专利名称：血液分析装置及血液分析方法
技术领域：
本发明涉及一种用于对血样进行光学测定，并将血样中所含血细胞分为数类的血液分析装置及血液分析方法。技术背景
健康人末梢血的白细胞中有以下种类的细胞淋巴细胞、单核细胞、嗜中粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞。淋巴细胞又可以大致分为3个子类别(T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK淋巴细胞)。B淋巴细胞是来源于骨髓的淋巴细胞，其表面有免疫球蛋白。B淋巴细胞分化为浆细胞并产生抗体等，在人体的免疫机能中发挥着重要作用。T淋巴细胞是来源于胸腺的淋巴细胞，其表面没有免疫球蛋白。众所周知，T淋巴细胞在调节免疫系统中发挥着重要作用，T 淋巴细胞出故障时会使得免疫不全、自身免疫病、过敏反应及增生性免疫疾病等频发。如上所述，B淋巴细胞和T淋巴细胞与免疫系统关联性强。因此，通过检查B淋巴细胞和T淋巴细胞的增减情况就能掌握免疫机能的变化。此外，B淋巴细胞和T淋巴细胞以一定的比例存在，但也会因为疾病的产生而出现变化。因此，通过测定B淋巴细胞和T淋巴细胞的比例，能获得有关是否患有疾病的有用信息。会出现B淋巴细胞增加的疾病如有多发性骨髓瘤、B淋巴细胞慢性淋巴白血病、传染性单核细胞增多症、伯基特氏淋巴瘤等。会出现B淋巴细胞减少的疾病如有AIDS、晚期癌、霍奇金淋巴瘤、无淋巴细胞低免疫球蛋白血症、无免疫球蛋白血症、网状细胞发育不全、 麻疹、水痘及疱疹等。会出现T淋巴细胞增加的疾病如有ATL、塞扎里综合征、传染性单核细胞增多症、 无免疫球蛋白血症等。会出现T淋巴细胞减少的疾病如有AIDS、晚期癌、以及淋巴细胞低免疫球蛋白血症等。在用流式细胞仪对白细胞进行分类的分类方法中，已有一种方法(特许(日本专禾IJ)文献1)用含有阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂的溶血剂、以及用于染色核酸的荧光色素对血样进行处理，并将白细胞分为5类进行计数。但特许(日本专利)文献1中完全没有关于B淋巴细胞和T淋巴细胞的测定的内容。此外，在对淋巴细胞进行分类、计数的技术中，已知有用流式细胞仪对荧光标记抗体标记后的淋巴细胞进行分类、计数的技术(特许(日本专利)文献2)。先行技术文献 特许(日本专利)文献
特许(日本专利)文献1 特开平10-319010 特许(日本专利)文献2 特开昭56-16872。发明概要 本发明要解决的课题
然而，所述特许(日本专利)文献2中所公开的技术在测定中需要使用高价的荧光标记抗体，存在着测定成本高、以及操作复杂费时的问题。
本发明的目的在于提供一种血液分析装置及血液分析方法，在所述装置和方法中，无需使用高价的标记荧光抗体即可获得B淋巴细胞和T淋巴细胞的相关信息。解决问题的方法
技术领域：
本发明的一种情形态中的血液分析装置包括用于供应血样的血样供应部件；试样制备部件，该试样制备部件混合所述血样供应部件供应的血样、溶血剂和用于染色核酸的荧光色素，在不使用荧光标记抗体的情况下制备测定试样；光源，用于向所述试样制备部件制备的测定试样照射光；第一检测器，用于检测所述光源光照下的测定试样发出的荧光；第二检测器，用于检测所述光源光照下的测定试样发出的散射光；信息处理部件，根据所述第一检测器检测出的荧光强度和所述第二检测器检测出的散射光强度，获取淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据获取的淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息；输出部件，用于输出所述信息处理部件获取的B 淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。在本形态中，所述信息处理部件还可以获取以下信息，将其作为B淋巴细胞数和T 淋巴细胞数比例的相关信息表示B淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞的总数中所占比例的数值、表示T淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞的总数中所占比例的数值、表示 B淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例在一定范围内的信息、表示T淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞的总数中所占比例在一定范围内的信息、或表示T淋巴细胞数和B淋巴细胞数的比例有无异常的信息。在所述形态中，所述信息处理部件还可以获取所述淋巴细胞荧光强度的代表值， 将其作为所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据所获取的所述代表值获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件还可以获取所述淋巴细胞荧光强度的散布度， 并将其作为所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据获取的所述散布度，获取B 淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件还可以获取表示所述淋巴细胞荧光强度分布的偏斜的数值，并将其作为所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据获取的所述表示分布的偏斜的数值，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件还可以获取淋巴细胞荧光强度的分布峰度或偏度，并将其作为表示所述分布的偏斜的数值，根据获取的所述峰度或偏度，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件也可以将所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标和一定阈值进行比较，以此判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例是否异常，在所述信息处理部件判断所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常时，所述输出部件输出表示所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常的信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件也可以根据所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取表示B淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中的比例的数值，通过比较获取的所述数值和一定的阈值来判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例是否异常，当所述信息处理部件判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常时，所述输出部件输出用于表示所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常的信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件也可以根据所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取表示T淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例的值，通过比较获取的所述数值和一定阈值来判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例是否异常。当所述信息处理部件判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常时，所述输出部件输出用于表示B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常的信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T 淋巴细胞数的比例的相关信息。在所述形态中，所述信息处理部件根据所述第一检测器检测出的荧光强度和所述第二检测器检测出的散射光强度，将所述测定试样中所含淋巴细胞与其他白细胞区加以区分，获取淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标。在所述形态中，所述信息处理部件通过区分所述测定试样中所含淋巴细胞和其他白细胞来对白细胞进行分类，所述输出部件输出所述信息处理部件的白细胞分类结果。在所述形态中，所述信息处理部件将所述测定试样中所含白细胞分为包括淋巴细胞在内的至少4组。在所述情况中，所述试样制备部件混合所述血样供应部件供应的血样、含有阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂的溶血剂以及用于染色核酸的荧光色素，以此制备测定试样。此外，本发明其中一种形态的血液分析方法具有以下步骤混合血样、溶血剂以及用于染色核酸的荧光色素，在不使用荧光标记抗体的情况下制备测定试样的步骤；向制备的测定试样照射光的步骤；分别检测光照下的测定试样发出的荧光和散射光的步骤；根据检测出的荧光强度和散射光强度获取淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标的步骤；根据获取的淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取B淋巴细胞和T淋巴细胞的比例的相关信息的步骤；输出获取的B淋巴细胞和T淋巴细胞的比例的相关信息的步骤。发明效果
通过本发明所涉及的血液分析装置及血液分析方法，可以在不使用荧光标记抗体的情况下获取B淋巴细胞和T淋巴细胞的相关信息。
图1为实施方式1所涉及的血液分析装置的外观斜视图2为样本容器的外观斜视图3为样架的外观斜视图4为实施方式1涉及的测定单元的结构框图5为光学检测器的简要结构模式图6为实施方式1涉及的信息处理单元的结构框图7为实施方式1涉及的血液分析装置的测定步骤作业顺序流程图8为实施方式1涉及的血液分析装置的数据处理步骤的作业流程图9为测定数据中侧向散射光强度和荧光强度的散点图10为B淋巴细胞较多的血样中荧光强度和细胞数的柱状图11为T淋巴细胞较多的血样中荧光强度和细胞数的柱状图；图12为实施方式1中B淋巴细胞和T淋巴细胞比例异常的血样A的分析结果界面示意图13为实施方式1中B淋巴细胞和T淋巴细胞比例正常的血样B的分析结果界面示意图14为实施方式2中的血液分析装置的测定步骤的作业流程图； 图15为实施方式2中B淋巴细胞和T淋巴细胞比例异常的血样A的分析结果界面示意图16为实施方式3中的血液分析装置的测定步骤的作业流程图； 图17为实施方式4中的血液分析装置的测定步骤的作业流程图； 图18为实施方式5中的血液分析装置的测定步骤的作业流程图； 图19为使用B淋巴细胞测定用试样和T淋巴细胞测定用试样，用流式细胞仪进行分析所获得的、细胞数和荧光强度的柱状图20为使用B淋巴细胞测定用试样，用流式细胞仪进行分析所获得的、侧向散射光强度和荧光强度散点图21为使用T淋巴细胞测定用试样，用流式细胞仪进行分析所获得的、侧向散射光强度和荧光强度散点图22为电子显微镜的分析结果示图23A为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为10 0时淋巴细胞的粒度分布；
