专利名称：用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，属于生物技术领域。
背景技术：
慢性阻塞性肺病(COPD)是一种以持续阻塞来自肺部的气流为特征的肺部疾病。 该疾病是一种阻碍正常呼吸且诊断不足威胁生命的肺病，是无法完全可逆的。其主要的临床表现为，咳嗽，咳痰以及呼吸困难。随着病程的进展，可发展到走平路时亦感到气急。部分患者有喘息症状。此外尚有乏力、纳差和体重减轻等全身症状。急性发作期并发呼吸衰竭或由心衰竭可出现相应症状。由于其患病人数多，死亡率高，社会经济负担重，已成为一个重要的公共卫生问题。慢性阻塞性肺病目前居全球死亡原因的第4位，据世界卫生组织报道，至2020年慢性阻塞性肺病将位居世界疾病经济负担第5位。在我国，慢性阻塞性肺病同样是严重危害人民身体健康的重要慢性呼吸系统疾病，因此，探索具有诊断价值的新型简易生物标记物不仅有益于慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)患者的早期诊断和早期干预，还会带来巨大的社会效益和经济效益。慢性阻塞性肺病的发病机制尚未完全明了。目前普遍认为慢性阻塞性肺病以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征。随着病情进展，可导致全身炎症，出现循环血液中细胞因子浓度异常增高等。目前诊断慢性阻塞性肺病急性加重的主要是依据症状体征以及肺部影像学的改变。因此，用于诊断慢性阻塞性肺病特别是慢性阻塞性肺病加重期、评价疗效的特征性生物标记物一直在开发探索中，以期监测慢性阻塞性肺病病程进展。近年来，随着人们对慢性阻塞性肺病的重新认识和不断重视，如何更加准确地诊断慢性阻塞性肺病以及急性加重期，以及如何优化现有预测指标指导该疾病的治疗等问题显得尤为紧迫。因此， 从多角度探索和开发对该疾病具有早期诊断价值的生物标记物拥有十分广阔的前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒。为了达到上述目的，本发明提供了一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，包括细胞因子及其酶标抗体，其特征在于，所述的细胞因子为白介素9(IL-9)、白介素 18结合蛋白A(IL-18BPa)、C-C序列配体^(CCI^8)、人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK)、 β细胞素(BTC)、单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)、单核细胞趋化蛋白-4(MCP-4)、进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白(LIGHT)、巨噬细胞源趋化因子(MDC)、人骨髓抑制因子1 (MPIF-1)、 人巨噬细胞刺激蛋白(MSP-a)、骨桥蛋白(OPN)和人胸腺表达趋化因子(TECK)。所述的白介素9为单克隆鼠IgG2B抗体，白介素18结合蛋白A为单克隆鼠IgGl 抗体，C-C序列配体观为单克隆鼠IgGl抗体，人皮肤T细胞虏获趋化因子为单克隆鼠抗体 IgG2抗体，β细胞素(BTC)为单克隆鼠IgG1抗体，单核细胞趋化蛋白-3为单克隆鼠IgGl 抗体，单核细胞趋化蛋白-4为单克隆鼠IgGl抗体，进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白为单克隆鼠IgGl抗体，巨噬细胞源趋化因子为单克隆鼠IgG2B抗体，人淋巴组织趋化性细胞因子为单克隆鼠IgG抗体，人巨噬细胞源趋化因子为单克隆鼠IgGl抗体，人骨髓抑制因子1为单克隆鼠IgG2B抗体，人巨噬细胞刺激蛋白为单克隆鼠IgGl抗体，骨桥蛋白为单克隆鼠Ig2A 抗体，人胸腺表达趋化因子为单克隆鼠IgGl抗体。所述的白介素9的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，白介素18的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，C-C序列配体观的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人皮肤T细胞虏获趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗鼠IgG抗体，β细胞素的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，单核细胞趋化蛋白-3的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，单核细胞趋化蛋白-4的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白为多克隆羊抗人IgG抗体，巨噬细胞源趋化因子的酶标抗体为多克隆鸡抗人IgY抗体，人淋巴组织趋化性细胞因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，巨噬细胞源趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人骨髓抑制因子1的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人巨噬细胞刺激蛋白的酶标抗体为多克隆鼠抗人IgG2B抗体，骨桥蛋白的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG 抗体，人胸腺表达趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。优选地，所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒还可以包括pH值为9. 