一种鸦胆子油口服干乳剂的质量控制方法
【专利摘要】本发明涉及一种中药制剂的检测方法，尤其是可以用以进行质量控制的成分的检测方法。本发明所述的鸦胆子油干乳剂质量控制检测方法是用气相色谱法同时测定鸦胆子油干乳剂中油酸和亚油酸含量的方法。本发明所述的鸦胆子油干乳剂质量控制检测方法由以下步骤组成：性状、鉴别、检查和含量测定。为了全面、准确地鸦胆子油干乳剂的质量，本发明制定了用气相色谱法识别鸦胆子油干乳剂的特征图谱和/或鸦胆子油口服干乳剂脂肪酸组成，并同时测定鸦胆子油干乳剂油酸和亚油酸的含量。经分析方法验证，其精密度、重现性、回收率和稳定性符合中国药典2010年一部附录《中药质量标准分析方法验证指导原则》的要求。
【专利说明】一种鸦胆子油口服干乳剂的质量控制方法
发明领域
[0001]本发明涉及一种鸦胆子油口服干乳剂的质量控制方法，属于中药的【技术领域】。
[0002]发明背景
[0003]鸦胆子油的主要成分油酸，它能够抑制拓扑异构酶(TOPOII)活性，从而抑制细胞DNA的合成及生长，阻断癌细胞的增殖。鸦胆子油对肿瘤癌细胞具有选择性，即选择性破坏癌细胞膜和线粒体等膜性系统，使癌细胞变性坏死，而对正常细胞无损害。同时，鸦胆子油对肿瘤癌细胞具有靶向性，用药后药物浓度集中，并与癌细胞具有特异性紧密的亲和力，对体液免疫和细胞免疫都有促进作用，并具有促进骨髓干细胞的造血功能作用。鸦胆子油口服剂在临床上广泛应用于放疗、化疗后辅助治疗或合并治疗有很好的疗效，不但能提高治疗效果，还具有升高白细胞，减轻毒副作用等疗效，对妇科肿瘤、乳腺癌、脑瘤、脑转移瘤、肉瘤、淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌等均有明显的治疗效果。目前，临床上使用的鸦胆子油口服剂主要有鸦胆子油口服乳剂和鸦胆子油口服软胶囊二种剂型。乳剂具有许多独特的优点，例如能够快速吸收，可作为不少水溶性差的药物的良好载体，载药量高，具有一定的靶向作用等。但也存在着稳定性差，油脂易氧化酸败导致产品质量不稳定等因素。软胶囊剂虽然可在一定程度上减缓了油脂的氧化酸败，但由于长期服用时，患者对明胶做成的囊壳消化能力下降，易产生嗳气，顺应性差。本发明中的干乳剂能很好的解决了上述问题，因而具有较好的药用前景。
[0004]鸦胆子口服乳液的质量控制采用卫生部颁药品标准(中药成方制剂第十九册)WS3-B-3646-98,该标准只检查PH和总酸量，该法虽能控制鸦胆子油的甘油三酸含量，但却不能控制其中起作用的活性成分，油酸和亚油酸的含量，因而也就不能很好的保证产品的疗效。中华人民共和国药典一部虽采用气相法分析鸦胆子药材中的油酸含量，但未涉及乳剂的测定，也未对其组分加以限定，不能很好的反映出成分组成，因而也就不能很好地控制鸦胆子油的组分波动。由于乳剂在制备过程中，为了增加其稳定性而大量加入了乳化剂和其他辅料。由于辅料特别是乳化剂的存在，对药物的含量测定造成一定的干扰，因此，必须选择简便准确的定量分析方法对乳剂进行质量控制。通常采用适宜的溶剂将药物溶解提取，再进行含量测定，测定方法必须考虑和排除辅料尤其是乳化剂对提取物含量测定的干扰和影响。由于乳剂中的油相被包裹于内部的油相中，必须先使乳剂破乳，释放出油相，才能进行提取。乳液含量测定的关键在于乳液能完全破乳后提取出乳剂的内相油，因此乳剂测定的准确性取决于二个方面:即破乳和油相的提取。破乳是使乳状液的油水两相完全分离，一般其过程分两步实现，第一步是絮凝，分散相的液珠聚集成团。第二步是聚结，在团中各液滴相互合并成大液珠，最后聚集分离。乳状液的破乳和稳定与许多因素有关，如两相组成与比例、粒径大小及分布、温度、表面张力、界面粘度及界面膜的性质等，其中界面张力界面膜强度对于乳状液的形成、稳定及破乳起着至关重要的作用。一般采用化学破乳法联合使用物理破乳法，可得到良好的破乳效果。化学破乳法有加酸、加碱、加盐等；物理破乳法有超声、微波、加热、电和I旲破乳法、冷冻解冻和闻速尚心等。破乳后，必须把样品提取完全，否则影响测定结果，但具有表面活性的乳剂的存在往往会使提取难以完全。目前，乳剂含量测定采用的破乳和提取方法主要是直接有机溶剂提取和电解质破坏乳剂方法，如孙苓苓(药物分析杂志1996，16 (2):98)在进行大果木姜子油乳测定时采用先用石油醚和丙酮进行两步提取，以除去乳化剂豆磷脂的干扰。由于木姜子油在乳化剂中有一定的溶解度，而乳化剂在水相中也有一定的溶解度，乳化剂的存在无疑增加了油相在水中的溶解度，使提取难以完全。