图2 为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为9:1时淋巴细胞的粒度分布；
图23C为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为8:2时淋巴细胞的粒度分布；
图23D为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为7:3时淋巴细胞的粒度分布；
图23E为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为6:4时淋巴细胞的粒度分布；
图23F为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为5:5时淋巴细胞的粒度分布；
图23G为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为4:6时淋巴细胞的粒度分布；
图23H为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为2:8时淋巴细胞的粒度分布；
图231为荧光强度和侧向散射光信息散点图，显示的是T/B淋巴细胞比例为0:10时淋巴细胞的粒度分布；
图24A为荧光强度粒度分布图，显示的是T/B淋巴细胞比例为10:0时淋巴细胞的分
布；
图24B为荧光强度粒度分布图，显示的是T/B淋巴细胞比例为9:1时淋巴细胞的分布； 图24C为荧光强度粒度分布图，显示的是T/B淋巴细胞比例为8:2时淋巴细胞的分布；图24D为荧光强度粒度分布图，显示的是Τ/Β淋巴细胞比例为7:3时淋巴细胞的分布； 图24Ε为荧光强度粒度分布图，显示的是Τ/Β淋巴细胞比例为6:4时淋巴细胞的分布； 图24F为荧光强度粒度分布图，显示的是Τ/Β淋巴细胞比例为5:5时淋巴细胞的分布； 图24G为荧光强度粒度分布图，显示的是Τ/Β淋巴细胞比例为4:6时淋巴细胞的分布； 图24Η为荧光强度粒度分布图，显示的是Τ/Β淋巴细胞比例为2:8时淋巴细胞的分布； 图241为荧光强度粒度分布图，显示的是Τ/Β淋巴细胞比例为0:10时淋巴细胞的分
布；
图25Α是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度平均值图表； 图25Β是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度中心值图表； 图25C是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的平均-中心值图表； 图25D是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的偏度图表； 图25Ε是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的峰度图表； 图25F是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的方差图表； 图25G是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的标准偏差图表； 图25Η是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的标准误差图表； 图251是各Τ/Β淋巴细胞比例中淋巴细胞的荧光强度的均方根； 图沈旨在说明荧光强度的平均-中心值与B淋巴细胞比例的关系图和荧光强度的粒度分布实测值之间具有相关性。本发明的实施方式
以下参照
本发明的优选实施方式。(实施方式1)
本实施方式涉及一种血液分析装置，该装置混合血样、溶血剂以及用于染色核酸的荧光色素，以此制备测定试样，通过光学流式细胞仪测定所述测定试样，以此获取所述血样中 B淋巴细胞和T淋巴细胞的相关信息。[血液分析装置的结构]
图1为本实施方式涉及的血液分析装置的外观斜视图。本实施方式中的血液分析装置 1用于检测出血样的血细胞中所含白细胞、红细胞、血小板等，并对各血细胞进行计数，是一种多项目血细胞分析装置。如图1所述，血液分析装置1具有测定单元2、位于测定单元2 的前面的样本运送单元4、能控制测定单元2和样本运送单元4的信息处理单元5。图2为装样本的样本容器的外观斜视图，图3为固定数个样本容器的样架的外观斜视图。如图2所示，样本容器T为管状，上端有开口。内部装有采自患者的血样，上端的开口由盖CP进行密封。样本容器T由具有透光性的玻璃或合成树脂构成，能够看其内部的血样。样本容器T的侧面贴有条形码标签BLl。此条形码标签BLl上印有表示样本ID的条形码。样架L能并排固定10支样本容器Τ。在样架L上，各样本容器T以垂直状态(直立状态)固定。此外，样架L的侧面上还贴有条形码标签BL2。此条形码标签BL2上印刷有用于表示架ID的条形码。<测定单元的结构>
