信号增强化合物在电化学发光检测中的用途
【专利摘要】本发明涉及使用新型试剂组合物通过电化学发光来检测样品中的分析物的方法。本发明披露了用于测量电化学发光(ECL)的新型试剂组合物、试剂盒以及使用所述新型试剂组合物的电化学发光检测方法。具体而言，本发明涉及可用于所述测量中以提供改善的测定性能的新型化合物组合的用途。
【专利说明】信号增强化合物在电化学发光检测中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及使用新型试剂组合物通过电化学发光来检测样品中的分析物的方法。本申请披露了用于测量电化学发光(ECL)的新型试剂组合物、试剂盒和使用所述新型试剂组合物的电化学发光检测方法。具体而言，本发明涉及可用于所述测量以提供改进的测定性能的新型化合物组合的用途。
【背景技术】
[0002]测量电化学发光现象的方法已为人所知有些年。所述方法利用特异的金属络合物能够借助氧化实现激发态的能力，从该激发态衰退至基态，发出电化学发光。综述参见Richter, Μ.Μ.，Chem.Rev.104 (2004) 3003-3036。
[0003]目前，存在很多种利用电化学发光(ECL)进行分析测量的可商购仪器。可引起发出ECL的物质(ECL-活性物质)已经用作ECL标记物。ECL标记物的实例包括有机金属化合物，诸如三-联吡啶-钌(RuBpy)部分，其中金属例如是VII和VIII族金属，包括Re、Ru、Ir和Os。在ECL过程中，与ECL标记物反应的物质在本申请中称之为ECL共反应剂。用于ECL的常用共反应剂包括叔胺(例如三丙基胺(TPA))、草酸盐和过硫酸盐。光由ECL标记物或配体产生；结合试剂在结合相互作用中的参与可通过测量从ECL标记物发出的ECL来监控。作为选择，来自ECL-活性化合物的ECL信号可指示化学环境(参见例如，美国专利5，641，623和5，643，713，其描述了监控特异性ECL共反应剂的存在或破坏的ECL测定)。对于用于进行ECL测定的ECL、ECL标记物、ECL测定和仪器的更多背景知识，参见美国专利 5，093，268 ;5，147，806 ;5，240，863 ;5，308，754 ;5，324，457 ;5，591，581 ;5，597，910 ；5，679，519 ;5，705，402 ;5，731，147 ;5，786，141 ;5，846，485 ;5，866，434 ;6，066，448 ；6，136，268 和 6，207, 369 以及 EP0441875 和公开的 PCT W097/36931 ；W098/12539 ；W099/14599 ；W099/32662 ；W099/58962 ；W099/63347 ；W000/03233 和 TO98/57154。
[0004]可商购的ECL仪器已经显示优异的性能。它们由于包括其优越的灵敏度、动态范围、精度和对复杂样品基质的耐受性等原因已经得到广泛应用。可商购的仪器使用基于流动细胞的设计，该设计具有持久可重复使用的流动细胞。
[0005]用于确定分析物的可用样品体积常常受到限制，并且越来越多的不同分析物必须从一个样品中确定出。还要求开发用于测定自动化的更快速的实验室设备和用于检测分析物的更灵敏方法。这导致需要高灵敏和特异性电化学发光测定和用于进行它们的方法。此夕卜，还应考虑与危害安全物或者环境问题相关的改进。
[0006]然而，分析物的甚至更灵敏的检测是非常有利的。因此，本发明的目标是改进所述已知的方法和试剂组合物，其具体针对增强ECL信号和改善与电化学发光操作组合的分析物检测进行改进。期望的是，发现具有改善的电化学发光测定性能的新型信号增强试剂和/或化合物。
【发明内容】
[0007]本发明在一种实施方案中涉及通过电化学发光检测来测量样品中的分析物的方法，包括以下步骤:a)将样品与用电化学发光基团标记的检测试剂一起孵育，b)使结合有分析物的经标记的检测试剂与不含分析物的经标记的检测试剂分离，c)将分离出的经标记的检测试剂与试剂组合物一起孵育，所述试剂组合物包含:i)至少一种共反应剂，和ii)选自式I和式II的碳酰胺(carbonic acid amide)的至少一种化合物，
[0008]式I
[0009]
【权利要求】
1.通过电化学发光检测来测量样品中的分析物的方法，包括以下步骤: a)将样品与用电化学发光基团标记的检测试剂一起孵育， b)使结合有分析物的经标记的检测试剂与不含分析物的经标记的检测试剂分离， c)将分离出的经标记的检测试剂与试剂组合物一起孵育，所述试剂组合物包含: i)至少一种共反应剂，和 ?)选自式I和式II的碳酰胺的至少一种化合物， 式I
2.权利要求1的方法，其特征在于使用ECL测量样品中的分析物在水溶液中进行。
3.权利要求1或2的方法，其特征在于所述碳酰胺选自乙酰胺、2-氟乙酰胺、2-氯乙酰胺、丙酰胺、2-氯丙酰胺、3-氯丙酰胺、丁酰胺和2-氯丁酰胺。
4.权利要求1至3中任一项的方法，其特征在于所述试剂组合物包含浓度为0.0lM至0.25M的碳酰胺。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其特征在于步骤Ic)的试剂组合物包含防腐剂。
6.权利要求5的方法，其特征在于步骤Ic)的试剂组合物包含浓度为0.1%至5%的防腐剂。
7.权利要求5或6的方法，其特征在于步骤Ic)的试剂组合物包含选自硼酸和硼酸盐的防腐剂。
8.权利要求1至7中任一项的方法，其特征在于步骤Ic)的试剂组合物包含洗涤剂和缓冲剂。
9.权利要求8的方法，其特征在于步骤Ic)的试剂组合物还包含盐和/或消泡剂。
10.用于确定ECL的试剂组合物，其包含: i)选自式I和式II的碳酰胺的化合物，和ii)至少一种共反应剂。
11.权利要求10的试剂组合物，其特征在于所述试剂组合物还包含选自硼酸和硼酸盐的防腐剂。
12.用于确定ECL的试剂混合物，其包含权利要求10或11的试剂组合物、待研究的样品和至少一种用电化学发光基团标记的检测试剂。
13.权利要求10或11的试剂组合物在确定ECL中的用途。
14.选自式I和式II的碳酰胺在进行电化学发光检测操作中的用途。
15.测量ECL的试剂盒，·其包含权利要求10或11的试剂组合物。
【文档编号】G01N21/66GK103443614SQ201180062441
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2011年10月24日 优先权日:2010年10月25日
【发明者】J.斯托克尔, M.温德福尔, A.芬克, B.豪普特曼 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司