一种用于补肺活血的药物的检测方法
【专利摘要】本发明提供一种用于补肺活血的药物的检测方法，所述药物由黄芪、赤芍和补骨脂制成，所述检测方法包括补骨脂薄层鉴定。本发明提供的检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪和/或赤芍的含量。此外，所述检测方法还包括检测药物性状和赤芍显微鉴别。本发明的检测方法可以有效控制药物、特别是补肺活血胶囊的质量，从而确保其临床疗效。
【专利说明】一种用于补肺活血的药物的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药领域，尤其涉及一种用于治疗肺心病、慢性阻塞性肺疾病的补肺活血药物的检测方法。
【背景技术】
[0002]复方中药是中医临床用药的主要形式，是中医药学的特色与精髓。中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，其化学成分的多样性与复杂性是其疗效的物质基础，建立符合中医药特点的现代质量控制体系，攻克中药质量分析与评价的难题，改进中药现有质量控制方法已成为人们积极研究的课题。
[0003]现代中药制剂“补肺活血胶囊”(国药准字Z20030063)具有益气活血，补肺固肾之功效，适用于肺肾气虚血瘀症。该药物主要由君药黄芪、臣药赤芍和佐药补骨脂制成，剂型为胶囊剂。方中君药黄苗，甘、微温，入肺脾二经。益肺健脾，培土生金，大补肺肾之气。臣药赤芍，苦、平，入肝、脾二经，能通血脉，化瘀血，行血中之滞。补骨脂，辛、大温，入脾、肾经。补肾助阳，壮火益土，纳气平喘。与黄芪合用，一补后天，两顾脾胃；二补先天，壮之阳，消阴翳。使肾气充足，摄纳正常，气归下元，虚喘自平；使肾阳充足，温煦有根，腰膝酸软、肢寒畏冷等症状得以改善。与赤芍相伍，温通血脉，是为佐药。三药合用，益气化瘀，温阳纳气，具有协同之功效。而每味药物归经直达所所需之脏，故可不用使药。纵观全方，益气化瘀、补肺固肾，具有恢复脏腑功能的作用，为治本之方。
[0004]对于这类药物的成分含量检测，2012年公开了胶囊剂的芍药苷含量测定方法(谢清春等人，“补肺活血胶囊中芍药苷的含量测定”，《中药材》，2012年第35卷第8期)，该方法采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，但是未涉及其它成分的测定，因此存在检测指标不全面、未对其有效成分的含量进行控制等不足。
[0005]因此，目前仍需要提供一种能够简单、准确且全面地检测药物活性成分含量的方法，以便能够更有效控制和保证这种药物、特别是补肺活血胶囊的质量，从而确保其临床疗效。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种用于补肺活血的药物的检测方法，所述检测方法能全面有效地控制此类药物、特别是补肺活血胶囊的质量，从而确保其疗效。
[0007]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
[0008]本发明提供了一种用于补肺活血的药物的检测方法，按重量份数计，所述药物由黄芪38-42份、赤芍38-42份和补骨脂16-24份制成，所述检测方法包括补骨脂薄层鉴定，包括以下步骤:
[0009]I)制备对照品溶液:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合液，即得；
[0010]2)制备供试品溶液:取所述药物约3g，加沸点30?60°C的石油醚20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
[0011]3)测定:吸取供试品溶液6μ 1，对照品溶液4μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0012]优选地，所述用于补肺活血的药物由黄芪40份、赤芍40份和补骨脂20份制成；更优选地，所述用于补肺活血的药物根据以下制备方法制成:
[0013]I)取部分赤芍粉碎备用，将剩余赤芍和黄芪与补骨脂加水煎煮二次，每次I小时，合并煎液而滤过，将滤液浓缩至80°C下相对密度为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达60% (体积比)，充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至80°C下相对密度为 1.35-1.40 ；
[0014]2)加入赤芍细粉，搅拌均匀，进行干燥与粉碎；
[0015]3 )采用90%乙醇(体积比)制粒。
[0016]其中,所述步骤I)中粉碎的赤苟的质量优选为赤苟总质量的1/4 ;优选地,所述步骤3)还包括制粒后，干燥，然后加辅料适量，混匀；进一步优选地，所述辅料为滑石粉。
[0017]所述用于补肺活血的药物可以为片剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液，优选为胶囊剂。更优选地，所述用于补肺活血的药物为补肺活血胶囊。在制成胶囊的情况下，本文提供的检测方法为检测胶囊的内容物。
[0018]为进一步准确、全面检测所述药物的活性成分含量，本发明提供的上述检测方法还可以包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪的含量，包括以下步骤:
[0019]I)制备供试品溶液:将所述药物研细，取lg，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，20ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
[0020]2)制备对照品溶液:称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得；
[0021]3)测定:分别精密吸取对照品溶液10μ 1、20μ 1，供试品溶液10μ I?20μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括:
[0022]色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
[0023]流动相:体积比为32:68的乙腈-水；
[0024]流速:lmL/min;
[0025]检测:蒸发光散射检测器；
[0026]理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
[0027]以黄芪甲苷计，所述药物含黄芪不得少于0.60mg/0.35g药物。
[0028]或者，本发明提供的上述检测方法还可以包括采用高效液相色谱法检测所述药物中赤芍的含量，包括以下步骤:
[0029]I)制备对照品溶液:取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50 μ g/ml的溶液，即得；[0030]2)制备供试品溶液:取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理I小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，每分钟3000转离心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0031]3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括:
[0032]色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
[0033]流动相:体积比为60:40的0.05mol / ml磷酸二氢钾溶液-甲醇；
[0034]流速:lmL/min;
[0035]紫外检测器检测波长:230nm ；
[0036]理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
[0037]以芍药苷计，所述药物含赤芍不得少于4.5mg/0.35g药物。
[0038]或者，本发明提供的检测方法可以同时包括补骨脂薄层鉴定以及黄芪和赤芍的含量的检测。具体而言，本发明的检测方法包括以下步骤:
[0039]一、补骨脂薄层鉴定
[0040]I)制备对照品溶液:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合液，即得；
[0041]2)制备供试品溶液:取所述药物约3g，加沸点30?60°C的石油醚20ml，超声处理15分钟(功率250W，频率40kHz)，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得；
[0042]3)测定:照中国药典2010年版一部附录VI B的薄层色谱法试验，吸取供试品溶液
6μ 1，对照品溶液4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0043]二、黄芪含量检测
[0044]I)制备供试品溶液:将所述药物研细，取lg，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤,合并洗液和滤液,回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次，所述正丁醇体积分别为30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
[0045]2)制备对照品溶液:称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得；
[0046]3)测定:分别精密吸取对照品溶液10μ 1、20μ 1，供试品溶液10μ I?20μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括:
[0047]色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
[0048]流动相:体积比为32:68的乙腈-水；
[0049]流速:lmL/min;
[0050]检测:蒸发光散射检测器；[0051]理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ；
[0052]优选地，所述药物含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于0.60mg/0.35g药物。
[0053]三、赤芍含量检测
[0054]I)制备对照品溶液:取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50 μ g/ml的溶液，即得；
[0055]2)制备供试品溶液:取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理I小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，每分钟3000转离心，精密量取上清液5ml，置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0056]3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括:
[0057]色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；
[0058]流动相:体积比为60:40的0.05mol / ml磷酸二氢钾溶液-甲醇；
[0059]流速:lmL/min;
[0060]检测波长:230nm；
[0061]理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000 ；
[0062]优选地,所述药物含赤苟以苟药苷计,不得少于4.5mg/0.35g药物。
[0063]此外，本发明提供的上述检测方法还包括检测药物性状，本发明的药物(制成胶囊的情况下为硬胶囊内容物)为棕黄色至棕褐色的细颗粒和粉末；气微香，味微酸，苦。
[0064]并且，上述检测方法还包括赤芍显微鉴别:取本发明的药物，置显微镜下观察，草酸钙簇晶直径11?35 μ m，散在或存在于薄壁细胞中，常数个至数十个排列成行。
[0065]此外，上述用于补肺活血的药物如为胶囊剂，应符合胶囊剂项下有关各项规定(中国药典2010年版一部附录I L)。
[0066]制得的胶囊通常每粒装0.35g，密封贮藏。使用时为口服，一次4粒，一日3次。
[0067]综上，本发明提供了用于补肺活血的药物、特别是补肺活血胶囊的有效成分检测方法。本发明的检测方法能够准确、全面、有效检测补肺活血药物中的有效成分，对其质量进行全面监测，从而更好地确保药物的临床疗效。
【专利附图】
【附图说明】
[0068]以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中:
[0069]图1A-1C分别显示了实施例1中采用高效液相色谱对对照品、供试品和阴性对照溶液进行黄芪含量测定的色谱图；
[0070]图2显示了实施例1中采用高效液相色谱对黄芪甲苷对照品溶液进行测定的线性关系图；
[0071]图3A-3C显示了实施例1中采用不同色谱柱对供试品溶液中黄芪含量的测定结果，其中 3A 为 Dikma Diamonsil C18，3B 为资生堂 C18ACR，3C 为 Ultimate XB-C18 ；
[0072]图4A-4C显示了实施例3中赤芍含量测定方法的专属性试验结果，其中4A为对照品，4B为供试品,4C为阴性供试品；
[0073]图5显示了实施例3中赤芍含量测定方法的线性关系试验结果；[0074]图6A-6J显示了实施例4中制备的不同批次补肺活血胶囊供试品的赤芍显微特征鉴别结果；
[0075]图7为显示了实施例5中采用不同提取溶剂的薄层鉴定结果，其中试样I提取溶剂为石油醚(沸点30?60°C)，试样2提取溶剂为氯仿，试样3提取溶剂为乙酸乙脂，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。
[0076]图8为显示了实施例5中采用不同沸点的石油醚的薄层鉴定结果，其中试样I为石油醚(30?60°C )，试样2为石油醚(60?90°C )，试样3为石油醚(90?120°C )，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。
