一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法及使用其的检测方法
【专利摘要】本发明提供了一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，包括：a、对牛乳进行乙腈提取，取有机相并旋转蒸发至干；b、依次用乙腈、水和乙腈清洗旋转蒸发的容器，合并后得到清洗液、对清洗液进行正己烷萃取，取有机相氮气吹干；d、将步骤c中氮气吹干得到的物质溶解，再用固相萃取柱净化；e、将净化后得到的液体氮气吹干，再用正己烷溶解。其中依次用乙腈、水和乙腈清洗旋转蒸发的容器，可较充分地回收吸附在容器壁上的待测组分。该样本前处理方法简单快捷且回收率较高。本发明还提供了一种通过上述样本前处理方法对牛乳进行前处理的检测牛乳中有机氯的方法。
【专利说明】一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法及使用其的检测 方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测有机氯的样本前处理方法及使用其的检测方法，尤其适用于 牛乳中有机氯的检测。
【背景技术】
[0002] 在牛乳的生产过程中存在有机氯污染的风险，常见的有机氯包括α -666, β -666， γ-666, δ-666，ρ，ρ' -DDE，p，p' -DDD，o，p' -DDT，p，p' -DDT，七氯，环氧七氯，順式-氯丹， 反式-氯丹，氧氯丹，，β -硫丹，硫丹硫酸盐，狄氏剂，艾氏剂等。
[0003] 目前已开发出多种检测牛乳中有机氯的方法。《GB/T 5009. 162-2008动物性食 品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定》和《GB/T 5009. 19-2008食品中 有机氯农药多组分残留量的测定》中提供的牛乳前处理方法为：首先用丙酮和石油醚提取， 浓缩后再经过凝胶层析净化，由于这种前处理方法中凝胶层析的装柱及过柱时间太长，不 能满足即时和快速检测的目的。《GB/T 23210-2008牛奶和奶粉中511种农药及相关化学 品残留量的测定气相色谱-质谱法》中提供的牛乳前处理方法为：乙腈提取后旋转蒸发浓 缩，再经ENVI-18固相萃取柱净化，用乙腈洗涤样品瓶，洗涤液并于固相萃取柱中，将洗脱 液用正己烷进行溶剂交换，此前处理方法对某些有机氯组分的回收率较低，如反式-氯丹、 七氯、p，p' -DDD、α-硫丹等，无法满足检测的要求。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其简单快捷且回 收率较高。
[0005] 本发明的另一个目的是提供一种检测牛乳中有机氯的方法，其检测效率及回收率 较闻。
[0006] 本发明提供了一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，包括：a、对牛乳进行乙 腈提取，取有机相并旋转蒸发至干；b、依次用乙腈、水和乙腈清洗旋转蒸发的容器，合并后 得到清洗液；c、对清洗液进行正己烷萃取，取有机相氮气吹干；d、将步骤c中氮气吹干得到 的物质溶解，再用固相萃取柱净化；e、将净化后得到的液体氮气吹干，再用正己烷溶解。其 中依次用乙腈、水和乙腈清洗旋转蒸发的容器，可较充分地回收吸附在容器壁上的待测组 分。
[0007] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的一种示意性实施方式中，步骤a中乙腈 提取的方法为：向牛乳中加入乙腈、硫酸镁和氯化钠，涡旋混合1至2分钟，再于4000至 6000转/分钟的转速下离心4至8分钟；其中处理每克牛乳需要乙腈的量为2至3毫升、 硫酸镁的量为〇. 3至0. 5克、氯化钠的量为0. 1至0. 2克。
[0008] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的又一种示意性实施方式中，步骤a中， 旋转蒸发的温度为50至60 °C。
[0009] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的还一种示意性实施方式中，步骤b中， 依次用1体积的乙腈、2体积的水和1体积的乙腈清洗旋转蒸发的容器。
