一种中药组合物中黄芪甲苷的含量测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种中药组合物中黄芪甲苷的含量测定方法，具体方法由以下步骤组成：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及测定，该测定方法有助于药物的质量控制，提高药物的安全性和可靠性。
【专利说明】一种中药组合物中黄芪甲苷的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及中药组合物中具体成分的含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 中药治疗疾病已经有几千年的历史了，随着科学技术的发展，中药也面临着现代 化，要走上世界市场，这就要求必须做好中药质量的控制，中药的成分含量的质量控制则是 最关键的，尤其是对于复方的中药制剂，要想全面的控制中药的质量，必须做好各成分的含 量的精确测定。
[0003] 本发明的中药组合物由黄芪、女贞子、滑石、夏枯草、荔枝核、琥珀、肉桂、关黄柏组 成，采用健脾益肾、利水散结的原则，治疗前列腺增生。对于该中药组合物，目前只公开了药 物成分和制备方法，并没有给出相应的药物成分的含量测定方法。该中药组合物有的化学 成分复杂，在测定各成分含量时，必须能除去干扰因素，精确的测定含量，做到效的控制药 物质量，保证药物的安全。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种有效测定中药组合物中黄芪甲苷的含量的方法。
[0005] 本发明所采用的技术方案是： 一种中药组合物中黄芪甲苷的含量测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药 组成：黄芪35-140份、女贞子9-25份、滑石9-25份、夏枯草15-35份、荔枝核15-35份、琥 珀1-4份、肉桂2-5份、关黄柏5-15份组成；测定方法由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取制剂，加入甲醇，浸泡过夜，超声处理，放冷，称重，用甲醇补足 重量，滤过，量取续滤液，蒸干，残渣用水转移至分液漏斗中，再用三氯甲烷振摇提取3次， 弃去三氯甲烷，水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次，合并正丁醇液，用0. 5%Na0H溶液洗涤 2次，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，合并NaOH洗液和水洗液，再用水饱和的正丁醇振摇提 取2次，与上述正丁醇液合并，蒸干，残渣加75%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中至刻度，摇 匀，即得； b、 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，即得； C、测定：分别精密吸取对照品溶液10 μ L、20 μ L以及供试品溶液10 μ L，注入高效液相 色谱仪中，测定，以外标两点法对数方程式计算，测得黄芪甲苷含量。
[0006] 作为优选方式，测定方法由以下步骤组成： a、供试品溶液的制备：取相当于该中药组合物生药量4-45g的制剂，加入甲醇50ml， 浸泡过夜，超声处理30分钟，放冷，称重，用甲醇补足重量，滤过，量取续滤液25ml，蒸干，残 渣用水20ml转移至分液漏斗中，再用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷，水 层用水饱和的正丁醇振摇提取5次，正丁醇每次用量分别是20ml、20ml、20ml、15ml、15ml， 合并正丁醇液，用〇. 5%Na0H溶液洗涤2次，每次10ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次 10ml，合并NaOH洗液和水洗液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，与上述正丁 醇液合并，蒸干，残渣加75%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中至刻度，摇匀，即得； b、对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，即得； C、测定：分别精密吸取对照品溶液10 μ L、20 μ L以及供试品溶液10 μ L，注入高效液相 色谱仪中，测定，以外标两点法对数方程式计算，测得黄芪甲苷含量。
[0007] 作为优选方式，所述步骤C中高效液相色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅 胶；检测器为蒸发光散射检测器，蒸发光散射检测器漂移管温度为75-85°C，气体流速为 2. 3-2. 7L/min ;流动相为体积比为75:25的甲醇-水，流速为0. 7-0. 9ml/min。
[0008] 为实现上述方案，将该中药组合物制成胶囊剂、片剂或丸剂。
