专利名称：顶空气相色谱—质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种药材中亚硫酸盐含量的检测方法，具体地说涉及一种利用气相色谱一质谱联用快速检测药材中亚硫酸盐含量的方法。
背景技术：
一些中药材、果蔬、食用菌等熏制硫磺的现象比较普遍，在硫熏过程中随着温度的升高，材料表面析出的水分及盐分和SO2反应形成了亚硫酸盐，残留在其表面。亚硫酸盐过量食用会刺激支气管和肺，进而可能诱发多种呼吸道炎症，哮喘病人对二氧化硫尤为敏感，食用会加重病情，甚至死亡，此外，二氧化硫还会对脑、心、胃、肠等多种器管产生毒理作用。因此，国家食品药品监督管理局对食品、药材中SO2的残留有一定的限制标准。这就要求企业在收购原材料的源头严格控制SO2的含量。目前，国内广泛使用四氯汞钠-副玫瑰苯胺比色法测定食品中SO2残留量，但吸收液四氯汞钠对人体有害，各种蒸馏-滴定法在现行标准中的应用最为广泛，具有低成本的优势，但受滴定法专属性不强的限制，有时会出现假阳性干扰。此外，对于测定食品中SO2S留量，另一种常用的方法是碘量法，但是该方法灵敏度较低，且其蒸馏过程费时，同时也容易导致二氧化硫损失。鉴于仪器分析灵敏度高，速度快，选择性好，易实现自动记录连续测定等优点，现在的工作人员逐渐开始借助气相色谱仪、液相色谱仪、离子色谱仪等各种分析仪器对药材中的二氧化硫进行检测。
李涛等人的《顶空气相色谱法检测中药饮片中的二氧化硫》(药物鉴定，2010，19
(24)，32-33)首次提出采用顶定设备使二氧化硫反应逸出，利用气相色谱一火焰光度检测器对9种陕西常见中药饮片中的二氧化硫残留量进行测定，为中药中二氧化硫的残留控制提供了一个先进可控的检测方法。孙艳平等人的《顶空气相色谱一火焰光度检测器检测山药中的二氧化硫》(陕西医学杂志，2010，39 (8)，1024、1025、1040)采用顶空气相色谱一火焰光度检测器对经硫磺熏制的山药进行了专属性试验。廖远熹、程志红等人还采用静态顶空气相色谱一质谱联用技术对照分析了未经硫黄熏制的柴胡与熏制过的柴胡，并对该方法的可靠性进行了考察(《静态顶空气相色谱一质谱联用鉴别硫黄熏制的柴胡》，中国中药杂志，2005，30 (24)，1909-1911)。上述利用分析仪器进行检测的方法，均是采用顶空设备使二氧化硫反应逸出，并直接导入气相色谱仪进行分离和检测，在检测时，顶空进样的温度和平衡时间均会影响气体逸出的程度或气体逸出快慢，由此决定着检测的准确性和检测时间的长短。在对药材中的二氧化硫进行检测时，为了确保检测的准确性，需要将药材表面残留的二氧化硫充分的释放，因此在药材的前处理阶段人们通常通过延长反应的时间和/或提高反应的温度来确保药材中二氧化硫的充分逸出，在用上述色谱仪进行测试时，即提高顶空瓶温度来确保药材中二氧化硫的充分逸出，上述文献中公开的顶空瓶的温度(95°C、120°C )符合人们的常规推断和常规做法，但是顶空瓶温度过高(即反应温度过高)，会造成药材中的挥发性成分随之挥发出来，干扰检测结果，其中某些药材自身固有的硫成分的挥发，也会干扰检测结果，但是如果降低反应温度，则需要延长样品的反应时间，以保证二氧化硫的充分释放，上述文献中的反应时间已经长达30min，如果再次延长反应时间，根本无法满足企业现场收购药材时临场快速检测的要求，由此可见，样品预处理的反应时间和反应温度成为一组无法平衡的矛盾。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现有技术中以顶空进样方式测定药材中亚硫酸盐的检测方法中，顶空瓶温度高检测结果不准确，顶空瓶温度低反应时间延长的问题，进而通过选择合适的方法和合理的参数设置，克服样品预处理的反应时间和反应温度的矛盾，提供一种准确性高，重复性好的，检测时间短的顶空气相色谱一质谱联用快速检测药材中亚硫酸盐含量的方法。为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案为:
一种顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，包括如下步骤:
(O制备所需阶梯浓度的亚硫酸钠标准溶液；
(2)取与阶梯浓度标准溶液数量相同的顶空瓶，向其中分别加入2-6g不含亚硫酸盐的的药材颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入350-500 μ I的所述阶梯浓度的标准溶液和一定体积的酸溶液，得到阶梯浓度的标准测试溶液；
(3)向顶空瓶中依次加入粉碎后的待测药材颗粒2-6g、350-500l.!I的水和一定体积的酸溶液，得到样品测试液；
(4)将阶梯浓度的标准测试溶液和样品测试液依次放入顶空进样器中进样，设置顶空瓶温度为45— 55°C，平衡时间5 — lOmin，从顶空瓶中抽取的气体经过气相色谱仪和质谱仪后分别得到标准测试溶液和样品测试液的总离子流图，根据标准测试溶液的浓度和所述标准测试溶液的出峰面积绘制标准曲线，将样品测试液的出峰面积代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐的含量。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，所述酸溶液为10-30wt%的硫酸溶液。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，所述不含亚硫酸盐的的药材颗 粒与所述待测药材颗粒的用量相等。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，所述步骤(2)中不含亚硫酸盐的的药材颗粒的加入量为2g ;所述步骤(3)中待测药材颗粒用量为2g。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，所述步骤(2)中向顶空瓶中加入的所述阶梯浓度的标准溶液为400微升；所述步骤(3)中向顶空瓶中加入的水为400微升。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，顶空瓶温度50 °C，平衡时间5min。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，气相色谱一质谱联用的参数条件为:
