专利名称：一种用于孜然挥发油成分的gc/ms指纹图谱的分析方法
技术领域：
本发明涉及一种孜然挥发油成分的分析方法，具体地，本发明涉及一种用于孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的分析方法。
背景技术：
指纹图谱是随着现代分析技术发展而诞生的一种从整体上研究复杂物质体系的技术，是以各种光谱、波谱、色谱等技 术为依托的又一种质量控制模式。色谱指纹图谱具有整体性和模糊性，是一种从整体上研究复杂物质体系的技术，具有指纹特征分析、宏观推断分析等特点，适合于考察复杂成分重要内在质量的均一性和稳定性。孜然挥发油是香精生产中的常用原料之一，其质量控制是香精产品稳定性的指标之一。指纹图谱能够比较全面地反映孜然挥发油成分的种类、数量及相互之间的比例等信息，进而有效地表征其内在质量。本专利申请旨在建立一套基于GC/MS数据的孜然挥发油成分的指纹图谱分析检测方法，为孜然挥发油成分的质量控制提供科学的依据和指导。
发明内容
本发明的目的是提供一种孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的构建方法以及由此方法所得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱，通过该标准指纹图谱为孜然挥发油的质量控制提供科学的依据和指导。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的构建方法，包括如下步骤I)、供试品溶液的制备将孜然样品粉碎至24目后，称取样品20g，精确至O.Olg，置于挥发油提取器中，力口A 10倍样品质量的二次蒸馏水与数粒玻璃珠浸泡12h，振摇均匀，回流提取5h (至馏出液无明显油珠为止)，将馏出液转入分液漏斗中，用60mL乙醚分两次进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，然后在50°C水浴下挥发去除乙醚，即得孜然挥发油，即供试品溶液。2)、孜然挥发油的GC-MS分析将步骤I)所得孜然挥发油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用；GC /MS分析条件气相色谱条件色谱柱HP-5MS石英毛细管色谱柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)；进样口温度250°C;载气高纯(彡99. 999%)氮气，载气流速lmL/min ；程序升温起始温度40°C,保持2min,以4°C /min的速度升至100°C,保持Imin,然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；进样量1ill;进样方式手动进样，分流比20 :1 ;
质谱条件电子轰击(EI)源分析，电子能量70eV，电子倍增器电压1381V，离子源温度230°C，四级杆温度150°C，接口温度260°C，选用全扫描(SCAN)模式，质量扫描范围40 450AMU。在此条件下分析孜然挥发油(即供试品溶液)，得孜然挥发油成分的指纹图谱。本发明还提供了一种由上述构建方法得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱，该标准指纹图谱通过对10批次孜然采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 6个共有特征峰，其保留时间分别为 10. 456min、ll. 183min、12. 427min、14. 395min、15. 186min 和15. 787min，这些共有特征峰构成了 孜然挥发油成分的指纹特征，可作为孜然挥发油成分的标准指纹图谱。本发明还提供了一种孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的分析检测方法，包括如下步骤I)、孜然挥发油的提取将孜然样品粉碎至24目后，称取样品20g，精确至O.Olg，置于挥发油提取器中，力口A 10倍样品质量的二次蒸馏水与数粒玻璃珠浸泡12h，振摇均匀，回流提取5h (至馏出液无明显油珠为止)，将馏出液转入分液漏斗中，用60mL乙醚分两次进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，然后在50°C水浴下挥发去除乙醚，即得孜然挥发油；2)、孜然挥发油的GC-MS分析将步骤I)所得孜然挥发油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用；GC / MS分析条件气相色谱条件色谱柱HP-5MS石英毛细管色谱柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)；进样口温度250°C;载气高纯(彡99. 