[0009] 作为优选方式，黄芪甲苷的含量测定由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取相当于生药量13. 5g的该中药组合物胶囊4g，，倒出内容物， 研细，加入甲醇50ml,浸泡过夜，超声处理30分钟，放冷，称重，用甲醇补足重量，滤过，量 取续滤液25ml，蒸干，残渣用水20ml转移至分液漏斗中，再用三氯甲烷振摇提取3次，每次 20ml，弃去三氯甲烷，水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次，正丁醇每次用量分别是20ml、 20ml、20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，用0. 5%Na0H溶液洗涤2次，每次10ml，再用正丁醇饱 和的水洗涤2次，每次10ml，合并NaOH洗液和水洗液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次， 每次l〇ml，与上述正丁醇液合并，蒸干，残渣加75%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中至刻度，摇 匀，即得； b、 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，即得； C、测定：分别精密吸取对照品溶液10 μ L、20 μ L以及供试品溶液10 μ L，注入高效液 相色谱仪中，测定，高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；检测器为蒸发光散射 检测器，蒸发光散射检测器漂移管温度为80°C，气体流速为2. 5L/min ;流动相为体积比为 75:25的甲醇-水，流速为0. 8ml/min，以外标两点法对数方程式计算，测得黄芪甲苷含量。 [0010] 所述中药组合物的活性成分的制备方法如下： (1) 取上述中药材，分别选净，粉碎，按组方称量； (2) 取黄芪、关黄柏，加50-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次0. 5-2小时，提取液过 滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度为1. 20-1. 25的清膏，备用； (3) 取女贞子，加6-10倍量70-90%乙醇，加热回流提取1-3次，时间为每次1-3小时， 提取液过滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度1. 20-1. 25的清膏，备用； (4) 取肉桂，加4-8倍量水浸泡1-2小时，提取挥发油2-6小时，挥发油另器收集，水提 取液过滤收集，残渣备用； (5) 取夏枯草、蒸枝核及肉桂提油后的残渔，加8-10倍量水，煎煮二次，第一次1-3 小时，第二次1-2小时，提取液过滤，合并，加入肉桂提油后的水溶液，浓缩成相对密度为 1. 20-1. 25的清膏，备用， (6) 取滑石、琥珀，粉碎成100目粉，备用； 步骤（2)所得清膏、步骤（3)所得清膏、步骤（4)所得挥发油、步骤（5)所得清膏和步骤 (6)所得细粉构成该中药组合物的活性成分。
[0011] 该中药组合物胶囊剂的制备由以下步骤构成： (1) 取上述中药材，分别选净，粉碎，按组方称量； (2) 取黄芪、关黄柏，加6-12倍量50-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次0. 5-2小时， 提取液过滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度为1. 2-1. 25的清膏，真空干燥，干膏 备用； (3) 取女贞子，加6-10倍量70-90%乙醇，加热回流提取1-3次，时间为每次1-3小时， 提取液过滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度1. 20-1. 25的清膏，真空干燥，干膏备 用； (4) 取肉桂，加4-8倍量水浸泡1-2小时，提取挥发油2-6小时，挥发油另器收集，水提 取液过滤收集，残渣备用； (5) 取夏枯草、蒸枝核及肉桂提油后的残渔，加8-10倍量水，煎煮二次，第一次1-3 小时，第二次1-2小时，提取液过滤，合并，加入肉桂提油后的水溶液，浓缩成相对密度为 1. 20-1. 25的清膏，真空干燥，干膏与黄芪、关黄柏、女贞子干膏粉碎成100目粉备用； (6) 取滑石、琥珀，粉碎成100目粉，备用； (7) 取干膏粉、原药粉和淀粉，混合均匀，用80%乙醇为粘合剂，搅拌制粒，60-70°C烘 干，整粒； (8) 筛出细粉，喷入挥发油，与颗粒混合均匀，密闭，装胶囊，即得。
[0012] 作为优选方式，所述中药组合物胶囊剂的制备由以下步骤构成： (1) 取上述中药材，分别选净，粉碎，按组方称量； (2) 取黄芪、关黄柏，加6倍量50%乙醇，加热回流提取1次，每次0. 5小时，提取液过 滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度为1. 20-1. 25的清膏，放入真空干燥箱，在温度 60°C，真空度0. 04Mpa条件下减压干燥，干膏备用； (3) 取女贞子，加6倍量70%乙醇，加热回流提取1次，时间为每次1小时，提取液过滤， 合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度1.20的清膏，放入真空干燥箱，在温度60°C，真空 度0. 04Mpa条件下减压干燥，干膏备用； (4) 取肉桂，加4倍量水浸泡1小时，提取挥发油2小时，挥发油另器收集，水提取液过 滤收集，残渣备用； (5) 取夏枯草、蒸枝核及肉桂提油后的残渔，加8倍量水，煎煮二次，第一次1小时，第二 次1小时，提取液过滤，合并，加入肉桂提油后的水溶液，浓缩成相对密度为1. 2的清膏，放 入真空干燥箱，在温度60°C，真空度0. 04Mpa条件下减压干燥，干膏与黄芪、关黄柏、女贞子 干膏粉碎成1〇〇目粉备用； (6) 取滑石、琥珀，粉碎成100目粉，备用； (7) 取干膏粉、原药粉和淀粉，混合均匀，用80%乙醇为粘合剂，搅拌制粒，60°C烘干，整 粒； (8) 筛出细粉，喷入挥发油，与颗粒混合均匀，密闭，装胶囊，即得。
