专利名称：：一种药物组合物注射液的质量检测方法
技术领域：
：本发明涉及一种注射液的质量检测方法，特别涉及本发明药物组合物注射液的指纹图谱质量检测方法及其注射液中总皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。
背景技术：
：本发明药物组合物注射液是由黄芪、人参、苦参素3味药物组成、采用现代提取分离技术精制而成的中药注射剂，具有益气扶正，增强机体免疫功能的功效，在临床上用于原发性肝癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科肿瘤以及各种原因引起的白细胞低下及减少症和慢性乙型肝炎的治疗。高效液相色谱(HPLC)技术是构建中药指纹图谱主要的方法，在中药的质量控制中发挥着重要的作用；但目前中药指纹图谱研究尚处于研究阶段，还存在一些问题需要不断探索，如指纹图谱研究的规范化、标准化有待加强，由于受所用仪器、色谱柱等影响，指纹图谱的重现性问题尚需提高，指纹图谱分析评价方法还有待完善等。超高效液相色谱(UltraPerformanceLiquidChromatography,UPLC)色谱理论认为提高色谱柱的效能(efficiency)就能增加仪器的解析度(resolution),而运用粒径低于2μπι的小颗粒无疑是增加效能的好方法；但减小固定相的粒度以增加色谱柱效能一直的色谱仪器科学的瓶颈，因为小颗粒不仅要求系统能承受高于目前极限压力(比如6000psi/400bar)，需要更小的系统体积(死体积)，并且需要能适应可能只有几秒峰宽的高速检测器；与传统的高效液相色谱(HPLC)相比，UPLC具有高分离度(ultraresolution)、高速度(ultraspeed)、灵敏度(sensitivity)等优势；目前，UPLC多应用于代谢组学分析及其他一些生化领域，在天然产物的分析方面运用也逐渐兴起，因为在这些领域深入研究需要更高的分析精度。
发明内容本发明目的在于提供一种注射液的质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现:本发明药物组合物注射液的质量检测方法，包括如下含量测定和/或指纹图谱检测方法:A药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.01.2mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成浓度为1.01.lmg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液23ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9,10-二甲氧基紫植烧-3-0-β-D-匍萄糖苷对照品，配制为15.016.5μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15ml1%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤,进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，检测波长207nm,柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C药物组合物注射液指纹图谱检测方法为:色谱条件，分析色谱柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，检测波长205nm，柱温30°C，流速0.8ml/min，理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi；毛细管电压(Vcap):4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor):175V;截取锥电压(Skimmer):65V;第一重八级杆的射频电压(OCTIRFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以8%12%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以75%85%甲醇18ml溶液洗脱，收集75%85%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；本发明药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.712±0.071，0.740±0.074，0.749±0.075，0.769±0.077，0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120;相对保留峰面积分别为:1.616±0.161,2.631±0.263,2.036±0.204，12.671±1.267,3.346±0.335，1.000+0.000,0.868+0.087,0.428+0.043,0.566+0.057,0.854+0.085,0.633±0.063,0.402±0.040,0.417±0.042,0.295±0.030,0.461±0.046。本发明药物组合物注射液的质量检测方法，优选如下含量测定和/或指纹图谱检测方法:A药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.999mg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.1OOmg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成浓度为1.050mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml,高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为15.9μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤,进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，检测波长207nm,柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml,高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C药物组合物注射液指纹图谱的质量检测方法为，色谱条件:分析色谱柱:AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，检测波长:205nm，柱温:30°C，流速:0.8ml/min，理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:0分钟15%A，20分钟19%A，36分钟25.5%A，50分钟50%A，65分钟70%A，85分钟70%A;质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap)4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor)175V;截取锥电压(Skimmer)65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解,上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；本发明药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.712，0.740，0.749，0.769，0.834，1.000，1.019，1.031，1.038，1.045，1.059，1.072，1.173，1.191，1.204;相对保留峰面积分别为:1.616,2.631,2.036，12.671,3.346，1.000,0.868,0.428,0.566,0.854,0.633,0.402，0.417,0.295,0.461。