一种检测化学药物中有关物质的方法
【专利摘要】本发明涉及一种检测化学药物奥拉西坦中有关物质的检测方法。本发明为该原料药及其制剂提供了一套可靠、稳定、全新的有关物质检测方法，使该原料药的合成及其制剂的工艺控制更加严格合理，质量更加稳定，为患者用药的有效性、安全性提供了保障。
【专利说明】一种检测化学药物中有关物质的方法
【技术领域】
[0001]本发明是一种检测化学药物奥拉西坦中有关物质的方法，属于药物的【技术领域】。【背景技术】
[0002]奥拉西坦由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，该药是一类能促进学习记忆能力的新型中枢神经系统药物，能选择性的作用于大脑皮层和海马，激活、保护或促进神经细胞的功能恢复，而本身无直接血管活性，也无中枢兴奋作用，对学习记忆能力的改善是一种持久的促进作用。奥拉西坦仅作用于中枢神经系统，能改善脑代，增强和促进青少年智力，改善老年大脑功能不全和记忆力障碍，治疗神经官能症和精神行为紊乱，尤其是老年痴呆症，是美国FDA批准的用于治疗老年痴呆的药物之一。也可用于脑外伤、脑炎等脑部疾病的康复治疗。
[0003]奥拉西坦剂型较多，如常用的注射液适用于脑损伤及引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍等症的治疗，对高血压脑出血患者、中、重型颅脑损伤患者、轻、中度阿尔茨海默病、痴呆症、儿童脑瘫患者及慢性精神分裂症患者均有一定的疗效。对照实验结果显示，奥拉西坦疗效优于同类益智药吡拉西坦。且奥拉西坦毒性极低，有极好的耐受性以及具有吡拉西坦所没有的抗凝血酶III的作用，具有极其广阔的应用前景。
[0004]无论是化学原料药还是药物制剂，都必须要在保证产品质量稳定可控的基础之上，才能不断的更新发展。化学药物在起始原料、工艺合成、制剂及存放的过程中都可能带入或产生新的有机杂质，因此找到方法简便、专属性强、重现性好、准确度高的检验方法，确保药物在任何途径下产生的杂质都能被准确检出，才能保证人民的用药安全，对企业和检验部门来说，也是非常理想的选择。化学药品，其杂质主要包括起始原料、工艺杂质、降解杂质。为了确保产品质量，要将任何途径产生的杂质都一一检出，需要客观有效的检测方法。奥拉西坦的起始原料为4-氯-3-羟基-丁酸乙酯，在生产的过程中可能带入最终的产品当中。
[0005]目前奥拉西坦相关物质检测方法，主要是对奥拉西坦产品当中所检测出来的杂质进行了总量控制，并未对单个杂质进行定性、定量的分析。本发明提供了一种检测方法，针对可能被带入奥拉西坦终产品中的起始原料4-氯-3-羟基-丁酸乙酯进行了定性分析，并进行了系统的方法学验证。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于:提供一种化学药物有关物质的检测方法，这种方法针对如下产品向相关的生产、检测机构提供检测的指标、检测的手段、技术方法等，以便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，所针的对产品为奥拉西坦原料及其制剂。
[0007]本发明是这样构成的:采用高效液相色谱法检测化学药物奥拉西坦中的有关物质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水溶液为流动相；主成分自身对照法进行定量。采用的检测波长为205nm-215nm，优选为210nm。所述的流动相甲醇-水溶液配比为35-45: 55-65，优选为38-42: 58-62。所述的流动相流速为0.4-0.8ml/min，优选为0.5-0.7ml/min。采用的色谱柱柱温为25_40°C。
[0008]进一步说，测试方法如下:照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(35-45:55-65)为流动相；检测波长 210±5nm ;柱温 25_40°C;流量 0.4-0.8ml/min ；精密称取奥担西坦原料药或制剂适量(相当于奥拉西坦40mg)，加去离子水溶解并稀释至每Iml含奥拉西坦4mg的溶液，作为供试品溶液。将供试品溶液稀释1000倍，作为对照溶液。再精密量取供试溶液及对照溶液各10-20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量检测。
[0009]具体测试方法如下:照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(35-45:55-65)为流动相；检测波长210±5nm ;柱温25_40°C;流量0.4-0.8ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药或制剂适量(相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量检测。
[0010]本 申请人:经过大量实验研究，所提供的方法适合本产品的检测方法。比如柱温的选择:采用柱温20°c进行检测，色谱峰保留时间较长，峰型拖尾；采用柱温50°C进行检测时，色谱峰保留时间较短，造成色谱峰分离度达不到要求，因此，柱温在20°C和50°C时都达不到检测要求。比如流动相的选择，采用甲醇-水(30:70)进行检测，色谱峰保留时间较长，峰型不对称；采用甲醇-水(50:50)进行检测，色谱峰出峰较快，峰与峰之间达不到完全分离，因此流动相在甲醇-水(30:70)和甲醇-水(50:50)时都达不到检测要求。
[0011]实验例有关物质检验的方法研究
[0012]本品作为原料药，杂质主要包括起始原料、工艺杂质和降解杂质，对于终产品中可能被带入的起始原料，我们建立了有效的检测方法，并进行全面的方法学验证。
[0013]1、色谱条件的拟定
[0014]检测波长确定:采用紫外分光光度计对奥拉西坦及4-氯-3-羟基-丁酸乙酯在190-400nm之间进行了紫外光谱扫描，结果显示最大吸收在190nm至200nm。考虑到末端吸收干扰较多，选定210nm作为检测波长。
[0015]另外考虑到4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的极性较小，本实验选择甲醇-水(40: 60)为流动相，柱温30°C，流速为0.6ml/min。在此条件下，4-氯-3-羟基-丁酸乙酯与奥拉西坦主峰分离度较优，分离比较完全。
[0016]下面对检测条件进行方法学验证。
[0017]2、方法学验证
[0018]2.1杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测
[0019]2.1.1色谱条件
[0020]流动相:甲醇-水(40: 60)
[0021]流速:0.6ml/min[0022]柱温:30℃。
[0023]2.1.2专属性考察
[0024]2.1.2.1奥拉西坦与4-氯_3_羟基-丁酸乙酯分离度
[0025]取奥拉西坦、4-氯-3-羟基-丁酸乙酯各适量，用甲醇-水(40: 60)溶解并稀释制成混合溶液，取20 μ I，注入高效液相色谱仪，结果显示各峰之间的分离度均符合要求。
[0026]2.1.3最低检测限和最小定量限
[0027]参照中国药典2010版二部附录XIX A检测限下的信噪比法进行测定。精密称取奥拉西坦标准品8.7mg、4-氯-3-羟基-丁酸乙酯10.5mg，分别用甲醇-水(4: 6)定容到IOml容量瓶中，倍半稀释作为待测溶液。量取对照品溶液20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录峰高，取信噪比为10的浓度为最小定量限，信噪比为3的浓度为最小检测限。测得结果为:奥拉西坦最小检测限为3ng，最小定量限为6ng ；4~氯-3-羟基-丁酸乙酯最小检测限为10.6ng,最小定量限为15.8ng。
[0028]2.1.4耐受性实验
[0029]开展耐受性实验，考察奥拉西坦有关物质检查方法的耐受性。
[0030]样品配制:4_氯-3-羟基-丁酸乙酯的浓度检出值不得超过供试液的0.5%，因此，配制混合溶液的浓度为:奥拉西坦3.94mg/ml,4-氯-3-羟基-丁酸乙酯0.02mg/ml (4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的浓度约为奥拉西坦的0.5% )。
