专利名称：一种快速检测米非司酮的方法
技术领域：
本发明属药品检测技术领域，涉及一种对包含米非司酮的药品的真伪鉴别的检测方法。特别涉及一种快速检测米非司酮的方法。
背景技术：
米非司酮为新型抗孕激素，并无孕激素、雌激素、雄激素及抗雌激素活性，能与孕酮受体及糖皮质激素受体结合，对子宫内膜孕酮受体的亲和力比黄体酮强5倍，对受孕动物各期妊娠均有引产效应，可作为非手术性抗早孕药。米非司酮是当前国内常见的避孕药和抗早孕药。服用不同的剂量的米非司酮会达到不同的效果，通常情况下，每次服用米非司酮10至25毫克可用于紧急避孕；服用150毫克可终止49天内的妊娠。近年来出现不法商贩用不包含活性成分的空白片冒充米非司酮片的情况，严重损害了消费者的权利和健康。而且该类没有有效成分的假药的包装与正规药品几乎没有区别，如果不借助实验室的色谱仪器设备，很难辨别真伪。《中国药典》2010年版提供了2种米非司酮原料药的鉴别方法，分别为紫外分光光度法和红外光谱法，对制剂米非司酮片提供了紫外分光光度法。这些方法均需专业人员借助现代分析仪器，仅能在实验室中才能进行鉴别。因此，需要一种准确、简单、速度快、专业性要求低的检验方法，能准确快速的鉴别出药品是否为仿冒米非司酮制剂的空白药品(即不合活性成分米非司酮的假药，通常情况下是片剂的形式)的方法，以提高检验效率和准确度，并能供非检验专业的药品监管人员在药品监管现场进行快速筛查。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够准确、简单、速度快、和/或专业性要求低地检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的空白药品的方法。本发明人令人惊奇地发现，采用硫酸-醋酐混合显色剂处理该可疑药品，可以方便地在药品市场监督的检查现场对此类药品制品进行检查，并且方法准确、简单、速度快、和/或专业性要求低。本发明基于以上发现而得以完成。为此，本发明第一方面提供了一种检测药品中的米非司酮的方法，或者一种检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品的方法，该方法包括以下步骤(1)取待检的所述药品适量，与提取溶剂混合，振摇，得提取液；(2)使步骤(1)提取液与硫酸-醋酐试剂混合，得混合液；(3)观察步骤( 所得混合液的颜色变化，若突然呈现明显的黄色、橙黄色和/或橙红色的颜色变化，则判断该药品中可能含有米非司酮；若混合液的颜色无变化，则可判断该药品中不含米非司酮。这样，如果步骤(3)结果表明“该药品中不含米非司酮”，则可直接认定它是仿冒的米非司酮制剂；在必要的情况下可进一步借助其它方法例如分光光度法作进一步的判定；这样本发明的方法可以大大减少市场监督时检查现场的工作量，依法及时维护市场秩序。根据本发明第一方面的方法，其中所述“药品”是确实含有、标示含有或者可能含有米非司酮的任何药品，或者确实具有、标示具有或者可能具有米非司酮的生理学作用的任何药品。并且根据本发明的原理，本发明还包括涉及上述情形的包含米非司酮的复方制剂，例如由米非司酮与另外一种或多种活性成分组成的复方制剂，亦可借助于本发明方法来简单快速地检查该复方制剂是否可能是假药。根据本发明第一方面的方法，其中所述“药品”、“制品”、“仿冒米非司酮制剂的空白药品”、“仿冒米非司酮制剂的药品”、或“怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品”，它们在本发明中可互换使用，其包括任何欲意给予哺乳动物例如人类的任何人工制成品，特别是人工混合制品，其包括但不限于药品、保健食品、食品、食品添加剂等，特别是药品。在一个实施方案中，所述药品本身或者通过其外包装或者通过使用说明书的形式标示含有米非司酮， 或者标示具有米非司酮的生理学功能。本领域技术人员理解，标示含有米非司酮或具有其生理学功能的药品，其在许多情况下，例如在市售现场，公众、使用者、销售人员、市场监管人员以及专业的药品检验人员在不通过专业的仪器、设备或方法的情况下，无法容易地判断该所谓的药品中是否确实含有米非司酮或具有米非司酮的生理学功能。