一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法，包括
a.在经过检测不含有卡那霉素的原料乳中添加不同量的卡那霉素，得到不同卡那霉素浓度的待测乳，使用卡那霉素试纸条检测各待测乳，根据卡那霉素试纸条的显色反应得到待测乳中卡那霉素的最低浓度检测限值；
b.取多份原料乳，分别向原料乳中添加卡那霉素，制备得到卡那霉素浓度为最低浓度检测限值的多份限度乳，向各限度乳中分别添加干扰物质，使用卡那霉素试纸条检测各添加干扰物质后的限度乳，根据卡那霉素试纸条的显色反应得到限度乳中各干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；
c.取多份原料乳，向各原料乳中分别添加干扰物质，使用卡那霉素试纸条检测各添加干扰物质后的原料乳，根据卡那霉素试纸条的显色反应得到原料乳中各干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；
d.取同一厂商的同一生产批次的不同卡那霉素试纸条检测限度乳，观测同一厂商同一生产批次的各卡那霉素试纸条的检测结果；
e.取同一厂商的同一生产批次的不同卡那霉素试纸条检测各待测乳，观测同一厂商同一生产批次的各卡那霉素试纸条的检测结果；
f.取同一厂商的不同生产批次的不同卡那霉素试纸条检测限度乳，观察同一厂商不同生产批次的各卡那霉素试纸条的测试结果；
g.取同一厂商的不同生产批次的不同卡那霉素试纸条检测各待测乳，观察同一厂商不同生产批次的各卡那霉素试纸条的测试结果。在一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法的再一种示意性的实施方式中，a步骤中，待测乳中卡那霉素的浓度分别为0、75、150、300、750和1500ug/kg。在一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法的另一种示意性的实施方式中，b和c步骤中，干扰物质为三聚氰胺、过氧化氢、抗生素、L一轻脯氨酸、尿素、解抗剂和硫氰酸钠。在一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法的又一种示意性的实施方式中，d和f步骤中，用卡那霉素试纸条检测限度乳进行10次重复测试。在一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法的又一种示意性的实施方式中，f和g步骤中，生产批次分别为生产日期当天的批次，1/2保质期的批次和保质期日期当天的批次。一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法具有以下特点 1.构思严谨。2.检测时间短，含样品处理时间，共计15分钟。3.检测无需额外仪器设备，检测方法简单。4.结果判断容易。
具体实施例方式一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法，包括
a.在经过检测不含有卡那霉素的原料乳中添加不同量的卡那霉素，得到不同卡那霉素浓度的待测乳，使用卡那霉素试纸条检测各待测乳，根据卡那霉素试纸条的显色反应得到待测乳中卡那霉素的最低浓度检测限值；
b.取多份原料乳，分别向原料乳中添加卡那霉素，制备得到卡那霉素浓度为最低浓度检测限值的多份限度乳，向各限度乳中分别添加干扰物质，使用卡那霉素试纸条检测各添加干扰物质后的限度乳，根据卡那霉素试纸条的显色反应得到限度乳中各干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；
c.取多份原料乳，向各原料乳中分别添加干扰物质，使用卡那霉素试纸条检测各添加干扰物质后的原料乳，根据卡那霉素试纸条的显色反应得到原料乳中各干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；
d.取同一厂商的同一生产批次的不同卡那霉素试纸条检测限度乳，观测同一厂商同一生产批次的各卡那霉素试纸条的检测结果；
e.取同一厂商的同一生产批次的不同卡那霉素试纸条检测各待测乳，观测同一厂商同一生产批次的各卡那霉素试纸条的检测结果；
f.取同一厂商的不同生产批次的不同卡那霉素试纸条检测限度乳，观察同一厂商不同生产批次的各卡那霉素试纸条的测试结果；
g.取同一厂商的不同生产批次的不同卡那霉素试纸条检测各待测乳，观察同一厂商不同生产批次的各卡那霉素试纸条的测试结果。
步骤a灵敏度(检测限度)测试
通过酶联免疫法检测筛选出不含有卡那霉素的原料乳。根据中国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中对于奶制品中卡那霉素的最高含量要求一150ug/ kg,向原料乳中添加不同量的卡那霉素，得到卡那霉素浓度分别为0、75、150、300、750和 1500ug/kg的待测乳。
检测步骤
1.吸取Iml待测乳于2ml离心管中，2000G离心10分钟，去除上层脂肪，得到处理乳；