本发明药物组合物注射液的质量检测方法，优选如下含量测定和/或指纹图谱检测方法:A药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成浓度为1.0mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液2.1ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却Imin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为15.2μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，检测波长207nm,柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C药物组合物注射液指纹图谱检测方法为:色谱条件，分析色谱柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，检测波长205nm，柱温30°C，流速0.8ml/min，理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap):4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor):175V;截取锥电压(Skimmer):65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加ΛI%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以9%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以78%甲醇18ml溶液洗脱，收集78%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；本发明药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.781,0.791,0.810,0.830,0.91,1.000，1.119，1.131，1.138，1.145，1159，1.172，1.273，1.291，1.304;相对保留峰面积分别为:1.776,2.891,2.236，13.671,3.676，1.000,0.948,0.471,0.616,0.939,0.696,0.442，0.459,0.325,0.507。本发明药物组合物注射液的质量检测方法，优选如下含量测定和/或指纹图谱检测方法:A药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.18mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成浓度为1.09mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液3ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml,高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为16.3μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，检测波长207nm,柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C药物组合物注射液指纹图谱检测方法为:色谱条件，分析色谱柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，检测波长205nm，柱温30°C，流速0.8ml/min，理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap):4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor):175V;截取锥电压(Skimmer):65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以11%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以82%甲醇18ml溶液洗脱，收集82%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；本发明药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.642,0.670,0.679,0.700,0.75，1.000，1.009，1.008，1.008，1.005，1.009，1.007，1156，1.072，1.084;相对保留峰面积分别为:1.455,2.368，1.832，11.404,3.311，1.000,0.781,0.385,0.509,0.769,0.570,0.362，0.375,0.265,0.415。上述本发明药物组合物注射液的原料药组成为:黄芪25-35重量份、人参8_12重量份、苦参素0.5-1.5重量份；本发明药物组合物注射液的制备方法为:以上三味药,人参用60-80%的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为650C1.101.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为65°C1.101.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75%，用氢氧化钠调PH值至67，静置10-18小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为650C1.101.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85%，用氢氧化钠调值PH至67，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水到400ml，用氢氧化钠调PH值至67，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调PH值至67，加活性炭适量，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至67，100—120°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。上述本发明药物组合物注射液的原料药组成为:黄芪30重量份、人参10重量份、苦参素I重量份；本发明药物组合物注射液的制备方法为:以上三味药，人参用75%的乙醇，回流提取三次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.101.20(65°C)的清膏，备用；黄芪加水煎煮二次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.101.20(65°C)的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75%，用氢氧化钠调PH值至67，静置12小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.101.15(650C)的清膏；再加乙醇使含醇量达85%，用氢氧化钠调值PH至67，静置，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加注射用水到400ml，用氢氧化钠调PH值至67，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调PH值至67，加活性炭适量，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至67，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