[0031]流速:以拟定的流动相条件，以不同的流速0.5ml/min,0.6ml/min,0.7ml/min,分别进样20 μ 1，记录色谱图，由图谱可知，奥拉西坦主峰与杂质的分离度都在1.5以上，柱效无明显变化，保留时间随流速的增加而缩短，流速增加柱压也明显增加，综合考虑选定流速为 0.6ml/min。
[0032]柱温:以拟定的流动相条件，在不同的柱温301:，351:，401:下，分别进样2(^1，记录色谱图，由图谱可知，奥拉西坦主峰杂质的分离度都在1.5以上，柱效无明显变化，保留时间随柱温的增加不明显，故最终选择常规柱温30 V。
[0033]流动相比例:以拟定的流速、柱温，改变流动相比例38: 62,40: 60,42: 58，分别进样20μ 1，记录色谱图，由图谱可知，三个比例下奥拉西坦主峰与杂质的分离度都在1.5以上，综合考虑最终选择流动相比例为40: 60。
[0034]最终拟定条件:IntersilCN_3柱(5 μ m,4.6*250mm, GL Sciences Inc.)为固定相，甲醇-水(40: 60)为流动相，流速为0.6ml/min，柱温30°C。
[0035]以上耐用性试验结果显示本方法的耐用性较好，目前确定的检测条件可行。
[0036]2.1.5有关物质检查
[0037]分别精密称取奥拉西坦原料药四批约40mg，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。精密量取1ml，置100mL量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
[0038]取对照溶液20 μ 1，注入高效液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。
[0039]结果显示，四批样品中均未检出4-氯-3-羟基-丁酸乙酯。见附图1-8所示。【专利附图】
【附图说明】
[0040]下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
[0041 ] 图1是奥拉西坦原料第I批有关物质检查0.1 %对照液HPLC图谱(CN_3柱)
[0042]图2是奥拉西坦原料第I批有关物质检查供试溶液HPLC图谱(CN_3柱)
[0043]图3是奥拉西坦原料第2批有关物质检查0.1 %对照液HPLC图谱(CN_3柱)
[0044]图4是奥拉西坦原料第2批有关物质检查供试溶液HPLC图谱(CN_3柱)
[0045]图5是奥拉西坦原料第3批有关物质检查0.1 %对照液HPLC图谱(CN_3柱)
[0046]图6是奥拉西坦原料第3批有关物质检查供试溶液HPLC图谱
[0047]图7是奥拉西坦原料第4批有关物质检查0.1 %对照液HPLC图谱(CN_3柱)
[0048]图8是奥拉西坦原料第4批有关物质检查供试溶液HPLC图谱(CN_3柱)
[0049]具体的实施方式
[0050]实施例1:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0051]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长210nm ;柱温30°C;流量0.6ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药约40mg，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0052]实施例2:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0053]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(38:62)为流动相；检测波长210nm ;柱温30°C;流量0.7ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药约40mg，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0054]实施例3:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0055]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(42:58)为流动相；检测波长210nm ;柱温35°C ;流量0.5ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药，置容量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0056]实施例4:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法[0057]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(35:65)为流动相；检测波长210nm ;柱温25°C ;流量0.8ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药，置容量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0058]实施例5:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0059]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(45:55)为流动相；检测波长210nm ;柱温40°C;流量0.4ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药约40mg，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0060]实施例6:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0061]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长215nm ;柱温30°C;流量0.6ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药约40mg，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0062]实施例7:奥拉西坦原料药中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0063]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长205nm ;柱温30°C;流量0.6ml/min ;精密称取奥拉西坦原料药约40mg，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0064]实施例8:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0065]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长210nm ;柱温30°C ;流量0.6ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0066]实施例9:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0067]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(38:62)为流动相；检测波长210nm ;柱温30°C ;流量0.7ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0068]实施例10:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0069]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(42:58)为流动相；检测波长2IOnm;柱温35°C ;流量0.5ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量，置容量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ I，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0070]实施例11:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0071]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(35:65)为流动相；检测波长210nm ;柱温25°C ;流量0.8ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量，置容量瓶中，力口去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0072]实施例12:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0073]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(45:55)为流动相；检测波长210nm ;柱温40°C ;流量0.4ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0074]实施例13:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0075]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长215nm ;柱温30°C ;流量0.6ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0076]实施例14:奥拉西坦注射液中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0077]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长205nm ;柱温30°C;流量0.6ml/min ;精密量取奥拉西坦注射液适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0078]实施例15:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0079]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长210nm ;柱温30°C ;流量0.6ml/min ;精密称取本品粉末适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0080]实施例16:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0081]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(38:62)为流动相；检测波长210nm ;柱温30°C ;流量0.7ml/min ;精密称取本品粉末适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0082]实施例17:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法[0083]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(42:58)为流动相；检测波长210nm ;柱温35°C ;流量0.5ml/min ;精密称取本品粉末适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置容量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0084]实施例18:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0085]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(35:65)为流动相；检测波长210nm ;柱温25°C ;流量0.8ml/min ;精密称取本品粉末适量，置容量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ I，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0086]实施例19:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0087]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(45:55)为流动相；检测波长210nm ;柱温40°C ;流量0.4ml/min ;精密称取本品粉末适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0088]实施例20:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0089]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长215nm ;柱温30°C ;流量0.6ml/min ;精密称取本品粉末适量，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质
4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
[0090]实施例21:注射用奥拉西坦中杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的检测方法
[0091]照高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(40:60)为流动相；检测波长205nm ;柱温30°C ;流量0.6ml/min ;精密称取本品粉末适量(约相当于奥拉西坦40mg)，置IOml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取1.0ml，置IOOml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置IOml量瓶中，力口去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法进行定量，结果显示杂质4-氯-3-羟基-丁酸乙酯未检出。
【权利要求】
1.一种检测化学药物奥拉西坦中有关物质的方法，其特征在于:采用高效液相色谱法，用氰基键合硅胶为填充剂；甲醇-水溶液为流动相；主成分自身对照法进行定量。
2.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:采用的检测波长为205nm-215nm。
3.按照要求2所述的检测方法，其特征在于:采用的检测波长优选为210nm。
4.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相甲醇-水溶液配比为35-45:55-65 ο
5.按照要求4所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相甲醇-水溶液配比优选为38-42:58-62 ο
6.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相流速为0.4-0.8ml/min。
7.按照要求6所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相流速优选为0.5-0.7ml/mirio
8.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:采用的色谱柱柱温为25-40°C。
【文档编号】G01N30/02GK103969344SQ201310030718
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年1月28日 优先权日:2013年1月28日
【发明者】不公告发明人 申请人:北京六盛合医药科技有限公司