进样口温度150°C，分流模式进样，分流比为500:1，色谱柱流速I ml/min，柱温80°C，扫描核质比为64和48的离子碎片。
上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，顶空进样的参数条件为:
顶空瓶温度50°C,平衡时间5min,进样时间0.5min,进样周期4min。上述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，所述药材为当归、枸杞或党参。与现有技术相比，本发明具有如下优点:
(I)本发明所述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，首先配制阶梯浓度的亚硫酸钠标准溶液，并利用阶梯浓度的亚硫酸钠标准溶液配制阶梯浓度的标准测试溶液和样品测试液，其中在配制阶梯浓度的标准测试溶液和样品测试液时，均直接在顶空瓶中进行，使得所述顶空瓶中含有相同体积的药材颗粒，特别是由于制备标准曲线的含有亚硫酸钠的标准溶液的顶空瓶中含有了相同量的药材颗粒，使用于制备标准曲线的顶空瓶中气液平衡条件与含有测试液的顶空瓶中气液平衡条件趋于一致，在仪器操作过程中避免了前后两者由于气液条件不一致造成的紊乱，使得顶空瓶温度可以在设置为45—55 °C时，即可在很短的时间内达到平衡，从而将平衡时间大幅缩短到5 — lOmin，明显缩短了单个样品的检测时；测试点位锁定药材表面的硫残留，克服了现有技术中通过延长反应时间和/或提高反应温度来保证二氧化硫充分释放的技术偏见，通过与药典法测量结果比较，表明该方法准确性高，通过三次平行进样测定的数值表明该方法重复性好。(2)本发明所述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，采用低温酸化处理的方式，将药材表面的亚硫酸盐残留反应为SO2，可以避免药材中其他含硫成分或挥发成分的干扰；同时采用硫酸对样品进行酸化处理，保证气液两相在很短的时间内达到平衡。(3)本发明所述顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法中，药材颗粒用量为2-6g，优选2g，向顶空瓶中加入的所述阶梯浓度的标准溶液或水的量为350-500微升，优选400微升，使得顶空瓶中气液比调节在一个合适的比例，保证在低温下能够快速的实现平衡，缩短反应时间。`(4)气相色谱一质谱联用的参数条件，进样口温度150°C，分流模式进样，分流比为500:1,色谱柱流速I ml/min，柱温80°C，扫描核质比为64和48的离子碎片，保证很好的灵敏度和准确性。(5)由于采用了特殊的离子扫描和低温气化模式，不受样品中其他物质的检测干扰，结果准确可靠，其中核质比为64和48的离子碎片，SO2的分子量为64，在失去一个氧原子后很容易产生48的碎片离子，采有本发明的处理方式，使待测样品中产生具有此碎片的成分，并且不受02、N2、CO2等小分子气体的干扰，在谱图上没有其他的峰出现。
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中
图1为实施例1的标准曲线 图2为实施例1枸杞药材经处理逸出的SO2的检测色谱 图3为实施例1枸杞药材经处理逸出的SO2的质谱图。
具体实施例方式本发明中用到的顶空进样器为安捷伦7188A、气相色谱仪为安捷伦7890A、质谱仪5975C，气相色谱一质谱联用的参数条件为:进样口温度150°C，分流模式进样，分流比为500:1，色谱柱流速I ml/min，柱温80°C，扫描核质比为64和48的离子碎片。实施例1
(1)精确称取0.50 g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取100、200、400、800、1600和3200 μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为4132、4334、45和八6 的 25 ml 的容量瓶中，得到 20、40、80、160、320 和 640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液；
(2)向编号为BI的顶空瓶中依次加入2g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒、400 μ I的20 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，然后加入5 ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀得到标准测试液Cl，经换算标准测试液Cl中单位药材的亚硫酸盐含量为5 ppm ；
按照步骤(2)的方法，向编号为B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中分别加入2 g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入400 μ I的浓度分别为40、80、160、320和640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，最后向不同编号的顶空瓶中分别加入5ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液C2、C3、C4、C5、C6，经换算上述标准测试液中单位药材的亚硫酸盐含量分别为10、20、40、80和160 ppm；
