通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法
【专利摘要】提供了使用质谱测定法测定样品中的反式T3的量的方法。该方法一般地包括电离样品中的反式T3并且检测和量化离子的量以测定样品中反式T3的量。
【专利说明】通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35U.S.C.§ 120要求于2011年12月5日提交的美国申请系列号13/311，412的权益，该申请的全部内容通过引用并入本公开。
【技术领域】
[0003]本发明涉及反式三碘甲状腺原氨酸的检测。在具体的方面，本发明涉及通过质谱测定法检测反式三碘甲状腺原氨酸的方法。
【背景技术】
[0004]下面对本发明背景的描述仅简单地提供以帮助理解本发明并且不是承认描述或构成本发明的现有技术。
[0005]反式三碘甲状腺原氨酸((2S) -2-氨基-3- [4- (4_羟基_3，5_ 二碘苯氧基)_3_碘苯基]丙酸)(rT3)是三碘甲状腺原氨酸(T3)的无活性异构体。T3和rT3两者都通过如下脱碘酶的作用来源于甲状腺素(四碘甲状腺原氨酸，T4):
[0006]
【权利要求】
1.一种通过质谱测定法测定体液样品中的反式T3(rT3)的量的方法，所述方法包括: a.电离来自所述体液样品的rT3以生成可通过质谱测定法检测到的一种或多种反式T3离子； b.通过质谱测定法测定所述一种或多种rT3离子的量；以及 c.使用所述rT3离子的量来测定所述体液样品中的rT3的量， 其中来自所述体液样品的rT3在电离前不经历固相提取。
2.权利要求1所述的方法，还包括使来自所述体液样品的rT3在电离之前经历液相色谱法。
3.权利要求2所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。
4.权利要求2所 述的方法，还包括在液相色谱法之前通过蛋白沉淀富集所述体液样品中的rT3。
5.权利要 求4所述的方法，其中所述蛋白沉淀包括使所述体液样品与足以沉淀可能存在于所述样品中的蛋白的至少一部分的量的甲醇接触。
6.权利要求1所述的方法，还包括在电离之前通过蛋白沉淀富集所述体液样品中的rT3。
7.权利要求6所述的方法，其中所述蛋白沉淀包括使所述体液样品与足以沉淀可能存在于所述样品中的蛋白的至少一部分的量的甲醇接触。
8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3尚子包括选自质/荷比为649.9±0.5、605.2±0.5和127.1±0.5的尚子的一种或多种。
9.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3离子包括选自质/荷比为649.9±0.5和605.2±0.5的离子的一种或多种。
10.权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述质谱测定法是串联质谱测定法。
11.权利要求10所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3离子包括质/荷比为649.9±0.5的前体离子，和选自质/荷比为605.2±0.5和127.1±0.5的离子的碎片离子。
12.权利要求11所述的方法，其中所述碎片离子是质/荷比为605.2±0.5的离子。
13.权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述体液样品包括血浆或血清。
14.一种通过质谱测定法测定体液样品中的反式T3(rT3)的量的方法，所述方法包括: a.处理体液样品以生成经处理的样品，所述经处理的样品包含来自所述体液样品的rT3 ;所述处理包括:a.用有机溶剂沉淀来自所述体液样品的蛋白，使得得到的上清液包含所述有机溶剂和来自所述体液样品的rT3 ； i.通过使所 述上清液经历反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱来纯化所述上清液中的rT3 ;其中所述纯化包括在引入所述上清液前将水性溶液引入至所述柱；iii.从所述RP-HPLC柱洗脱rT3以生成包含rT3的经处理的样品； b.电离所述经处理的样品中的rT3以生成可通过质谱测定法检测到的一种或多种反式T3离子； c.通过质谱测定法测定一种或多种rT3离子的量；以及d.使用所述rT3离子的量来测定所述体液样品中的rT3的量。
15.权利要求14所述的方法，其中经历所述柱的所述上清液体积与之前引入至所述柱的所述水性溶液的比率在约10:1至1:10的范围内。
16.权利要求14所述的方法，其中经历所述柱的所述上清液体积与之前引入至所述柱的所述水性溶液的比率在约5:1至1:5的范围内。
17.权利要求14所述的方法，其中经历所述柱的所述上清液体积与就在之前引入至所述柱的所述水性溶液的比率为约1:1。
18.权利要求14-17中任一项所述的方法，其中所述水性溶液基本上不含有机溶剂。
19.权利要求14-18中任一项所述的方法，其中来自所述体液样品的rT3在电离之前不经历固相提取。
20.权利要求14-19中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂包括甲醇。
21.权利要求20所述的方法，其中所述上清液包括至少10%的甲醇。
22.权利要求14-21中任一项所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3尚子包括选自质/荷比为649.9±0.5、605.2±0.5和127.1 ±0.5的尚子的一种或多种。
23.权利要求14-21中任一项所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3离子包括选 自质/荷比为649.9±0.5和605.2±0.5的离子的一种或多种。
24.权利要求14-23中任一项所述的方法，其中所述质谱测定法是串联质谱测定法。
25.权利要求24所述的方法，其中可通过质谱测定法检测到的所述一种或多种rT3离子包括质/荷比为649.9±0.5的前体离子，和选自质/荷比为605.2±0.5和127.1±0.5的离子的碎片离子。
26.权利要求25所述的方法，其中所述碎片离子是质/荷比为605.2±0.5的离子。
27.权利要求14-26中任一项所述的方法，其中所述体液样品包括血浆或血清。
【文档编号】G01N27/62GK104040338SQ201280059697
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2012年11月30日 优先权日:2011年12月5日
【发明者】J·F·班克斯, P·P·周, N·M·马特 申请人:奎斯特诊断投资公司