专利名称：消结安制剂质量检测中供试品溶液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药制剂质量检测中供试品溶液的制备方法。
背景技术：
消结安(原名乳癖安消)制剂是由功劳木、三叉苦、益母草、鸡血藤、土茯苓、连翘等六味药材组成的中药复方制剂，具有活血化瘀，软坚散结的功能。临床用于气滞血瘀所致乳癖，乳腺小叶增生，卵巢囊肿，子宫肌瘤见上述证候者。消结安胶囊现行质量标准收载于《国家中成药标准汇编》地标升国标口腔肿瘤儿科分册(411-414页)，标准编号WS-10433 (ZD_0433)-2002，消结安口服液现行质量标准收载于《国家中成药标准汇编》地标升国标口腔肿瘤儿科分册(415-418页)，标准编号 WS-10646 (ZD-0646)-2002。上述消结安制剂现行国家药品标准涉及颜色反应检测黄酮类成分，薄层色谱法鉴别功劳木成分盐酸小檗碱和盐酸巴马汀，以及高效液相法检测功劳木成分盐酸小檗碱的含量。质量控制指标较少，不利于药品的质量控制。中国专利200610047040. 7公开了ー种乳癖安消颗粒的鉴别方法，采用薄层色谱鉴别法鉴别益母草中的成分盐酸水苏碱，供试品以甲醇超声或加热回流提取、中性氧化铝纯化制备，以正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，喷以碘化铋钾试液，检视。中国专利200610150616. 2公开了治疗妇科疾病的乳癖安消药物的质量控制方法，采用薄层色谱鉴别法鉴别益母草中的成分盐酸水苏碱，供试品采用甲醇或乙醇提取、活性炭-氧化铝纯化的方法制备，以正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，喷以生物碱显色剂，检视。中国专利 20071020023. 7公布了治疗妇科疾病的胶囊剂及其制备方法和质量控制方法，采用薄层色谱鉴别法和高效液相色谱法对益母草中的成分盐酸水苏碱进行鉴别和含量測定，供试品采用甲醇水浴回流提取，中性氧化铝纯化的方法制备，薄层色谱法以正丁醇-盐酸-水为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试液为显色剂，检视；高效液相色谱色谱条件为以氨基键合硅胶为填充剂，乙腈-PH5. 5的磷酸盐缓冲液(85:15)为流动相，检测波长203nm。以上专利公布的方法均能对其制剂中的益母草成分盐酸水苏碱进行鉴别和/或含量測定，但用于消结安制剂中益母草成分盐酸水苏碱的鉴别和/或含量測定吋，存在色谱效果不好、分离效果差、有杂质干扰、重现性差等问题。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术存在问题，提供消结安制剂质量检测中一种供试品溶液的制备方法，为消结安制剂质量检测方法中益母草指标性成分盐酸水苏碱的薄层鉴别和/或含量測定提供供试品溶液。益母草是消结安制剂中的主要成分之一，性苦、辛、微寒。活血调经，利尿消肿，清热解毒，临床用于治疗月经不调，痛经经闭，恶露不浄，水肿尿少，疮疡肿毒等。盐酸水苏碱是益母草中的有效成分之一，具有提高冠状动脉和心肌营养性血流量、改善微循环、减慢心率、减少心输出量等作用；能抑制乳腺癌和子宮肌腺病的发生；还具有降低出血率和出血时间，兴奋子宮等作用。因此也是消结安制剂中的主要活性成分之一。2010年版中国药典将盐酸水苏碱作为益母草鉴别和含量測定的指标性成分。药典中含有益母草的诸多成方制剂也以盐酸水苏碱作为益母草的指标性成分进行鉴别和/或含量測定。基于上述原因，我们以盐酸水苏碱为指标性成分建立消结安制剂中益母草的质量控制方法。本发明为消结安制剂中益母草的质量控制提供一种供试品溶液，该供试品溶液可用于消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱鉴别和/或含量測定。