专利名称：：用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法
技术领域：
：本发明涉及油脂样品的预处理方法，尤其涉及用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法。
背景技术：
：本发明涉及的油脂样品的预处理方法是用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理。氯丙醇酯是油脂及含油脂食品在热加工过程中形成的副产物，目前被认为是潜在的食品安全危害因子之一。目前文献报道的用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法主要采用硅胶柱层析和固相萃取柱萃取两类。Zelinkovdi采用娃胶柱层析的方法进行乳脂样品的前处理(Haines,T.D.,etal.,DirectDeterminationofMCPDFattyAcidEstersandGlycidylFattyAcidEstersinVegetableOilsbyLC-TOFMS.JournaloftheAmericanOilChemistsSociety,2011.88(1):1-14.):200mg乳脂中加入7.26μg氘代3-氯丙醇ニ棕榈酸酷(3-MCPD_d5-l，2-dipalmitate)内标物，用ImL正己烧溶解后上样到330X20mm娃胶柱(silicagel60,70-230mesh；Merck,Darmstadt,Germany)，用石油醚(沸点4565°C):こ醚=955(v/v)混合溶剂500mL以4mL/min的速率洗脱，收集含有3-氯丙醇酯的组分，旋蒸后,用200μL四氢呋喃溶解,准备进行GC-MS分析。Moravcova从油脂样品中分离3_氯丙醇ニ酯也采用了娃胶柱层析的方法(Moravcova,E.,etal.,NovelapproachestoanalysisofJ-chloropropane—l,2—diolestersinvegetableoils.AnalBiana丄Chem,2012.402(9)=2871-83.):称量8±0.Img油样于2mL小瓶中，用30yL氘代内标溶液(3-MCPD-d5-l,2-dipalmitate的こ酸こ酯溶液，浓度300ng/mL)溶解，然后上样到装填了I.8g硅胶(用正己烷こ醚=964，v/v混合溶剂溶胀)的180X4mm玻璃柱，用30mL正己烧こ醚=964,v/v混合溶剂洗脱,流速0.8mL/min,收集525mL的部分(含有3-氯丙醇ニ酯)，旋转蒸发溶剤，用200μL甲醇重新溶解准备进行U-HPLC-MS和DART-MS分析。硅胶柱层析方法的不足之处是整个预处理的周期较长，且柱子的装填效果直接影响样品预处理的效果，样品预处理结果的再现性受到很大影响。Moravcova采用了固相萃取柱萃取的方法从油脂样品中分离3_氯丙醇单酯(Moravcova,E.,etal.,NovelapproachestoanalysisοιJ-cnloropropane-l,2-diolestersinvegetableoils.AnalBianalChem,2012.402(9):2871-83.)称量100土Img油样于2mL小瓶中，用50μL正己烧和60μL同位素标记的标准溶液(3-MCPD-d5-monopalmitate的こ酸こ酯溶液，浓度60ng/mL)溶解，上样到已用2X2mL正己烧活化好的固相萃取柱(aminopropylSPEcartridge,500mg)上，真空条件下，先用8mL正己烧ニ氯甲烧こ醚=8910I(v/v/v)混合溶剂洗脱并弃去，接着用2mL正己烷こ酸こ酷=8515(v/v)混合溶剂洗脱并弃去，最后用IOmL正己烷こ酸こ酷=8515(v/v)混合溶剂洗脱并收集，旋转蒸发，用250μL甲醇重新溶解准备进行分析。Hori也利用固相萃取柱对油脂样品进行了前处理(Hori,K.,etal.,SimultaneousdeterminationofJ-MしPDiattyacidestersandglycido丄fattyacidestersinedibleoilsusingliquidchromatographytime-of-flightmassspectrometry.LffT-FoodScienceandTechnology,2012.48(2):204-208.):准确称量IOmg油样于螺旋盖玻璃管中，加入2mLこ腈的正己烷饱和溶液、2mL正己烷的こ腈饱和溶液及20mL内标溶液，混合溶液振摇lmin，于3500Xg条件下离心lOmin，正己烷相上样到用4mL正己烷平衡好的固相萃取柱(Sep-PakPlusSIcartridges,500mg),用4mL氯仿洗脱并收集；こ腈相上样到用ImL甲醇、2mLこ腈平衡好的固相萃取柱(Sep-PakPlusC18cartridges,500mg),先后用2mLこ腈和2mLこ酸こ酯洗脱并收集，收集的正己烷相和こ腈相混合，并用氮气吹干，用ImLこ腈溶解，准备进行LC/T0F-MS分析。固相萃取柱萃取方法的不足之处是固相萃取柱的价格较高，使得样品预处理的成本増加，同时其对活化和洗脱过程中的流速有较高的要求，加上萃取柱本身易被污染，从而提高了对整个预处理过程的操作要求，操作过程中稍有不慎就会导致样品预处理的结果不理想。本发明方法以有机溶剂除去油脂中的甘油三酯组分，然后采用高效液相色谱收集油脂中的氯丙醇酯组分，其中，色谱条件为使用C18色谱柱，分别以こ腈和异丙醇为流动相A和流动相B，以流速lmL/min等度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测，流动相A和流动相B的体积比为55。