在一个实施方案中，所述药品或指代它的类似术语是指一种制品，本领域技术人员(特别是健康/卫生/药监主管部门或者其工作人员)主观上或者客观上认为，该制品中可能有意地或者无意地未加入活性成分米非司酮，从而使得该制品不具有米非司酮的生理学功能，例如不具有避孕的效果。在本发明中，该药品亦可称为样品、检测样品等，本领域技术人员根据本发明的语境理解指代该药品的不同术语所具有的含义，例如使该药品与提取溶剂振摇后，得到的混合液体可以称为混合试液。在本发明中，该药品可以是固体(例如粉末或块状物，例如片剂的形式)、半固体、液体等状态。根据本发明第一方面的方法，步骤(1)中所述提取溶剂为有机溶剂。在一个实施方案中，所述的有机溶剂包括但不限于三氯甲烷、二氯甲烷或其组合，或者含它们的其它有机溶剂。该提取溶剂的作用在于使米非司酮溶解并与硫酸-醋酐试剂接触、混合、反应，因此任何能够实现该功能的含三氯甲烷或二氯甲烷的提取溶液均是适用的。在一个实施方案中，所述的有机溶剂为三氯甲烷。在一个实施方案中，所述的有机溶剂为二氯甲烷。根据本发明的方法，在步骤(1)中，所述药品和提取溶剂的量和比例不必作特别的限制，只要制品和提取溶剂混合后，可能存在的米非司酮溶解在溶剂中并达到本发明方法检测限即可。例如在一个实施方案中，在步骤(1)中的提取溶剂为0. 1 10ml，例如0. 5 5ml，例如1 5ml，例如1 :3ml ；所取的药品的量例如0. 1 10g，例如0. 1 5g ；或者所取的药品的量以米非司酮计为例如0. 01 500mg，例如0. 1 200mg，例如1 200mg，例如5 lOOmg， 例如10 lOOmg。本发明方法的检测限足以满足以上实施方案的范围选择。根据本发明第一方面的方法，其中步骤O)中所述的硫酸-醋酐试剂是硫酸与醋酐临用新配的混合试剂。在一个实施方案中，所述硫酸-醋酐试剂是硫酸与醋酐按 1 (0. 1 50)体积比混合的试剂，优选体积比为1 (1 50)，优选体积比为1 (5 50)，优选体积比为1 (10 50)，优选体积比为1 (10 30)，例如约1 20。本领域技术人员理解，硫酸与醋酐可以容许有较大的变化范围，虽然在某些比率下变色速度/强度上可能会有差异，然而并不影响本发明的实施。
根据本发明第一方面的方法，其中步骤( 中，所述硫酸-醋酐试剂与提取液的体积比为1 (1 100)，优选1 (1 50)，优选1 0 25)，优选1 (5 20)，优选 1 (5 12)，例如约1 8，例如约1 10。本领域技术人员理解，硫酸-醋酐试剂与提取液的体积比可以容许有较大的变化范围，虽然在某些比率下变色速度/强度上可能会有差异，然而并不影响本发明的实施。根据本发明第一方面的方法，其中步骤( 所述硫酸质量百分比浓度大于90%， 优选大于95 %，例如约96 %、约97 %、约98 %、约99 %、约99. 5 %。根据本发明的方法，一般情况下，如果药品中含有米非司酮，使用90%的硫酸溶液可以实现本发明的目的，虽然浓度较低时显色反应需要的时间会长一些，而当浓度较高例如达到约98%时，一般地在1分钟内即可以显示典型的颜色变化。因此，本发步骤O)的混合时间不必作特别的限定。由于米非司酮的溶液在遇硫酸-醋酐显色剂后产生粉色或红色，但随后颜色会逐渐消退，因此， 根据本发明的方法，步骤( 混合操作时间应尽可能短，只要达到混勻即可，然后观察颜色变化。因此在药液混勻之后，可在1分钟内观察颜色变化，优选在30秒内观察，例如在30 秒、20秒、15秒、10秒内观察颜色变化。根据本发明第一方面的方法，如果所述药品被判定为其中不合有米非司酮，则该药品可以进一步用其它方法进行检测，例如通过实验室的方法，例如分光光度法、HPLC法等。这样，本发明的方法特别适用于在市场上或者其它检测现场进行更大样本的检测和筛查，并进而减少实验室的工作量；由于本发明方法使用的检品量少，有利于维护商家合法利益和正常经营。基于本发明第一方面的方法，本发明第二方面提供了一种检测试剂盒，其用于检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品中是否含米非司酮，所述试剂盒包括盒体以及(i)提取溶剂，其封装于第一溶剂瓶中；(ii)硫酸，其封装于第二溶剂瓶中；(iii)醋酐；其封装于第三溶剂瓶中；和任选的(iv)使用说明资料，其上记载有使用该试剂盒检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品中是否含米非司酮的操作方法。