(3)取待测的枸杞样品，将枸杞粉碎为小颗粒状，向顶空瓶Dl中依次加入混匀后的待测药材颗粒2 g, 400 μ I的水和5 ml的质量浓度为10%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。(4)将编号为B1·-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，设置顶空瓶温度50°C,平衡时间5min,进样时间0.5 min,进样周期4 min,从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标准测试液C1-C6的浓度和其出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为y=105576x+811218，将测试液E1-E3的出峰面积1930323、1983111和1951438，依次代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐的含量分别为10.6ppm、ll.1ppm和10.8ppm,上述三个平行样的测定结果表明本实施中测试方法的重现性好。将本实施例中的待测枸杞，由具有多年检测经验的甘肃省出入境检验检疫局按传统药典法进行测试，得该样品中亚硫酸盐的含量为12ppm。实施例2
(1)精确称取0.50 g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取100、200、400、800、1600和3200 μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为 Α1、Α2、Α3、Α4、Α5 和 Α6 的 25 ml 的容量瓶中，得到 20、40、80、160、320 和 640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液；
(2)向编号为BI的顶空瓶中依次加入2g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的当归颗粒，400 μ I的20 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，然后加入5 ml的质量浓度为25%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，得到标准测试液Cl，经换算标准测试液Cl中单位药材的亚硫酸盐含量为5 ppm ；
按照步骤(2)的方法，向编号为B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中分别加入2 g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的当归颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入400 μ I的浓度分别为40、80,160,320和640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，最后向不同编号的顶空瓶中分别加入5ml质量浓度为25%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液C2、C3、C4、C5、C6，经换算上述标准测试液中单位药材的亚硫酸盐含量分别为10、20、40、80和160 ppm；
(3)取待测当归饮片，将饮片粉碎为小颗粒状，向顶空瓶中依次加入混匀后的待测药材颗粒2 g, 400 μ I的水和5 ml的质量浓度为25%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。(4)将编号为B1-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，设置顶空瓶温度50°C,平衡时间5min,进样时间0.5 min,进样周期4 min,从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标准测试液C1-C6的浓度和其出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为 y=106045x+769924 (R2=0.9992)，将测试液 E1-E3 的出峰面积 37429680、37546330、37461494。代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐的含量345.7ppm、346.8ppm、346ppm。上述三个平行样的测定结果表明本实施中测试方法的重现性好。将本实施例中的待测党参饮片，由具有多年检测经验的甘肃省出入境检验检疫局按传统药典法进行测试，得该样品中亚硫酸盐的含量为343ppm。实施例3
(1)精确称取0.50 g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取100、200、400、800、1600和320 0μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为Al、Α2、Α3、Α4、Α5和Α6的定容到25 ml的容量瓶中，得到20、40、80、160、320和640 μ g/ml的标准溶液；