999%)氮气，载气流速lmL/min ；程序升温起始温度40°C,保持2min,以4°C /min的速度升至100°C,保持Imin,然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；进样量Iill ;进样方式手动进样，分流比20 :1 ;质谱条件电子轰击(EI)源分析，电子能量70eV，电子倍增器电压1381V，离子源温度230°C，四级杆温度150°C，接口温度260°C，选用全扫描(SCAN)模式，质量扫描范围40 450AMU。在此条件下分析孜然挥发油，得孜然挥发油成分的指纹图谱，并与上述得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱进行分析比较。本发明所具有的有益效果本发明将指纹图谱技术用于孜然原料质量控制，可反映其主要挥发性组分的化学成分及其比例，有效地表征孜然质量。且本发明分析方法有很好的重现性和可靠性。可用于孜然挥发油的质量评价，这将为孜然挥发油的质量控制提供新的途径。
图I为某一孜然样品处理后得到孜然挥发油，再进行GC / MS分析后的总离子流图。图2为本发明得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱，共有6个特征峰，从左往右依次为I号、2号、3号、4号、5号、6号。图3为枯铭醛标准物质(纯度99%)色谱图，通过对比可知图2中6号峰为枯铭醛。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。
实施例I一种孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的构建方法，包括如下步骤I)、供试品溶液的制备将孜然样品粉碎至24目后，称取样品20g，精确至O.Olg，置于挥发油提取器中，力口A 10倍样品质量的二次蒸馏水与数粒玻璃珠浸泡12h，振摇均匀，回流提取5h (至馏出液无明显油珠为止)，将馏出液转入分液漏斗中，用60mL乙醚分两次进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，然后在50°C水浴下挥发去除乙醚，即得孜然挥发油，即供试品溶液。 2)、孜然挥发油的GC-MS分析将步骤I)所得孜然挥发油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用；GC / MS分析条件气相色谱条件色谱柱HP-5MS石英毛细管色谱柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m)；进样口温度250°C;载气高纯(彡99. 999%)氮气,载气流速lmL/min ；程序升温起始温度40°C,保持2min,以4°C /min的速度升至100°C,保持Imin,然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；进样量Iii I ;进样方式手动进样，分流比20 :1 ;质谱条件电子轰击(EI)源分析，电子能量70eV，电子倍增器电压1381V，离子源温度230°C，四级杆温度150°C，接口温度260°C，选用全扫描(SCAN)模式，质量扫描范围40 450AMU。在此条件下分析孜然挥发油(即供试品溶液)，得孜然挥发油成分的指纹图谱。在此条件下，分析某一孜然样品，得总离子流图，如图I所示；按照上述方法对10批次孜然采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 6个共有特征峰，从左往右分别为I号、2号、3号、4号、5号、6号，其保留时间依次为10. 456min、ll. 183min、12. 427min、14. 395min、15. 186min 和 15. 787min,这些共有特征峰构成了孜然挥发油成分的指纹特征，可作为孜然挥发油成分的标准指纹图谱，如图2所示，并通过与枯铭醛标准物质(纯度99%)色谱图对比分析可知，6号峰为枯铭醛。其中以6号峰的色谱峰分离度好、强度高，并且为所有批次图的共有峰，因此选择为参照物峰，且在进行稳定性和精密度考察试验时选用2号峰的数据进行计算。方法学考察
稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、3、6、9、12、15、18、21、24h不同时间点
检测指纹图谱，再用夹角余弦相似度计算样品与Oh样品相似度的RSD值。以评价样品和仪器的稳定性。结果显示相似度RSD值〈3. 1%。说明供试品溶液与测试仪器在24h内基本稳定，没有明显变化，符合指纹图谱检测的要求。精密度试验取同一供试品溶液，连续进样6次，利用夹角余弦相似度计算，将后5次进样的图谱分别与第I次进样图谱进行相似度计算，得出后5个样品相似度的RSD值，用以评价该方法的精密度。结果显示其相似度RSD值〈2.8%。说明实验的总体精密度良好，符合指纹图谱检测的要求。夹角余弦法是一种相似度的评价方法
权利要求