2.吸取处理乳IOOul于2ml离心管中，再加入IOOul样品稀释液(PBS缓冲液，具体配方如下磷酸二氢钾(KH2P04) 0. 24克，磷酸氢二钠(Na2HP04) 3. 63克，氯化钠(NaCl) 8克， 氯化钾(KCl) 0. 2克，加水定容到1L)于离心管中，混勻得到稀释乳；
3.吸取IOOul稀释乳加入试纸条加样孔中，3-5分钟判读结果。结果判断
读取结果时，不可以从试纸条侧面或倒置试纸条进行结果观察。检测结果分为 阴性τ线(检测线，靠近滴入样品溶液的一端)比C线(对照线)深或一样深，判断为阴性，表示样品中卡那霉素药物浓度低于试纸最低检测限。阳性Τ线比C线浅，或T线无显色，判断为阳性，表示样品中卡那霉素浓度高于试纸最低检测限；
无效c线未显色，表明不正确的操作过程或检测条已失效。在此情况下，应用新的检测条重新测试。检测结果
分别对由卡那霉素浓度分别为0、75、150、300、750和1500ug/kg的待测乳制得的稀释乳测试，发现对应于卡那霉素在待测乳中的含量为150ug/kg (即稀释乳中的含量为75ug/ kg)时为转折点，即为卡那霉素的最低浓度检测限值，大于此浓度时，卡那霉素试纸条上的T 线均比C线浅或无色，由此得到待测乳中卡那霉素的最低浓度检测限值为150ug/kg，满足中国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》对卡那霉素含量测试灵敏度的要求。如果卡那霉素试纸条在卡那霉素含量为150ug/kg仍然现实为阴性，说明此种类型的卡那霉素试纸条灵敏度不足。
如下的步骤b和步骤c涉及卡那霉素试纸条有效性中的特异性测试。步骤b
取原料乳，向原料乳中添加卡那霉素，制备得到卡那霉素浓度为150ug/kg的多份限度乳，向多份限度乳中分别添加干扰物质，这些干扰物质是三聚氰胺、过氧化氢、抗生素、L-羟脯氨酸、尿素、解抗剂和硫氰酸钠，其中，各限度乳中这些干扰物质的浓度分别为 过氧化氢30mg/kg ；
抗生素青霉素如g/kg+四环素100ug/kg+磺胺二甲基嘧啶100ug/kg +氯霉素0. 3ug/ kg+链霉素200ug/kg+庆大霉素200 ug/kg (以上抗生素含量均达到或超过国家标准规定的限量)；
L-羟脯氨酸10 mg/kg ； 尿素500 mg/kg ； 解抗剂4U/ml ； 硫氰酸钠0. 5 mg/kg。以上干扰物质浓度的选取都参考了相关国家标准对与这些干扰物质在乳制品中浓度含量限值的规定。结果判断同上述步骤a中的结果判断过程。
检测结果
分别含有三聚氰胺、过氧化氢、抗生素、L-羟脯氨酸、尿素、解抗剂和硫氰酸钠的干扰乳中，卡那霉素试纸条的显示结果均为阳性，说明干扰乳中干扰物质并未与卡那霉素试纸条发生干涉反应而改变测试结果，此种卡那霉素试纸条可靠；如果卡那霉素试纸条的现实结果出现阴性，说明干扰乳中干扰物质并与卡那霉素试纸条发生干涉反应而改变测试结果， 此种卡那霉素试纸条不可靠。步骤c
取多份原料乳，向各份原料乳中分别添加干扰物质，这些干扰物质是三聚氰胺、过氧化氢、抗生素、L-羟脯氨酸、尿素、解抗剂和硫氰酸钠(这些干扰物质是目前乳制品中最常见的添加物质)，制备得到干扰乳(每个干扰乳中只含有一种干扰物质)，其中，各干扰乳中上述干扰物质的浓度为 过氧化氢30mg/kg ；
抗生素青霉素如g/kg+四环素100ug/kg+磺胺二甲基嘧啶100ug/kg +氯霉素0. 3ug/ kg+链霉素200ug/kg+庆大霉素200 ug/kg (以上抗生素含量均达到或超过国家标准规定的限量)；
L-羟脯氨酸10 mg/kg ； 尿素500 mg/kg ； 解抗剂4U/ml ； 硫氰酸钠0. 5 mg/kg。以上干扰物质浓度的选取都参考了相关国家标准对与这些干扰物质在乳制品中浓度含量限值的规定。结果判断同上述步骤a中的结果判断过程。检测结果
分别含有三聚氰胺、过氧化氢、抗生素、L-羟脯氨酸、尿素、解抗剂和硫氰酸钠的限度乳中，卡那霉素试纸条的显示结果均为阳性，说明限度乳中干扰物质并未与卡那霉素试纸条发生干涉反应而改变测试结果，此种卡那霉素试纸条可靠；如果卡那霉素试纸条的现实结果出现阴性，说明干扰乳中干扰物质并与卡那霉素试纸条发生干涉反应而改变测试结果， 此种卡那霉素试纸条不可靠。如下的步骤d、e、f和g涉及卡那霉素试纸条有效性中的稳定性测试。其中步骤d 和e确定批内稳定性；步骤f和g确定批间稳定性。步骤d使用同一厂商生产的同一批次的卡那霉素试纸条，对同一卡那霉素浓度为 150ug/kg的限度乳反复进行10次实验，即取10张同一厂商生产的同一批次的卡那霉素试纸条，分别检测同一卡那霉素浓度为150ug/kg的限度乳并观察试纸条的颜色。步骤e使用同一厂家生产的同一批次的卡那霉素试纸条，对步骤a中的各卡那霉素浓度待测乳做平行实验，即对同一浓度水平的待测乳使用不同的试纸条多次检测并观察其的颜色。结果判断同上述步骤a中的结果判断过程。检测结果
如果步骤d的10次检测对限度乳的测试结果均为阳性，且步骤e中对于不同卡那霉素浓度的待测乳在同一浓度水平上的测试结果一致，则卡那霉素试纸条的同一生产批次内的
