专利名称：一种用于酶联免疫吸附测定的固相载体及试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及酶联免疫吸附测定领域，具体地，涉及ー种用于酶联免疫吸附测定的固相载体及试剂盒。
背景技术：
1971 年瑞典学者 Engvail 和 Perlmann,荷兰学者 Van Weerman 和 Schuurs 分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫測定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。ELISA 现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是ー种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的ー种新型的免疫测定技术。基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量測定。測定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)测量时，抗原(抗体)先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加ー种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物)，此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈顔色。其所生成的顔色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计(酶标仪)加以測定。其方法简单，方便讯速，特异性强。现有技术中的ELISA试剂盒一般采用聚苯こ烯微孔板(40或96孔)作为固相载体，将特异性的抗原或抗体包被在聚苯こ烯微孔板的微孔内，由于该固相载体是以多孔方式存在，在检测时，需要逐孔添加酶标记物和底物，致使酶标记物和底物的使用量大，产品成本高、灵敏度低。
实用新型内容本实用新型的目的在于克服上述现有技术的缺点和不足，提供ー种用于酶联免疫吸附测定的固相载体，可降低酶标记物和底物的使用量，从而节约成本，降低产品价格，并可提高测定的灵敏度。本实用新型的另一目的在于提供ー种用于酶联免疫吸附测定的试剂盒。实现上述目的的技术方案如下ー种用于酶联免疫吸附测定的固相载体，所述固相载体为可结合蛋白的纤维素膜。[0015]进ー步地，所述纤维素膜为硝酸纤维素膜。进ー步地，所述硝酸纤维素膜上可设置检测线，所述检测线位置包被可与血液中IgE抗体结合的特异性过敏源。进ー步地，所述硝酸纤维素膜上还可设置有质控线。ー种用于酶联免疫吸附测定的试剂盒，包括上述的固相载体。由于采用上述技术方案，本实用新型具有以下有益效果I、本实用新型采用可结合蛋白的纤维素膜，尤其是硝酸纤维素膜，代替传统的聚苯こ烯微孔板，能降低酶标记物和底物的使用量，从而节约成本，降低产品价格。 2、本实用新型采用硝酸纤维素膜作为固相载体，可以提高检测灵敏度，即使是在血液样本中的含量极低的特异性IgE抗体，通过将特异性过敏原结合在硝酸纤维素膜的检测线位置处，也可进行高效地检測。3、在硝酸纤维素膜上设置质控线，用于检测操作是否正确或试剂是否无效，提高检测成功率。下面通过附图和实施例，对本实用新型的技术方案做进ー步的详细描述。
图I为本实用新型的用于酶联免疫吸附测定的固相载体结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。本实施例以检测血液样本中的含量极低的特异性IgE抗体为例进行说明。如图I所示，本实用新型的用于酶联免疫吸附测定的固相载体为可结合蛋白的纤维素膜I，优选硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上可设置检测线2和质控线3，检测线2位置包被可与血液中IgE抗体结合的特异性过敏源(喷膜包被处理)。其中过敏原喷硝酸纤维素膜的处理方法如下(I)将过敏原溶于IOOmM的PBS (PH :8. 0)，使其浓度达到lmg/ml。(2)将BioDot喷膜机參数设置为Rate值I. Oul/cm。(3)将硝酸纤维素膜平放在操作台上，在湿度30% -50%范围内喷膜。(4)在室温条件下放置1-2小吋，使其干燥。质控线的喷膜方法同上。本实用新型的用于酶联免疫吸附测定的试剂盒，包括上述的固相载体(含检测线及质控线)以及清洗液(PBST)、酶标ニ抗(辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgE单克隆抗体)和底物(四甲基联苯胺TMB)、终止液。利用上述试剂盒进行检测的过程如下(I)将喷好过敏原的硝酸纤维素膜置于孵育槽中，加入Iml血清样品，室温下在摇摆摇床上晃动孵育30分钟。(2)吸去孵育槽中液体。每槽加入I. 5ml清洗液，室温下在摇摆摇床上晃动5分钟，吸去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。[0038](3)吸去孵育槽中液体。每槽加入Iml酶标ニ抗，室温下在摇摆摇床上晃动孵育30分钟。(4)重复步骤⑵洗涤。(5)吸去孵育槽中液体。每槽加入Iml底物，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育10分钟。(6)吸去孵育槽中液体。每槽加入I. 5ml蒸馏水，室温下晃动洗涤I分钟。(7)吸去孵育槽中液体。每槽中加入Iml终止液，室温下晃动孵育5分钟。(8)将硝酸纤维素膜置于滤纸上干燥，将检测条带(检测线区)与阳性条带(质控线区)比较，判断結果。结果解释阳性分别在检测线区及质控线区各出现一条蓝色条带；阴性仅在质控线区出现一条蓝色带；质控线区未出现蓝色带，表明不正确的操作或试剂无效，需重新进行检测试验。抗体浓度在0. 7IU/ml或以上时，本试剂检测结果为临界阳性或阳性；在0. 35IU/ml或以下时，本试剂检测结果为阴性；在0. 35-0. 7IU/ml之间时，本试剂检测结果为临界阳性或阴性。最后应说明的是以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，尽管參照前述实施例对本实用新型进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。
权利要求1.ー种用于酶联免疫吸附测定的固相载体，其特征在于，所述固相载体为可结合蛋白的纤维素膜。
2.根据权利要求I所述的用于酶联免疫吸附测定的固相载体，其特征在于，所述纤维素膜为硝酸纤维素膜。
3.根据权利要求2所述的用于酶联免疫吸附测定的固相载体，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上可设置检测线，所述检测线位置包被可与血液中IgE抗体结合的特异性过敏源。
4.根据权利要求3所述的用于酶联免疫吸附测定的固相载体，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上还可设置有质控线。
5.ー种用于酶联免疫吸附测定的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的固相载体。
专利摘要本实用新型公开了一种用于酶联免疫吸附测定的固相载体及含有所述固相载体的试剂盒，其中固相载体采用可结合蛋白的纤维素膜，尤其是硝酸纤维素膜，代替传统的聚苯乙烯微孔板，可提高检测灵敏度，降低酶标记物和底物的使用量，从而节约成本，降低产品价格。
文档编号G01N33/544GK202433382SQ20112054302
公开日2012年9月12日 申请日期2011年12月22日 优先权日2011年12月22日
发明者张逸南, 李冬冬 申请人:北京海瑞祥天生物科技有限公司