果:本发明药物组合物注射液含量测定方法，更加明确了产品的有效成分及其含量测定方法，能更好的控制产品质量，保证产品更安全、有效；本发明使用指纹图谱技术有效的控制了本发明药物组合物注射液的质量；通过实验证明本发明指纹图谱测定方法精密度良好，重现性较好，供试品溶液在24h内稳定性良好;本发明通过高分辨质谱对化学成分的鉴定，实验依据更加充分和考靠；所鉴定的色谱峰经过该色谱峰(TIC)保留时间区域的质谱图比较，证明该色谱峰显示了单一的化合物；本发明药物组合物注射液色谱指纹图谱(除苦参素外)中共鉴定了16个化学成分，以上化学成分进一步经过高分辨质谱进行了结构确认；四个化学成分来源于药材黄苗，分别为(6aR,IlaR)-3-hydroxy-9,lO-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-sambubioside,9,10_二甲氧基紫植烧-3-0-β-D-匍萄糖昔、2’-轻基-3’，4’-二甲氧基异黄烷-7-0-β-D-葡萄糖苷和黄芪甲苷；十二个化学成分来源于药材人参，其中8个化学成分(人参皂苷Re，Rgl，Rf，RbI，Re，Rg2，Rb2和Rd)来源于人参药材中的原型成分，4个化学成分来源于人参药材中含量高的原型成分在生产和制剂工艺中(药材提取溶液的酸性环境、较高温度加热80度，制剂灭菌100度加热)特定工艺条件下分解产生的次级人参皂苷，但本身也是活性化学成分。附图:1.未进行固相萃取处理的本发明药物组合物注射液供试品2.氧化苦参碱的ESI(+)MS的质谱图3.氧化苦参碱为UV205nm检测I4.氧化苦参碱为UV205nm检测25.本发明药物组合物注射液中化学成分低分辨LC-MS鉴定6.本发明药物组合物注射液中化学成分低分辨LC-MS鉴定人参皂苷Rgl7.本发明药物组合物注射液中化学成分低分辨LC-MS鉴定人参皂苷Re8.9,10-_■甲氧基紫植烧-3-0-β-D-甸萄糖昔(N0.4)9.2’-羟基-3’，4’-二甲氧基异黄烷-7-0-β-D-葡萄糖苷(N0.5)10.人参皂苷Rf(N0.6)11.人参皂苷Rbl(N0.7)12.人参皂苷Re(N0.8)13.人参皂苷Rg2(N0.9)14.人参皂苷Rb2(N0.10)15.人参皂苷Rhl(N0.11)16.黄芪甲苷(N0.12)17.人参皂苷Rd(N0.13)18.人参皂苷Rg5，Rg6,RKl，F419.人参皂苷Rh4或Rk3(N0.15)20.人参皂苷Rk3或Rh4(N0.16)21-1.ESI(-)负离子的总离子流图(TIC)21_2.0六0检测器图谱(205.)22.本发明药物组合物注射液组分高分辨LC-MS鉴定(N0.1)23.人参皂苷Rgl(N0.2)24.人参皂苷Re(N0.3)25.9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷(N0.4)26.2’-羟基-3’，4’-二甲氧基异黄烷-7-0-β-D-葡萄糖苷(N0.5)27.人参皂苷Rf(N0.6)28.人参皂苷Rbl(N0.7)29.人参皂苷Re(N0.8)30.人参皂苷Rg2(N0.9)31.人参皂苷Rb2(N0.10)32.人参皂苷Rhl(N0.11)33.黄芪甲苷(N0.12)34.人参皂苷Rd(N0.13)35.人参皂苷Rg5、F4、Rkl或Rg6(N0.14)36.人参皂苷Rh4或Rk3(N0.15)37.人参皂苷Rk3或Rh4(N0.16)38.本发明药物组合物注射液150min图谱39.空白梯度图谱40.本发明药物组合物注射液指纹图谱下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明；本发明实验例中药物组合物注射液均由实施例1方法制备。实验例IHPLC-ES1-1ontrap分析鉴定本发明药物组合物注射液中的化学成分I仪器与色谱质谱条件1.1仪器与材料高效液相色谱-质谱联用仪:高效液相:Agilent1200series;质谱:BrukerHCT1ntrap(三维离子讲质谱仪)色谱纯乙臆(Acetonitrile):HPLCgrade,FisherScientific色谱纯甲醇(Methanol):HPLCgrade,TianjinJizhunChemicals超纯水(Water):ultra-purewater固相萃取柱(SPE):TianjinShuangjichromatographyscientific1.2色谱条件分析色谱柱:AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm检测波长:205nm,柱温:30°C,流速:0.8ml/min理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000Timetable:Time(min)Acetonitrile-water(V/V)015:852019:813625.5:74.55050:506570:308570:301.3质谱条件ESIconditions:GasTemp:350°CDryingGas:8L/minNebulizer:30psiVcap:4000V`MS1ntrapconditions:CapillaryExit:145VSkimmer:40V1.4工作站BrukerESICompass1.3forHCT/EsquireDataAnalysisversion4.02供试品溶液制备`2.1样品前处理本发明药物组合物注射液中(实施例1制备)含有大量的苦参素(10mg/mL)，而苦参素是氧化苦参碱(Oxymatrine)与极少量氧化槐果碱(Oxysophocarpine)的混合碱,本实验以液质联用(LC-MS)方法鉴定了大量氧化苦参碱的存在；HPLC-ES1-MS分析:在色谱指纹图谱开始2-5min出现一很大的色谱峰(图1)，经HPLC-ES1-MS鉴定为苦参素；氧化苦参碱的分子量为264.4，质谱图中的265.1为氧化苦参碱的[M+H]+峰，529.2为氧化苦参碱的[2M+H]+峰(图2);为了避免大量苦参素的存在对人参和黄芪化学成分分析的干扰，我们采用固相萃取方法除去大量的苦参素。2.2样品前处理实验步骤:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg;活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；备注:利用薄层色谱法(TLC)鉴定酸水洗脱液、水洗脱液含有大量苦参素，10%甲醇洗脱液中含有极少量的苦参素，80%甲醇洗脱液未见苦参素斑点，而显示紫红色皂苷的斑点；100%甲醇洗脱液未见明显斑点；进一步对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰。权利要求1.一种药物组合物注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法:A、药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.98·1.10mg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0·1.2mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1V/V的比例混合，制成浓度为1.01.lmg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液23ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B、药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为·15.016.5μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-·18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤,进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18:150X4.6mm,5μm,流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