专利名称：流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，涉及一种流产嗜性衣原体单克隆抗体及其制备方法与应用，尤其涉及一种流产嗜性衣原体P0MP18D N端蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用。
背景技术：
流产嗜性衣原体(Chlamydia abortus, C. abortus)是一大群与革兰氏阴性菌有密切关系的专性真核细胞内寄生的原核生物，其能引起各种动物和人的感染，对许多国家的畜牧业生产造成巨大的经济损失和影响公共卫生。流产嗜性衣原体是比较常见的导致母畜流产的病原体，近几年，邱昌庆等人对目前国内各省份的规模化猪场进行的猪衣原体病的调查显示，猪衣原体感染总体呈上升趋势，如1987年四川的感染率为11. 45%，1989年为 15. 52%，2003年上升到80%，给集约化养猪业造成严重的经济损失。在衣原体诊断方面，目前应用最多抗原的仍然是主要外膜蛋白(MOMP)和脂多糖 (LPS)。包括根据ompA基因保守性建立的检测抗原的多聚酶链式反应(PCR)技术，根据检测LPS特异性建立的直接免疫荧光抗体检测技术，如英国OXOID公司的衣原体荧光检测试剂盒，以及放大酶联免疫吸附实验(PCE-ELISA)方法。检测抗体的试剂盒，如以LPS包被的间接荧光试剂盒(以色列Savyon Diagnostics)，以MOMP为包被抗原的酶联免疫吸附试剂盒(法国IDVET)抗体检测试剂盒等。但是PCR技术诊断周期长、适用范围窄，不利于临床推广，而进口抗体检测试剂盒虽然可信度较高，但成本也高、也不利于临床普及。
发明内容
本发明的目的是提供一种流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用。本发明提供的流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体是由杂交瘤细胞株1F10D4产生的，其免疫原为流产嗜性衣原体(C. abortus)外膜蛋白是以P0MP18D N端首段重组蛋白 P0MP18D-1为免疫原，免疫Balb/c小鼠，然后筛选出的杂交瘤细胞株。本发明提供的杂交瘤细胞株1F10D4，已于2011年03月10号在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (地址北京市朝阳区大屯路甲3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，保藏号为 CGMCC No. 4658。本发明还提供流产嗜性衣原体单克隆抗体的制备方法，其是以流产嗜性衣原体外膜蛋白P0MP18D N端蛋白作为抗原免疫小鼠，免疫后的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得分泌流产嗜性衣原体P0MP18D N端蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，得到流产嗜性衣原体 P0MP18D N端蛋白单克隆抗体。其中，所述的流产嗜性衣原体外膜蛋白P0MP18D N端蛋白为冷冻抽干粉，免疫时用适量的PBS溶液稀释。流产嗜性衣原体外膜蛋白P0MP18D N端蛋白，命名为P0MP18D-1，为DSEQ ID No. 2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
2) SEQ ID No. 2的氨基酸序列经过添加标签序列衍生的蛋白质。为了使1)的P0MP18D-1蛋白质便于纯化，可在SEQ ID No. 2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1.标签序列
权利要求
1.一种流产嗜性衣原体P0MP18D N端蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株1F10D4，其保藏编号为CGMCC No. 4658。
2.由权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生的流产嗜性衣原体外膜蛋白单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其免疫原为1)由序列表中SEQID No. 2所示的氨基酸序列组成的流产嗜性衣原体外膜蛋白 P0MP18D N端蛋白；或2)序列表中SEQID No. 2的氨基酸序列经过添加标签序列而衍生的流产嗜性衣原体外膜蛋白P0MP18D N端蛋白。
4.权利要求2所述的流产嗜性衣原体外膜蛋白P0MP18DN端蛋白单克隆抗体在流产嗜性衣原体检测中的应用。
5.直接荧光检测流产嗜性衣原体的方法，其包括以荧光素标记的权利要求2所述的单克隆抗体直接与组织细胞中相应抗原结合，在荧光显微镜下检测特异荧光来检测流产嗜性衣原体。
6.间接荧光检测流产嗜性衣原体的方法，其包括以权利要求2所述的单克隆抗体为一抗，以荧光素标记的兔抗鼠IgG为二抗，进行间接免疫荧光染色法检测流产嗜性衣原体。
7.含有荧光素标记的权利要求2所述的单克隆抗体的直接免疫荧光试剂盒。
8.含有权利要求2所述的单克隆抗体的间接免疫荧光试剂盒。
9.根据权利要求8所述的间接荧光试剂盒，其特征在于，还含有荧光素标记的兔抗鼠 IgG、阳性对照血清、阴性对照血清、磷酸盐、吐温20和/或封片介质。
全文摘要
本发明涉及一种流产嗜性衣原体POMP18D N端蛋白单克隆抗体及其制备方法与应用。所述的单克隆抗体是由保藏编号为CGMCC No.4658的杂交瘤细胞株1F10D4分泌的。本发明还提供应用所述的单克隆抗体进行流产嗜性衣原体的直接荧光免疫或者间接荧光免疫检测。本发明的流产嗜性衣原体POMP18D N端蛋白单克隆抗体具有很强的特异性和荧光特性，适宜作为荧光抗体建立直接荧光检测方法或者作为一抗建立间接免疫荧光检测方法。
文档编号G01N33/577GK102220285SQ20111009827
公开日2011年10月19日 申请日期2011年4月19日 优先权日2011年4月19日
发明者何诚, 凌勇, 杨君敬, 欧长波, 潘青 申请人:中国农业大学