李萍(柱后衍生化HPLC法测定前列地尔乳剂的有关物质，中国医药导报2010,7(34):47)采用柱前衍生的方法对前列地尔乳剂进行测定，排除辅料的干扰，方法虽可行，但操作过于繁杂，不利于实际应用；中国专利CN101596161介绍了一种前列地尔脂肪乳剂测定的方法，采用冷冻干燥的方法去乳化，使样品成为油状物，然后用有机溶剂抽提油状物，得到供试液，此法费时，同时对提取过程中乳化剂的影响并没有很好的消除。为确保产品质量可控和安全有效，本发明采用鸦胆子油口服干乳剂乳滴粒径控制、鸦胆子油干乳剂的特征图谱和/或鸦胆子油干乳剂的脂肪酸组成来对鸦胆子油干乳剂的质量和成分组成加以限定，同时采用总酸量测定和油酸及亚油酸含量测定来控制产品中的甘油三酯含量及油酸和亚油酸含量，特别是在用气相色谱对油酸及亚油酸含量进行测定时，首先用无机盐破坏乳剂的结构，然后再用混合溶剂，确保将鸦胆子油完全提出。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种鸦胆子油口服干乳剂的质量控制方法
[0006]本发明所述的质量控制方法是通过如下的技术方案实现的:
[0007]一、性状
[0008]取鸦胆子油口服干乳剂适量，置光滑纸上，平铺约5cm2，将其表面压平，在明亮处观察，为白色的颗粒；样品颗粒或其加水复溶后的乳剂有甜味。
[0009]二、鉴别
[0010]取鸦胆子油口服干乳剂lg，加无水乙醇IOml溶解，过滤，滤液照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录V A)测定，在270nm的波长处有最大吸收。
[0011]三、检查
[0012]1、装量差异
[0013]取鸦胆子油口服干乳剂10袋，分别精密称定每袋内容物的重量，每袋内容物重量与标示量比较，装量差异限度不得超过±5.0%，超出装量差异限度的，应不多于2袋，并不得有I袋超出装量差异限度的一倍。(《中国药典》2010年版一部附录IC)
[0014]2、粒度
[0015]取鸦胆子油口服干乳剂单剂量包装的成品5袋，称定重量置于药筛内过筛，过筛时保持水平，左右往返轻轻筛动3分钟，不能通过I号筛和能通过五号筛的颗粒粉末总和，不得过15%。(《中国药典》2010年版一部附录XI B第二法)
[0016]3、水分
[0017]照水分测定法(《中国药典》2010年版一部附录IX H第一法)测定，不得过6.0%。
[0018]4、乳化性
[0019]取鸦胆子油口服干乳剂I袋，加温水200ml，搅拌5分钟，应全部溶化，静置，可分层，振摇后仍能均匀分散，并不得有不溶性杂质。
[0020]5、乳滴粒径[0021]取鸦胆子油口服干乳剂lg，W 60°C温水10ml，搅拌使全部溶化，放置10分钟，搅拌，取样测定，粒径< 10 μ m的不得少于99%。
[0022]6、微生物限度检查
[0023]照《中国药典》2010年版一部附录XIII C检查，细菌数不得过800CFU/g，霉菌数不得过80CFU/g，大肠杆菌、活螨不得检出。
[0024]7、特征图谱
[0025]照气相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI E)测定
[0026]色谱条件与系统适用性试验化学键合聚乙二醇毛细管柱(CP WAX-52CB，内径0.32mm,柱长30m，膜厚度0.50 μ m);柱温205°C，进样口温度250°C，检测器(FID) 300°C，载气高纯氮，流速lml/min,分流比5: I。理论塔板数按照油酸峰面积计算应不低于10000。参照物溶液的制备精密称取油酸甲酯对照品、亚油酸甲酯对照品、硬脂酸甲酯对照品、棕榈酸甲酯对照品适量，加正己烷制成每Iml含Img的溶液，作为参照物溶液。
[0027]8、测定法
[0028]取鸦胆子油口服干乳剂约lg，精密称定，置试管中，加水2ml振摇使溶解完全，加饱和硫酸钠溶液lml，振摇。加入异丙醇:正己烷:冰乙酸(体积比40: 10: l)3ml，振摇，静置使完全分层，吸取最上层淡黄色溶液置25ml量瓶，加正己烷至刻度，摇匀，精密吸取1ml，另精密称取油酸参照物溶液2ml，分别置IOml具塞试管中，用氮气吹干，分别精密加入0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴皂化25min，每隔数分钟振荡一次，至油珠全部消失，放冷。分别精密加入14%三氟化硼甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴酯化2min，放冷；分别精密加入正己烷2ml，充分振摇，分别加饱和氯化钠溶液1ml，振摇，静置，分别精密吸取上层溶液Iml于IOml容量瓶中，用氮气吹干，加正己烷适量，定容，摇匀。分别吸取上层溶液各I μ L注入气相色谱仪中，测定，记录20分钟的色谱图，即得。
