专利名称：一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法
技术领域：
本发明涉及药物质量分析领域，具体涉及一种二氢化茚酰胺类化合物的检测分析方法。
背景技术：
蛋白酪氨酸激酶(PTK)是在正常和异常增殖过程中起重要作用的癌蛋白和原癌蛋白家族中的成员，是一种能选择性地使不同底物的酪氨酸残基磷酸化的一种酶，它们催化ATP的Y-磷酸基转移到许多重要蛋白质的酪氨酸残基上，使酚羟基磷酸化。蛋白酪氨酸激酶分为受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK),非受体酪氨酸激酶(nrPTK)以及IR和Janus激酶等。RTK包括胞外配体区、跨膜区和胞内活性区，nrPTKs是一种胞浆蛋白，一般没有细胞膜外结构域，nrPTKs现已经确认的约有30种，分为10大家族。与细胞生存和增殖相关的nrPTKs主要有Abl、Src激酶家族(如Src, Fyn, Yes、Blk, Yrk、Lck、Lyn和Csk等)以及其他酪氨酸激酶如Jak、FAK> Ack、Fes、Rak和Brk等。它们的主要生物学功能是介导细胞内的信号转导。nrPTKs在细胞增殖、分化和死亡调控中起不同的作用，有些广泛表达，有些则只在特异组织中表达。在肿瘤组织中nrPTKs常被激活，再激活下游的信号转导途径，促进细胞增殖、抵抗细胞凋亡，促使肿瘤的发生和发展。目前，国外的制药公司已经研制出来数十种针对酪氨酸激酶的祀向抗癌药，例如格列卫(gleevec),易瑞沙(iressa),特罗凯(tarceva),和索坦(sutent)等,它们对特定酪氨酸激酶高表达型肿瘤疗效确切，毒副作用比经典的抗癌药小。专利W02010072166公开了全新一代的酪氨酸蛋白激酶抑制剂二氢化茚酰胺类化合物，说明书实施例16公开了(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的合成方法，但该专利文献没有公开保证该化合物的质量，即没有公开该化合物和含有该化合物制剂的含量检测分析方法。
发明内容
基于上述原因，申请人根据(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基_3_[(4_批啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的性质，在高效液相检测过程中我们发现，为了提高(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-批啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的峰纯度、保持(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4-甲基-3- [ (4-吡啶-3-基嘧啶_2_基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的稳定性，应该在流动相中加入一定量的盐，采用特定的流动相洗脱，这样就可以很好的将(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基_3-[ (4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐含量确定，同时可以保持(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧唳~2~基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐的稳定性，使(IS) -1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2,3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的含量得到精确的测定，但在流动相中加入太多量的盐会对填充柱损伤较大，而加入盐的量不在一定范围内就不能产生很好的峰纯度，我们通过长期实验研究确定流动相为有机溶剂与含盐的水相组成，可以很好的将(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2,3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐与其性质相近的杂质分离开，保证了(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐含量的精确性，并可以很好的保持色谱柱的使用率。本发明通过以下技术方案实现的。一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，包括(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3- 二氢化茚_5位酰胺倍半硫酸盐、含有(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧 啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其方法为采用C18色谱柱，流动相为有机溶剂与含盐的水相组成。其中所述的有机溶剂优选包括甲醇或乙腈。其中所述的含盐水相选自以下盐二乙胺、三乙胺。其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 1%-1. 0%。其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 5%。其中流动相中有机溶剂与含盐水相的体积比为30-40 :70_60。其中含盐水相的pH值为5. 0-7. O。其中含盐水相的优选pH值为6. 5。其中调pH值试剂为磷酸。一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速O. 5-1. Oml/min ;柱温20-400C ;检测波长267 nm。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4-甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O.1-1mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O.1-1mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2_50μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。其中流速1. Oml/min ;柱温 30°C。
图1 :实施例1高效液相检测图谱。图2 :实施例2高效液相检测图谱。图3 :实施例3高效液相检测图谱。
图4:实施例4高效液相检测图谱。图5 :实施例5高效液相检测图谱。制备实施例 实施例1
(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐检测分析方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速O. 5/min ;柱温25°C;检测波长267nm，流动相以乙腈-O. 2%三乙胺水溶液体积比为30 70 (磷酸调节pH值至5.0)。
对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O.1mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O.1mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例2
(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐检测分析方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1. o/min ;柱温300C ;检测波长267nm，流动相以甲醇-O. 5% 二乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至6.0)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 5mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O. 5mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例3