[0010] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的还一种示意性实施方式中，步骤c中， 正己烷萃取的方法为：向清洗液中加入与清洗液等体积的正己烷，涡旋混合30至60秒，取 出有机相，向剩余的液体中加入清洗液〇. 5倍体积的正己烷重复提取一次，合并两次提取 的有机相。
[0011] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的还一种示意性实施方式中，步骤C中， 氮气吹干的温度为50至60 °C。
[0012] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的还一种示意性实施方式中，步骤d中， 固相萃取柱为佛罗里硅藻土固相萃取柱，将氮气吹干后的物质溶解所使用的溶剂为正己 烷-丙酮混合液，正己烷-丙酮混合液中正己烷与丙酮的体积比为9:1。
[0013] 在检测牛乳中有机氯的样本前处理方法的还一种示意性实施方式中，步骤e中， 氮气吹干的温度为50至60 °C。
[0014] 本发明还提供了一种检测牛乳中有机氯的方法，通过上述样本前处理方法对牛乳 进行前处理并用气相色谱法对处理后的样本进行检测。
[0015] 本发明提供的一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其简单快捷且回收率较 商。
[0016] 本发明提供的一种检测牛乳中有机氯的方法，其样本前处理过程简单快捷且回收 率较高，提高了检测的效率。
【具体实施方式】
[0017] 为了对发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现结合以下实施例说明 本发明的【具体实施方式】。
[0018] 第一实施例：前处理方法。
[0019] 1、仪器、耗材和试剂： 旋转蒸发仪：配真空系统和加热装置； 氮吹仪和离心机； 正己烷-丙酮混合液（9:1):将正己烷与丙酮以体积比9:1混合而成； 氯化钠、硫酸镁为分析纯；有机溶剂均为色谱纯，实验用水符合GB/T 6682三级水的要 求； 佛罗里娃藻土固相萃取柱：500mg/3mL，活化方法为依次用3mL正己烧和3mL正己 烷-丙酮混合液（9:1)淋洗佛罗里硅藻土固相萃取柱。
[0020] 2、方法步骤： a、 取10克牛乳于50mL离心管中，加入20毫升乙腈、4克硫酸镁和1克氯化钠，涡旋混 合1分钟，在4000转/分钟的转速下离心5分钟；然后用滴管将有机相（即离心后最上层清 液）全部转移到250mL旋转蒸发瓶中，在50°C水浴旋转蒸发至干； b、 依次用2. 5毫升的乙腈、5毫升的水和2. 5毫升的乙腈清洗旋转蒸发瓶，并转入50毫 升离心管中合并得到清洗液； c、 向清洗液中加入与清洗液等体积的正己烷，涡旋混合30秒，用滴管将有机相转移到 15毫升离心管中，向剩余的液体中加入清洗液0. 5倍体积的正己烷重复提取一次，合并两 次提取的有机相，并在50°C水浴中氮气吹干； d、 用1毫升正己烷-丙酮混合液（9:1)将氮气吹干后的物质溶解，得到溶解液；净化： 将溶解液加入活化的佛罗里硅藻土固相萃取柱中，接收洗脱液；再用3mL正己烷-丙酮混合 液（9:1)润洗盛放溶解液的离心管，再倒入上述佛罗里硅藻土固相萃取柱，并重复两次，接 收洗脱液； e、 将净化后得到的洗脱液在50°C水浴中氮气吹干，再加入1毫升正己烷于涡旋混合器 上振荡溶解，经〇. 45um有机系滤膜过滤后待测。
[0021] 第二实施例：前处理方法。
[0022] 1、仪器、耗材和试剂： 与第一实施例中所述的仪器、耗材和试剂相同。
[0023] 2、方法步骤： a、 取10克牛乳于50mL离心管中，加入25毫升乙腈、3克硫酸镁和1. 5克氯化钠，涡旋 混合1. 5分钟，在5000转/分钟的转速下离心4分钟；然后用滴管将有机相（即离心后最上 层清液）全部转移到250mL旋转蒸发瓶中，在55°C水浴旋转蒸发至干； b、 依次用2毫升的乙腈、4毫升的水和2毫升的乙腈清洗旋转蒸发瓶，并转入50毫升离 心管中合并得到清洗液； c、 向清洗液中加入与清洗液等体积的正己烷，涡旋混合45秒，用滴管将有机相转移到 15毫升离心管中，向剩余的液体中加入清洗液0. 5倍体积的正己烷重复提取一次，合并两 次提取的有机相，并在55°C水浴中氮气吹干； d、 用1毫升正己烷-丙酮混合液（9:1)将氮气吹干后的物质溶解，得到溶解液；净化： 将溶解液加入活化的佛罗里硅藻土固相萃取柱中，接收洗脱液；再用3mL正己烷-丙酮混合 液（9:1)润洗盛放溶解液的离心管，再倒入上述佛罗里硅藻土固相萃取柱，并重复两次，接 收洗脱液； e、 将净化后得到的洗脱液在55°C水浴中氮气吹干，再加入1毫升正己烷于涡旋混合器 上振荡溶解，经〇. 45um有机系滤膜过滤后待测。
