一种支气管炎片的定性定量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种支气管炎片的定性定量检测方法,包括：（1）采用薄层色谱法鉴别黄芩、甘草；（2）采用高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱、矮地茶中岩白菜素的含量，每片含矮地茶以岩白菜素计不得少于2.1mg、每片含盐酸麻黄碱(C10H15NO?HCl)应为标示量的70.0%～110.0%。本发明方法可增加该产品的质量可控性，克服现有技术的不足，以便能够更好的保证疗效，更好的为广大患者服务。
【专利说明】一种支气管炎片的定性定量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药学领域，具体涉及一种支气管炎片的质量控制方法。
【背景技术】
[0002] 支气管炎片是清热化痰，定喘止咳的药品，临床上用于哮喘型慢性气管炎，其原质 量标准为部颁标准，标准编号：WS3-B-1506-93,原标准中仅有2项化学鉴别，且化学鉴别的 操作复杂，该标准难以有效控制产品质量。中国药品标准2009年10卷第3期《支气管炎 质量标准研究》记载了支气管炎片的质量标准，采用高效液相色谱法对处方中的矮地茶、 黄芩同时测定岩白菜素、黄芩苷的含量，用薄层色谱鉴别盐酸麻黄碱、现代中药研究与实践 2008年第22卷第4期《HPLC法测定支气管炎片中黄芩苷的含量》记载了采用高效液相色 谱法测定黄芩苷作为含量控制的指标、吉林中医药2008年28卷第12期《高效液相色谱法 测定支气管炎片中岩白菜素的含量》记载了采用HPLC法测定支气管炎片中岩白菜素含量 的方法，以上文献中未对盐酸麻黄碱进行定性定量控制或者是仅对盐酸麻黄碱进行了薄层 鉴别的定性控制，因盐酸麻黄碱作为易制毒的管制药品，且其为拟肾上腺素药，能兴奋交感 神经，可用于支气管哮喘、百日咳、枯草热及其他过敏性疾病，还能对抗脊椎麻醉引起的血 压降低、扩大瞳孔，也用于重症肌无力、痛经等疾患，还可作中枢神经系统兴奋剂，故此应对 其含量进行定量测定以对其有效进行质量控制。并且发明人经过提取溶剂对比考察，结果 显示采用70%甲醇对岩白菜素的提取率优于文献中采用甲醇的提取率。天津药学2009年 第21卷第1期《HPLC法测定支气管炎片中盐酸麻黄碱的含量》记载了HPLC法测定支气管 炎片中盐酸麻黄碱含量的方法，其测定一批样品需使用250ml流动相，其流动相为乙腈-0. 2%磷酸溶液（7:93)，而发明人经过研究，本发明中盐酸麻黄碱的含量测定只需使用20mL 盐酸甲醇（1 - 100)，大大节省了提取溶剂、降低了检测成本和对环境的污染。
[0003] 总的来说，现有的质量控制方法不能有效的控制支气管炎片的质量，从而将影响 该产品的生产和质量保证及其临床疗效。
[0004]
【发明内容】
： 本发明的目的是提供一种支气管炎片的定性定量检测方法，包括支气管炎片中黄芩、 甘草的鉴别，以及支气管炎片中盐酸麻黄碱、岩白菜素的含量测定；鉴别：采用薄层色谱法 鉴别黄芩、甘草，含量测定：采用高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱、矮地茶中岩白菜素的含 量；每片含矮地茶以岩白菜素计不得少于2.lmg、每片含盐酸麻黄碱（CiciH15NOHCl)应为标示 量的70. 0%?110. 0%，本发明方法可增加该产品的质量可控性，克服现有技术的不足，以便 能够更好的保证疗效，更好的为广大患者服务。
[0005] 本发明的目的是通过如下技术方案实现的：一种支气管炎片的定性定量检测方 法，包括（1)采用薄层色谱法鉴别黄芩、甘草；（2)采用高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱、矮 地茶中岩白菜素的含量，所述定性定量检测方法包含如下步骤： (1)鉴别： 黄芩的鉴别包括下列步骤：取本品2片，除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理20分 钟，滤过，滤液浓缩至约lml，作为供试品溶液。再取黄芩对照药材0. 5g，同法制成对照药材 溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱 法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各3?5iU，分别点于同 一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙酯-丁酮-醋酸-水（10 : 7 : 5 : 3)为展开剂， 展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品 色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。
[0006] 甘草的鉴别包括下列步骤：取本品5片，除去包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理 20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次 20ml，合并正丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗涤3次，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣 加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照 薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸上述二种溶液各5?10iU，分别 点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光 灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点。
[0007] (2)含量测定： 矮地茶中岩白菜素的含量测定方法包括下列步骤：照高效液相色谱法（中国药典2010 年版一部附录VID)测定。
[0008] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (20:80)为流动相；检测波长为275nm。理论板数按岩白菜素峰计算应不低于3000。
[0009] 对照品溶液的制备取岩白菜素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每Iml 含50吒的溶液，即得。