:0分钟:15%A，30分钟:25%A，40分钟:40%A，检测波长207nm，柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛·0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C、药物组合物注射液指纹图谱检测方法为:色谱条件，分析色谱柱AgilentXDB-C18:·150X4.6mm,5μm,检测波长205nm，柱温30°C，流速·0.8ml/min,理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:0分钟:15%A，20分钟:19%A，36分钟:25.5%A,50分钟:50%A，65分钟:70%A，85分钟:70%A;质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap):4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor):175V;截取锥电压(Skimmer):65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以·15mlI%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以8%12%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以75%85%甲醇18ml溶液洗脱，收集75%85%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用·0.45μπι微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.712±0.071,0.740±0.074,0.749±0.075,0.769±0.077,0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120;相对保留峰面积分别为:1.616±0.161,2.631±0.263,2.036±0.204，12.671±1.267,3.346±0.335，1.000±0.000，0.868±0.087，0.428±0.043，0.566±0.057，0.854±0.085，0.633±0.063,0.402±0.040,0.417±0.042,0.295±0.030,0.461±0.046；药物组合物注射液由如下方法制成:黄苗25-35重量份、人参8-12重量份、苦参素0.5-1.5重量份以上三味药，人参用60-80%的乙醇，回流提取1-3次，每次1_2小时，合并提取液，减压浓缩至相对密度为65°C1.101.20的清膏，备用；黄芪加水煎煮1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为65°C1.101.20的清膏，与人参清膏合并，加乙醇使含醇量达75%，用氢氧化钠调PH值至67，静置10-18小时，取上清液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为65°C1.101.15的清膏；再加乙醇使含醇量达85%，用氢氧化钠调值PH至67,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到400ml,用氢氧化钠调PH值至67，100°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤；用氢氧化钠调PH值至67，加活性炭适量，搅匀，煮沸15分钟，滤过，滤液备用；另取苦参素溶解，用稀盐酸调PH值至67，100--120°C灭菌30分钟，冷藏，抽滤，与脱炭后的药液合并，混匀，加注射用水至规定量，滤过，灌装，即得。2.如权利要求1所述的药物组合物注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法:A、药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.999mg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.100mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1V/V的比例混合，制成浓度为1.050mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B、药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为15.9μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μL分析;液相条件=AgilentEclipseXDB-C18:.150X4.6mm，5μm，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:0分钟:.15%A，30分钟:25%A,40分钟:40%A，检测波长207nm,柱温30V，流速0.8ml/min;精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C、药物组合物注射液指纹图谱的质量检测方法为，色谱条件:分析色谱柱=AgilentXDB-C18:150Χ4.6_，5μπι，检测波长:205nm，柱温:30°C，流速:0.8ml/min，理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:0分钟15%A,20分钟19%A,36分钟25.5%A,50分钟50%A,65分钟70%A,85分钟70%A;质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap)4000V；四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor)175V；截取锥电压(Skimmer)65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15ml1%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱,然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.712,0.740,0.749,0.769,0.834，1.000，1.019，1.031，1.038，1.045，1.059，1.072，.1.173，1.191，1.204;相对保留峰面积分别为:1.616,2.631,2.036，12.671,3.346，1.000，.0.868,0.428,0.566,0.854,0.633,0.402,0.417,0.295,0.461。3.