专利名称：化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种化妆品中甲硝唑、4-硝基咪唑、2-甲硝咪唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、特尼哒唑、氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、塞克硝唑、替硝唑、羟基异丙硝唑、奥硝唑、异丙硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法。
背景技术：
随着国民生活水平的提高和人们对美的追求，化妆品特别是一些日用的护肤、美白、清洁用品等已经成为人们日常生活中不可或缺的必需品。因此，化妆品的安全性也越来越成为相关部门和广大消费者关注的热点问题。硝基咪唑类抗生素广泛用于抗厌氧菌感染，对毛囊虫病、痤疮、酒渣鼻也有一定的疗效。因此，为增强使化妆品的祛痘和美白效果，部分化妆品生产企业在生产过程中通常加入某种或某几种硝基咪唑类抗生素药物。硝基咪唑是一类具有硝基咪唑环结构的药物，其性状为白色或淡黄色结晶，弱碱性，能和酸结合成盐，易溶于甲醇，微溶于水。它属于抗微生物药物，具有抗菌和消炎的作用。我国已明确规定化妆品中严禁添加甲硝唑等硝基咪唑类抗生素药物。在祛痘化妆品中违法添加硝基咪唑，虽然短期内可能起到除螨、祛痘的作用，但长期使用会刺激皮肤，引起接触性皮炎，严重时可导致对硝基咪唑类化合物的耐药性，造成健康隐患。因此对化妆品中是否添加硝基咪唑类等违禁药物进行监督、检测，保证化妆品卫生质量十分必要
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法，其检测快速，结果准确。一种化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法，是化妆品样品经前处理后，用液相色谱-串联四极杆质谱检测，经与平行操作的15种禁用硝基咪唑类抗生素对照品比较，以保留时间和监控离子对定性，峰面积进行定量，以标准曲线法计算含量；其中所述液相色谱的条件是色谱柱规格为2.1mmX 150mmX 3. 5 μ m 的 Waters XSELECT CSH C18 色谱柱；流动相乙腈和O. 1%甲酸-水；柱温30°C；进样量5yL;质谱的条件是毛细管电压3. OkV;萃取电压3V;射频透镜电压0.1V;离子源温度150°C;脱溶剂气温度400°C ;
脱溶剂气流量800L/hr ;锥孔气流量50L/hr ;碰撞室压力3·2X lCr3mbar ；离子能量1:0.5V;碰撞室入口电压IV ；碰撞室出口电压1V ；离子能量2 0. 5V ；碰撞气体IS气；数据采集模式多反应监测；O 2. 5min :不进入质谱仪分析,2. 5 15min :进入质谱仪分析。本发明的测定方法，其中所述样品为水剂类样品时，前处理的过程为称取0.5g水剂类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心lOmin，取3mL上清液过Oa sis HLB固相萃取柱，先用4mL20%甲醇/水淋洗，然后用8mL90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。本发明的测定方法，其中所述样品为香波类样品时，前处理的过程为称取0.5g香波类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心lOmin，取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL20%甲醇/水淋洗，然后用8mL90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。本发明的测定方法，其中所述样品为膏霜类样品时，前处理的过程为称取0.5g膏霜类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心lOmin，取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL20%甲醇/水淋洗，然后用8mL90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。本发明的测定方法，其中所述样品为散粉类样品时，前处理的过程为称取0.5g散粉类样品，置于IOmL比色管中，加入50%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心lOmin，取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL20%甲醇/水淋洗，然后用8mL90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。本发明的测定方法是将化妆品样品经过超声提取、高速离心及固相萃取后，用高效液相色谱-串联四极杆质谱进行检测分析。与平行操作的甲硝唑等15种禁用硝基咪唑的标准品进行比较，以保留时间和优化的监控离子对进行定性，以其中信噪比较高、峰形好及背景干扰小的离子为定量离子进行定量，然后以标准曲线进行外标法定量。本方法对氯甲硝唑、苯硝咪唑的检出限为2ng/mL，定量下限为5ng/mL ;二甲硝唑、羟基异丙硝唑的检出限为Ing/mL，定量下限为2ng/mL ；2-甲硝咪唑、羟基二甲硝咪唑、洛硝哒唑、塞克硝唑、替硝唑、奥硝唑的检出限为O. 5ng/mL，定量下限为Ing/mL ;4_硝基咪唑、羟基甲硝唑、甲硝唑、特尼咕唑的检出限为O. 25ng/mL,定量下限为O. 5ng/mL ;异丙硝唑的检出限为O.1ng/mL,定量下限为O. 2ng/mL。若取O. 5g化妆品进行测定，本方法对氯甲硝唑、苯硝咪唑的检出浓度为O. 4 μ g/g,最低定量浓度为O.1 μ g/g ;洛硝咕唑、轻基异丙硝唑的检出浓度为O. 05 μ g/g,最低定量浓度为O.1 μ g/g ；4-硝基咪唑、2-甲硝咪唑、羟基甲硝唑、羟基二甲硝咪唑、甲硝唑、二甲硝唑特尼哒唑、塞克硝唑、替硝唑、奥硝唑的检出浓度为O. 03 μ g/g，最低定量浓度为O. 04 μ g/g ;异丙硝唑的检出浓度为O. 005 μ g/g,最低定量浓度为O. 01 μ g/g。
