专利名称：一种治疗肾炎的中药复方制剂制备及质量控制方法
技术领域：
本发明属于中药制剂的制备エ艺和质量控制方法，具体是ー种治疗肾炎的中药制备エ艺和质量控制方法。
背景技术：
肾炎是最常见的泌尿系统疾病之一，也是导致慢性肾功能衰竭的主要病因，很多国家都将其列入重大疾病范围。其临床主要表现为血尿和/或蛋白尿。肾小球硬化是肾炎引起肾小球损伤的共同结局，肾小球系膜细胞(MC)増殖及肾小球细胞外基质(ECM)堆积与肾小球硬化密切相关，ECM的过度积聚是其前奏，也是很多肾小球损伤后的ー个共同病理特征。故延缓硬化性病变的进程是肾炎治疗中的重要环节。中医古代文献中，无肾炎病名记载，但据其临床表现，多属“水肿”、“尿血”范畴。如《灵枢论疾诊尺》说“视人之目窠上微痈，如新卧起伏，其静脉动，时咳，按其手足上，眘而不能起者，风水肤胀也。”张仲景在《金匮要略水气病脉证并治》中载有风水、皮水的症状及病因。均与肾炎极为相似。《小儿药证直觉肿病》曰“肾热传于膀胱，膀胱热盛。逆于脾胃，脾胃虚而不能制肾。水反克肾，脾随水行，脾主四肢，故流走而身面皆肿也。”强调了脾土不能制肾水在水肿发生中的机制。依据30余年治疗肾炎的临床经验总结，我们认为肾小球疾病进展为肾小球硬化时的主要病机为“虚、瘀、毒”。虚为发病之本。小儿为稚阴稚阳之体，正气相对不足。加之脏腑娇嫩，形气未充，肺、脾、肾常不足，容易感受外邪而致病。当毒邪入侵(外感风寒、风热、湿热或时行邪毒)，肺失通调，脾失健运，肾失开阖，导致“水精四布”失调。水液输布失常，泛溢肌肤发为水肿；湿热下注，灼伤膀胱血络而产生尿血。精微不能输布、封藏而下泄则出现蛋白尿。“瘀”贯穿于整个疾病过程中，血热内盛，灼烁津液，血稠而成瘀；病程日久，气虚无カ推动血运成瘀，脉络阻滞，出现瘀血之症；若毒、瘀久恋，伤阴耗气，可加重本虚。本虚又极易使机体感受毒邪，使疾病反复发作，迁延不愈。三者之间相互影响，使疾病反复发作，迁延不愈。现代医学对本病的发病机理尚不十分清楚，在肾炎的研究中，无论是原发性肾炎还是继发性肾炎，大部分是由免疫机制介导的。实验动物模型及人类肾炎的免疫病理学表现都说明免疫反应及其介导的炎症反应在其发病中起了重要的作用。目前国内外尚缺乏有效的特异的治疗药物，治疗主要应用糖皮质激素，免疫抑制剂等，但疗效尚难肯定。综合目前国内中医、中西医结合治疗肾炎的文献，多以中医辨证分型治疗为主或中医辨证加西药。李良将慢性肾小球疾病分为四型，针对不同中医分型，采用不同的药物治疗。(I)脾肾气虚型健脾补肾。方用四君子汤加減。(2)脾肾阳虚型温补脾肾。基本方熟附片，桂枝，山萸肉，熟地黄，淮山药，党參，白木，仙灵脾，巴戟天等。(3)肝肾阴虚型滋养肝肾。基本方山萸肉，茯苓，丹皮，熟地黄，牛膝，麦冬，五味子，太子參，枸杞子。气阴两虚型养阴益气。基本方黄芪，太子參，淮山药，丹皮，麦冬，山萸肉，茯苓，莲子肉等。(李良.辨证论治治疗慢性肾小球疾病1123例临床观察，上海中医药杂志，2003，37 (11) :20_21)。
刘剑勇以益气活血化瘀汤(生黄芪、三七、丹參、当归、川芎)加减治疗慢性肾炎30例，证属气虚血瘀证，临床观察3个月，总有效率达93. 3%。(刘剑勇、杨芳，范伏元.益气活血化瘀汤治疗慢性肾炎(气虚血瘀证)30例临床观察·中医药导报.2007，13 (8) :20_22)。袁斌等自拟丹芍颗粒II号方治疗过敏性紫癜肾炎，采用凉血化瘀通络法；方药组成为水牛角、生地黄、赤芍、丹參、鸡血藤、小蓟、蝉蜕、甘草，ロ服2个月，总有效率为96. 8%。(袁斌，孙轶秋，樊忠等.凉血化瘀通络法治疗小儿过敏性紫癜肾炎临床观察.中国中医药信息杂志· 2008，15 (8) : 67-68)。陈香美教授以肾华片治疗气阴两虚证的IgA肾病67例，方药组成为，黄芪、女贞子、白木、金银花等，临床观察12周，总有效率可达63. I %。(陈香美，陈建，陈以平.肾华片治疗IgA肾病(气阴两虚证)多中心随机对照临床观察.中国中西医结合杂志.2007, 27(2) :101-105)。