1.一种孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤 1)、供试品溶液的制备 将孜然样品粉碎至24目后，称取样品20g，精确至O. Olg,置于挥发油提取器中，加入10倍样品质量的二次蒸馏水与数粒玻璃珠浸泡12h，振摇均匀，回流提取5h，将馏出液转入分液漏斗中，用60mL乙醚分两次进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，然后在50°C水浴下挥发去除乙醚，即得孜然挥发油，即供试品溶液。
2)、孜然挥发油的GC-MS分析 将步骤I)所得孜然挥发油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用； GC / MS分析条件 气相色谱条件 色谱柱HP-5MS石英毛细管色谱柱(30mX0. 25_Χ0. 25μπι)； 进样口温度250°C ； 载气高纯(彡99. 999%)氮气，载气流速lmL/min ； 程序升温起始温度40°C，保持2min，以4°C /min的速度升至100°C，保持lmin，然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；进样量1μ1 ; 进样方式手动进样，分流比20 1 ； 质谱条件 电子轰击(EI)源分析，电子能量70eV，电子倍增器电压1381V，离子源温度230°C，四级杆温度150°C，接口温度260°C，选用全扫描(SCAN)模式，质量扫描范围40 450AMU。在此条件下分析孜然挥发油，得孜然挥发油成分的指纹图谱。
2.一种由权利要求I的构建方法得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱，其特征在于该标准指纹图谱通过对10批次孜然采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 6个共有特征峰，其保留时间分别为10. 456min、ll. 183min、12. 427min、14. 395min、15. 186min和15. 787min，这些共有特征峰构成了孜然挥发油成分的指纹特征，可作为孜然挥发油成分的标准指纹图谱。
3.一种孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的分析检测方法，其特征在于包括如下步骤 1)、孜然挥发油的提取 将孜然样品粉碎至24目后，称取样品20g，精确至O. Olg,置于挥发油提取器中，加入10倍样品质量的二次蒸馏水与数粒玻璃珠浸泡12h，振摇均匀，回流提取5h，将馏出液转入分液漏斗中，用60mL乙醚分两次进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，然后在50°C水浴下挥发去除乙醚，即得孜然挥发油； 2)、孜然挥发油的GC-MS分析 将步骤I)所得孜然挥发油溶于IOmL乙醚中供GC / MS分析使用； GC / MS分析条件 气相色谱条件 色谱柱HP-5MS石英毛细管色谱柱(30mX0. 25_Χ0. 25μπι)； 进样口温度250°C ；载气高纯(≥99. 999%)氮气，载气流速lmL/min ； 程序升温起始温度40°C，保持2min，以4°C /min的速度升至100°C，保持lmin，然后以2V /min的速度升至150°C，保持2min，再以4°C /min的速度升至250°C保持IOmin ；进样量1μ1; 进样方式手动进样，分流比20 1 ； 质谱条件 电子轰击(EI)源分析，电子能量70eV，电子倍增器电压1381V，离子源温度230°C，四级杆温度150°C，接口温度260°C，选用全扫描(SCAN)模式，质量扫描范围40 450AMU。
在此条件下分析孜然挥发油，得孜然挥发油成分的指纹图谱，并与权利要求2得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱进行分析比较。
全文摘要
本发明涉及一种用于孜然挥发油成分的GC/MS指纹图谱的分析方法，包括如下步骤1)、将孜然样品粉碎至24目后，称取样品20g，精确至0.01g，置于挥发油提取器中，加入10倍样品质量的二次蒸馏水与数粒玻璃珠浸泡12h，振摇均匀，回流提取5h，将馏出液转入分液漏斗中，用60mL乙醚分两次进行萃取，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，然后在50℃水浴下挥发去除乙醚，即得孜然挥发油；2)、孜然挥发油的GC-MS分析，得孜然挥发油成分的指纹图谱，并与得到的孜然挥发油成分的标准指纹图谱进行分析比较。本发明分析方法有很好的重现性和可靠性。可用于孜然挥发油的质量评价。
文档编号G01N30/02GK102768252SQ201210289238
公开日2012年11月7日 申请日期2012年8月14日 优先权日2012年8月14日
发明者刘娜 申请人:天津春发生物科技集团有限公司