图1是15种禁用硝基咪唑化合物的MRM色谱图；其中1. 4-硝基咪唑(4-Nitroimidazole) ;2· 2_ 甲硝咪唑(Menidazole) ;3·轻基甲硝唑(1-(2-HydroxyethyI)-2-hydroxymethyl-5-nitroimidazole) ；4.轻基二甲硝唑(2-Hydroxymethyl-l-methyl-5-nitro imidazole) ；5.甲硝唑(Metronidazole) ；6. 二甲硝咪唑(Dimetridazole)；7.洛硝咕唑(Ronidazole) ;8·特呢咕唑(Ternidazole) ;9·塞克硝唑(Secnidazole)；10.苯硝咪唑(5-Nitrobenzimidazole) ；11.氯甲硝唑(1-Methyl-5-chloro-4-nitroimidazole) ；12.替硝唑(Tinidazole) ；13.轻基异丙硝唑(Ipronidazole-OH) ； 14.奥硝唑(Ornidazole) ； 15.异丙硝唑(Ipronidazole)图2是15种禁用硝基咪唑类抗生素在Oasis HLB (6cc, 500mg)柱上的洗脱曲线；图3是不同体积的90%甲醇-水对异丙硝唑的洗脱效果；图4是水剂类空白样品的多反应监测色谱图；图5是水剂类空白样品添加标准品浓度为O.1 μ g/g的多反应监测色谱图；图6是香波类空白 样品的MRM色谱图；图7是香波类空白样品添加标准品浓度为O.1 μ g/g的多反应监测色谱图；图8是散粉类空白样的MRM色谱图；图9是散粉类空白样品添加标准品浓度为O.1 μ g/g的多反应监测色谱图；图10是膏霜类空白样品的MRM色谱图；图11是散粉类空白样品添加标准品浓度为O.1 μ g/g的多反应监测色谱图。
具体实施例方式为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明一、试剂和材料I甲醇,色谱纯。2乙腈，色谱纯。3乙醇，分析纯。4甲酸，色谱纯。54-硝基咪唑，纯度97%。62-甲硝咪唑，纯度99%。7羟基甲硝唑，纯度99. 3%。
8羟基二甲硝咪唑，纯度98. 5%。9甲硝唑，纯度99.5%。10 二甲硝咪唑，纯度98. 5%。11洛硝哒唑，纯度99. 5%。12特尼哒唑，纯度99. 8%。13氯甲硝咪唑，纯度98%。14苯硝咪唑，纯度98. 5%。15塞克硝唑，纯度99. 6%。16替硝唑，纯度99. 7%。17羟基异丙硝唑，纯度99. 8%。18奥硝唑,纯度98. 5%。19异丙硝唑，纯度99. 8%。20空白化妆品样品被检测不含目标化合物成分的化妆品。21 固相萃取柱0asis HLB, 6cc, 500mg。22 15种硝基咪 唑类抗生素的标准储备溶液准确称取IOmg (精确至O. OOOlg)硝基咪唑抗生素标准品，置于IOmL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释种刻度，混匀，得到每种硝基咪唑浓度为1000 μ g/mL的标准储备液。23 15种硝基咪唑类抗生素的混合标准储备液分别精密量取每种硝基咪唑抗生素的标准储备液各5mL置于IOOmL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，得到50 μ g/mL的硝基咪唑混合标准储备液。24 15种硝基咪唑类抗生素的标准工作液精密量取一定体积的混合标准储备液置于IOmL容量瓶中，用10%甲醇/水稀释至刻度，使得各硝基咪唑抗生素的浓度分别为 O.1 μ g/L、0. 2 μ g/L、0.5 μ g/L、I μ g/L、2μ g/L、5μ g/L、10 μ g/L、20μ g/L、50μ g/L、100 μ g/L、200μ g/L、500μ g/L、1000 μ g/L。二、仪器和设备I液相色谱-串联四极杆质谱仪。2分析天平感量为O. OOlg。3分析天平感量为O. OOOlg04超纯水器。5涡旋振荡器。6精密移液器。7超声波清洗机。8通风柜。9旋转蒸发仪。10氮吹仪配有加热装置。11高速冷冻离心机。三、分析步骤I样品预处理水剂类称取O. 5g(精确至O. OOlg)水剂类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混匀，超声提取30min，试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB (6cc,500mg)固相萃取柱(预先用5mL甲醇活化,5mL水平衡),先用4mL 20%甲醇/水淋洗,然后用SmL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜，滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。香波类称取O. 5g(精确至O. OOlg)香波类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混匀，超声提取30min，试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB (6cc,500mg)固相萃取柱(预先用5mL甲醇活化,5mL水平衡),先用4mL 20%甲醇/水淋洗,然后用SmL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜，滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。