在研究消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱的鉴别和含量測定方法吋，我们參照2010年版中国药典中益母草药材以及含有益母草的成方制剂如益母草颗粒、益母草ロ服液、益母草膏、妇康宁片、肾复康胶囊、肾康宁片等的盐酸水苏碱鉴别和/或含量测定方法进行试验，供试品溶液制备中采用732型阳离子交換树脂、氧化铝-活性炭、中性氧化铝等多种方法进行纯化，但所制备的供试品溶液用于薄层色谱法鉴别和/或用薄层色谱扫描法、高效液相色谱法测含量均不能得到良好的效果。在此基础上我们又对色谱条件进行了筛选，仍不能得到好的色谱結果。薄层色谱法色谱图主要出现供试品溶液与对照品溶液色谱斑点位置不一致、颜色不一致、阴性有干扰、重现性不好等问题。高效液相色谱法色谱图中主要出现杂质峰较多，基线较高，各成分分离不开，重现性差等问题。由此，我们考虑可能供试品溶液中还有其它的干扰成分不能通过现有的纯化方法除去，所以进行了新纯化方法的研究。十八烷基硅烷键合硅胶通常作为反相硅胶键合相，其吸附原理与732型阳离子交换树脂、氧化铝-活性炭、中性氧化铝等的吸附原理不同，可用于分离不同极性的物质，极性较大的物质先被洗脱下来。盐酸水苏碱是一种极性较大的生物碱，不被十八烷基硅烷键合硅胶吸附，水洗即可洗脱，而其它非极性及中等极性的物质可被其吸附，从而达到除去消结安制剂中其它干扰性成分的目的。本发明所述的消结安制剂质量检测中供试品溶液的制备方法由以下步骤组成 一、提取液制备
称取消结安固体制剂或其内容物0. 5 10. 0g，加入提取生物碱通用溶剤，超声处理， 或加热回流，放冷，滤过，滤液即为提取液，备用；
或量取消结安液体制剂4 80ml，滤过，滤液即为提取液，备用； ニ、提取液纯化
取提取液，蒸干，残渣加盐酸溶液(1 - 5000) 1 IOml使溶解，离心，取上清液缓慢通过十八烷基硅烷键合硅胶(50 500mg)柱，用水2 30ml洗脱，收集流出液和洗脱液，蒸干，残渣加体积百分比30 100%甲醇或50 95%乙醇1 IOml使溶解，静置，取上清液， 即为消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱薄层鉴别和/或含量測定方法中的供试品溶液。本发明所述的消结安固体制剂是由以下原料药按配比制成的中药复方固体制剂 功劳木1100、三叉苦750、益母草750、鸡血藤750、土茯苓900、连翘750。所述的消结安液体制剂是由以上原料药按配比制成的中药复方液体制剂。本发明的步骤ー为该领域中的通用技木，所述的提取生物碱通用溶剂如水、 水-盐酸溶液、水-冰醋酸溶液、体积百分比30 100%甲醇、体积百分比30-95%乙醇、2 10%冰醋酸-40 70%乙醇溶液等。所述的提取溶剂用量通常为10 250ml。所述的超声处理时间通常为5 50分钟，加热回流提取时间通常为10 150分钟。步骤ー还可以扩展为将消结安固体制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剤、外用贴膏剂、凝胶剂、膜剂等剂型按照通常方法，加入提取生物碱通用溶剤，超声处理，或加热回流， 放冷，滤过，滤液即为提取液。消结安液体制剂，如ロ服液、注射剂、气雾剂、搽剂、酊剂等剂型，过滤，滤液即为提取液。本发明的步骤ニ提取液纯化的方法还可为提取液用中性氧化铝、活性炭-中性氧化铝、732型阳离子交換树脂中任意ー种或几种常用纯化方法先进行一次或多次纯化，得纯化液，再将纯化液蒸干，残渣加盐酸溶液(1 - 5000) 1 IOml使溶解，离心，取上清液缓慢通过十八烷基硅烷键合硅胶(50 500mg)柱，用水2 30ml洗脱，收集流出液和洗脱液，蒸干，残渣加体积百分比30 100%甲醇或50 95%乙醇1 IOml溶解，静置，取上清液，即为消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱薄层鉴别和/或含量測定方法中的供试品溶液。所述的用中性氧化铝纯化，常用方法为提取液直接通过中性氧化铝柱，甲醇或乙醇洗脱，洗脱液即为纯化液。所述的用活性炭-中性氧化铝纯化，常用方法为提取液直接通过活性炭-中性氧化铝柱，甲醇或乙醇洗脱，洗脱液即为纯化液。所述的用732型阳离子交換树脂纯化，常用方法为提取液加稀盐酸调节pH至 1 3，过滤，滤液通过732型氢型阳离子交換树脂柱或732型钠型阳离子交換树脂柱，依次用水、乙醇洗脱，弃去洗脱液，再用氨溶液洗脱，洗脱液即为纯化液。