[0010] 供试品溶液的制备取本品1〇片，除去包衣，精密称定，研细，取约〇.lg，精密称 定，置25ml量瓶中，加70%甲醇20ml，超声处理（功率300W，频率25kHz) 45分钟，放冷，力口 70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0011] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各IOy1，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0012] 支气管炎片每片含矮地茶以岩白菜素（C14H16O9)计，不得少于2.lmg。
[0013] 盐酸麻黄碱的含量测定方法包括下列步骤：照高效液相色谱法（中国药典2010年 版一部附录VID)测定。
[0014] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-0. 4% 磷酸溶液（7:93)为流动相；检测波长为215nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于 3000。
[0015] 对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含 〇?Img的溶液，即得。
[0016]供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约〇.2g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸甲醇（1 - 100) 20ml，称定重量，超声处理(功率300W，频 率25kHz) 30分钟，放冷，称重，用盐酸甲醇（1 - 100)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得。
[0017] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0018] 支气管炎片每片含盐酸麻黄碱（CiciH15NOHCl)应为标示量的70. 0%?110. 0%。
[0019] 为更好的表明本发明的实质，将本发明的方法学考察详述如下： (1)黄芩的薄层色谱鉴别 ①供试品溶液的制备：除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩 至约lml，作为供试品溶液。
[0020] ②取黄芩对照药材0. 5g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml， 作为对照药材溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶 液。
[0021] ③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去黄芩的其他味药材，按制法项下的工 艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
[0022] ④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试 验，吸取上述四种溶液各3?5iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙 酯-丁酮-醋酸-水（10 : 7 : 5 : 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇 溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑 点，缺黄芩的阴性对照无干扰，结果见图1。
[0023] (2)甘草的薄层色谱鉴别 ①供试品溶液的制备：取本品5片，除去包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正 丁醇提取液，用以正丁醇饱和的水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶 解，作为供试品溶液。
[0024] ②取缺甘草的其他药材，制成缺甘草的阴性样品，同法制成缺甘草的阴性对照溶 液。另取甘草及胀果甘草对照药材各lg，同上述方法分别制成对照药材溶液。
[0025] ③阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除去甘草的其他味药材，按制法项下的工 艺制成样品，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。
[0026] ④薄层色谱条件及结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试 验，吸取上述四种溶液各5?10iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙 酯-甲酸-冰醋酸-水（15 : 1 : 1 : 2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇 溶液，105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，缺甘草的阴性对照无干扰，结果见图2。 [0027] (3)岩白菜素含量测定 ①仪器与试药=Wasters1525高效液相色谱仪；CG-300超声清洗仪（300W，25kHz);天 平：AE240，CP22? ;WasterS 2996 (PDA);岩白菜素（中国药品生物制品检定所提供，供含量 测定用，批号=111532-200202)。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
[0028]②系统适应性：色谱柱：AgientC18(DB) ( 250mmX4. 6mmX5Mm)，Agilent公司； 柱温：35°C;流动相：甲醇-水（20 : 80);流速l.Oml/min;检测波长275nm;色谱工作站 Empower。
[0029]③对照品溶液的制备：精密称取岩白菜素对照品14. 30mg，置IOOml量瓶中，力口 入70%甲醇适量，振摇使溶解，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液①（0.143mg/ ml)。精密量取对照品溶液①10ml，置25ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇勻，即得对 照品溶液②（〇.〇572mg/ml)。精密量取对照品溶液②10ml，置IOOml量瓶中，加70%甲醇稀 释至刻度，摇匀，即得对照品溶液③（0. 〇〇572mg/ml)。精密吸取10 iil，注入液相色谱仪，测 定，见图3。