(2)向编号为B1、B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中分别加入2g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的党参颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入400 μ I的浓度分别为20、40、80、160、320和640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，最后向不同编号的顶空瓶中分别加入8 ml质量浓度为30%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液Cl、C2、C3、C4、C5、C6，经换算上述标准测试液中单位药材的亚硫酸盐含量分别为5、10、20、40、80和160 ppm。(3)取待测的党参样品，将党参粉碎为小颗粒，向顶空瓶中依次加入混匀后的待测药材颗粒2 g, 400 μ I的水和8 ml的质量浓度为30%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。(4)将编号为B1-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，设置顶空瓶温度55°C,平衡时间IOmin,进样时间0.5 min,进样周期4 min,从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标准测试液C1-C6的浓度和其出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为y=107869x+121843，将测试液E1-E3 的出峰面积 19754001、20293346 和 19430394，依次代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐的含量分别为182ppm、187ppm和179ppm。
将本实施例中的待测党参，由具有多年检测经验的甘肃省出入境检验检疫局按传统药典法进行测试，得该样品中亚硫酸盐的含量为185ppm。
实施例4
(1)精确称取l.0g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取200、400、800、1600、3200和640 0μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为4132、4334、45和八6的定容到25 ml的容量瓶中，得到40、80、160、320、640、1280 μ g/ml的标准溶液；
(2)向编号为B1、B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中分别加入4g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的党参颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入400 μ I的浓度分别为40、80、160、320、640和1280 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，最后向不同编号的顶空瓶中分别加入10 ml质量浓度为30%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液Cl、C2、C3、C4、C5、C6，经换算上述标准测试液中单位药材的亚硫酸盐含量分别为5、10、20、40、80和160 ppm。(3)取待测的党参样品，将党参粉碎为小颗粒，向顶空瓶中依次加入混匀后的待测药材颗粒4 g, 400 μ I的水和10 ml的质量浓度为30%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。(4)将编号为B1-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，设置顶空瓶温度45°C,平衡时间IOmin,进样时间0.5 min,进样周期4 min,从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标准测试液C1-C6的浓度和其出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为y=107867x+121799， 将测试液E1-E3 的出峰面积 19753593、20185061 和 19537859，依次代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐含量分别为182ppm、186ppm和180ppm。将本实施例中的待测党参，由具有多年检测经验的甘肃省出入境检验检疫局按传统药典法进行测试，得该样品中亚硫酸盐的含量为185ppm。对比例I
(1)精确称取0.50 g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取100、200、400、800、1600和3200 μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为 Α1、Α2、Α3、Α4、Α5 和 Α6 的 25 ml 的容量瓶中，得到 20、40、80、160、320 和 640 μ g/ml的标准溶液；