下面说明测定单元的结构。图4为测定单元的结构框图。如图4所示，测定单元2具有样本吸移部件21，用于从样本容器(采血管)T吸移样本，即吸移血液；试样制备部件22，用于从样本吸移部件21吸移的血液制备测定所用的测定试样；检测部件23，用于从试样制备部件22制备的测定试样检测出血细胞。此外，测定单元2还有取入口(参照图1)和样本容器运送部件25，其中取入口用于将样本运送单元4的样架运送部件43运送的样架L上的样本容器T取入测定单元2的内部；样本容器运送部件25用于将样本容器T从样架L取入测定单元2内部，并将其运送到样本吸移部件21的吸移位置。如图4所示，样本吸移部件21有吸管211。此外，样本吸移部件21还有注射泵(无图示)。吸管211能够沿垂直方向移动，通过上下移动，所述吸管穿过运送至吸移位置的样本容器T的盖CP，吸移其内部的血液。试样制备部件22有混合室MC。吸管211通过注射泵(无图示)从样本容器T吸移一定量的全血样本，吸移的样本移送到混合室MC的位置，通过所述注射泵，分别向各个室 MC分配和供应一定量的全血样本。此外，试样制备部件22具有用于加热混合室MC的加热器H0试样制备部件22通过管部连接着用于装第一试剂的试剂容器221、用于装第二试剂的试剂容器222、以及用于装鞘液(稀释液)，即用于装第三试剂的试剂容器223。此外，试剂制备部件22连接着无图示的压缩机，能够通过该压缩机产生的压力分别获取试剂容器 221、222、以及223内的试剂。第一试剂含有用于溶解红细胞的溶血剂。第一试剂中所含溶血剂可以是白细胞测定中使用的一般公知的溶血剂。具体使用的溶血剂最好含有阳离子表面活性剂及非离子表面活性剂。在此，阳离子表面活性剂最好是4级铵盐表面活性剂或吡啶盐表面活性剂。具体而言，如有化1所示总碳原子数为9 30的表面活性剂。[化1]
权利要求
1.一种血液分析装置，其具有以下部分用于供应血样的血样供应部件；试样制备部件，该试样制备部件混合所述血样供应部件供应的血样、溶血剂和用于染色核酸的荧光色素，在不使用荧光标记抗体的情况下制备测定试样；光源，用于向所述试样制备部件制备的测定试样照射光；第一检测器，用于检测所述光源光照下的测定试样发出的荧光；第二检测器，用于检测所述光源光照下的测定试样发出的散射光；信息处理部件，根据所述第一检测器检测出的荧光强度和所述第二检测器检测出的散射光强度，获取淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据获取的淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息；输出部件，用于输出所述信息处理部件获取的B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。
2.根据权利要求1所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件获取以下信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息表示B淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例的数值、表示T淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例的数值、表示B淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例在一定范围内的信息、表示T淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例在一定范围内的信息、或表示T淋巴细胞数和B淋巴细胞数的比例有无异常的信息。
3.根据权利要求1或2所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件获取所述淋巴细胞荧光强度的代表值，并将其作为所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据所获取的所述代表值获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。
4.根据权利要求1 3中的任意一项所述的血液分析装置，其中，所述信息处理部件获取淋巴细胞荧光强度的散布度，并将其作为所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标， 根据获取的所述散布度，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。
5.根据权利要求1 4其中任意一项所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件获取表示淋巴细胞荧光强度分布的偏斜的数值，并将其作为所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，根据获取的所述表示分布的偏斜的数值，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例的相关信息。