[0024] 第三实施例：前处理方法。
[0025] 1、仪器、耗材和试剂： 与第一实施例中所述的仪器、耗材和试剂相同。
[0026] 2、方法步骤： a、 取10克牛乳于50mL离心管中，加入30毫升乙腈、5克硫酸镁和2克氯化钠，涡旋混 合2分钟，在6000转/分钟的转速下离心8分钟；然后用滴管将有机相（即离心后最上层清 液）全部转移到250mL旋转蒸发瓶中，在60°C水浴旋转蒸发至干； b、 依次用3毫升的乙腈、6毫升的水和3毫升的乙腈清洗旋转蒸发瓶，并转入50毫升离 心管中合并得到清洗液； c、 向清洗液中加入与清洗液等体积的正己烷，涡旋混合60秒，用滴管将有机相转移到 15毫升离心管中，向剩余的液体中加入清洗液0. 5倍体积的正己烷重复提取一次，合并两 次提取的有机相，并在60°C水浴中氮气吹干； d、 用1毫升正己烷-丙酮混合液（9:1)将氮气吹干后的物质溶解，得到溶解液；净化： 将溶解液加入活化的佛罗里硅藻土固相萃取柱中，接收洗脱液；再用3mL正己烷-丙酮混合 液（9:1)润洗盛放溶解液的离心管，再倒入上述佛罗里硅藻土固相萃取柱，并重复两次，接 收洗脱液； e、将净化后得到的洗脱液在60°C水浴中氮气吹干，再加入1毫升正己烷于涡旋混合器 上振荡溶解，经〇. 45um有机系滤膜过滤后待测。
[0027] 第四实施例：检测方法。
[0028] 气相色谱仪：配电子捕获检测器。仪器条件：进样口温度：260°C ;检测器温度： 300°C ;柱温：初始温度 85°C，以 5°C /min 升至 160°C，保持 5min，以 15°C /min 升至 200°C， 保持2min，以30°C /min升至280°C，保持lOmin，总时间为37. 33min ;载气：高纯氮气(纯度 彡99. 999%);分流比：关；柱流速：2. 5mL/min ;进样量：1 μ L。
[0029] 色谱柱：选用CP-Sill9CB毛细管色谱柱，规格为50mX0. 25_Χ0· 20μπι。
[0030] 定量方法：内标法。
[0031] 方法步骤：取牛乳样品，按照第一实施例的前处理方法进行样本前处理，再用气相 色谱仪对其中的有机氯组分进行检测，最后按照公式"X= (AiXCXV)/ (AsXm)"计算出 牛乳样品中各有机氯组分的含量。式中：X-待测样品中有机氯组分x的含量，单位为mg/ kg ；Ai一待测样品有机氯组分x的峰面积；C一标准品有机氯组分X的浓度，单位为μ g/mL ; V-待测样品定容体积，1. OOmL ;As-标准品有机氯组分x的峰面积；m-待测样品质量，单 位为g。计算结果保留三位有效数字，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不 超过算数平均值的15%。
[0032] 第五实施例：检测方法。
[0033] 气相色谱仪：与第四实施例所述相同。
[0034] 色谱柱：与第四实施例所述相同。
[0035] 定量方法：内标法。
[0036] 方法步骤：取牛乳样品，按照第二实施例的前处理方法进行样本前处理，再用气相 色谱仪对其中的有机氯组分进行检测，最后按照公式"X= (AiXCXV) / (AsXm)"计算出 牛乳样品中各有机氯组分的含量。式中：X-待测样品中有机氯组分x的含量，单位为mg/ kg ；Ai一待测样品有机氯组分x的峰面积；C一标准品有机氯组分X的浓度，单位为μ g/mL ; V-待测样品定容体积，1. OOmL ;As-标准品有机氯组分x的峰面积；m-待测样品质量，单 位为g。计算结果保留三位有效数字，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不 超过算数平均值的15%。
[0037] 第六实施例：检测方法。
[0038] 气相色谱仪：与第四实施例所述相同。
[0039] 色谱柱：与第四实施例所述相同。
[0040] 定量方法：内标法。