膏霜类称取O. 5g(精确至O. OOlg)膏霜类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混匀，超声提取30min，试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB (6cc,500mg)固相萃取柱(预先用5mL甲醇活化,5mL水平衡),先用4mL 20%甲醇/水淋洗,然后用SmL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜，滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。散粉类称取O. 5g(精确至O. OOlg)散粉类样品，置于IOmL比色管中，加入50%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混匀，超声提取30min，试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB (6cc,500mg)固相萃取柱(预先用5mL甲醇活化,5mL水平衡),先用4mL 20%甲醇/水淋洗,然后用SmL 90%甲醇/水进行 洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜，滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。2液相色谱/质谱参考条件2.1色谱参考条件色谱柱WatersXSELECT CSH C18 色谱柱(2.1mmX 150mmX3. 5 μ m，表面带电杂化颗粒三键键合碳十八键合相)或具有同等柱效的色谱柱；流动相乙腈(A)和O. 1%甲酸-水(B);梯度洗脱程序见表1 ;表I梯度洗脱条件
权利要求
1.化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法，其特征在于化妆品样品经前处理后，用液相色谱-串联四极杆质谱检测，经与平行操作的15种禁用硝基咪唑类抗生素对照品比较，以保留时间和监控离子对定性，峰面积进行定量，以标准曲线法计算含量；其中所述液相色谱的条件是 色谱柱规格为 2.1mmX 150mmX 3. 5 μ m 的 Waters XSELECT CSH C18 色谱柱； 流动相乙腈和O. 1%甲酸-水； 柱温30°C ; 进样量5yL ; 质谱的条件是 毛细管电压3. OkV ； 卒取电压3V ； 射频透镜电压0.1V ； 离子源温度150°c ; 脱溶剂气温度400°C ； 脱溶剂气流量800L/hr ； 锥孔气流量50L/hr ； 碰撞室压力3· 2X lCT3mbar ； 尚子能量I 0. 5V ； 碰撞室入口电压IV ； 碰撞室出口电压1V ； 尚子能量2 0. 5V ； 碰撞气体気气； 数据采集模式多反应监测； O 2. 5min :不进入质谱仪分析,2. 5 15min :进入质谱仪分析。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述样品为水剂类样品时，前处理的过程为称取O. 5g水剂类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL 20%甲醇/水淋洗，然后用8mL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述样品为香波类样品时，前处理的过程为称取O. 5g香波类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL 20%甲醇/水淋洗，然后用8mL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述样品为膏霜类样品时，前处理的过程为称取O. 5g膏霜类样品，置于IOmL比色管中，加入25%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL 20%甲醇/水淋洗，然后用8mL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述样品为散粉类样品时，前处理的过程为称取O. 5g散粉类样品，置于IOmL比色管中，加入50%甲醇/水溶液至刻度，涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混勻，超声提取30min,试样全部转移至50mL离心管中，以10000r/min离心IOmin,取3mL上清液过Oasis HLB固相萃取柱，先用4mL 20%甲醇/水淋洗，然后用8mL 90%甲醇/水进行洗脱，收集洗脱液进行旋蒸至近干，剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸，准确加入3mL 10%甲醇/水溶解残渣，过O. 2 μ m微孔滤膜得滤液待用。
全文摘要
本发明涉及一种化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的测定方法。本发明的测定方法是将化妆品样品经过超声提取、高速离心及固相萃取后，用高效液相色谱-串联四极杆质谱进行检测分析。与平行操作的甲硝唑等15种禁用硝基咪唑的标准品进行比较，以保留时间和优化的监控离子对进行定性，以其中信噪比较高、峰形好及背景干扰小的离子为定量离子进行定量，然后以标准曲线进行外标法定量。其检测快速，结果准确。
文档编号G01N30/06GK103048401SQ20121052641
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月7日 优先权日2012年12月7日
发明者马强, 孟宪双, 李文涛, 白桦, 陈云霞, 丁岚, 李晶瑞, 马会娟 申请人:中国检验检疫科学研究院