根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述各溶剂瓶是可以反复开启和密封的溶剂瓶。该溶剂瓶的材质不作特别限制，例如可以是带有瓶塞、瓶盖等的玻璃瓶、塑料瓶等。三种溶剂瓶均可用于观察颜色的变化，为此目的，至少一个溶剂瓶以玻璃为材质是优选的。根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述第一溶剂瓶内装入的提取溶剂的体积占溶剂瓶容量的1/10 9/10，例如1/10 5/10，例如1/10 2/10。在溶剂瓶中预留一定空间是非常有益的，例如可以直接将待检制品直接加入到溶剂瓶中，盖严，然后振摇，使待检制品与提取溶剂充分混合，以尽可能地使可能存在的活性成分溶解在溶液中；这样本发明提供的试剂盒非常简单。根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述第二溶剂瓶和第三溶剂瓶中，至少一个溶剂瓶的剩余容量(即未填充试液的空间)足以填充另一溶剂瓶的溶液，并且该剩余容量足够使二种溶液在使用时混合。例如第二溶剂瓶的剩余容量是所需醋酐液体积量的1. 5 10倍，使得将醋酐倾入到硫酸中时有足够的空间使二者混合。根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述第一溶剂瓶、第二溶剂瓶和第三溶剂瓶中，至少一个溶剂瓶的剩余容量(即未填充试液的空间)足以填充另外两个溶剂瓶的溶液，并且该剩余容量足够使三种溶液在使用时混合。例如，第一溶剂瓶的剩余容量是所需硫酸-醋酐试剂的体积量的1. 5 10倍，使得将硫酸-醋酐试剂倾入到提取液中时有足够的空间使它们混合。又例如，第二溶剂瓶的剩余容量是所需硫酸-醋酐-提取溶液三者体积总量的1. 5 10倍，使得将提取液倾入到硫酸-醋酐试剂中时有足够的空间使它们混合。根据本发明第二方面的试剂盒，其中还可以包括第四溶剂瓶，其容量足以填充针对一个检品所需的硫酸-醋酐-提取溶液三者体积总量，例如是该体积总量的1.5 10倍。例如在一个实施方案中，将药品加入到提取溶剂瓶中进行提取，另外将第二溶剂瓶中的硫酸和第三溶剂瓶中的醋酐混合，再将提取液与硫酸-醋酐试剂分别倒入该第四溶剂瓶中，使它们混合，并观察颜色变化。根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述第一溶剂瓶中的提取溶剂、第二溶剂瓶中的硫酸、第三溶剂瓶中的醋酐，它们各自独立地是可供多次检验所需的量，从而使得本发明试剂盒成为一种多剂量试剂盒。根据本发明的精神，这些多剂量试剂盒的各种配置以及变型是可以由本领域技术人员容易实施的，并且这些各种配置以及变型均在本发明的精神和范围内。根据这些实施方案，本发明提供了可以在相同地点或者不同地点检测多个制品所需材料的试剂盒。根据本发明第二方面的试剂盒，其中所述使用说明资料可以是使用说明书、检测方法说明、检测判定标准等等，其形式可以是印刷有相应信息的纸张、卡片等，该使用说明资料基本上记载了本发明第一方面所述的方法。因此，本发明第一方面任一实施方案中，其中的任一技术特征同样适用于本发明第二方面的试剂盒或者适用于本发明的其它方面。本发明第三方面提供了一种信息说明资料，其中基本上记载了本发明第一方面任一项所述的方法。在一个实施方案中，该信息说明资料是呈选自下列的形式纸质文件(包括但不限于文件单页、小册子、刊物)、磁介质、光盘、软盘、电子出版物、网络出版物等，以及它们的组合。本发明第四方面提供了根据本发明第三方面信息说明资料检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品中是否合有米非司酮的方法。本发明第五方面提供了一种制品，其标示含有米非司酮，但是使用本发明第一方面所述方法、第二方面所述试剂盒和/或第三方面所述信息说明资料检测显示该制品不合有米非司酮。本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