发明内容
本发明的目的，是提供ー种治疗肾炎的中药复方制剂(芪蓟肾康颗粒)制备エ艺方法，本方具有益气、化瘀、解毒的功效，对肾炎具有良好的疗效。 本发明的另一目的，是提供一种制备治疗肾炎的中药复方的质量标准 采用的技术方案是
ー种治疗肾炎的中药复方制剂(芪蓟肾康颗粒)，是由黄芪150-400g、丹參100-300g、牡丹皮100-300g、仙鹤草100-300g、小蓟100_300g、老头草100_300g、白花蛇舌草100_300g、重楼100-200g制备成。ー种治疗肾小球肾炎的中药复方制剂(芪蓟肾康颗粒)的制备方法，包括下述エ艺步骤
I、取黄芪150-400g和丹參100-300g加こ醇煎煮2_3次，每次加6_8倍量こ醇，每次提取I小时，合并提取液，过滤，滤液回收こ醇，浓缩至在60°C下相对密度为1.05-1. 10的清膏。2、取牡丹皮100-300g、老头草100_300g、白花蛇舌草100_300g、小蓟100_300g、仙鹤草100-300g、重楼100-200g和黄芪、丹參的醇提取药渣，加水煎煮2次，每次I小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 05-1. 10的清膏。3、合并步骤I和步骤2所得的清膏，调节相对密度为I. 04，喷雾干燥(进风温度650C，物料温度40°C )，得干粉。再加入适量糊精和糖粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，按设定粒度制粒，即得。苗蓟肾康颗粒的质量控制标准
对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含O. 05mg的溶液，即得。供试品液的制备取本品lg，精密称定，置具塞三角瓶中，加30%甲醇溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟(功率250w，频率33KHz)，放冷补足减失重量，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得。測定方法分别精密吸取对照品和供试品各10μ 1，注入高效液相色谱仪，測定，即得。本品每g含丹酚酸B不得少于4mg。、
功能益气、化瘀、解毒
主治感染后肾小球肾炎、紫癜性肾炎证属气虚血瘀者。服用量10岁以下，每次10g，每日2次，10岁以上，每次20g，每日2次。本发明的有益效果
感染后肾小球肾炎、紫癜性肾炎由于发病率高、肾损害严重，已成为严重危害儿童及青少年健康及生命的重要多发疾病。目前治疗以肾上腺糖皮质激素或免疫抑制剂为主，疗效尚不确切，且副作用较大。中医药对本病的病情发展和愈后有良好的干预。国内有较多用中药复方汤剂或煎剂治疗肾炎的文献报道，但已研制成中药新药(VI类)的尚未见到。我们总结临床治疗感染性肾小球肾炎、紫癜性肾炎近30年经验，基于祖国医学对本病的病因病机认识，确立了益气、化瘀、解毒的治疗原则，在进行了大量临床用药的基础上筛选有效药味， 形成有效固定经验处方，临床愈显率达85. 2%。并在临床使用的水煎剂的基础上，依据中药的有效成分和药效学的实验结果，对处方的提取和剂型エ艺进行了改革，制成芪蓟肾康颗粒剂，并进行了临床观察，证实该中药复方具有益气、化瘀、解毒功效，能够在较短的时间内缓解症状，缩短疗程，減少病情反复，减轻肾损害的发展，且无激素的戒断效应。本发明通过剂型エ艺和质量控制研究，为该方的应用及新药研发提供良好的基础，具有很好的应用前景，可以获得重大社会效益和经济效益。
