专利名称：一种用液相色谱法分离测定阿利吉仑中间体及其光学异构体的方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定阿利吉仑中间体及其光学异构体的方法。
背景技术：
阿利吉仑是新一代非肽类肾素阻滞药，能在第一环节阻断RAS系统，降低肾素活性，减少AngII和醛留酮的生成，不影响缓激肽和前列腺素的代谢，起到降血压和治疗心血管疾病的作用。从目前研究来看阿利吉仑是强效的、高度选择性的、口服有效的、长效的新一代抗高血压药物。(S)-2-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-3-甲基丁酸[(S)-2-(4-methoxy-3- (3-methoxypropoxy) benzyl) -3-methylbutanoic acid],分子式为 C17H26O5,为阿利吉仑合成路线中的重要中间体，其结构见下图。作为合成必需的手性中间体，在定向合成路线中，其光学纯度对终产品的质量有重要影响。对于阿利吉仑中间体的光学异构体杂质，在定向合成目标终产品阿利吉仑的过程中，需要对其光学异构体的含量进行质量控制，以确保终产品的质量。含有手性碳原子的对映体的分离一直是手性药物合成中质量控制的难点，实现对阿利吉仑中间体及其光学异构体的分离，在阿利吉仑的质量控制方面具有现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离测定阿利吉仑中间体(S)-2_(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-3-甲基丁酸及其光学异构体的高效液相方法，从而实现阿利吉仑中间体与其光学异构体的分离和测定，合格的中间体进入定向合成，以保证终产品阿利吉仑原料药的质量控制。本发明所述的用液相色谱法分析阿利吉仑中间体及其光学异构体的方法，是采用以纤维素-三(对甲苯基甲酸酯)或直链淀粉-三(3，5_ 二甲苯基氨基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇混合溶液为流动相，低级醇是指Cl C6的单元醇或多元醇。上述所说的手性色谱柱以纤维素-三(对甲苯基甲酸酯)或直链淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯)填料，选自牌号为CHIRALCEL OJ, CHIRALCEL OJ-H、CHIRALCEL AD和 CHIRALCEL AD-H 色谱柱。上述所说的低级醇选自以下化合物:甲醇、无水乙醇、丙醇、异丙醇，优选为无水乙
醇或异丙醇。
上述所说的方法，其流动相正己烷-低级醇溶液体积比为99:1 80: 20，优选体积比为97: 3 85: 15。本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现:I)取阿利吉仑中间体样品适量，用无水乙醇或流动相溶解样品，配制成含阿利吉仑中间体0.1 1.5mg的样品溶液。2)设置流动相流速为0.4 1.0mL/min,流动相流速优选为0.5mL/min,检测波长为210 250nm，最佳检测波长为225nm，色谱柱柱箱温度为20 40°C，柱箱柱温最佳为20。。。3)取I)的样品溶液10 50UL，注入液相色谱仪，完成阿利吉仑中间体与光学异构体的分离测定。其中:方法一:高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津岛津:LC-1OATvp, SPD-MlOAvp色谱柱:0J-H(CHIRALCEL250 X 4.6mm)流动相:正己烧-异丙醇=90: 10流速:0.5mT ,/mi n检测波长:227nm柱温:20°C进样体积:20 ii L方法二:高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津岛津:LC-1OATvp, SPD-MlOAvp色谱柱:AD-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)流动相:正己烷-无水乙醇=95: 5流速:0.5mT ,/mi n检测波长:227nm柱温:20°C进样体积:20 ii L本发明采用OJ-H (CHIRALCEL 250X4.6mm)或 AD_H(CHIRALCEL250X4.6mm)，能够有效的分离阿利吉仑中间体。本发明解决了阿利吉仑中间体及其光学异构体的分离测定问题，以此可对阿利吉仑中间体进行含量检测，从而确保了终产品阿利吉仑原料药的质量可控。
:图1实施例1空白溶剂的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=90: 10)图2实施例1阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=90: 10)图3实施例1阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=90: 10)
图4实施例2阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=95: 5)图5实施例2阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=95: 5)图6实施例3阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=85: 15)图7实施例3阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-异丙醇=85: 15)图8实施例4空白溶剂的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=95: 5)图9实施例4阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=95: 5)图10实施例4阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=95: 5)图11实施例5阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=97: 3)图12实施例5阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=97: 3)图13实施例6阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=90: 10)图14实施例6阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=90: 10)图15实施例7阿利吉仑中间体消旋体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=85: 15)图16实施例7阿利吉仑中间体的高效液相色谱图(流动相:正己烷-无水乙醇=85: 15)
具体实施方式
:以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。实施例1仪器与条件高效液相色谱仪:岛津:LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱:OJ-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烧-异丙醇=90: 10;流速:0.5mT ,/mi n ；检测波长:227nm；柱温:20°C;进样体积:20iiL。实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2、图3。图2中保留时间为11.057min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，
