专利名称：八味安宁制剂的检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药制剂的检测方法。
背景技术：
八味安宁丸是藏医传统验方，收载于《卫生部药品标准》藏药分册中，标准编号为 WS3-BC-0234-95，处方由寒水石(制)、褐铁矿(制)、白芥子、甘青青兰、铁棒锤、诃子、毛诃子、余甘子等药材组成。消食，止血行瘀，用于经血过多，崩漏，消化不良，胃胀满，腰肾疼痛。八味安宁散为藏族验方，原质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》 (95年版藏药第一册)。拼音名BaweiAnning San书页号Cl-237标准编号WS3-BC-0234-9处方寒水石(制)400g、褐铁矿(制)100g、白芥子350g、甘青青兰10g、铁棒锤 10g、诃子10g、毛诃子10g、余甘子IOgo制法以上八味，粉碎成细粉，过筛，混匀，即得。性状本品为棕红色粉末，气淡，味苦、辛。检查应符合散剂项下有关的各项规定(附录10页)。功能与主治消食，止血行瘀。用于经血过多，崩漏，消化不良，胃胀满，腰肾疼痛。用法与用量一次lg，一日2 3次。规格每袋装10g。贮藏密闭，防潮。目前尚未有八味安宁制剂的检测方法，也没有对方中的毒性成分进行含量检测的方法。寒水石载于卫生部药品标准藏药第一册，为硫酸盐类矿物，主含硫酸钙，称北寒水石，或为碳酸盐类矿物，主含碳酸钙，称南寒水石。褐铁矿载于卫生部药品标准藏药第一册，为表生矿物，由含铁矿物，尤其是含铁硫化物矿床地表部分，经氧化和分解而成。白芥子收载于《中国药典》2010年版一部,为十字花科植物白芥SinapisalbaL.或芥Brassicajuncea(L. ) Czern. et Coss.的干燥成熟种子。前者习称“白芥子”，后者习称
“黄芥子”。甘青青兰收载于卫生部药品标准藏药第一册，为唇形科植物甘青青兰 Dracocephalum tanguticum Maxim.的干燥地上部分。铁棒锤，《中华本草》藏药卷274页中记载到铁棒锤(榜阿那保)，异名热毒那保《度母本草》，满庆、孜巴、热毒、巴保、赞毒、榜那《蓝琉璃》，洛毒那保《晶珠本草》，毕嘎那保、堆孜落玛、寨次玛《甘露本草明镜》。铁棒锤收载于卫生部药品标准藏药第一册，为毛莨科植物伏毛铁棒锤Aconitum flavum Hand. -Mazz.和铁棒锤A. pendulum Busch.的干燥块根。
诃子收载于《中国药典》2010年版一部,为使君子科植物诃子Terminalia chebula Retz.或绒毛诃子 Terminalia chebula Retz. var. tomentella Kurt.的干燥成熟果实。毛诃子收载于《中国药典》2010年版一部，系藏族习用药材。为使君子科植物毗黎勒 Termz-naLia bellirica(Gaertn. )Roxb.的干燥成熟果实。余甘子收载于《中国药典》2010年版一部，系藏族习用药材。为大戟科植物余甘子 Phyllan-thus emblica L.的干燥成熟果实。
发明内容
本发明的目的在于提供一种八味安宁制剂的检测方法，所述检测方法重现性好、 专属性强，能够有效地检测八味安宁制剂的质量，从而使八味安宁制剂的质量稳定、安全、 可控。为实现上述目的，本发明的技术方案为一种八味安宁制剂的检测方法，该制剂原料药组成为寒水石(制)400重量份、褐铁矿(制)100重量份、白芥子350重量份、甘青青兰10重量份、铁棒锤/榜那10重量份、 诃子/去核的诃子10重量份、毛诃子/去核的毛诃子10重量份、余甘子/去核的余甘子10
重量份；所述检测方法包括下述鉴别和/或检查方法的一种或两种通过薄层层析对制剂中的白芥子进行定性鉴别；以及检查制剂中铁棒锤/榜那所含乌头碱的含量。具体地，白芥子的定性鉴别包括Ia)制备白芥子供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、不含白芥子的阴性样品溶液；2a)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ia)所获得的供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3a)以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查包括Ib)制备铁棒锤/榜那供试品溶液、乌头碱对照品溶液；2b)照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ib)所获得的供试品溶液、乌头碱对照品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3b)以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，将步骤2b)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。所述白芥子及铁棒锤/榜那供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐及乌头碱对照品溶液、 阴性样品溶液的制备方法包括(I)白芥子供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、阴性样品溶液取所述八味安宁制剂，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐对照品，同法制成芥子碱硫氰酸盐对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液。(2)铁棒锤/榜那供试品溶液、乌头碱对照品溶液取所述八味安宁制剂，加氨试液，搅匀，放置，加乙醚，振摇，放置，滤过，滤液蒸干， 残渣加无水乙醇使溶解，作为铁棒锤/榜那供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成溶液，作为乌头碱对照品溶液。