专利名称：莱克多巴胺分子印迹材料制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种莱克多巴胺分子印迹材料制备方法，本发明还涉及莱克多巴胺分子印迹材料的应用。
背景技术：
莱克多巴胺(Ractopamine, Rac)是苯乙醇胺类β _受体激动剂，在养殖中能够提高饲料的转化率和胴体瘦肉率，美国将其批准为饲料添加剂使用。但莱克多巴胺代谢物易在体内畜积，过量情况下会对人体造成肌肉震颤、心动过速、心率失常、晕眩等毒副作用，我国农业部以[农牧发(1997)3号文]严令禁止克仑特罗、莱克多巴胺等β_受体激动剂在动物生产中的应用。但在经济利益的驱使下，违法使用莱克多巴胺的现象仍时有发生。因此，为了保证食品安全和人类健康，对其监测工作十分重要。测定莱克多巴胺残留检测的前处理多使用液液分配或固相萃取方法，耗时繁琐，基质影响大。而免疫亲和净化技术的应用虽然解决了特异性问题，但生物抗体制备耗时长，保存时间短，批次之间差异大，无法大量生产，在一定程度上抑制了其的应用。近年来，分子印迹(MIP)材料以其制备简单、化学惰性、成本低廉等优点而在药物残留分析中倍受关注。利用分子印迹(MIP)材料特异性识别克仑特罗的已有少量专利和文献报道，如黄怡等在《分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中莱克多巴胺》(色谱，2012. I)报道了以莱克多巴胺为模板分子，采用本体聚合法合成了莱克多巴胺分子印迹物。本体聚合法是将模板分子克仑特罗和功能单体甲基丙烯酸、交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯按一定的比例混合在致孔剂乙腈或氯仿中，相互作用平衡后，以加热的方式引发交联聚合反应得到固体聚合物，将形成的块状聚合物研磨成一定大小的无定形颗粒，经筛选、洗脱模板分子后在聚合物中便留下与模板分子空间结构与作用位点互补的空穴，得到印迹聚合物微粒，该微粒材料对模板分子具有一定的识别功能。本体聚合法是目前应用最广、制备印迹聚合物最成熟和最通用的方法，显著的优点是制备过程相对简单，聚合体系控制方便，但存在模板分子包埋过深、难以洗脱、模板渗漏、形状不规则和机械性能低等缺点，在很大程度上抑制了实际样品中的应用。现有技术中也有文献公开，如申请号为200810153837. 4《一种富集痕量莱克多巴胺的高分子聚合物的制备方法》(公开号为CN101747513A)公开了制备一种莱克多巴胺分子印迹物的方法，根据上述申请的申请人在国外发表的论文《Molecularly imprinted polymer for the determination of trace ractopamine in pork using SPE followed by HPLC with fluorescence detection》(Journal of Separation Science,2009. 9)可知，采用表面印迹法制备的分子印迹物对于莱克多巴胺的吸附量为I. 99mg/g，吸附量较小， 有待进一步提供。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述的技术现状而提供一种特异识别性强、结合性好、吸附量高的莱克多巴胺分子印迹材料制备方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为一种莱克多巴胺分子印迹材料制备方法，其特征在于包括如下步骤①硅胶的活化，称取硅胶，用体积百分比为10% 20%酸的水溶液进行回流活化；②硅胶双键键合，活化后硅胶与含双键的硅烷偶联剂加热后进行反应；③硅胶表面化学接枝，将硅胶置于聚乙烯亚胺水溶液中加热反应，得到吸附材料；④产物制得，将吸附材料加到500 1000mg/L的莱克多巴胺水溶液中，调节体系 PH值至碱性，加入交联剂，加热反应；反应结束后，洗去模板分子莱克多巴胺，干燥，即得莱克多巴胺表面分子印迹材料。作为选优，步骤①中的硅胶粒径范围在5 120 μ m之间。作为选优，步骤①中的酸为甲烷磺酸或盐酸。作为选优，步骤②中的含双键的硅烷偶联剂为Y-氯丙基三甲氧基硅烷或Y-溴
丙基二甲氧基娃烧。作为选优，步骤③中的聚乙烯亚胺分子量范围为10000-70000。作为选优，步骤③中的聚乙烯亚胺水溶液重量百分比浓度为50%。作为选优，步骤④中的交联剂为乙二醇二缩水甘油醚或1，6_ 二氯己烷。作为选优，步骤④中的碱性满足pH为8 10之间。作为选优，步骤②中加热温度为80 90°C，步骤③中加热温度为80 90°C，步骤 ④中的加热温度为50 80°C。莱克多巴胺表面分子印迹材料的应用领域包括以下方面(I)表面分子印迹材料为颗粒物，装备到SPE柱中，应用于莱克多巴胺残留分析的样品前处理过程中；(2)表面分子印迹材料可装配到传感器上，制备出适用用于莱克多巴胺检测分析的传感设备；(3)表面分子印迹材料可装配到液相填充柱中，制备出适用于莱克多巴胺的高效液相色谱HPLC柱。(4)表面分子印迹材料可直接用于固相基质萃取技术，应用于液体样品中莱克多巴胺前处理技术。与现有技术相比，本发明的优点在于制备过程简单，可操作性强，制备成本低廉; 分子印迹材料特异性好，对莱克多巴胺的吸附平衡时间短，洗脱时间短且洗脱效果好，并且，具有良好的特异识别选择性与高度的结合亲和性。可广泛应用于环境、生物、食品等样品中莱克多巴胺残留的前处理过程。