如权利要求1所述的药物组合物注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法:Α、药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.10mg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成浓度为1.0mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液2.1ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水IOml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B、药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为15.2μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱,再以IOml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤,进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，检测波长207nm,柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C、药物组合物注射液指纹图谱检测方法为:色谱条件，分析色谱柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm,检测波长205nm，柱温30°C，流速0.8ml/min,理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min),70%A(65min),70%A(85min)；质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap):4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor):175V;截取锥电压(Skimmer):65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以9%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以78%甲醇18ml溶液洗脱，收集78%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；本发明药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.781,0.791,0.810,0.830,0.91，1.000，1.119，1.131，1.138，1.145，1.159，1.172，1.273，1.2911.304;相对保留峰面积分别为:1.776,2.891,2.236，13.671，3.676，1.000,0.948,0.471,0.616,0.939,0.696,0.442,0.459,0.325,0.507。4.如权利要求1所述的药物组合物注射液的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下含量测定、鉴别和/或指纹图谱检测方法:Α、药物组合物注射液中总皂苷成分的含量测定方法为:对照品溶液制备，精密称取人参皂苷Rgl标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人参皂苷储备溶液；精密称取黄芪甲苷标准品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.1Smg/ml的黄芪甲苷储备溶液，将以上两种储备溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成浓度为1.09mg/ml对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液3ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脱，将80%甲醇-水洗脱部分蒸干，取甲醇适量定容于2ml容量瓶，制成供试品溶液；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；B、药物组合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-Ο-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法为:对照品溶液制备，称取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-Ο-β-D-葡萄糖苷对照品，配制为16.3μg/ml的对照品溶液；供试品溶液制备，精密量取本发明药物组合物注射液.10ml，水浴蒸干，残渣加入I%冰醋酸水溶液3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗分离，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脱,再以.1Oml水洗脱，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以80%甲醇18ml溶液洗脱，收集80%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μL分析；液相条件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，检测波长207nm,柱温30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供试品溶液200μL，置于试管中，氮气吹干，加入香草醛0.2ml，高氯酸0.8ml混匀，于60°C进行显色反应15min，加入冰醋酸5ml混匀，冰浴冷却lmin，以空白溶液作参比，在552nm波长下，测定吸光度，代入标准曲线计算总皂苷的量，即得；C、药物组合物注射液指纹图谱检测方法为:色谱条件，分析色谱柱AgilentXDB-C18.150X4.6mm5μm,检测波长205nm，柱温30°C，流速0.8ml/min,理论板数按人参皂苷Rf峰计算应不低于200000，流动相:以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min),70%A(65min),70%A(85min)；质谱条件:电喷雾(ESI)离子源，正离子模式；气帘气温度(Gastemp)350°C;气帘气流速(Gasflow)8L/min;辅助气压力(Nebulizer)为30psi;毛细管电压(Vcap):4000V;四级杆-飞行时间串联质谱仪条件(MSQTOFconditions):碎裂电压(Fragmentor):175V;截取锥电压(Skimmer):65V;第一重八级杆的射频电压(0CT1RFVpp)750V;供试品溶液制备:精密量取本发明药物组合物注射液10ml，水浴蒸干，残渣加入1%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗)分离，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脱，再以IOml水洗脱，然后以11%甲醇水溶液15ml洗脱，弃去上述洗脱液，再以82%甲醇18ml溶液洗脱，收集82%甲醇洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μπι微孔滤膜过滤，进样10μI分析；对10%和100%甲醇洗脱液进行HPLC分析，在对应的保留时间没有皂苷类和黄酮类色谱峰；本发明药物组合物注射液指纹图谱共有15个指纹峰，共有指纹峰的相对保留时间分别为:0.642,0.670,0.679,0.700,0.75，1.000，1.009，1.008，1.008，1.005，.1.009，1.007，1.156，1.072，1.084;相对保留峰面积分别为:1.455,2.368，1.832，11.404，.3.311，1.000,0.781,0.385,0.509,0.769,0.570,0.362,0.375,0.265,0.415。全文摘要本发明公开一种药物组合物注射液的质量检测方法；其中色谱指纹图谱质量检测方法用分析色谱柱AgilentXDB-C18150×4.6mm5μm，检测波长205nm，柱温30℃，流速0.8ml/min；供试品溶液制备，取药物组合物注射液，水浴蒸干，残渣加入冰醋酸水溶液溶解，上固相萃取柱分离，梯度洗脱，残渣加甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，进样10μl分析，供试品指纹图谱(见附图40)；本发明还提供该药物组合物注射液中总皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。文档编号G01N21/31GK103105371SQ20111035496公开日2013年5月15日申请日期2011年11月10日优先权日2011年11月10日发明者段宏泉,翁红,张子安,李颖,杨玲申请人:长白山制药股份有限公司