一致性合格。步骤f使用同一厂家生产的不同批次的卡那霉素试纸条，例如生产日期当天的批次，1/2保质期的批次和保质期日期当天的批次对同一卡那霉素浓度为150ug/kg的限度乳反复进行10次实验，即取10张同一厂商生产的不同批次的卡那霉素试纸条，分别检测同一卡那霉素浓度为150ug/kg的限度乳并观察试纸条的颜色。步骤g使用同一厂家生产的不同批次的卡那霉素试纸条，例如生产日期当天的批次，1/2保质期的批次和保质期日期当天的批次，对步骤a中的各卡那霉素浓度待测乳做平行测试实验，即使用不同批次的试纸条对同一浓度水平的待测乳分别多次检测并观察试纸条的颜色。结果判断同上述步骤a中的结果判断过程。检测结果
如果步骤f的测试结果均为阳性，且步骤g中对于不同卡那霉素浓度的待测乳在同一浓度水平上的测试结果一致，则卡那霉素试纸条的生产批次间的一致性合格。—种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法具有以下特点 1.构思严谨。2.检测时间短，含样品处理时间，共计15分钟。3.检测无需额外仪器设备，检测方法简单。4.结果判断容易。因此，该卡那霉素快速检测试纸条符合乳制品企业检测卡那霉素需要，可以进行使用。上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明， 它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法，包括a.在经过检测不含有卡那霉素的原料乳中添加不同量的卡那霉素，得到不同卡那霉素浓度的待测乳，使用卡那霉素试纸条检测各所述待测乳，根据所述卡那霉素试纸条的显色反应得到所述待测乳中卡那霉素的最低浓度检测限值；b.取多份所述原料乳，分别向所述原料乳中添加卡那霉素，制备得到卡那霉素浓度为所述最低浓度检测限值的多份限度乳，向各所述限度乳中分别添加干扰物质，使用所述卡那霉素试纸条检测各添加所述干扰物质后的所述限度乳，根据所述卡那霉素试纸条的显色反应得到所述限度乳中各所述干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；c.取多份所述原料乳，向各所述原料乳中分别添加干扰物质，使用所述卡那霉素试纸条检测各添加所述干扰物质后的所述原料乳，根据所述卡那霉素试纸条的显色反应得到所述原料乳中各所述干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；d.取同一厂商的同一生产批次的不同所述卡那霉素试纸条检测所述限度乳，观测同一厂商同一生产批次的各所述卡那霉素试纸条的检测结果；e.取同一厂商的同一生产批次的不同所述卡那霉素试纸条检测各所述待测乳，观测同一厂商同一生产批次的各所述卡那霉素试纸条的检测结果；f.取同一厂商的不同生产批次的不同所述卡那霉素试纸条检测所述限度乳，观察同一厂商不同生产批次的各所述卡那霉素试纸条的测试结果；g.取同一厂商的不同生产批次的不同所述卡那霉素试纸条检测各所述待测乳，观察同一厂商不同生产批次的各所述卡那霉素试纸条的测试结果。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述步骤a中，所述待测乳中卡那霉素的浓度分别为 0、75、150、300、750 和 1500ug/kg。
3.如权利要求1所述的方法，其中b和c步骤中，所述干扰物质为三聚氰胺、双氧水、 抗生素、L一轻脯氨酸、尿素、解抗剂和硫氰酸钠。
4.如权利要求1所示的方法，其中d和f步骤中，用所述卡那霉素试纸条检测所述限度乳进行10次重复测试。
5.如权利要求1所示的方法，其中f和g步骤中，所述生产批次分别为生产日期当天的批次，1/2保质期的批次和保质期日期当天的批次。
全文摘要
一种评价乳制品检测中卡那霉素试纸条有效性的方法，包括a.根据卡那霉素试纸条的显色反应得到待测乳中卡那霉素的最低浓度检测限值；b.根据述卡那霉素试纸条的显色反应得到限度乳中各干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；c.根据卡那霉素试纸条的显色反应得到原料乳中各干扰物质对卡那霉素浓度检测结果的影响；d.观测同一厂商同一生产批次的各所述卡那霉素试纸条的检测结果；e.观测同一厂商同一生产批次的各所述卡那霉素试纸条的检测结果；f.观察同一厂商不同生产批次的各所述卡那霉素试纸条的测试结果；g.观察同一厂商不同生产批次的各所述卡那霉素试纸条的测试结果。
文档编号G01N33/558GK102478575SQ20101056373
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月29日 优先权日2010年11月29日
发明者乌尼尔, 刘卫星, 刘志楠, 刘晓川, 喻东威, 李梅, 杨绍谊, 赵源 申请人:内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司