用本发明制备方法制备得到的供试品溶液可用于薄层色谱法鉴別，和/或薄层色谱扫描法、高效液相色谱法测定消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱的含量。本发明制备得到的供试品溶液用于薄层色谱法鉴别消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱，常用方法为取盐酸水苏碱对照品，加体积百分比30 100%甲醇或50 95%乙醇制成每Iml含1 IOmg的溶液，作为对照品溶液。按照2010年版中国药典一部附录VI B薄层色谱法进行试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各1 10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸(10:6:1)、丙酮-乙醇-盐酸(10:10:1)、乙酸乙酷-无水乙醇-甲酸(5:2:2)、正丁醇-盐酸-水(8:2:1)、乙酸乙酷-正丁醇-盐酸(1:8:3) 中的任意ー种作为展开剂，展开，取出，晾干，在105°C加热10-30分钟，放冷，显色。所述显色方法可为喷以1%三氯化铁乙醇溶液-稀碘化铋钾试液(1:10)混合溶液显色；喷以碘化铋钾试液显色；先喷10%硫酸乙醇溶液，晾干，再喷碘化铋钾试液显色等。本发明制备得到的供试品溶液用于薄层色谱扫描法测消结安制剂中益母草的指标性成分盐酸水苏碱的含量，按照已公布的薄层色谱扫描法测盐酸水苏碱含量的方法，如 2005年版中国药典公布的益母草，2010年版中国药典公布的益母草ロ服液、益母草颗粒、 益母草膏等含量測定项下盐酸水苏碱含量測定方法进行操作，即取本发明制备得到的供试品溶液按上述方法的色谱条件进行检測。本发明制备得到的供试品溶液用于高效液相色谱法测定消结安制剂中益母草的指标性成分盐酸水苏碱的含量，按照已公布的高效液相色谱法测盐酸水苏碱含量的方法， 如2010年版药典公布的益母草、益母丸含量測定项下盐酸水苏碱含量的測定方法，中国
5专利20071020023. 7公布的盐酸水苏碱含量測定方法，文献《HPLC法測定益母草中盐酸水苏碱的含量》(安徽医药，2008年07期)公布的盐酸水苏碱含量測定方法等进行操作，即 取本发明制备得到的供试品溶液按上述方法的色谱条件进行检測。本发明方法可用于消结安制剂，如消结安胶囊剂、ロ服液、片剂、颗粒剂、丸剤、注射剂、外用贴膏剂、凝胶剂、膜剂、气雾剂、搽剂或酊剂等剂型中益母草的指标性成分盐酸水苏碱薄层鉴别和/或含量測定供试品溶液的制备。本发明的优点和效果如下
1、本发明以十八烷基硅烷键合硅胶纯化作为消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱鉴别和/或含量測定方法中供试品溶液的制备中的纯化方法。通过该法纯化可以有效的排除消结安制剂中其它成分的干扰。2、本发明方法制备得到的供试品溶液，用于消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱鉴别和/或含量測定吋，所得到的色谱图效果好。薄层色谱图中所测成分斑点清晰， 与其它斑点分离良好，无背景干扰，高效液相色谱图中所测成分色谱峰峰形好，分离度好， 无杂质峰干扰。如结合中性氧化铝、活性炭-中性氧化铝、732型阳离子交換树脂纯化，色谱图效果更好。利于消结安制剂中益母草指标性成分定性定量分析。3、本发明方法所制备得到的供试品溶液，用于消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱鉴别和/或含量測定，采用已公布的色谱方法进行试验，专属性強，耐用性好，重现性好。4、本发明方法所制备得到的供试品溶液，可用于消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱鉴别和/或含量測定，増加了消结安制剂中质量控制的方法，从而提高了消结安制剂的质量标准，对于有效监测、控制制剂生产过程和市场上制剂产品的质量，确保产品安全、有效、质量稳定如一具有实际意义。本发明方法与现有方法比较结果
