专利名称：传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及ー种胶体金检测试剂盒，具体涉及传染性单核细胞增多症检测试剂盒。
背景技术：
单核细胞增多症(Infectious mononucleosis)是由EBV病毒(一种接触传染性病毒，Epstein-Barr virus)所致的急性自限性传染病。其临床特征为发热，咽喉炎，肝脾淋巴结肿大，外周血淋巴细胞显著增多并出现异常淋巴细胞，嗜异性凝集试验阳性，感染后体内出现抗EBV抗体。青少年及年轻成年人较易发生(12到40岁)。单核细胞增多症潜伏期在4 15天，成人可更长，起病急缓不一。约40%单核细 胞增多症患者有前驱症状，历时4 5天，如全身不适、乏力、头痛、恶心、稀便、畏寒等，症状较典型，如不及时治疗还可能出现心血管系统、泌尿系统、呼吸系统等并发症，因此，对单核细胞增多症的早期诊断有助于该病的治疗，并减少并发症带来的身体伤害。EBV病毒在健康人体中也有存在，因此不适于作为单核细胞增多症检测的指标，而其抗体IgM因出现时间早、消失快、灵敏度和特异性高，已被广泛的应用于单核细胞增多症的早期诊断当中。目前，主要的检测方法为免疫荧光法和酶免疫吸附法，这两种方法操作复杂，成本高，实验条件严格，不利于基层的推广，急需ー种操作简单、成本低、检测快速准确的新方法用于单核细胞增多症的早期诊断。
实用新型内容本实用新型的目的是克服现有技术缺陷，从提高检测灵敏度出发，提供一种既方便又快速的单核细胞增多症胶体金快速检测试剂盒。本实用新型采用了下述技术方案来解决上述技术问题一种传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，其中，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察ロ，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗人IgM抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的一条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有异嗜性抗原，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。进ー步的，所述检测线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近免疫胶体金纸片端，质控线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近吸水纸端。进ー步的，所述盒盖的加样孔位于所述试剂条的滤样纸之上，部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，所述盒盖的观察ロ位于所述试剂条的免疫硝酸纤维素膜之上，所述免疫硝酸纤维素膜上的检测线与质控线完全或部分裸露于所述观察ロ之中。进ー步的，所述加样孔贯穿盒盖。进ー步的，所述观察ロ贯穿盒盖。[0012]进ー步的，所述盒盖与盒座的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并可经所述连接部件相卡合或扣合。所述胶体金标记人IgM抗体可采用人IgM抗体常规方法标记胶体金获得。试剂盒的工作原理为试剂盒的检测线包被有异嗜性抗原，免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗人IgM抗体。检测时，(一)、如果血液中没有EBV病毒抗体IgM存在，血液和免疫胶体金纸片上的抗人IgM抗体-胶体金混合，经毛细作用在硝酸纤维素膜上层祈，依次通过T线和C线，在样品混合物通过T线时，不会被包被在T线的异嗜性抗原結合，T线捕捉不到胶体金因而不显色，只在C线出现一条红色线条。(ニ )、如果血液中含有EBV病毒抗体IgG，血液中EBV病毒抗体IgG便首先与免疫胶体金纸片上的抗人IgM抗体-胶体金结合，形成“ IgM抗体-胶体金-抗人IgM抗体复合物”。样品混合物继续在硝酸纤维素膜上层析，依次通过T线和C线，在样品混合物通过T线时，包被在T线的异嗜性抗原与血
液样品中的IgM抗体结合形成“ IgM抗体-胶体金-抗人IgM抗体-异嗜性抗原”复合物，T线捕捉到胶体金颗粒因而显色。血液中IgM抗体浓度的越高，T线的颜色越深。(三)、包被在质控线(C线)上的羊抗人IgG为多克隆抗体，其总是能捕获人源性的抗体，所以总能与抗人IgM抗体-胶体金形成“羊抗人IgG-抗人IgM抗体-胶体金”复合物。因此，在C线处总是形成一定深度的红线。C线的出现和血液中有无IgM抗体无关，它的出现表明检测操作正确、试剂盒反应系统工作正常。同吋，C线也是判断T线强度的參照线。本实用新型提供的传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便省吋，检测结果准确、稳定，可用于单核细胞增多症的早期诊断。
图I:传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒示意图图2 :去盒盖的传染性单核细胞增多症胶体金测试剂盒示意图图3 :传染性单核细胞增多症胶体金测试剂盒的试剂条侧视示意图附图标记I :盒座 2 :盒盖3 :试剂条4 :加样孔5:观察ロ 6:滤样纸7:免疫胶体金纸片 8:免疫硝酸纤维素膜9 :吸水纸 10 :检测线(T线)11 :质控线(C线) 12 :塑料薄片
具体实施例如图1-3所示传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，包括盒座I、盒盖2和试剂条3，其中，试剂条3固定于盒座中部且位于盒座I与盒盖2之间，盒盖上设有加样孔4与观察ロ 5，试剂条3包括底层与上层，所述底层为塑料薄片12，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸6、免疫胶体金纸片7、免疫硝酸纤维素膜8和吸水纸9，免疫胶体金纸片7上包被有胶体金标记抗人IgM抗体，免疫硝酸纤维素膜8上设有平行的一条检测线10和一条质控线11，所述检测线10上包被有异嗜性抗原，所述质控线11上包被有羊抗鼠IgG。检测线10靠近免疫硝酸纤维素膜8的近免疫胶体金纸片端，质控线11靠近所述免疫硝酸纤维素膜8的近吸水纸端。盒盖的加样孔4位于试剂条的滤样纸6之上，部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，盒盖的观察ロ 5位于试剂条的免疫硝酸纤维素膜8之上，免疫硝酸纤维素膜上的检测线10与质控线11完全或部分裸露于观察ロ 5之中。为便于观察，检测线10与质控线11的至少90%应裸露于观察ロ之中。加样孔4和观察ロ 5均贯穿盒盖。盒盖I与盒座2的设计是为了防止污染，盒盖I与盒座2的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并可经所述连接部件相卡合或扣