6.根据权利要求5所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件获取淋巴细胞荧光强度的分布峰度或偏度，并将其作为表示所述分布的偏斜的数值，根据获取的所述峰度或偏度，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。
7.根据权利要求1 6其中任意一项所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件将所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标和一定阈值进行比较，以此判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例是否异常；在所述信息处理部件判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常时，所述输出部件输出表示所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例异常的信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。
8.根据权利要求1 6其中任意一项所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件根据所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取表示B淋巴细胞数在B淋巴细胞和T淋巴细胞总数中所占比例的数值，比较获取的所述数值和一定的阈值，以此判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例是否异常；当所述信息处理部件判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常时，所述输出部件输出表示所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例异常的信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。
9.根据权利要求1 6其中任意一项所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件根据所述淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取表示T淋巴细胞数在B淋巴细胞和T 淋巴细胞总数中所占比例的数值，比较获取的所述数值和一定的阈值，以此判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例是否异常；当所述信息处理部件判断B淋巴细胞数和T淋巴细胞数的比例异常时，所述输出部件输出表示所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例异常的信息，并将其作为所述B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息。
10.根据权利要求1 9其中任意一项所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件根据所述第一检测器检测出的荧光强度和所述第二检测器检测出的散射光强度，将所述测定试样中所含淋巴细胞与其他白细胞区加以区分，获取淋巴细胞荧光强度的粒度分布的相关指标。
11.根据权利要求10所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件区分所述测定试样中所含淋巴细胞和其他白细胞，以此对白细胞进行分类；所述输出部件输出所述信息处理部件的白细胞分类结果。
12.根据权利要求11所述的血液分析装置，其中所述信息处理部件将所述测定试样中所含白细胞分为包括淋巴细胞在内的至少4组。
13.根据权利要求1 12其中任意一项所述的血液分析装置，其中所述试样制备部件混合所述血样供应部件供应的血样、含有阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂的溶血剂以及染色核酸的荧光色素，以此制备测定试样。
14.一种血液分析方法，包括以下步骤混合血样、溶血剂以及染色核酸的荧光色素，在不使用荧光标记抗体的情况下制备测定试样；向制备的测定试样照射光；分别检测光照下的测定试样发出的荧光和散射光；根据检测出的荧光强度和散射光强度获取淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标；根据获取的淋巴细胞荧光强度的粒度分布相关指标，获取B淋巴细胞数和T淋巴细胞数比例的相关信息；输出获取的B淋巴细胞和T淋巴细胞比例的相关信息。
全文摘要
本发明提供一种血液分析装置和血液分析方法，该装置和方法能够在不使用荧光标记抗体的情况下，获取B淋巴细胞和T淋巴细胞的相关信息。本发明的血液分析装置具有血样供应部件；试样制备部件，该试样制备部件混合所述血样供应部件供应的血样、溶血剂和用于染色核酸的荧光色素，在不使用荧光标记抗体的情况下制备测定试样；光源；第一检测器，用于检测荧光；第二检测器，用于检测散射光；信息处理系统，根据荧光强度和散射光强度，分类淋巴细胞，根据分类后淋巴细胞的荧光强度，获取B淋巴细胞和T淋巴细胞的相关信息。
文档编号G01N33/49GK102472738SQ201080029989
公开日2012年5月23日 申请日期2010年6月30日 优先权日2009年7月3日
发明者朝田祥一郎, 河野麻理, 高木由里 申请人:希森美康株式会社