发明内容本发明克服现有技术中的缺点，提供了ー种操作简单、预处理结果重现性好、预处理成本低的用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法，在食品、医药、环境等许多分析领域有着较高的应用价值。为了解决上述技术的问题，本发明是通过以下技术方案实现的用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法，其特征在于，具体步骤为第一歩将油脂加热到液体状态，用有机溶剂去除甘油三酯；第二步測定当日用こ腈稀释配制氯丙醇酯标准溶液，其浓度为Cs，用O.2μm孔径过滤膜过滤得到标准溶液，高效液相色谱检测得到氯丙醇酯的流出时间，色谱条件为使用C18色谱柱，分别以こ腈和异丙醇为流动相A和流动相B，以流速lmL/min等度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测，流动相A和流动相B的体积比为5:5;第三步将第一歩所得的有机溶剂相用O.2μπι孔径过滤膜过滤，采用与第二步相同的色谱条件收集与氯丙醇酯标准品保留时间一致的组分，从而得到油脂样品中的氯丙醇酷。所述第一歩中将油脂预处理除去甘三酯的具体步骤为在油脂样本中加入2倍体积的こ腈，镟润振荡30s,以转速10000r/min离心IOmin,取上清。与现有技术相比，本发明的优点在于能够通过简单的方法对用于检测油脂中氯丙醇酯的样品进行预处理。具体实施例方式下面结合实施例来具体说明本发明。实施例I用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法第一歩将煎炸30h后的28度棕榈油样本加热，使呈液体状态，加入2倍体积的こ腈，镟润振荡30s,以转速10000r/min离心IOmin,取上清；第二歩用こ腈稀释配制氯丙醇ニ油酸酯和氯丙醇单硬脂酸酯标准溶液，其浓度Cs均为O.156mg/mL，用O.2μm孔径过滤膜过滤得到标准溶液，高效液相色谱检测得到氯丙醇单硬脂酸酯的流出时间为2.74min，氯丙醇ニ油酸酯的流出时间为5.36min，色谱条件为使用C18色谱柱(4.6X150mm;5μm;SunFire;Waters,MadeinIreland),进样量5μL，分别以こ腈和异丙醇为流动相A和流动相B，以流速lmL/min等度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测，流动相A和流动相B的体积比为5:5;第三步将第一歩所得的こ腈相溶液用O.2μπι孔径过滤膜过滤得到样品溶液，采用与第二步相同的色谱条件，收集流出时间在26min的组分，从而得到油脂样品中的氯丙醇酯。实施例2另ー种用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法第一歩于添加3%氯化钠、5%水于240°C加热3h后的玉米油样本中加入2倍体积的こ腈，镟润振荡30s,以转速10000r/min离心IOmin,取上清；第二步用こ腈稀释配制氯丙醇ニ油酸酯和氯丙醇单硬脂酸酯标准溶液，其浓度Cs均为0.156mg/mL，用0.2μm孔径过滤膜过滤得到标准溶液，高效液相色谱检测得到氯丙醇单硬脂酸酯的流出时间为2.74min，氯丙醇ニ油酸酯的流出时间为5.36min，色谱条件为使用C18色谱柱(4.6X150mm;5μm;SunFire;Waters,MadeinIreland),进样量5μL，分别以こ腈和异丙醇为流动相A和流动相B，以流速lmL/min等度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测，流动相A和流动相B的体积比为5:5;第三步将第一歩所得的こ腈相溶液用0.2μπι孔径过滤膜过滤得到样品溶液，采用与第二步相同的色谱条件，收集流出时间在26min的组分，从而得到油脂样品中的氯丙醇酯。权利要求1.用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法，其特征在于，具体步骤为第一歩将油脂加热到液体状态，用有机溶剂去除甘油三酯；第二步測定当日用こ腈稀释配制氯丙醇酯标准溶液，其浓度为Cs，用O.2μm孔径过滤膜过滤得到标准溶液，高效液相色谱检测得到氯丙醇酯的流出时间，色谱条件为使用C18色谱柱，分别以こ腈和异丙醇为流动相A和流动相B，以流速lmL/min等度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测，流动相A和流动相B的体积比为5:5;第三步将第一歩所得的有机溶剂相用O.2μπι孔径过滤膜过滤，采用与第二步相同的色谱条件收集与氯丙醇酯标准品保留时间一致的组分，从而得到油脂样品中的氯丙醇酷。2.如权利要求I所述的用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法，其特征在于，所述第一歩中将油脂预处理除去甘三酯的具体步骤为在油脂样本中加入2倍体积的こ臆，镟润振荡30s,以转速10000r/min离心IOmin,取上清。全文摘要本发明提供了用于检测油脂中氯丙醇酯的样品预处理方法，其特征在于，具体步骤为取油脂除去甘油三酯后采用高效液相色谱收集油脂中的氯丙醇酯组分，其中，色谱条件为使用C18色谱柱，分别以乙腈和异丙醇为流动相A和流动相B，以流速1mL/min等度洗脱，蒸发光散射检测器进行检测，流动相A和流动相B的体积比为5∶5。本发明的优点在于能够通过简单的方法对用于检测油脂中氯丙醇酯的样品进行预处理。文档编号G01N1/28GK102854042SQ201210324488公开日2013年1月2日申请日期2012年9月5日优先权日2012年9月5日发明者金青哲,周红茹,王兴国,杨娇,周克茹,孙雪梅申请人:江南大学