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ロ ο上述试剂盒可采用下列方法制备I.用柠檬酸三钠还原法备胶体金溶液。2.用胶体金标记抗人IgM抗体，制备抗人IgM抗体-胶体金免疫复合物溶液。a)计算需要的原始抗体量，用O. 1M，pH7. 2的磷酸盐缓冲液将抗人IgM抗体的浓度调整至I. Omg/ml,备用。b)取IOOOml胶体金溶液，加入O. 1M、ρΗ7· 2的磷酸盐缓冲液100ml，混匀。c)量取18ml I. Omg/ml的抗人IgM抗体加入到胶体金溶液中。室温反应10分钟，并不时搅拌。d)反应结束后，加入5%的BSA (作为抗体-胶体金结合物保护剂)，使溶液中BSA的终浓度为O. I %。室温保持10分钟并不时搅拌。e)反应复合物纯化反应结束后将复合物泵入“胶体金洗涤浓缩系统”，用pH7. 2,0. OlM磷酸-O. Ol % BSA缓冲液循环纯化，至流出的废液变得清晰或为浅粉红为止(OD540 ^ O. 05) οf)纯化结束后，浓缩抗体-胶体金复合物溶液至终体积约80ml。3.将抗人IgM抗体-胶体金溶液包被到玻璃纤维膜上制得免疫胶体金纸片。4.用羊抗鼠IgG配制质控线(C线)溶液，用异嗜性抗原配制检测线(T线)溶液。4. IC线的配置a.配制批量为20ml，羊抗鼠IgG抗体蛋白终浓度为2. 5mg/ml。b. O. 05M EDTA溶液准备在IOml O. OlM, pH7. 2、O. OlM磷酸缓冲液中加入O.186gEDTA。c. 2. 5mg/ml羊抗鼠IgG溶液准备用O. 01M，pH7. 2,0. OlM磷酸缓冲液将原始羊抗鼠IgG液稀释至蛋白终浓度2. 5mg/ml。d.取上述I. 5mg/ml羊抗鼠IgG溶液20ml。加入O. 13ml的(λ 05M的EDTA溶液，使EDTA终浓度为O. 33mM。4· 2T线的配置a.配制批量为20ml，异嗜性抗原的终浓度为I. 5mg/ml。b. I. Omg/ml异嗜性抗原溶液用O. 01M，pH7. 2,0. OlM磷酸缓冲液将原始抗原容液稀释至蛋白终浓度为I. Omg/ml οc.取上述I. Omg/ml异嗜性抗原溶液20ml,加入O. 13ml的O. 05M的EDTA溶液,使EDTA终浓度为O. 33mM。5.在硝酸纤维素膜上喷点C、T线，制得免疫硝酸纤维素膜。6.用Tris-HCl缓冲液处理滤样纸，干燥即得。[0050]7.将免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、滤样纸及吸水纸粘贴在塑料薄片上组成单核细胞增多症胶体金检测试剂卡片。本实用新型试剂盒的使用方法为I.将试剂盒放置在水平台面上。2.用加样吸管吸取尿样，然后滴3滴(约120ul)血浆或血清样品到试剂盒的加样孔中。观察结果在滴加样品后10-15分钟判读結果。检测结果的判断方法阳性在结果观察窗口内出现两条色带，即检测线(T线)和质控线(C线)位置各出现一条红色线条，表示样品中有IgM抗体的存在。阴性只在结果观察窗ロ的质控线(C线)位置出现一条红色线条，检测线(T线)未出现任何线条，表示样品中无IgM抗体的存在。无效质控线(C线)不出现。任何情况下，C线均应形成，表示加样和操作正确。C线未出现表明测试结果是不确定的，应重做。
权利要求1.一种传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察口，其特征在于，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗人IgM抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的一条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有异嗜性抗原，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。
2.如权利要求I所述传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近免疫胶体金纸片端，质控线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近吸水纸端。
3.如权利要求I所述传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖的加样孔位于所述试剂条的滤样纸之上，部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，所述盒盖的观察口位于所述试剂条的免疫硝酸纤维素膜之上，所述免疫硝酸纤维素膜上的检测线与质控线完全或部分裸露于所述观察口之中。
4.如权利要求I所述传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述加样孔和观察口均贯穿盒盖。
5.如权利要求I所述传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖与盒座的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并可经所述连接部件相卡合或扣合。
专利摘要本实用新型提供了一种传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，其中，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗人ΙgM抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的一条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有异嗜性抗原，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。本实用新型提供的传染性单核细胞增多症胶体金检测试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便省时，检测结果准确、稳定，可用于单核细胞增多症的早期诊断。
文档编号G01N33/558GK202471711SQ20122006645
公开日2012年10月3日 申请日期2012年2月27日 优先权日2012年2月27日
发明者张国华 申请人:上海凯创生物技术有限公司