图I是本发明的治疗肾炎的中药复方制剂对增殖的肾小球黏膜细胞IL-6蛋白含量的影响的统计图。具体实施例
实施例一
ー种治疗肾炎的中药复方制剂，是由中药材黄芪3000g、丹參2000g、牡丹皮2000g、小蓟2000g、仙鹤草2000g、白花蛇舌草2000g、重楼1500g、老头草2000g制备成。实施例ニ
ー种治疗肾炎的中药复方制剂，其中黄芪3000g、丹參2000g加85%こ醇提取2次，提取液另器保存，药渣与丹皮2000g、小蓟2000g、仙鹤草2000g、白花蛇舌草2000g、重楼1500g、老头草2000g加水煎煮2次，每次I小时，滤过，滤液浓缩至比重为I. 05 - I. 10时，加こ醇沉淀，静置过夜后，滤除沉淀，滤液加入黄芪和丹參的こ醇提取液，浓缩至比重为I. 15 I. 25，加入适量糖粉和糊精，喷雾干燥制粒，即得。实施例三
ー种治疗肾炎的中药复方制剂，其中黄芪3000g、丹參2000g加80%こ醇提取2次，提取液另器保存，丹皮g小蓟2000g、仙鹤草2000g、白花蛇舌草2000g、重楼1500g、老头草2000g等6味药加水煎煮2次，每次I小时，滤过，滤液浓缩至比重为I. 05 一 I. 10，所有药味提取后的浓缩液加こ醇沉淀，静置过夜后，滤除沉淀，浓缩至比重为I. 15 I. 25，加入适量糖粉和糊精，喷雾干燥制粒，即得。实施例四
取芪蓟肾康颗粒lg，加30%甲醇溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，得供试品液。取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含O. 05mg的溶液，即得对照品液。分别吸取供试品和对照品各IOyl注入高效液相色谱仪，照中国药典(2010年版一部附录)的高效液相色谱法，以甲醇-ZJ青-甲酸-水(28:10:1:61)为流动相，流速lml/min，柱温25°C，检测波长286nm:分别吸取上述供试品液和对照品液，注入高效液相，測定峰面积，计算样品中丹酚酸B的含量。本品每g含丹酚酸B不得少于4mg。临床研究
芪蓟肾康治疗肾炎124例临床分 析。I资料与方法
I.I临床资料全部病例均为2009年I月 2011年12月辽宁中医药大学附属医院病例，共124例，男65例，女59例。其中感染后肾炎60例，过敏性紫癜肾炎64例。I. 2病例选择
(I)西医诊断标准參照中华医学会儿科学分会肾脏病学组《小儿肾小球疾病的临床分类、诊断及治疗》标准制定[1]。感染后肾小球肾炎诊断标准
①有前驱感染史。②血尿。2周内分别3次以上离心尿检查RBC 10个/HPF，并证实为肾小球源性血尿者。③蛋白尿，尿蛋白彡2+。过敏性紫癜肾炎诊断标准
在过敏性紫癜病程中(多数在6个月内)，出现血尿和(或)蛋白尿(尿蛋白< 2+)。(2)中医辨证标准參照《中药新药临床研究指导原则》[2 ]及《中医儿科学》[3]中关于尿血的诊断标准制定。气虚血瘀证尿血,尿浊,迁延不愈,面色少华,体倦乏力，易患感冒，舌质暗红或紫暗，脉沉。全部病例均符合中西医诊断标准。I. 3治疗方法
中医治疗益气，化瘀，解毒，方用芪蓟肾康颗粒，〈10岁，毎次10g，每日两次ロ服，>10岁，毎次20g，每日两次ロ服。疗程4周，观察2个疗程。I. 4疗效评定标准
參照《中药新药临床研究指导原则》判定[2]。①临床控制尿常规检查蛋白转阴，或24h尿蛋白定量正常；尿常规检查红细胞数正常，或尿沉渣RBC计数正常；
②显效尿常规检查蛋白减少2个“+ ”，或24h尿蛋白定量減少き40%，RBC減少き3个/HP或2个“ + ”，或尿沉渣RBC计数检查减少き40% ；
③有效尿常规检查蛋白减少I个“+ ”，或24h尿蛋白定量减少〈40%，RBC减少〈3个/HP或I个“ + ”，或尿沉渣RBC计数检查减少〈40% ；