1.试验方法
分別取消结安胶囊、消结安口服液按照下列方法进行试验，并对各种方法进行验证。方法1 取消结安胶囊，按照中国专利200710200023. 7公布的薄层色谱鉴别法和高效液相色谱法试验。方法2 取消结安胶囊，按照中国专利200610150616. 2公布的水苏碱或盐酸水苏
碱薄层色谱法鉴别方法试验。方法3 取消结安胶囊，按照中国专利200610047040. 7公布的益母草的鉴别方法
ο方法4:取消结安口服液，按照2010年版中国药典中“益母草ロ服液”质量标准公布的鉴别项下方法试验。方法5 本发明实施例1。方法6 本发明实施例2。方法7 本发明实施例3。2.试验结果
2.1薄层色谱结果
权利要求
1.一种消结安制剂质量检测中供试品溶液的制备方法，由以下步骤组成 一、提取液制备称取消结安固体制剂或其内容物0. 5 10. 0g，加入提取生物碱通用溶剤，超声处理， 或加热回流，放冷，滤过，滤液即为提取液，备用；或量取消结安液体制剂4 80ml，滤过，滤液即为提取液，备用； 其特征在于 ニ、提取液纯化取提取液，蒸干，残渣加盐酸溶液1ヰ5000 1 IOml使溶解，离心，取上清液缓慢通过十八烷基硅烷键合硅胶50 500mg柱，用水2 30ml洗脱，收集流出液和洗脱液，蒸干， 残渣加体积百分比30 100%甲醇或50 95%乙醇1 IOml使溶解，静置，取上清液，即为消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱薄层鉴别和/或含量測定方法中的供试品溶液。
2.一种消结安制剂质量检测中供试品溶液的制备方法，由以下步骤组成 一、提取液制备称取消结安固体制剂或其内容物0. 5 10. 0g，加入提取生物碱通用溶剤，超声处理， 或加热回流，放冷，滤过，滤液即为提取液，备用；或量取消结安液体制剂4 80ml，滤过，滤液即为提取液，备用； 其特征在于ニ、提取液用中性氧化铝、活性炭-中性氧化铝、732型阳离子交換树脂中任意ー种或几种常用纯化方法先进行一次或多次纯化，得纯化液，再将纯化液蒸干，残渣加盐酸溶液 1 - 5000 1 IOml使溶解，离心，取上清液缓慢通过十八烷基硅烷键合硅胶50 500mg 柱，用水2 30ml洗脱，收集流出液和洗脱液，蒸干，残渣加体积百分比30 100%甲醇或 50 95%乙醇1 IOml溶解，静置，取上清液，即为消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱薄层鉴别和/或含量測定方法中的供试品溶液。
3.如权利要求1或2所述的消结安制剂质量检测中供试品溶液的制备方法，其特征在于所述的消结安固体制剂是由以下原料药按配比制成的中药复方固体制剂功劳木1100、 三叉苦750、益母草750、鸡血藤750、土茯苓900、连翘750。
4.如权利要求1或2所述的消结安制剂质量检测中供试品溶液的制备方法，其特征在于所述的消结安液体制剂是由以下原料药按配比制成的中药复方液体制剂功劳木1100、 三叉苦750、益母草750、鸡血藤750、土茯苓900、连翘750。
全文摘要
本发明涉及一种中药制剂质量检测中供试品溶液的制备方法。本发明所述的制备方法由以下步骤组成一、提取液制备称取消结安固体制剂或其内容物0.5～10.0g，加入提取生物碱通用溶剂，超声处理，或加热回流，放冷，滤过，滤液即为提取液，备用；或量取消结安液体制剂4～80ml，滤过，滤液即为提取液，备用；二、提取液纯化取提取液，蒸干，残渣加盐酸溶液(1→5000)1～10ml使溶解，离心，取上清液缓慢通过十八烷基硅烷键合硅胶(50～500mg)柱，用水2～30ml洗脱，收集流出液和洗脱液，蒸干，残渣加体积百分比30～100%甲醇或50～95%乙醇1～10ml使溶解，静置，取上清液，即为消结安制剂中益母草指标性成分盐酸水苏碱薄层鉴别和/或含量测定方法中的供试品溶液。
文档编号G01N30/14GK102539588SQ20111035581
公开日2012年7月4日 申请日期2011年11月11日 优先权日2011年11月11日
发明者杨增明 申请人:云南良方制药有限公司