[0013] 由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是： 本发明的方法能准确的测定出该中药组合物中黄芪甲苷的含量，有助于药物的质量控 制，提高药物的安全性和可靠性。
[0014] 本发明的测定方法的精密度、准确度、回收率等的检验 专属性试验 按实施例1处方量称取除黄芪外的药材，按制备工艺的要求制得空白样品，空白对照 液的处理方法同供试品溶液的处理方法。分别吸取空白样品溶液、对照品溶液及供试品溶 液，按照选定测定条件进行检测，结果表明：在黄芪甲苷相应的保留时间，空白样品无相应 波峰出现，空白样品不干扰测定，见图1。
[0015] 线性关系考察： 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液3、5、10、20、50μ 1注入高效液相色谱仪中，进行测定。 测定结果见表1 : 表1线性关系测定结果
【权利要求】
1. 一种中药组合物中黄芪甲苷的含量测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料 药组成：黄芪35-140份、女贞子9-25份、滑石9-25份、夏枯草15-35份、荔枝核15-35份、 琥珀1-4份、肉桂2-5份、关黄柏5-15份组成；其特征在于测定方法由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取制剂，加入甲醇，浸泡过夜，超声处理，放冷，称重，用甲醇补足 重量，滤过，量取续滤液，蒸干，残渣用水转移至分液漏斗中，再用三氯甲烷振摇提取3次， 弃去三氯甲烷，水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次，合并正丁醇液，用0. 5%NaOH溶液洗涤 2次，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，合并NaOH洗液和水洗液，再用水饱和的正丁醇振摇提 取2次，与上述正丁醇液合并，蒸干，残渣加75%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中至刻度，摇 匀，即得； b、 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，即得； C、测定：分别精密吸取对照品溶液10 μ L、20 μ L以及供试品溶液10 μ L，注入高效液相 色谱仪中，测定，以外标两点法对数方程式计算，测得黄芪甲苷含量。
2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于测定方法由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取相当于该中药组合物生药量4-45g的制剂，加入甲醇50ml， 浸泡过夜，超声处理30分钟，放冷，称重，用甲醇补足重量，滤过，量取续滤液25ml，蒸干，残 渣用水20ml转移至分液漏斗中，再用三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，弃去三氯甲烷，水 层用水饱和的正丁醇振摇提取5次，正丁醇每次用量分别是20ml、20ml、20ml、15ml、15ml， 合并正丁醇液，用〇. 5%NaOH溶液洗涤2次，每次10ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次 10ml，合并NaOH洗液和水洗液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，与上述正丁 醇液合并，蒸干，残渣加75%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中至刻度，摇匀，即得； b、 对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，即得； C、测定：分别精密吸取对照品溶液10 μ L、20 μ L以及供试品溶液10 μ L，注入高效液相 色谱仪中，测定，以外标两点法对数方程式计算，测得黄芪甲苷含量。
3. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述步骤c中高效液相色谱柱填 充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；检测器为蒸发光散射检测器，蒸发光散射检测器漂移管温 度为75-85°C，气体流速为2. 3-2. 7L/min ;流动相为体积比为75:25的甲醇-水，流速为 0· 7-0. 9ml/min〇
4. 根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物的制剂剂型为 胶囊剂、片剂或丸剂。
5. 根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于黄芪甲苷的含量测定由以下步骤组 成： a、供试品溶液的制备：取相当于生药量13. 5g的该中药组合物胶囊4g，倒出内容物， 研细，加入甲醇50ml,浸泡过夜，超声处理30分钟，放冷，称重，用甲醇补足重量，滤过，量 取续滤液25ml，蒸干，残渣用水20ml转移至分液漏斗中，再用三氯甲烷振摇提取3次，每次 20ml，弃去三氯甲烷，水层用水饱和的正丁醇振摇提取5次，正丁醇每次用量分别是20ml、 20ml、20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，用0. 