(2)向编号为BI的顶空瓶中依次加入2g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒、400 μ I的20 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，然后加入5 ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀得到标准测试液Cl，经换算标准测试液Cl中单位药材的亚硫酸盐含量为5 ppm ；
按照步骤(2)的方法，向编号为B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中分别加入2 g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入400 μ I的浓度分别为40、80,160,320和640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，最后向不同编号的顶空瓶中分别加入5ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液C2、C3、C4、C5、C6，经换算上述标准测试液中单位药材的亚硫酸盐含量分别为10、20、40、80和160 ppm。(3)取与实施例1相同的待测枸杞样品小颗粒，向顶空瓶Dl中依次加入混匀后的待测药材颗粒2 g, 400 μ I的水和5 ml的质量浓度为10%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。(4)将编号为B1-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标准测试液C1-C6的浓度和其出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为y=118412X+54004，将测试液E1-E3的出峰面积2351196、2552497、1380218，代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐的含量19.4ppm、21.lppm、ll.2ppm。在本对比例中顶空瓶温度95°C,平衡时间30min,进样时间0.5 min,进样周期4 min。对比例2
(1)精确称取0.50 g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取100、200、400、800、1600和3200 μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为4132、4334、45和八6 的 25 ml 的容量瓶中，得到 20、40、80、160、320 和 640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液；
(2)向编号为BI的顶空瓶中依次加入2g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒、400 μ I的20 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，然后加入5 ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀得到标准测试液Cl，经换算标准测试液Cl中单位药材的亚硫酸盐含量为5 ppm ；
按照步骤(2)的方法，向编号为B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中分别加入2 g经粉碎处理后的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入400 μ I的浓度分别为40、80,160,320和640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液，最后向不同编号的顶空瓶中分别加入5ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液C2、C3、C4、C5、C6，经换算上述标准测试液中单位药材的亚硫酸盐含量分别为10、20、40、80和160 ppm；
(3)取与实施例1相同的待测枸杞样品小颗粒，向顶空瓶中依次加入混匀后的待测药材颗粒2 g, 400 μ I的水和5 ml的质量浓度为10%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。
(4)将编号为B1-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标准测试液C1-C6的浓度和其出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为 y=109443x+841566，将测试液E1-E3 的出峰面积 1837497、2034494、和 1782776，分别代入所述标准曲线中，得到药材中亚硫酸盐的含量9.lppm、10.9ppm、8.6ppm。在本对比例中，顶空瓶温度40°C，平衡时间40min，进样时间0.5 min，进样周期4min。对比例3
(1)精确称取0.50 g亚硫酸钠固体粉末，加入IOOml的容量瓶中超声溶解，并定容得到标准储备液；分别取100、200、400、800、1600和3200 μ I的所述标准储备液，依次定容到编号为 Α1、Α2、Α3、Α4、Α5 和 Α6 的 25 ml 的容量瓶中，得到 20、40、80、160、320 和 640 μ g/ml的标准溶液，其编号依次为？1、？243、？4、？5、？6 ；