[0030] ④供试品溶液的制备：取本品(批号：20071114) 40片，除去包衣，精密称定，研细， 备用。
[0031] ⑤提取溶剂的选择：取上述粉末约0.lg，共四份，精密称定，置25ml量瓶中，依次 加入20%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇20ml，超声处理（300W，25kHz) 30分钟，放冷，分别 加相应溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 IOW，注入液相色谱仪，测定并计算，结果见表1。
[0032] 表1提取溶剂选择结果比较表
【权利要求】
1. 一种支气管炎片的定性定量检测方法，，其特征在于包括（1)采用薄层色谱法鉴别 黄辜、甘草；（2)采用高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱、矮地茶中岩白菜素的含量，所述定 性定量检测方法包含如下步骤： (1) 鉴别： 黄辜的鉴别包括下列步骤；取本品2片，除去包衣，研细，加甲醇20ml，超声处理20分 钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液，再取黄辜对照药材0. 5g，同法制成对照药材 溶液，另取黄辜巧对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法 (中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述H种溶液各3?5 y 1，分别点于同一娃 胶G薄层板上，使成条状，W己酸己醋-下丽-醋酸-水（10 : 7 : 5 : 3)为展开剂，展开， 取出，瞭干，喷W 2% H氯化铁己醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相 应的位置上，显相同的颜色的斑点； 甘草的鉴别包括下列步骤；取本品5片，除去包衣，研细，加甲醇25ml，超声处理20分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用W水饱和的正下醇振摇提取3次，每次20ml， 合并正下醇提取液，用W正下醇饱和的水洗涂3次，弃去水液，取正下醇液蒸干，残渣加甲 醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材Ig，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用W水饱和的正下醇振摇提取3次，每次20ml，合并正 下醇提取液，用W正下醇饱和的水洗涂3次，弃去水液，取正下醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使 溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸上述 二种溶液各5?10 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，使成条状，W己酸己醋-甲酸-冰醋 酸-水（15 : 1 : 1 : 2)为展开剂，展开，取出，瞭干，喷W 10%硫酸己醇溶液，105°C加热 至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的英光斑点； (2) 含量测定： 矮地茶中岩白菜素的含量测定方法包括下列步骤：照高效液相色谱法（中国药典2010 年版一部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W甲醇-水（20:80) 为流动相；检测波长为275nm，理论板数按岩白菜素峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备；取岩白菜素对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含50嗦 的溶液，即得； 供试品溶液的制备；取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0. Ig，精密称定，置 25ml量瓶中，加70 %甲醇20ml，超声处理(功率300W，频率25曲Z )45分钟，放冷，加70 %甲 醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 支气管炎片每片含矮地茶W岩白菜素咕化6〇9)计，不得少于2. Img ; 盐酸麻黄碱的含量测定方法包括下列步骤：照高效液相色谱法（中国药典2010年版一 部附录VI D)测定； 色谱条件与系统适用性试验：用十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W己睛-0. 4%磯酸 溶液（7:93)为流动相；检测波长为215nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000 ; 对照品溶液的制备；取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0. Img 的溶液，即得； 供试品溶液的制备；取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约〇.2g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入盐酸甲醇（1 一 100)20ml，称定重量，超声处理(功率300W，频率 25曲z)30分钟，放冷，称重，用盐酸甲醇（1 一 100)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液， 即得； 测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，测定，即 得； 支气管炎片每片含盐酸麻黄碱（CwHisNO?肥1)应为标示量的70. 0%?110. 0%。
【文档编号】G01N30/88GK104345116SQ201310317684
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年7月26日 优先权日:2013年7月26日
【发明者】欧金秀, 谷陟欣, 张妮瑜, 辛秀, 郗瑞云, 袁莉, 朱丽, 颜冬兰 申请人:九芝堂股份有限公司