5%NaOH溶液洗涤2次，每次10ml，再用正丁醇饱 和的水洗涤2次，每次10ml，合并NaOH洗液和水洗液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次， 每次l〇ml，与上述正丁醇液合并，蒸干，残渣加75%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中至刻度，摇 匀，即得； b、对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，即得； C、测定：分别精密吸取对照品溶液10 μ L、20 μ L以及供试品溶液10 μ L，注入高效液 相色谱仪中，测定，高效液相色谱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；检测器为蒸发光散射 检测器，蒸发光散射检测器漂移管温度为80°C，气体流速为2. 5L/min ;流动相为体积比为 75:25的甲醇-水，流速为0. 8ml/min，以外标两点法对数方程式计算，测得黄芪甲苷含量。
6. 根据权利要求1-3任一项所述的测定方法，其特征在于所述中药组合物的活性成分 的制备方法如下： (1) 取上述中药材，分别选净，粉碎，按组方称量； (2) 取黄芪、关黄柏，加50-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次0. 5-2小时，提取液过 滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度为1. 20-1. 25的清膏，备用； (3) 取女贞子，加6-10倍量70-90%乙醇，加热回流提取1-3次，时间为每次1-3小时， 提取液过滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度1. 20-1. 25的清膏，备用； (4) 取肉桂，加4-8倍量水浸泡1-2小时，提取挥发油2-6小时，挥发油另器收集，水提 取液过滤收集，残渣备用； (5) 取夏枯草、蒸枝核及肉桂提油后的残渔，加8-10倍量水，煎煮二次，第一次1-3 小时，第二次1-2小时，提取液过滤，合并，加入肉桂提油后的水溶液，浓缩成相对密度为 1. 20-1. 25的清膏，备用， (6) 取滑石、琥珀，粉碎成100目粉，备用； 步骤（2)所得清膏、步骤（3)所得清膏、步骤（4)所得挥发油、步骤（5)所得清膏和步骤 (6)所得细粉构成该中药组合物的活性成分。
7. 根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于该中药组合物胶囊剂的制备由以下步 骤构成： (1) 取上述中药材，分别选净，粉碎，按组方称量； (2) 取黄芪、关黄柏，加6-12倍量50-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次0. 5-2小时， 提取液过滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度为1. 2-1. 25的清膏，真空干燥，干膏 备用； (3) 取女贞子，加6-10倍量70-90%乙醇，加热回流提取1-3次，时间为每次1-3小时， 提取液过滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度1. 20-1. 25的清膏，真空干燥，干膏备 用； (4) 取肉桂，加4-8倍量水浸泡1-2小时，提取挥发油2-6小时，挥发油另器收集，水提 取液过滤收集，残渣备用； (5) 取夏枯草、蒸枝核及肉桂提油后的残渔，加8-10倍量水，煎煮二次，第一次1-3 小时，第二次1-2小时，提取液过滤，合并，加入肉桂提油后的水溶液，浓缩成相对密度为 1. 20-1. 25的清膏，真空干燥，干膏与黄芪、关黄柏、女贞子干膏粉碎成100目粉备用； (6) 取滑石、琥珀，粉碎成100目粉，备用； (7) 取干膏粉、原药粉和淀粉，混合均匀，用80%乙醇为粘合剂，搅拌制粒，60-70°C烘 干，整粒； (8) 筛出细粉，喷入挥发油，与颗粒混合均匀，密闭，装胶囊，即得。
8. 根据权利要求4所述的测定方法，其特征在于所述胶囊剂的制备由以下步骤构成： (1) 取上述中药材，分别选净，粉碎，按组方称量； (2) 取黄芪、关黄柏，加6倍量50%乙醇，加热回流提取1次，每次0. 5小时，提取液过 滤，合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度为1. 20-1. 25的清膏，放入真空干燥箱，在温度 60°C，真空度0. 04Mpa条件下减压干燥，干膏备用； (3) 取女贞子，加6倍量70%乙醇，加热回流提取1次，时间为每次1小时，提取液过滤， 合并，减压回收乙醇后，浓缩成相对密度1.20的清膏，放入真空干燥箱，在温度60°C，真空 度0. 04Mpa条件下减压干燥，干膏备用； (4) 取肉桂，加4倍量水浸泡1小时，提取挥发油2小时，挥发油另器收集，水提取液过 滤收集，残渣备用； (5) 取夏枯草、蒸枝核及肉桂提油后的残渔，加8倍量水，煎煮二次，第一次1小时，第二 次1小时，提取液过滤，合并，加入肉桂提油后的水溶液，浓缩成相对密度为1. 2的清膏，放 入真空干燥箱，在温度60°C，真空度0. 04Mpa条件下减压干燥，干膏与黄芪、关黄柏、女贞子 干膏粉碎成1〇〇目粉备用； (6) 取滑石、琥珀，粉碎成100目粉，备用； (7) 取干膏粉、原药粉和淀粉，混合均匀，用80%乙醇为粘合剂，搅拌制粒，60°C烘干，整 粒； (8) 筛出细粉，喷入挥发油，与颗粒混合均匀，密闭，装胶囊，即得。
【文档编号】G01N30/06GK104280464SQ201310278686
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月4日 优先权日:2013年7月4日
【发明者】刘敏彦, 董超, 许红辉 申请人:河北以岭医药研究院有限公司