专利名称：一种含有几种农药残留的中草药样品测定前的处理方法
技术领域：
本发明属于农药残留的测定技术领域，涉及含有氨基甲酸酯类农药残留的中草药 样品的测定方法，更具体的说是含有15种氨基甲酸酯类农药残留的中草药样品测定前的 处理方法。
背景技术：
农药残留指的是在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬 菜、果品、畜产品、水产品中以及土壤和水体中的现象。农药残留问题是随着农药大量生产 和广泛使用而产生的。目前使用的农药，有些在较短时间内可以通过生物降解成为无害物 质，而一些有机氯类农药却难以降解，是残留性强的农药。蔬菜农药残留超标，会直接危及 人体的神经系统和肝、肾等重要器官。同时残留农药在人体内蓄积，超过一定量度后会导致 一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至会诱发血管疾病、糖尿病和癌症等。由于农药残留 对人类和生物危害很大，各国对农药的施用都进行严格的管理，并对食品中农药残留容许 量作了规定。中医药是我们中华民族的瑰宝，有着几千年的悠久历史。我国现有中药资源12807 种，其中药用植物11146种，药用动物1581种，药用矿物80种，中药材种植面积近600万亩， 产量超过35万吨，这些丰富的天然药用资源为我国的中药生产提供了丰富的原材料。然而 在中药生产中出现的质量安全问题，制约了我国中药的发展。中药的质量安全直接关系人 民群众的日常生活和生命安全，关系社会和谐稳定。人民群众要将健康掌握在自己手中，增 强自我保护意识。超过最低限度的重金属及砷盐、黄曲霉素、农药残留、微生物等有毒有害 物质，会对给人体的免疫系统、神经系统、生殖系统、骨骼造血功能、血管和消化系统等人体 器官造成巨大的伤害。中药材作为一种特殊食品为患者及体弱者所服用，服用时间长，更易 造成蓄积中毒。中草药样品中含有氨基甲酸酯类农药等多种残留的农药杂质。氨基甲酸酯类农药是一类具有良好杀虫效果的广谱性农药，因其高效、低毒等特 点而被国内外广泛应用于农作物种植和中药材栽培等过程中病虫害的防治。与此同时，这 类药产生的水环境污染、农药残留超标问题也已引起人们的广泛关注。关于氨基甲酸酯类农药，目前报道的检测方法有气相色谱法(GC)、气相色谱-质 谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)以及液相色谱质谱联用法(LC-MS)等。由于该 类药物具有极性强、不易挥发、热不稳定等特点，不适合用GC法和GC-MS法检测。虽然HPLC 柱后衍生化法是经典方法，但同时检测多种组分残留时色谱分离难度较大，灵敏度差，且不 能进行可靠的定性分析。而LC-MS技术集HPLC的高分离能力与MS的高灵敏度、高选择性和 极强的定性能力等众优点于一身，尤其是超高效液相色谱-串联质谱联用技术(UPLC-MS/ MS)，具有分析范围广、分离能力强、灵敏度高、分析速度快等特点，非常适用于氨基甲酸酯 类农药的分析。近年来，UPLC-MS/MS被越来越多的应用于农产品中氨基甲酸酯类农药残留 的测定，但其在中药材中的应用研究还很少。目前，中药材中氨基甲酸酯类农药的检测方法 多是采用HPLC法，而且前处理方法繁琐，检测的药材品种单一。
是否能准确的检测出微量的残留其关键是样品的前处理方法，样品处理的好，可 以减少杂质干扰，减少杂质对仪器的污染，提高分析结果的灵敏度和准确度。本专利所建立 的样品前处理方法为我单位自行研制的方法，国内公开文献没有查到相关报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足提供一种含有氨基甲酸酯类农药 残留的中草药样品测定前的处理方法，按如下的步骤进行(1)准确称取粉碎的中草药样品2g，于离心管中，加入20-30mL乙腈，涡旋2min， 4000rpm离心5min，取上清液，残渣用10_20mL乙腈重复提取一次，涡旋2min，4000rpm离心 5min，合并上清液；(2)将提取液在40°C下蒸干，残渣用体积比20 80的丙酮-正己烷5mL溶解，待 净化；(3)将PSA固相萃取柱先用6mL丙酮，6mL丙酮-正己烷体积比20 80活化，并 将PSA柱用固相萃取柱转接头与25mL注射器相连；(4)将样品液转移至注射器中，再用体积比，1/4的丙酮/正己烷洗涤样品瓶，每次 5mL，洗两次，并将洗涤液全部转移至注射器中，收集所有流出液；待样品液全部流干后，再 用体积比50/50的丙酮/正己烷30mL洗脱，合并流出液；将其在40°C下蒸干后，用体积比 40/60的甲醇/0. 