本文使用的术语“怀疑”可以是因主观因素或者客观原因，使人认为标示含有米非司酮或具有其生理学功能的制品(例如药品)，其产品质量与其标示的不一致，特别是可能根本就不含有米非司酮，即通常人们所讲的空白片或假药。本文使用的术语“半定量”，是指该定量结果是粗略的，不是精确定量。本文使用的术语“定量限”，是指含量低于该限度时，不能定量。 本文使用的术语“硫酸-醋酐试剂”，亦可称为硫酸-醋酐显色剂或者显色剂，其是由硫酸和醋酐两者在临用前混合得到的。在本发明的一个实施方案中，所述试剂盒中还可以配备试管。本发明所述提取溶剂可以是三氯甲烷或二氯甲烷，或是任何含三氯甲烷或二氯甲烷的可以溶解米非司酮的混合溶剂。对于许多米非司酮制剂而言，其中含有较多的辅料，而提取溶剂多数并不能溶解这些辅料，因此，本发明方法中步骤(1)所得提取液可能是一种混悬液。根据本发明的方法，步骤(1)所得提取液不必过滤即可用于下一步骤，这大大简化了操作步骤，亦特别适用于极少量样品的处理。因此，在本发明第一方面的优选实施方案中，提供了一种检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品的方法，该方法包括以下步骤(1)取样品加提取溶剂1 anl，并振摇1分钟；(2)样品溶液无需过滤，直接使硫酸-醋酐组成的显色剂与步骤(1)所得样品溶液混合；(3)在10秒钟内观察步骤(2)所得混合液的颜色变化，若突然呈现明显的黄色、橙黄色和/或橙红色的颜色变化，则判断该药品中可能含有米非司酮；若混合液的颜色无变化，则可判断该药品中不含米非司酮。在本发明第一方面的另一优选实施方案中，提供了一种检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品的方法，该方法包括以下步骤(1)取样品(含标示的米非司酮为5 IOOmg)加提取溶剂三氯甲烷加1，并振摇 1分钟；(2)无需过滤，直接将新配的体积比为1 20的硫酸-醋酐显色剂约0. 25ml与步骤(1)的提取液混合；(3)在10秒钟内观察步骤( 所得混合液的颜色变化，若突然呈现明显的黄色、橙黄色和/或橙红色的颜色变化，则判断该药品中可能含有米非司酮；若混合液的颜色无变化，则可判断该药品中不含米非司酮。为克服现有技术的不足，本发明提供一种米非司酮药品的快速鉴别真伪的方法， 可用于判断药品是否为仿冒米非司酮的空白片。本发明与其它米非司酮药品的快速检测方法相比，具有如下优点(1)速度快本发明样品在溶解后无需过滤等步骤，在加入显色剂10秒钟内即可判断出结果，检测全过程仅耗时约3分钟。而其他方法检测全过程至少要耗时45分钟以上。方法紫外分光光度法红外光谱法本发明方法耗时制备样品溶液10 分钟，仪器准备 30分钟，仪器分析5分钟，累计制备过滤样品溶液10 分钟，蒸发20分钟， 制备样品和对照品溴化钾压片10分钟，仪制备溶解样品1 分钟，配制显色剂1分钟，显色 10秒钟，累计约45分钟器分析10分钟，累计 50分钟3分钟。(2)操作简便与其它方法相比本发明方法无需过滤，检测步骤少，操作更加简便。(3)结果准确本发明方法显色现象明显，抗干扰能力强，结果准确。(4)适用性强本发明操作简单，对操作环境无特殊要求，结果判断现象明显，无需具备专业技术经验，适于非检验专业的监管人员在药品监管现场操作。(5)灵敏度高本发明灵敏度高，对米非司酮的检测灵敏度至少可达到0.25mg/ml，一个最小剂量的片剂即可满足检测要求。在实施本发明方法时，以下方面亦考虑在本发明的精神和范围内本发明提供的一种米非司酮的快速鉴别方法的注意事项如下(1)米非司酮的溶液例如三氯甲烷溶液在遇硫酸-醋酐显色剂后产生黄色或橙黄色，但随后颜色会逐渐消退，故需要在加入显色剂后30秒钟(优选20秒钟，优选10秒钟)内观察溶液颜色的变化。(2)硫酸-醋酐显色剂由于长期放置后会变质，故须临用新配。(3)虽然随着硫酸-醋酐显色剂用量的增加显色效果会更明显，但同时样品溶液温度也会升高，故显色剂用量应控制在样品溶液体积的1/2以内。优选地，硫酸-醋酐试剂与提取液的体积比为1 (1 100)，优选1 (1 50)，优选1 0 25)，优选1 (5 20)，例如约 1 10。。