[0029]供试品特征图谱应有4个特征峰，其中4个峰与相应的参照物峰保留时间相同，与油酸甲酯参照物峰相应的峰为S峰，计算特征峰1、2、4的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为0.60 (峰I)、0.94 (峰2)、1.00 (峰3)、1.12 (峰4)。
[0030]9、鸦胆子油口服干乳剂脂肪酸组成测定
[0031]取鸦胆子油口服干乳剂lg，精密称定，置试管中，加水2ml振摇使溶解完全，加饱和硫酸钠溶液lml，振摇。加入异丙醇:正己烷:冰乙酸(体积比40: 10: l)3ml，振摇，静置使完全分层，吸取最上层淡黄色溶液置25ml量瓶，加正己烷至刻度，摇匀，精密吸取lml，另精密称取油酸参照物溶液2ml，分别置IOml具塞试管中，用氮气吹干，分别精密加入0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴皂化25min，每隔数分钟振荡一次，至油珠全部消失，放冷。分别精密加入14%三氟化硼甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴酯化2min，放冷；分别精密加入正己烷2ml，充分振摇，分别加饱和氯化钠溶液1ml，振摇，静置，分别精密吸取上层溶液Iml于IOml容量瓶中，用氮气吹干，加正己烷适量，定容，摇匀，为供试品溶液，以油酸甲酯、亚油酸甲酯对照品、硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯的正己烷溶液为对照，色谱柱用 CP-WAX 52CB (30mX 0.32mmX 0.50 μ m)，进样口温度:250°C，检测器温度:300。。，柱温:205°C,分流比:5: I,载气流速:1ml ^irT1,理论塔板数按油酸和亚油酸峰计算均应不低于10000。脂肪酸保留时间依次为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸。按峰面积归一化法计算，各脂肪酸百分含量分别为10%~15%、4%~7%、55%~70%和15%~28%。[0032]四、总酸量测定
[0033]取鸦胆子油口服干乳剂22g，精密称定，加水22ml溶散，加中性乙醇20ml (临用前加酚酞指示液1.0ml，用氢氧化钠滴定液0.lmol/L滴至微显粉红色)，精密加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml，加热回流40分钟，用中性乙醇IOml冲洗冷凝管，放冷，加酚酞指示液2滴，用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定至红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每Iml盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于HL 25mg的C18H3402。本品总酸量按油酸(C18H34O2)计，不得少于8.0%。
[0034]五、油酸和亚油酸含量测定
[0035]1、色谱条件与系统适用性试验
[0036]CP-WAX 52CB毛细管柱，FID检测器，进样口温度为250°C，柱温为205°C，检测器温度为300°C，进样量为I μ 1，分流比为5: 1，载气流速:1ml理论塔板数按油酸峰计算不低于20000。在上述色谱条件下，各油酸甲酯、亚油酸甲酯和苯甲酸苯酯都达到基线分离。
[0037]2、对照品溶液的制备
[0038]取油酸、亚油酸对照品适量，精密称定，加正己烷制成每Iml含1.00，0.50mg的溶液。
[0039]取苯甲酸苯酯对照品适量，精密称定，加正己烷制成每Iml含1.0Omg的溶液，作为内标溶液。
[0040]脂肪酸的衍生化:分别精密量取供试品溶液Iml适量置IOml具塞试管中，用氮气吹干，加入0.5mol .L-1氢氧化钾甲醇溶液2ml，密塞，摇匀，置60°C水浴中皂化25min，放冷，加15%三氟化硼甲醇溶液2ml，密塞，摇匀，置60°C水浴甲酯化3min，放冷，精密加入正己烷2ml，振摇，加饱和NaCl溶液Iml，振摇，静置使分层，精密取正己烷层溶液Iml，用氮气吹干，精密加入内标溶液0.7ml，加正己烷使溶解并稀释至10ml，即得。