12.684min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例2仪器与条件高效液相色谱仪:岛津:LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱:OJ-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烷-异丙醇=95: 5；流速:0.5mL/min ；检测波长:227nm；柱温:20°C;进样体积:20iiL。实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图4、图5。图4中保留时间为27.332min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，24.077min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例3仪器与条件高效液相色谱仪:岛津:LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱:OJ-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烷-异丙醇=85: 15;流速:0.5mL/min ；检测波长:227nm；柱温:20°C;进样体积:20iiL。实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图6、图7。图6中保留时间为7.718min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，
9.154min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例4仪器与条件
高效液相色谱仪:岛津:LC-10ATvp，SPD-MlOAvp；色谱柱:AD-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烷-无水乙醇=95: 5 ；流速:0.5mL/min ;检测波长:227nm；柱温:20°C；进样体积:20iiL。实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图8、图9、图10。图9中保留时间为21.179min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，18.726min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例5仪器与条件高效液相色谱仪:岛津:LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱:AD-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烷-无水乙醇=97: 3 ；流速:0.5mL/min ；检测波长:227nm;柱温:2(TC;进样体积:20 u L。实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图11、图12。图11中保留时间为27.907min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，32.487min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例6仪器与条件高效液相色谱仪:岛津:LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱:AD-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烷-无水乙醇=90: 10;流速:0.5mL/min ;检测波长:227nm;柱温:20°C;进样体积:20 u L。
实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图13、图14。图13中保留时间为15.180min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，
16.552min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。实施例7仪器与条件高效液相色谱仪:岛津:LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色谱柱:AD-H(CHIRALCEL 250X4.6mm)；流动相:正己烷-无水乙醇=85: 15;流速:0.5mL/min ;检测波长:227nm;柱温:20°C;进样体积:20iiL。实验步骤取阿利吉仑中间体及其消旋体各约25mg，分别置50mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图15、图16。图15中保留时间为6.290min的色谱峰为阿利吉仑中间体对映异构体的色谱峰，
8.415min的色谱峰为阿利吉仑中间体的色谱峰，由图可以看出，阿利吉仑中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。从图1-图16表明:本发明的方法，可以清楚地将阿利吉仑中间体与其光学异构体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出光学异构体的含量，从合成中间体的质量控制入手，从而有效控制终产品阿利吉仑的产品质量。
权利要求
1.一种液相色谱法分离测定阿利吉仑中间体或/和其光学异构体的方法，其特征在于:以纤维素-三(对甲苯基甲酸酯)或直链淀粉-三(3，5_ 二甲苯基氨基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇的混 合溶剂为流动相，正己烷-低级醇溶液体积比为99: I 80: 20。
2.根据权利要求1所述的分离测定方法，手性色谱柱选自牌号为CHIRALCELOJ、CHIRALCEL OJ-H, CHIRALCEL AD、CHIRALCEL AD-H 中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于低级醇为甲醇、无水乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或几种。
4.根据权利要求3所述的分离测定方法，其特征在于低级醇优选为无水乙醇、异丙醇。
5.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于正己烷-低级醇溶液的体积比优选为 97: 3 85: 15。
6.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于以下几个步骤: 1)取阿利吉仑中间体样品适量，分别用乙醇、甲醇或流动相溶解样品，配制成每ImL含阿利吉仑中间体0.5 1.5mg的样品溶液； 2)设置流动相流速为0.4 1.0mL/min，检测波长为210 235nm，色谱柱柱箱温度为20 30°〇。
3)取I)的样品溶液10 50yL，注入液相色谱仪，完成阿利吉仑中间体与其光学异构体的分离测定。
7.根据权利要求6所述的分析分离方法，其特征在于流动相流速优选为0.5mL/min。
8.根据权利要求6所述的分析分离方法，其特征在于检测波长为227nm。
全文摘要
本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定阿利吉仑合成中间体[(S)-2-(4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)苄基)-3-甲基丁酸]及其光学异构体的方法，该方法以纤维素-三(对甲苯基甲酸酯)或直链淀粉-三(3，5-二甲苯基氨基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以一定比例的正己烷-低级醇的混合溶剂为流动相，可以定量测定阿利吉仑中间体的光学异构体的含量，从而通过定向合成，有效控制终产品阿利吉仑原料药的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。
文档编号G01N30/02GK103207247SQ20121058976
公开日2013年7月17日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者陈东, 吴清芬, 郭夏, 宋雪梅 申请人:北京万全德众医药生物技术有限公司