[0077]图9为显示了实施例5中采用不同用量的溶剂的薄层鉴定结果，其中试样I为石油醚(30?60°C) 10ml，试样2为石油醚(30?60°C) 20ml，试样3为石油醚(30?60°C )30ml，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。
[0078]图10为显示了实施例5中采用不同超声时间的薄层鉴定结果，其中试样I为超声提取10分钟，试样2为超声提取15分钟，试样3为超声提取25分钟，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品。其中因超声25分钟，溶液挥干，不能继续后面的检测工作，因此试样3无斑点。
[0079]图1lA和IlB显示了实施例5中补骨脂薄层鉴定结果，其中IlA为Merck板，T:21.7°C, RH:42% ；11B 为手铺板，T:21.6°C, RH:42% ;展距 8cm ;试样 I 为 050504 批样品，试样2为050505批样品，试样3为060301批样品，试样4为补骨脂素、异补骨脂素对照品，试样5为补骨脂阴性对照。
【具体实施方式】
[0080]以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0081]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
[0082]实施例中采用的补肺活血药物为以黄芪720g、赤芍720g、补骨脂360g作为原料药，根据以下方法制成胶囊剂:
[0083]I)取180g赤芍粉碎备用，将剩余赤芍和黄芪与补骨脂加水煎煮二次，每次I小时，合并煎液而滤过，将滤液浓缩至80°C下相对密度为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达60% (体积比)，充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至80°C下相对密度为 1.35-1.40 ；
[0084]2)加入赤芍细粉，搅拌均匀，进行干燥与粉碎；
[0085]3)采用90%乙醇(体积比)制粒，干燥，然后加适量滑石粉，混匀后装入胶囊。
[0086]在测定时取其内容物。
[0087]实施例1黄芪含量测定方法的选择
[0088]试验材料
[0089]1.仪器 AgilentllOO 高效液相色谱仪；Alltech2000ES
[0090]蒸发光检测器；色谱柱:UltimateXB-C18、Dikma Diamonsil C-18、资生堂C18ACR。[0091]2.试剂乙腈(色谱纯)，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
[0092]3.对照品黄芪甲苷(含量测定用，批号110781 — 200613)，购于中检所。
[0093]4.供试品 100101、100102、100103、100104、100302、100303、100501、100502、100601、100602。
[0094]5.黄芪阴性对照品根据上述胶囊的制备方法，不加黄芪制得黄芪阴性对照。
[0095]6.色谱柱参照中国药典2010年版一部黄芪含量测定项下的测定方法；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
[0096]7.检测方式参照中国药典2010年版一部黄芪含量测定项下的测定方法；选用蒸发光散射检测器进行检测。
[0097]8.流动相采用中国药典2010年版一部黄芪的含量测定项中所用的流动相:乙腈一水(32:68体积比)为流动相。
[0098](一)供试品溶液的制备选择
[0099]参照补肺活血胶囊的国家药品标准及中国药典2010年版一部黄芪项下，对供试品进行“索氏一回流提取”方法(方法一)、“加热回流法”(方法二)及“超声法”(方法三)的提取考察。具体试验如下:
[0100]方法一:取同一批补肺活血胶囊(批号100103)，研细，分别取供试品两份，每份约3g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流提取，提取液回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解。用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，20ml，20ml，20ml )，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液。正丁醇蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。按表I回流时间进行了试验并测定黄芪甲苷的含量，测定结果如表I。
[0101]表I索氏提取法选择不同提取时间测定结果
【权利要求】
1.一种用于补肺活血的药物的检测方法，按重量份数计，所述药物由黄芪38-42份、赤芍38-42份和补骨脂16-24份制成，其特征在于，所述检测方法包括补骨脂薄层鉴定，包括以下步骤: 1)制备对照品溶液:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每Iml各含Img的混合液，即得； 2)制备供试品溶液:取所述药物约3g，加沸点30?60°C的石油醚20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，即得； 3)测定:吸取供试品溶液6μ 1，对照品溶液4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:2的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述用于补肺活血的药物由黄芪40份、赤芍40份和补骨脂20份制成。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述用于补肺活血的药物根据以下制备方法制成: O取部分赤芍粉碎备用，将剩余赤芍和黄芪与补骨脂加水煎煮二次，每次I小时，合并煎液而滤过，将滤液浓缩至80°c下相对密度为1.05-1.15，加乙醇使含醇量达体积比为60%，充分搅拌，静置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，继续浓缩至80°C下相对密度为 1.35-1.40 ； 2)加入赤芍细粉，搅拌均.匀，进行干燥与粉碎； 3)采用体积比为90%的乙醇制粒。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤I)中粉碎的赤芍的质量为赤苟总质量的1/4。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)还包括制粒后，干燥，然后加辅料适量，混匀。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述辅料为滑石粉。