优选地，所述方法包括以下步骤a)白芥子的定性鉴别取所述八味安宁制剂I 5重量份，研细，加甲醇10 50体积份，超声处理20 90分钟，滤过，滤液浓缩约O. 5 5体积份，作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐适量，加甲醇制成每体积含O. 0005 O. 002重量份的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各O. 001 O. 01体积份,分别点样于同一娃胶G薄层板上，以体积比为3 5 : 4 8 O. 7 I. 4 O. 3 O. 7的乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂,薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。b)铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查取所述八味安宁制剂3 8重量份,研细，加氨试液O. 5 2体积份,搅勻，放置 I 3小时,加乙醚10 20体积份,振摇O. 5 2小时,放置18 30小时,滤过,滤液蒸干，残渣加无水乙醇I 3体积份使溶解，作为铁棒锤/榜那供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每体积份含O. 0005 O. 002重量份的溶液，作为乌头碱对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液O. 005 O. 02 体积份、乌头碱对照品溶液O. 001 O. 01体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2 8 I 3 0.5 2的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。更优选地，所述方法包括以下步骤a)白芥子的定性鉴别取所述八味安宁制剂3g，研细，加甲醇25ml，超声处理I小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img 的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液。照薄层色谱法《中国药典》 2010版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3.5 5 I 0.5)为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟， 展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。b)铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查
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取所述八味安宁制剂5g，研细，加氨试液1ml，搅匀，放置2小时，加乙醚15ml，振摇I小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为铁棒锤/榜那供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为乌头碱对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10 μ 1， 乌头碱对照品溶液5 μ 1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5 2 I的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。上述八味安宁制剂的剂型可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。制备方法为 取所述八味安宁制剂，粉碎成细粉，过筛，混匀，加适量水制丸，阴干即得；或取所述八味安宁制剂，粉碎成细粉，过筛，混匀，混匀，按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂。本发明针对八味安宁制剂的组成成分，对指标性成分白芥子的存在进行检测，并检测制剂中铁棒锤/榜那所含毒性成分乌头碱的含量，以达到对制剂的质量进行控制的目的。本发明的检测方法根据实际检测需要，对现有的检测方法的检测条件进行了筛选，确定了较佳的八味安宁制剂的检测方法，该检测方法具有灵敏、重现性好和专属性强的特点。
图I为八味安宁制剂中白芥子薄层层析检测图；其中，从左到右样品顺序为供试品溶液I、供试品溶液2、供试品溶液3、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、阴性样品溶液；其中，展开剂为乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3.5 5 I 0.5)，置紫外光灯 (365nm)下检视。图2为八味安宁制剂中铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检测图；其中，从左到右样品顺序为供试品溶液I、供试品溶液2、供试品溶液3、乌头喊对照品溶液I、乌头碱对照品溶液2、阴性样品溶液；其中，展开剂为环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(5 2 I)，显色剂为稀碘化铋试液； 日光下检视。
具体实施例方式下述实验例和实施例进一步说明但不限于本发明。下述用于各成分检测的制剂在各检测方法下均简称为“供试品”，应理解为其指按照各检测方法要求制备的供试品，例如在白芥子方法中所述的供试品为“白芥子的供试