(2)向编号为B1、B2、B3、B4、B5、B6的顶空瓶中依次加入400μ I的浓度分别为40、80、160、320和640 μ g/ml的亚硫酸钠标准溶液,最后向不同编号的顶空瓶中分别加入5 ml质量浓度为10%的硫酸溶液，迅速密封瓶盖，摇匀，依次得到标准测试液。(3)取与实施例1相同的待测枸杞样品小颗粒，向顶空瓶Dl中依次加入混匀后的待测药材颗粒2 g, 400 μ I的水和5 ml的质量浓度为10%的硫酸溶液，密封瓶盖，摇匀，得到测试液El ;再按步骤(3)的方法另配制2瓶测试液E2、E3，其顶空瓶分别编号为D2、D3。(4)将编号为B1-B6的顶空瓶和编号为D1-D3的顶空瓶放入顶空进样器中进样，从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体先后进入色谱仪和质谱仪，得到各顶空瓶中抽取的二氧化硫气体的总离子流图，根据标标准溶液F1-F6的浓度和相应的标准测试液出峰面积绘制标准曲线，得到曲线方程为y=8765x+811236，将测试液E1-E3的出峰面积1161836、986538、1074190，代入所述标准曲线中，得到2g待测药材溶入400 μ I水时亚硫酸盐的浓度为40、
20、30 μ g/ml,换算为单位药材中亚硫酸盐的含量为8ppm、4ppm、6ppm。在本对比例中顶空瓶温度50°C,平衡时间5min,进样时间0.5 min，进样周期4 min。通过实施例1与对比例1、对比例2相比较，可以看出以相同的处理方式，对相同的样品进行处理，顶空瓶温度50°C，平衡时间5min，处理得到的枸杞样品，其测定值的重现性好，均接近常规药典法的测定值，检测结果准确，而对比例I和对比例2的测定值不仅重现性差，且与药典法的测定值相差较远，实施例1与对比例3相比较可以看出，在标准测试液中不加与待测枸杞颗粒质量相同的不含亚硫酸盐的枸杞颗粒时，枸杞颗粒中亚硫酸盐含量测得值偏小，可能是由于制备标准曲线的顶空瓶中气液平衡条件与样品测试液的顶空瓶中气液平衡条件不一致，在仪器操作过程中前后两者短时间内无法弥补两者条件的差别，使气液不平衡或平衡条件不一样，造成由顶空瓶吸入的SO2的量相对较少。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的 保护范围之中。
权利要求
1.一种顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，包括如下步骤: (1)制备所需阶梯浓度的亚硫酸钠标准溶液； (2)取与阶梯浓度标准溶液数量相同的顶空瓶，向其中分别加入2-6g不含亚硫酸盐的药材颗粒，并依次向不同的顶空瓶中加入350-500 μ I的所述阶梯浓度的标准溶液和一定体积的酸溶液，得到阶梯浓度的标准测试溶液； (3)向顶空瓶中依次加入粉碎后的待测药材颗粒2-6g、350-500l.!I的水和一定体积的酸溶液，得到样品测试液； (4)将阶梯浓度的标准测试溶液和样品测试液依次放入顶空进样器中进样，设置顶空瓶温度为45— 55°C，平衡时间5 — lOmin，从顶空瓶中抽取的二氧化硫气体经过气相色谱仪和质谱仪后分别得到标准测试溶液和样品测试液的总离子流图，根据标准测试溶液的浓度和所述标准测试溶液的出峰面积绘制标准曲线，将样品测试液的出峰面积代入所述标准曲线中,得到药材中亚硫酸盐的含量。
2.根据权利要求1所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，所述酸溶液为10-30wt%的硫酸溶液。
3.根据权利要求2所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，所述不含亚硫酸盐的药材颗粒与所述待测药材颗粒的用量相等。
4.根据权利要求3所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中不含亚硫酸盐的药材颗粒的加入量为2g ;所述步骤(3)中待测药材颗粒用量为2g。
5.根据权利要求4所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中 向顶空瓶中加入的所述阶梯浓度的标准溶液为400微升；所述步骤(3)中向顶空瓶中加入的水为400微升。
6.根据权利要求5所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，顶空瓶温度50°C，平衡时间5min。
7.根据权利要求1-6任一所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，气相色谱一质谱联用的参数条件为: 进样口温度150°C，分流模式进样，分流比为500:1，色谱柱流速I ml/min，柱温80°C，扫描核质比为64和48的离子碎片。
8.根据权利要求7所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，顶空进样的参数条件为: 顶空瓶温度50°C,平衡时间5min,进样时间0.5min,进样周期4min。
9.根据权利要求8所述的顶空气相色谱一质谱联用测定药材中亚硫酸盐含量的方法，其特征在于，所述药材为当归、枸杞或党参。
全文摘要
本发明公开了一种顶空气相色谱-质谱联用测定药材中二氧化硫含量的方法，通过选择合适的方法和合理的参数调整，设置顶空瓶温度45-55℃，平衡时间5-10min；优选地，设置顶空瓶温度50℃，平衡时间5min。明显缩短了单个样品的检测时间，克服了现有技术中通过延长反应时间和/或提高反应温度来保证二氧化硫充分释放的技术偏见，通过与药典法测量结果比较，表明该方法准确性高，重复性好。
文档编号G01N30/06GK103245748SQ20131015231
公开日2013年8月14日 申请日期2013年4月27日 优先权日2013年4月27日
发明者王维波, 刘鸿雁 申请人:甘肃奇正藏药有限公司