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述用于补肺活血的药物为片剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述用于补肺活血的药物为胶囊剂。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述用于补肺活血的药物为补肺活血胶囊。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪的含量，包括以下步骤: 1)制备供试品溶液:将所述药物研细，取lg，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，所述正丁醇体积分别为30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得； 2)制备对照品溶液:称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得； 3)测定:分别精密吸取对照品溶液ΙΟμ 1、20μ 1，供试品溶液10μ I?20 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相:体积比为32:68的乙腈-水； 流速:lmL/min ； 检测:蒸发光散射检测器； 理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
11.根据权利要求10所述的检测方法，其特征在于，所述药物含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于0.60mg/0.35g药物。·
12.根据权利要求1至9中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中赤芍的含量，包括以下步骤: 1)制备对照品溶液:取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得； 2)制备供试品溶液:取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理I小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇勻，每分钟3000转离心,精密量取上清液5ml,置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相:体积比为60:40的0.05mol / ml磷酸二氢钾溶液-甲醇； 流速:lmL/min ； 检测波长:230nm ； 理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
13.根据权利要求12所述的检测方法，其特征在于，所述药物含赤芍以芍药苷计，不得少于4.5mg/0.35g药物。
14.根据权利要求1至9中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括采用高效液相色谱法检测所述药物中黄芪和赤芍的含量，其中检测所述药物中黄芪的含量包括以下步骤: 1)制备供试品溶液:将所述药物研细，取lg，精密称定，加甲醇加热回流提取2次，每次50ml，第一次60分钟，第二次30分钟，滤过，滤渣用少量甲醇洗涤，合并洗液和滤液，回收甲醇至干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，所述正丁醇体积分别为30ml、20ml、20ml、20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40ml，最后一次洗涤后静置过夜，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得； 2)制备对照品溶液:称取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，即得；3)测定:分别精密吸取对照品溶液ΙΟμ 1、20μ 1，供试品溶液10μ I?20 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算黄芪的含量；其中，所述高效液相色谱法的条件包括: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相:体积比为32:68的乙腈-水； 流速:lmL/min ； 检测:蒸发光散射检测器； 理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ； 并且，检测所述药物中赤芍的含量包括以下步骤: 1)制备对照品溶液:取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成50μg/ml的溶液，即得； 2)制备供试品溶液:取所述药物，研细，取0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理I小时，条件为功率250W，频率40kHz，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失 的重量，摇勻，每分钟3000转离心,精密量取上清液5ml,置20ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 3)测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定，即得；其中，所述高效液相色谱法的条件包括: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料； 流动相:体积比为60:40的0.05mol / ml磷酸二氢钾溶液-甲醇； 流速:lmL/min ； 检测波长:230nm ； 理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
15.根据权利要求14所述的检测方法，其特征在于，所述药物含黄芪以黄芪甲苷计，不得少于0.60mg/0.35g药物；所述药物含赤芍以芍药苷计，不得少于4.5mg/0.35g药物。
16.根据权利要求1、10、12或14所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括检测药物性状，所述药物为棕黄色至棕褐色的细颗粒和粉末；气微香，味微酸，苦。
17.根据权利要求1、10、12或14所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括赤芍显微鉴别，将所述药物置显微镜下观察，草酸钙簇晶直径11?35μπι，散在或存在于薄壁细胞中，数个至数十个排列成行。
【文档编号】G01N30/02GK103439449SQ201310317350
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年7月25日 优先权日:2013年7月25日
【发明者】关泽明, 陈继慈 申请人:广东远大药业有限公司