口 ”
ΡΠ ο实施例I :白芥子的薄层鉴别(I)仪器电子秤、具塞锥形瓶、移液管、超声波提取仪、漏斗、滤纸、蒸发皿、点样器、硅胶G 板、层析缸。(2)对照品
芥子碱硫氰酸盐对照品(批号111702-200501)，购自中国药品生物制品检定所。(3)试剂甲醇、乙醇、丙酮、甲酸、乙酸乙酯、水。(4)检验方法提取溶剂的选择分别采用甲醇和95%乙醇为提取溶剂；提取方法的选择分别采用超声处理和冷浸；展开剂的选择分别以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5 5 I)、乙酸乙酯-丙酮-甲酸(3.5: 5 : I)、乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3.5 5 I O. 5)为展开剂。(5)分别选择以上不同提取溶剂、提取方法和展开剂进行试验，结果如下
取溶剂展开剂超声提取冷浸甲醇95%乙醇甲醇95%乙醇乙酸乙酯-甲醇-甲酸 (5:5:1)Rf值偏大难于点样，斑点颜色浅Rf值大，斑点颜色浅难于点样，斑点颜色浅乙酸乙酯-丙酮-甲酸 (3.5:5:1)Rf值适中， 有拖尾难于点样，斑点颜色浅，拖尾严重Rf值适中，斑点颜色浅，有拖尾难于点样，斑点颜色浅，拖尾严重乙酸乙酯-丙酮-甲酸 -/K (3.5:5:1:0.5)Rf值适中， 斑点清晰， 分离度好Rf值适中，斑点不清晰，拖尾不明显Rf值适中，斑不点清晰，拖尾不明显Rf值适中，斑点不清晰，拖尾不明显在以上条件下反复试验，最终确定了白芥子的专属性薄层鉴别方法，具体如下取所述八味安宁制剂3g，研细，加甲醇25ml，超声处理I小时，滤过，滤液浓缩至约 2ml，作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水 (3.5 5 I 0.5)为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，如图I所示。该方法经多人多次试验操作，重现性好，专属性强，可以作为八味安宁制剂中白芥子的专属性薄层鉴别方法。实施例2 :铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查(I)仪器电子秤、具塞锥形瓶、移液管、超声波提取仪、漏斗、滤纸、蒸发皿、点样器、硅胶G 薄层板、层析缸、喷雾瓶、电吹风。
(2)对照品乌头碱对照品(批号320756035164)，购自中国药品生物制品检定所。(3)试剂氨试液、乙醚、无水乙醇、环己烷、苯、乙酸乙酯、二乙胺、二氯甲烷、丙酮、甲醇、稀碘化铋钾、改良碘化铋钾试液。(4)提取方法展开剂的选择分别以苯-乙酸乙酯-乙二胺(14 4 I)、环己烷-乙酸乙酯-乙二胺(14 4 I)、环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(5 2 I)、二氯甲烷-丙酮-甲醇(6 : I : I)为展开剂；显色剂的选择分别以稀碘化铋钾试液和改良碘化铋钾试液为显色。(5)分别选择以上不同展开剂和显色剂进行试验，结果如下
权利要求
1.一种八味安宁制剂的检测方法，该制剂原料药组成为寒水石(制)400重量份、褐铁矿(制)100重量份、白芥子350重量份、甘青青兰10重量份、铁棒锤/榜那10重量份、 诃子/去核的诃子10重量份、毛诃子/去核的毛诃子10重量份、余甘子/去核的余甘子10重量份；所述检测方法包括下述鉴别和/或检查方法的一种或两种通过薄层层析对制剂中的白芥子进行定性鉴别；以及检查制剂中铁棒锤/榜那所含乌头碱的含量。
2.如权利要求I所述的检测方法，其中，所述白芥子的定性鉴别包括Ia)制备白芥子供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、不含白芥子的阴性样品溶液；2a)照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ia)所获得的供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、阴性样品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上； 3a)以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂，将步骤2a)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，于365nm，紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查包括Ib)制备铁棒锤/榜那供试品溶液、乌头碱对照品溶液；2b)照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，分别吸取步骤Ib)所获得的供试品溶液、乌头碱对照品溶液，并点样于同一硅胶G薄层板上；3b)以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，将步骤2b)所获得的薄层板放置在展开缸中饱和、展开、取出、晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