图I为实施例I所得的分子印迹材料的莱克多巴胺吸附动力学曲线图。图2为实施例I所得的分子印迹材料的莱克多巴胺洗脱曲线图。图3为实施例I所得的分子印迹材料对莱克多巴胺、莱克多巴胺及沙丁胺醇三种物质的吸附量柱状图。
具体实施例方式以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。实施例I :称取娃胶(粒径5 μ m) 30g,加入10 % (v/v)的甲烧磺酸水溶液150mL,回流温度下搅拌8h后，用蒸馏水洗至中性，65°C干燥12h后得到活化硅胶。将5g活化硅胶加入到50mL 二甲苯和2mL水中，加入7mL Y -氯丙基三甲氧基硅烷，在80°C下搅拌反应8h，产物用水洗涤，再经65°C干燥12h后得到双键健合硅胶。在烧瓶中加入50mL重量百分比为50 %分子量为10000的聚乙烯亚胺水溶液、3g CP-SiO2,80°C搅拌进行反应，8h后得到吸附材料。用水洗净后65°C干燥12h后备用。取50mL浓度为500mg · Γ1的莱克多巴胺水溶液，加入Ig吸附材料，搅拌lh，使吸附材料对莱克多巴胺的吸附达到饱和，调节体系pH值，使pH = 8. 0， 加入O. 2mL的乙二醇二缩水甘油醚，在50°C下搅拌反应6h，反应结束后，用洗脱溶液洗去模板分子莱克多巴胺，再用蒸馏水洗至中性，65°C干燥12h后即得莱克多巴胺表面分子印迹材料。具体可参考如下反应式
权利要求
1.一种莱克多巴胺分子印迹材料制备方法，其特征在于包括如下步骤①硅胶的活化，称取硅胶，用体积百分比为10% 20%酸的水溶液进行回流活化；②硅胶双键键合，活化后硅胶与含双键的硅烷偶联剂加热后进行反应；③硅胶表面化学接枝，将硅胶置于聚乙烯亚胺水溶液中加热反应，得到吸附材料；④产物制得，将吸附材料加到500 1000mg/L的莱克多巴胺水溶液中，调节体系pH值至碱性，加入交联剂，加热反应；反应结束后，洗去模板分子莱克多巴胺，干燥，即得莱克多巴胺表面分子印迹材料。
2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于步骤①中的硅胶粒径范围在5 120 μ m之间。
3.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于步骤①中的酸为甲烷磺酸或盐酸。
4.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于步骤②中的含双键的硅烷偶联剂为 Y-氯丙基二甲氧基娃烧或Y-溴丙基二甲氧基娃烧。
5.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于步骤③中的聚乙烯亚胺分子量范围为 10000-70000。
6.根据权利要求I 分比浓度为50%。
7.根据权利要求I 油醚或1，6_ 二氯己烷。
8.根据权利要求I 间。
9.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于步骤②中加热温度为80 90°C，步骤 ③中加热温度为80 90°C，步骤④中的加热温度为50 80°C。
10.权利要求I 9中制得的表面分子印迹材料在莱克多巴胺残留检测中的应用。所述的制备方法，其特征在于步骤③中的聚乙烯亚胺水溶液重量百所述的制备方法，其特征在于步骤④中的交联剂为乙二醇二缩水甘所述的制备方法，其特征在于步骤④中的碱性满足pH为8 10之
全文摘要
一种莱克多巴胺分子印迹材料制备方法，其特征在于包括如下步骤①硅胶的活化，称取硅胶，用酸的水溶液进行回流活化；②硅胶双键键合，活化后硅胶与含双键的硅烷偶联剂加热后进行反应；③硅胶表面化学接枝，将硅胶置于聚乙烯亚胺水溶液中加热反应，得到吸附材料；④产物制得，将吸附材料加到莱克多巴胺水溶液中，调节体系pH值至碱性，加入交联剂，加热反应；反应结束后，洗去模板分子莱克多巴胺，干燥，即得莱克多巴胺表面分子印迹材料。与现有技术相比，本发明的优点在于制备过程简单，可操作性强，制备成本低廉；分子印迹材料特异性好，对莱克多巴胺的吸附平衡时间短，洗脱时间短且洗脱效果好。
文档编号G01N1/40GK102580702SQ20121005816
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月7日 优先权日2012年3月7日
发明者叶宇飞, 吕燕, 吴银良, 杨挺 申请人:宁波市农业科学研究院