(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐检测分析方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速Ι/min ;柱温30°C;检测波长267nm，流动相以乙腈-1%三乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至 6. 5)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 2mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O. 2mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液40μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例4
片剂处方(1000制剂单位)(is)-l-(4-甲基哌嗪-1-基)-Ν-(4-甲基_3-[(4_吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐10g，填充剂乳糖17g、微晶纤维素41g，预胶化淀粉3. 7g，崩解剂羧甲基淀粉钠3. 4g，润滑剂硬脂酸镁O. 75g。
制备方法
取处方量(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐、乳糖、微晶纤维素、预胶化淀粉，3g羧甲基淀粉钠混合均匀，用水制软材，制粒，加入O. 4g羧甲基淀粉钠，加入润滑剂，混合均匀，压片，即得。色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1. o/min ;柱温300C ;检测波长267nm，流动相以乙腈-O. 5% 二乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至6.0)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 5mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品片剂，用流动相配制成每Iml含O. 5mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例5
片剂处方(1000制剂单位)(is)-l-(4-甲基哌嗪-1-基)-Ν-(4-甲基_3-[(4_吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐25g，填充剂乳糖50g、微晶纤维素100g，崩解剂交联聚维酮12. 5g，润滑剂微粉硅胶2. 3g。制备方法
取处方量(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐、乳糖、微晶纤维素，10. 6g交联聚维酮混合均匀，用水制软材，制粒，加入1. 9g交联聚维酮，加入润滑剂，混合均匀，压片，即得。色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速Ι/min ;柱温300C ;检测波长267nm，流动相以甲醇-O. 5%三乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至6. 5)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 2mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取片剂，用流动相配制成每Iml含O. 2mg的溶液作为供试品 溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液40μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。所述实施例包括但不限于上述。
权利要求
1.一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，包括(lS)-l-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3- 二氢化茚_5位酰胺倍半硫酸盐、含有(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其特征在于采用C18色谱柱，流动相为有机溶剂与含盐的水相组成。
2.根据权利要求1所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述的有机溶剂包括甲醇或乙腈。
3.根据权利要求1所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述的含盐水相选自以下盐二乙胺、三乙胺。
4.根据权利要求3所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 1%-1. 0%。
5.根据权利要求3所述的一种一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 5%。
6.根据权利要求1一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中流动相中有机溶剂与含盐水相的体积比为30-40 :70-60。
7.根据权利要求1所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中含盐水相的pH 值为 5. 0-7. O。
8.根据权利要求7所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中含盐水相的pH值为6. 5。
9.根据权利要求7或8所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中调pH值试剂为磷酸。
10.根据权利要求1-8任一项所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其特征在于 色谱柱C18色谱柱； 色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速O. 5-1. Oml/min ;柱温20-40°C ;检测波长267nm ； 对照品溶液的配制精密称取(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O.1-1mg的溶液； 供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O.1-1mg的溶液作为供试品溶液； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2_50μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。
11.根据权利要求10所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中流速1.Oml/min ;柱温 30°C。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，本发明公开了化合物(1S)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2,3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐原料及制剂的检测分析方法；该方法具有检测含量精确、操作简便等优点。
文档编号G01N30/26GK103018349SQ201110283460
公开日2013年4月3日 申请日期2011年9月22日 优先权日2011年9月22日
发明者朱吉满, 曹捷, 解菁雅, 赵海燕, 杨艳, 朱希卓, 郭永起, 孙德杰 申请人:北京美迪康信医药科技有限公司, 哈尔滨誉衡药业股份有限公司