3.如权利要求2所述的检测方法，其中，所述白芥子及铁棒锤/榜那供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐及乌头碱对照品溶液、阴性样品溶液的制备方法包括(1)白芥子供试品溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、阴性样品溶液取所述八味安宁制剂，加甲醇，超声处理，滤过，滤液浓缩，作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐对照品，同法制成芥子碱硫氰酸盐对照品溶液；按处方比例及制备工艺， 配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液；(2)铁棒锤/榜那供试品溶液、乌头碱对照品溶液取所述八味安宁制剂，加氨试液，搅匀，放置，加乙醚，振摇，放置，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇使溶解，作为铁棒锤/榜那供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成溶液，作为乌头碱对照品溶液。
4.如权利要求1-3中任一项所述的检测方法，包括以下步骤a)白芥子的定性鉴别取所述八味安宁制剂I 5重量份，研细，加甲醇10 50体积份，超声处理20 90 分钟，滤过，滤液浓缩约O. 5 5体积份，作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐适量，加甲醇制成每体积含O. 0005 O. 002重量份的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各O. 001 O. 01体积份,分别点样于同一娃胶G薄层板上，以体积比为3 5 : 4 8 O. 7 I. 4 O. 3 O. 7的乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水为展开剂,薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b)铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查取所述八味安宁制剂3 8重量份,研细,加氨试液O. 5 2体积份,搅勻,放置I 3 小时，加乙醚10 20体积份，振摇O. 5 2小时，放置18 30小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇I 3体积份使溶解，作为铁棒锤/榜那供试品溶液；另取乌头碱对照品适量， 加无水乙醇制成每体积份含O. 0005 O. 002重量份的溶液，作为乌头碱对照品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液O. 005 O. 02体积份、乌头碱对照品溶液O. 001 O. 01体积份，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 2 8 : I 3 : 0.5 2的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和O 40分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
5.如权利要求4所述方法，包括以下步骤a)白芥子的定性鉴别取所述八味安宁制剂3g，研细，加甲醇25ml，超声处理I小时，滤过，滤液浓缩至约2ml， 作为白芥子供试品溶液；另取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配置不含白芥子的阴性样品，并按所述供试品溶液的制备方法制成不含白芥子的阴性样品溶液；照薄层色谱法《中国药典》2010版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各5μ 1，分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3.5 5 I O. 5)为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟，展开，取出， 晾干，于365nm，紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；b)铁棒锤/榜那所含乌头碱含量检查取所述八味安宁制剂5g,研细,加氨试液Iml,搅勻,放置2小时,加乙醚15ml,振摇I小时，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为铁棒锤/榜那供试品溶液；另取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为乌头碱对照品溶液； 照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液10μ 1，乌头碱对照品溶液5μ1，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5 2 I的环己烷-乙酸乙酯-二乙胺为展开剂，薄层板置展开缸中饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点或不出现斑点。
6.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于所述八味安宁制剂的剂型可以是片剂、 胶囊剂、颗粒剂、丸剂或散剂。
7.如权利要求I所述的检测方法，其特征在于取所述八味安宁制剂，粉碎成细粉，过筛，混匀，加适量水制丸，阴干即得；或取所述八味安宁制剂，粉碎成细粉，过筛，混匀，混匀， 按药剂学常规方法，加入常规辅料，制成临床上接受的口服制剂。
全文摘要
本发明涉及一种八味安宁制剂的检测方法，所述方法包括通过薄层层析对制剂中的白芥子进行定性鉴别和/或检查制剂中铁棒锤/榜那所含乌头碱的含量。所述检测方法具有灵敏、重现性好和专属性强的特点。
文档编号G01N30/90GK102590434SQ20121005156
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月1日 优先权日2012年3月1日
发明者张国霞, 李波, 陈丽娟 申请人:西藏奇正藏药股份有限公司