1 %甲酸水2mL复容，并过0. 22 μ m滤膜进样，采用超高效液相-质谱/质 谱联用仪测定。本发明结合固相萃取样品处理技术，克服了中草药样品中复杂的基质干扰问题， 首次建立了中药材中15种氨基甲酸酯类农药的UPLC-MS/MS检测方法。适用于各种中药材 中多种氨基甲酸酯类农药同时测定。特别是人参、黄芪、白菊、决明子等中药材可以测定本 身含有氨基甲酸酯类农药的微量数值，为中药材的合理正确使用提供了有力的依据。本发明通过15种氨基甲酸酯类农药添加回收率研究，采用超高效液相-质谱/质 谱联用仪(UPLC/MS/MQ法法，建立简捷可行的15种氨基甲酸酯类农药残留分析方法。本发明测定的保留时间为2. 38-10. 04min,定量限2 10 μ g/kg，检出限为 0. 2-2. 5μ g/kg，回收率为 60% 95%。本发明的更加详细的处理方法及测定条件如下1、仪器条件1.1色谱条件色谱柱AcquityBEH C18 O. ImmX 100mm，1. 7 μ m)；进样量10 μ L ；柱温30°C。 以乙腈(A相)和0.1%甲酸水溶液(B相)为流动相进行线性梯度洗脱。梯度洗脱程序 0 10min，A相的比例由10%线性变化至90%,10- 12min，A相的比例保持10%;流速为 0. 2mL/min。1.2质谱条件电离模式ESI⑴；毛细管电压3.01^;离子源温度1101；脱溶剂气温度 3500C ；脱溶剂气流量550L/h ；锥孔反吹气流量50L/h ；检测方式多反应监测扫描模式 (MRM)；质谱采集参数见表1。表115种农药的质谱检测条件
权利要求
1. 一种含有氨基甲酸酯类农药残留的中草药样品测定前的处理方法，其特征在于按如 下的步骤进行(1)准确称取粉碎的中草药样品2g，于离心管中，加入20-30mL乙腈，涡旋2min， 4000rpm离心5min，取上清液，残渣用10_20mL乙腈重复提取一次，涡旋2min，4000rpm离心 5min，合并上清液；(2)将提取液在40°C下蒸干，残渣用体积比20/80的丙酮/正己烷5mL溶解，待净化；(3)将PSA固相萃取柱先用6mL丙酮冲洗，然后再用6mL丙酮/正己烷体积比20/80活化；(4)将样品液转移至注射器中，再用体积比1/4的丙酮/正己烷洗涤，并将洗涤液全部 转移至注射器中，收集所有流出液；待样品液全部流干后，再用体积比50 50的丙酮-正 己烷30mL洗脱，合并流出液；将其在40°C下蒸干后，用体积比40 60的甲醇-0. 1 %甲酸 水2mL复容，并过0. 22 μ m滤膜进样，采用超高效液相-质谱/质谱联用仪测定。
全文摘要
本发明公开了一种含有氨基甲酸酯类农药残留的中草药样品测定前的处理方法，它是准确称取粉碎的中草药样品2g，于离心管中，加入30ml乙腈，涡旋2min，4000rpm离心5min，取上清液，残渣用10-20ml乙腈重复提取一次，涡旋2min，4000rpm离心5min，合并上清液；将提取液在40℃下蒸干，残渣用体积比20∶80的丙酮-正己烷5ml溶解，待净化；将PSA固相萃取柱先活化，并将PSA柱用固相萃取柱转接头与25ml注射器相连；用甲醇-0.1％甲酸水2ml复容，并过0.22μm滤膜进样，采用超高效液相-质谱/质谱联用仪测定。本发明公开的处理方法，测定速度快，设备简单、测定成本低，准确度、稳定性和可靠性高。
文档编号G01N30/12GK102121927SQ20101059720
公开日2011年7月13日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者刘磊, 张玉婷, 李娜, 李辉, 邵辉, 郭永泽 申请人:天津市农业科学院中心实验室