[0041]3、供试品溶液的制备
[0042](I)破乳方法的考察
[0043]A、不同无机盐的考察
[0044]选用常用来破乳的无机盐对鸦胆子油口服干乳剂进行破乳处理，固定提取溶剂及提取方法，比较不同无机盐破乳后油酸与亚油酸的提取率。结果见表1。
[0045]表1破乳方法的考察
[0046]
【权利要求】
1.一种鸦胆子油口服干乳剂的质量控制方法，其鸦胆子油干乳剂是用鸦胆子油与乳化剂及辅料经乳化、干燥，然后制成的口服干乳制剂；其特征在于，所述的鸦胆子油干乳剂的质量控制方法包括以下全部内容: (1)鸦胆子油口服干乳剂乳滴粒径的检查方法: 取本品lg，w 60°c温水10ml，搅拌使全部溶化，放置10分钟，搅拌，取样测定，粒径<10 μ m的不得少于99% ； (2)乳滴粒径: 取样品化，加60°C温水10ml，搅拌使全部溶化，放置10分钟，搅拌，取样测定，粒径<10 μ m的不得少于99% ； (3)鸦胆子油口服干乳剂的特征图谱和/或鸦胆子油口服干乳剂脂肪酸组成测定: 鸦胆子油口服干乳剂的特征图谱: 参照物溶液的制备，精密称取油酸甲酯对照品、亚油酸甲酯对照品、硬脂酸甲酯对照品、棕榈酸甲酯对照品适量，加正己烷制成每ImL含Img的溶液，作为参照物溶液。 取鸦胆子油口服干乳剂lg，精密称定，置试管中，加水2ml振摇使溶解完全，加饱和硫酸钠溶液lml，振摇；加入异丙醇:正己烷:冰乙酸(体积比40: 10: I)复合溶剂3ml，振摇，静置使完全分层，吸取最上层淡黄色溶液置25ml量瓶，加正己烷至刻度，摇匀，精密吸取1ml，另精密称取油酸参照物溶液2ml，分别置IOml具塞试管中，用氮气吹干，分别精密加入0.5mol/L氢氧化钾甲`醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴皂化25min，每隔数分钟振荡一次，至油珠全部消失，放冷；分别精密加入14%三氟化硼甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴酯化2min，放冷；分别精密加入正己烷2ml，充分振摇，分别加饱和氯化钠溶液1ml，振摇，静置，分别精密吸取上层溶液Iml于IOml容量瓶中，用氮气吹干，加正己烷适量，定容，摇匀，为供试品溶液，以油酸甲酯、亚油酸甲酯对照品、硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯的正己烷溶液为对照，色谱柱用CP-WAX 52CB (30mX0.32mmX0.50 μ m)，进样口温度:250°C，检测器温度:300°C，柱温:205°C，分流比:5: 1，载气流速:1ml理论塔板数按油酸和亚油酸峰计算均应不低于10000 ;供试品色谱中，特征图谱应有4个特征峰，其中4个峰与相应的参照物峰保留时间相同，与油酸甲酯参照物峰相应的峰为S峰，计算特征峰1、2、4的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内；规定值为0.60 (峰I)、0.94 (峰2)、1.00 (峰3),1.12(峰 4)； 鸦胆子油口服干乳剂脂肪酸组成测定: 取鸦胆子油口服干乳剂lg，精密称定，置试管中，加水2ml振摇使溶解完全，加饱和硫酸钠溶液lml，振摇；加入异丙醇:正己烷:冰乙酸(体积比40: 10: l)3ml，振摇，静置使完全分层，吸取最上层淡黄色溶液置25ml量瓶，加正己烷至刻度，摇匀，精密吸取1ml，另精密称取油酸参照物溶液2ml，分别置IOml具塞试管中，用氮气吹干，分别精密加入0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴皂化25min，每隔数分钟振荡一次，至油珠全部消失，放冷；分别精密加入14%三氟化硼甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴酯化2min，放冷；分别精密加入正己烷2ml，充分振摇，分别加饱和氯化钠溶液lml，振摇，静置，分别精密吸取上层溶液Iml于IOml容量瓶中，用氮气吹干，加正己烷适量，定容，摇匀，为供试品溶液，以油酸甲酯、亚油酸甲酯对照品、硬脂酸甲酯和棕榈酸甲酯的正己烷溶液为对照，色谱柱用 CP-WAX 52CB(30mX0.32mmX0.50 μ m)，进样口温度:250°C，检测器温度:300。。