④无效临床表现与上述实验室均无改善或加重。总有效率=(治愈例数+显效例数)/总例数。2 结果
临床治疗结果临床治愈72例，显效28例，有效8例，无效16例，治愈率58. 1%，总有效率为87. 1%。结果表明采用益气、化瘀、解毒法筛选的中药芪蓟肾康颗粒剂，对肾炎的治疗，疗效确切。研究已列入国家重大专项项目。參考文献
[I]中华医学会儿科学分会肾脏病学组.《小儿肾小球疾病的临床分类、诊断及治疗》[J].中华儿科杂志，2001 , 39 ( 12 ) : 746-749。[2]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则(试行)[S]北京 中国医药科技出版社，2002:158。[3]汪受传·中医儿科学[M],北京:人民卫生出版社，2011 :958_960。实验研究
芪蓟肾康颗粒主要药效学实验研究
摘要目的对芪蓟肾康颗粒进行主要药效学研究。方法采用脂多糖制备大鼠IgA肾病实验，观察芪蓟肾康颗粒对尿红细胞计数、24h蛋白尿定量以及血清免疫复合物的影响。采用Ang II刺激体外培养的肾小球系膜细胞，使之发生増殖的实验，观察芪蓟肾康颗粒对炎症因子的影响。结果芪蓟肾康颗粒能明显的减少尿红细胞计数和24h尿蛋白定量；減少血中循环免疫复合物的含量；减少Ang II所致增殖的系膜细胞IL-6的蛋白含量。结论芪蓟肾康颗粒具有改善尿红细胞计数、24h蛋白尿定量，调节免疫，抗炎的作用。芪蓟肾康颗粒是由黄芪、丹參、牡丹皮、小蓟等8味药材组成，具有益气、化瘀、解毒功效。用于治疗感染后肾炎、紫癜性肾炎。本文针对其功效和临床应用，对该药进行了主要药效学试验。一、实验目的
观察芪蓟肾康颗粒与功能主治有关的主要药效学作用，为该药的临床应用提供參考。ニ、实验材料
受试药物芪蓟肾康颗粒，由辽宁中医药大学药学院提供，西药阳性对照药替米沙坦，Boehringer Ingelheim Pharm GmbH & Co. KG Binger Strasse 173,D-55216 Ingelheim amRhein，批号006670,批准文号进ロ药品注册证号H20090416，规格7片/瓶，80mg/片。氯沙坦，sigma公司，批号101104458o受试对象SPF级SD大鼠，雌雄各半，180 220g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，许可证号SCXK (京)2009-0004。大鼠肾小球系膜细胞株，购于博士德生物有限公司，货号CX0130。实验环境辽宁省中医药研究院实验动物中心。许可证号SYXK (辽)2007-0010。实验室温度20°C 23°C，实验室湿度50% 60%。辽宁中医药大学中医分子生物实验室。许可证号TCM-03-091。实验室温度20-23°C，实验室湿度50% 60%。仪器UF-1000全自动尿沉渣分析仪；日立7600全自动生化分析仪；卓越330全自动生化分析仪，上海科华；SpeCtia Maxl90酶标仪，美国；微孔板酶标仪，美国伯乐公司，型号550
试剂24h尿蛋白定量试剂，批号235366，朗道实验室有限公司生产。免疫复合物试剂盒，批号:201111，美国RD公司生产。IL-6ELISA试剂盒，批号RA20607, Bio-Swamp公司生产。
统计方法所有数据用均数土标准差(I 土 s)表示。组间比较用t检验。三、实验方法与结果