6的碳酸盐缓冲液，pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液，血清蛋白稀释液，终止液，四甲基联苯胺底物溶液，正常人血清和阳性对照血清。本发明通过收集7例慢性阻塞性肺病急性加重期患者血浆、5例慢性阻塞性肺病稳定期患者血浆，以及5例正常人血浆。利用定量细胞因子芯片技术，该技术采用免疫学原理，通过抗体包被抗原，检测得到血浆内40种细胞因子，同时以稳定期慢性阻塞性肺病患者及正常人血清中蛋白表达水平作为衡量标准，筛选慢性阻塞性肺病急性加重期患者血清中上调或下调的细胞因子(P<0. 05)。根据标准曲线计算得到每种细胞因子的浓度。应用 SPSS 18. 0软件，计算得到每种细胞因子在每组人群中的均值和标准差，对所得每组数据进行配对t检验，即分别比较慢性阻塞性肺病急性加重期组与稳定期慢性阻塞性肺病组和正常组的数据，认为P<0. 05有统计学意义。最终确定慢性阻塞性肺病急性加重期患者血清蛋白谱中有13种细胞因子表达与慢性阻塞性肺病患者及正常人比较存在差异，包括4种细胞因子上调和9种细胞因子下调的联合表达改变(表1)。用实验组数值与正常组数值的比值作为最终结果的表现形式。表1多种细胞因子在COPD急性加重期患者、COPD患者及正常人血清中的表达变化
权利要求
1.一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，包括细胞因子及其酶标抗体， 其特征在于，所述的细胞因子为白介素9、白介素18结合蛋白A、c-c序列配体观、人皮肤T 细胞虏获趋化因子、β细胞素、单核细胞趋化蛋白-3、单核细胞趋化蛋白-4、进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白、巨噬细胞源趋化因子、人骨髓抑制因子1、人巨噬细胞刺激蛋白、骨桥蛋白和人胸腺表达趋化因子。
2.如权利要求1所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的白介素9为单克隆鼠IgG2B抗体，白介素18结合蛋白A为单克隆鼠IgGl抗体，C-C 序列配体观为单克隆鼠IgGl抗体，人皮肤T细胞虏获趋化因子为单克隆鼠抗体IgG2抗体， β细胞素为单克隆鼠IgG1抗体，单核细胞趋化蛋白-3为单克隆鼠IgGl抗体，单核细胞趋化蛋白-4为单克隆鼠IgGl抗体，进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白为单克隆鼠IgGl抗体， 巨噬细胞源趋化因子为单克隆鼠IgG2B抗体，人淋巴组织趋化性细胞因子为单克隆鼠IgG抗体，人巨噬细胞源趋化因子为单克隆鼠IgGl抗体，人骨髓抑制因子1为单克隆鼠化6皿抗体，人巨噬细胞刺激蛋白为单克隆鼠IgGl抗体，骨桥蛋白为单克隆鼠Ig2A抗体，人胸腺表达趋化因子为单克隆鼠IgGl抗体。
3.如权利要求1或2所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于，所述的白介素9的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，白介素18的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，C-C序列配体观的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人皮肤T细胞虏获趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗鼠IgG抗体，β细胞素的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG 抗体，单核细胞趋化蛋白-3的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，单核细胞趋化蛋白-4的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白为多克隆羊抗人IgG 抗体，巨噬细胞源趋化因子的酶标抗体为多克隆鸡抗人IgY抗体，人淋巴组织趋化性细胞因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，巨噬细胞源趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人骨髓抑制因子1的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人巨噬细胞刺激蛋白的酶标抗体为多克隆鼠抗人IgG2B抗体，骨桥蛋白的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体，人胸腺表达趋化因子的酶标抗体为多克隆羊抗人IgG抗体。
4.如权利要求1所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，其特征在于， 所述的用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒还可以包括PH值为9. 6的碳酸盐缓冲液，PH值为7. 4的磷酸盐缓冲液，血清蛋白稀释液，终止液，四甲基联苯胺底物溶液，正常人血清和阳性对照血清。
全文摘要
本发明涉及一种用于诊断慢性阻塞性肺病急性加重期的试剂盒，包括细胞因子及其酶标抗体，其特征在于，所述的细胞因子为白介素9、白介素18结合蛋白A、C-C序列配体28、人皮肤T细胞虏获趋化因子、β细胞素、单核细胞趋化蛋白-3、单核细胞趋化蛋白-4、进入T细胞的类淋巴毒素诱导蛋白、巨噬细胞源趋化因子、人骨髓抑制因子1、人巨噬细胞刺激蛋白、骨桥蛋白和人胸腺表达趋化因子。本发明首次提出上述细胞因子可成为慢性阻塞性肺病急性加重期诊断的主要指标。
文档编号G01N33/68GK102253220SQ20111015027
公开日2011年11月23日 申请日期2011年6月7日 优先权日2011年6月7日
发明者王向东, 白春学, 陈弘 申请人:复旦大学附属中山医院