具体实施例方式下面通过具体的实例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。在以下试验中，如未另外说明，提及的硫酸是指浓度为98%的硫酸。在以下试验中，如未另外说明，提及的步骤(1)中的提取溶剂为例如anl，提及的硫酸-醋酐试剂是硫酸与醋酐按体积比1 20的混合物，提及的硫酸-醋酐试剂与提取液的体积比为1:8。
棚列1、·幌I始械■睡一 I鞭細牛1、取样量对不同类型样品推荐取样如下
权利要求
1.检测药品中的米非司酮的方法，该方法包括以下步骤(1)取待检的所述药品适量，与提取溶剂混合，振摇，得提取液；(2)使步骤(1)提取液与硫酸-醋酐试剂混合，得混合液；(3)观察步骤( 所得混合液的颜色变化，若突然呈现明显的黄色、橙黄色和/或橙红色的颜色变化，则判断该药品中可能含有米非司酮；若混合液的颜色无变化，则可判断该药品中不含米非司酮。
2.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)中所述提取溶剂为有机溶剂；包括但不限于三氯甲烷、二氯甲烷或其组合，或者含它们的其它有机溶剂。
3.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述的硫酸-醋酐试剂是硫酸与醋酐临用新配的混合试剂。
4.根据权利要求3的方法，所述硫酸-醋酐试剂是硫酸与醋酐按1 (0.1 50)体积比混合的试剂。
5.根据权利要求1的方法，其中步骤( 中，所述硫酸-醋酐试剂与提取液的体积比为 1 (1 100)。
6.一种检测试剂盒，其用于检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品中是否含米非司酮， 所述试剂盒包括盒体以及(i)提取溶剂，其封装于第一溶剂瓶中； ( )硫酸，其封装于第二溶剂瓶中；(iii)醋酐；其封装于第三溶剂瓶中；和任选的(iv)使用说明资料，其上记载有使用该试剂盒检测怀疑为仿冒米非司酮制剂的药品中是否含米非司酮的操作方法。
7.根据权利要求6的试剂盒，其特征在于所述各溶剂瓶是可以反复开启和密封的溶剂瓶，优选是玻璃瓶； 所述第一溶剂瓶内装入的提取溶剂的体积占溶剂瓶容量的1/10 9/10 ； 所述第二溶剂瓶和第三溶剂瓶中，至少一个溶剂瓶的剩余容量足以填充另一溶剂瓶的溶液，并且该剩余容量足够使二种溶液在使用时混合；所述第一溶剂瓶、第二溶剂瓶和第三溶剂瓶中，至少一个溶剂瓶的剩余容量足以填充另外两个溶剂瓶的溶液，并且该剩余容量足够使三种溶液在使用时混合；其中还可以包括第四溶剂瓶，其容量足以填充针对一个检品所需的硫酸-醋酐-提取溶液三者体积总量；所述第一溶剂瓶中的提取溶剂、第二溶剂瓶中的硫酸、第三溶剂瓶中的醋酐，它们各自独立地是可供多次检验所需的量；和/或所述使用说明资料基本上记载了权利要求1至5任一项所述的方法。
8.一种信息说明资料，其中基本上记载了权利要求1至5任一项所述的方法。
9.根据权利要求8的信息说明资料，其是呈选自下列的形式纸质文件(包括但不限于文件单页、小册子、刊物)、磁介质、光盘、软盘、电子出版物、网络出版物等，以及它们的组合。
10.一种制品，其标示含有米非司酮，但是使用权利要求1-9任一项所述方法、试剂盒和/或信息说明资料检测显示该制品不含有米非司酮。
全文摘要
本发明涉及一种快速检测米非司酮的方法。具体涉及检测药品中的米非司酮的方法，该方法包括以下步骤(1)取待检的所述药品适量，与提取溶剂混合，振摇，得提取液；(2)使步骤(1)提取液与硫酸-醋酐试剂混合，得混合液；(3)观察步骤(2)所得混合液的颜色变化，若突然呈现明显的黄色、橙黄色和/或橙红色的颜色变化，则判断该药品中可能含有米非司酮；若混合液的颜色无变化，则可判断该药品中不含米非司酮。本发明的方法具有准确、简单、速度快、专业性要求低等特点。
文档编号G01N21/78GK102565046SQ20111044927
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者张喆, 方颖, 王威, 王志斌, 王铁松, 赵明, 车宝泉, 郭洪祝, 陈安东, 高青 申请人:北京市药品检验所