，柱温:205°C,分流比:5: I,载气流速:1ml.mirT1,理论塔板数按油酸和亚油酸峰计算均应不低于 10000 ； (4)鸦胆子油口服干乳剂总酸量含量测定: 取鸦胆子油口服干乳剂22g，精密称定，加水22ml溶散，加中性乙醇20ml (临用前加酚酞指示液1.0ml，用氢氧化钠滴定液0.lmol/L滴至微显粉红色)，精密加入0.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液25ml，加热回流40分钟，用中性乙醇IOml冲洗冷凝管，放冷，加酚酞指示液2滴，用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定至红色消失,并将滴定的结果用空白试验校正；每11111盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于 141.25mg 的 C18H34O2 ； (5)鸦胆子油口服干乳剂油酸和亚油酸含量测定: 取鸦胆子油干乳颗粒剂lg，精密称定，置试管中，加水2ml振摇使溶解完全，加饱和硫酸钠溶液lml，振摇；加异丙醇:正己烷:冰乙酸(体积比40: 10: l)3ml，振摇，静置使完全分层，吸取最上层淡黄色溶液置25ml量瓶。下层溶液重复提取3次，每次加正己烷2ml，振摇，加异丙醇:正己烷:冰乙酸(体积比40: 10: l)2ml，振摇，静置使完全分层；吸取上层澄清溶液，合并提取液，加正己烷至刻度，摇匀，精密吸取1ml，另精密量取油酸对照品溶液和亚油酸对照品溶液各1ml，分置IOml具塞试管中，用氮气吹干，分别加0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2ml，摇匀，置60°C水浴皂化25min，每隔数分钟振荡一次，至油珠全部消失，放冷；分别加14%三氟化硼甲醇溶液2ml，密塞，摇匀，置60°C水浴酯化2min，放冷；分别精密加入正己烷2ml，充分振摇，分别加饱和氯化钠溶液lml，振摇，静置，分别精密吸取上层溶液Iml于IOml容量瓶中，用氮气吹干，精密加入内标溶液0.7ml，加正己烷定容至刻度，摇匀。
2.按照权利要求1所述方法，鸦胆子油口服干乳剂的总酸量按油酸(C18H34O2)计，不得少于8.0% ;每Ig鸦胆子油干乳剂含油酸，以(C18H34O2)计，不得少于45mg ;含亚油酸(C18H32O2)计,不得少于 1`3mg。
3.按照权利要求1所述方法，鸦胆子油口服干乳剂的特征图谱，其中4个峰与相应的参照物峰保留时间相同，与油酸甲酯参照物峰相应的峰为S峰，计算特征峰1、2、4的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内，规定值为0.60 (峰I)、0.94 (峰2)、1.00(峰 3)、1.12(峰 4)。
4.按照权利要求1所述方法鸦胆子油口服干乳剂脂肪酸组成，脂肪酸保留时间依次为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸。按峰面积归一化法计算，各脂肪酸百分含量分别为10%~15%、4%~7%、55%~70%和 15%~28%。
5.按照权利要求1所述方法，鸦胆子油口服干乳剂的特征图谱测定和/或鸦胆子油干乳剂脂肪酸组成测定以及鸦胆子油口服干乳剂油酸和亚油酸含量测定所用的破乳方法是:取鸦胆子油口服干乳剂，精密称定，置试管中，加水振摇使溶解完全，加饱和硫酸钠溶液振摇，加异丙醇-正己烷-冰乙酸溶液，振摇提取20s，静置5分钟，吸取最上层淡黄色溶液；下层溶液再提取三次，每次先加正己烷振摇15秒，再加入异丙醇-正己烷-冰乙酸溶液振摇15秒，静置5分钟后，吸取上层澄清溶液，合并前后四次提取液于25ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得。
6.按照权利要求3所述方法，破乳过程按下列顺序操作，先加饱和无机盐溶液充分振摇，然后加加正己烷振摇，最后加复合有机溶剂进行提取。
7.按照权利要求6所述方法，饱和无机盐溶液为硫酸钠的饱和溶液。
8.按照权利要求6所述方法，复合有机溶剂为异丙醇-正己烷-冰乙酸溶液，其组成比例为体积比(V/V)40: 10:1`。
【文档编号】G01N30/06GK103512971SQ201210225196
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月17日 优先权日:2012年6月17日
【发明者】吕拓, 方成玲, 黄汉泉 申请人:吕拓, 黄汉泉