I芪蓟肾康颗粒对脂多糖所致IgA肾病大鼠尿红细胞计数及24h尿蛋白定量的影响，取180-220g SD大鼠50只，雌雄各半，按体重随机分5组，每组10只，分别为正常组，模型组，苗蓟肾康颗粒高、低剂量组(41. 25g生药/kg、20. 6g生药/kg),替米沙坦组(8mg/kg)。运用脂多糖(LPS)+四氯化碳ロ服(CCL4) +牛血清白蛋白(BSA)联合造模方法BSA剂量为400mg/kg,隔日灌胃，持续六周，皮下注射蓖麻油O. 5ml+CCL40. 10ml，每周一次持续9周，并联合应用LPS (分别于第6，8周以0.05mg尾静脉注射)。实验于第8周开始给药，除空白组，模型组给予等量蒸馏水外，其余各组给予大鼠相应的药物，每日一次，连续5周，用药至12周。12周后用代谢笼收集各组大鼠尿液，流式法UF-1000全自动尿沉渣分析仪检测尿沉渣红细胞计数；免疫比浊法全自动生化分析仪检测24小时尿蛋白定量。结果见表I、表2
表I芪蓟肾康颗粒对实验性IgA肾病大鼠尿红细胞计数的影响G 土 s)
权利要求
1.ー种治疗肾炎的中药复方制剂，其特征是由黄芪150-400g、丹參100-300g、牡丹皮100-300g、仙鹤草100-300g、小蓟100_300g、老头草100_300g、白花蛇舌草100_300g、重楼100-200g制备成。
2.根据权利要求I所述的ー种治疗肾小球肾炎的中药复方制剂的制备方法，其特征在于包括下述エ艺步骤 (1)、取黄芪150-400g和丹參100-300g加こ醇煎煮2_3次，每次加6_8倍量こ醇，每次提取I小吋，合并提取液，过滤，滤液回收こ醇，浓缩至在60V下相对密度为1. 05-1. 10的清膏； (2)、取牡丹皮100-300g、老头草100-300g、白花蛇舌草100_300g、小蓟100_300g、仙鹤草100-300g、重楼100-200g和黄芪、丹參的醇提取药渣，加水煎煮2次，每次I小吋，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为I. 05-1. 10的清膏； (3)、合并步骤I和步骤2所得的清膏，调节相对密度为I.04，喷雾干燥(进风温度650C，物料温度40°C )，得干粉，再加入适量糊精和糖粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，按设定粒度制粒，即得。
3.根据权利要求I所述的ー种治疗肾炎的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于 对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含O. 05mg的溶液，即得； 供试品液的制备取本品lg，精密称定，置具塞三角瓶中，加30%甲醇溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟(功率250w，频率33KHz)，放冷，补足减失重量，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得； 測定方法分别精密吸取对照品和供试品各10μ 1，注入高效液相色谱仪，測定，即得；本品每g含丹酚酸B不得少于4mg。
全文摘要
一种治疗肾炎的中药复方制剂，其特征是由黄芪150-400g、丹参100-300g、牡丹皮100-300g、仙鹤草100-300g、小蓟100-300g、老头草100-300g、白花蛇舌草100-300g、重楼100-200g制备成。本发明具有益气、化瘀、解毒功效，能够在较短的时间内缓解症状，缩短疗程，减少病情反复，减轻肾损害的发展，且无激素的戒断效应。本发明通过剂型工艺和质量控制研究，为该方的应用及新药研发提供良好的基础，具有很好的应用前景，可以获得重大社会效益和经济效益。
文档编号G01N30/02GK102641402SQ20121010982
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月16日 优先权日2012年4月16日
发明者张君, 许枬 申请人:辽宁中医药大学