[0041] 方法步骤：取牛乳样品，按照第三实施例的前处理方法进行样本前处理，再用气相 色谱仪对其中的有机氯组分进行检测，最后按照公式"x= (AiXCXV) / (AsXm)"计算出 牛乳样品中各有机氯组分的含量。式中：X-待测样品中有机氯组分x的含量，单位为mg/ kg ；Ai一待测样品有机氯组分x的峰面积；C一标准品有机氯组分X的浓度，单位为μ g/mL ; V-待测样品定容体积，1. 〇〇mL ;As-标准品有机氯组分x的峰面积；m-待测样品质量，单 位为g。计算结果保留三位有效数字，在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不 超过算数平均值的15%。
[0042] 第七实施例：精密度和回收率实验。
[0043] 1、精密度实验：分别配制 α -666, β -666, γ -666, δ -666, p，p' -DDE，p，p' -DDD， 〇，口'-〇〇1'，卩，卩'-〇〇1'，七氯，环氧七氯，順式-氯丹，反式-氯丹，氧氯丹，（1-硫丹，0-硫 丹，硫丹硫酸盐，狄氏剂和艾氏剂的空白加标牛乳样品，加标量如下表所示；用第四至第六 实施例的检测方法对空白加标牛乳样品平行检测6次，并计算相对标准偏差RSD%，结果如 下表所示。
[0044]
【权利要求】
1. 一种检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其特征在于，包括： a、 对牛乳进行乙腈提取，取有机相并旋转蒸发至干； b、 依次用乙腈、水和乙腈清洗所述旋转蒸发的容器，合并后得到清洗液； c、 对所述清洗液进行正己烷萃取，取有机相氮气吹干； d、 将所述步骤c中氮气吹干得到的物质溶解，再用固相萃取柱净化； e、 将所述净化后得到的液体氮气吹干，再用正己烷溶解。
2. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤a中所述 乙腈提取的方法为：向所述牛乳中加入乙腈、硫酸镁和氯化钠，涡旋混合1至2分钟，再于 4000至6000转/分钟的转速下离心4至8分钟；其中处理每克所述牛乳需要所述乙腈的 量为2至3毫升、所述硫酸镁的量为0. 3至0. 5克、所述氯化钠的量为0. 1至0. 2克。
3. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤a中，所述 旋转蒸发的温度为50至60 °C。
4. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤b中，依次 用1体积的乙腈、2体积的水和1体积的乙腈清洗所述旋转蒸发的容器。
5. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤c中，所述 正己烷萃取的方法为：向所述清洗液中加入与所述清洗液等体积的正己烷，涡旋混合30至 60秒，取出有机相，向剩余的液体中加入所述清洗液0. 5倍体积的正己烷重复提取一次，合 并两次提取的有机相。
6. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤c中，所述 氮气吹干的温度为50至60 °C。
7. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤d中，所述 固相萃取柱为佛罗里硅藻土固相萃取柱，将所述氮气吹干后的物质溶解所使用的溶剂为正 己烷-丙酮混合液，所述正己烷-丙酮混合液中正己烷与丙酮的体积比为9:1。
8. 如权利要求1所述的检测牛乳中有机氯的样本前处理方法，其中所述步骤e中，所述 氮气吹干的温度为50至60 °C。
9. 一种检测牛乳中有机氯的方法，其特征在于，通过权利要求1至8中任一所述的检测 牛乳中有机氯的样本前处理方法对牛乳进行前处理并用气相色谱法对处理后的样本进行 检测。
【文档编号】G01N30/08GK104215725SQ201310217010
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年6月4日 优先权日:2013年6月4日
【发明者】姜瑞清, 常建军, 魏文平, 曹海霞, 周琳, 宋晓东 申请人:内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司