白蔹提取物美白功效的检测方法
【专利摘要】白蔹提取物美白功效的检测方法，涉及天然白蔹提取物。1）配制酪氨酸酶溶液、L-酪氨酸溶液和PBS溶液作为基础溶液，再配制4种待测溶液：熊果苷溶液、超临界二氧化碳萃取白蔹提取物溶液、水提白蔹提取物溶液和醇提白蔹提取物溶液，取4支试管定量加入各基础溶液和4种待测溶液中的一种，摇匀；2）将4只试管置于水浴锅中加热，分别测定其在波长475nm下的吸光度，计算出该浓度的待测溶液对酪氨酸酶的抑制率；3）重复1）和2），测定其它待测溶液对酪氨酸酶的抑制率，以及不同浓度待测溶液对酪氨酸酶的抑制率，再根据测定结果比较得出同浓度各白蔹提取物及熊果苷的美白功效，以及每个白蔹提取物或熊果苷在不同浓度下的美白功效。
【专利说明】白蔹提取物美白功效的检测方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及天然白蔹提取物，尤其是涉及白蔹提取物美白功效的检测方法。
【背景技术】
[0002]白蔹是葡萄科蛇葡萄属植物，又名白根、五爪藤、山地瓜等，具有清热解毒、消痈散结、生肌止痛之功效。白蔹入药历史悠久，主要采用其干燥块根，早在《名医别录》中就有记载，是历代医家治疗疔痈的重要药物。现代临床及药理研究表明，白蔹块根的提取物具有调节免疫活性、抗菌、抗肿瘤及兴奋作用等，可用于治疗各种痤疮、溃疡、烧伤、皲裂、黄褐斑及老年斑等。另外，白蔹块根的水提物及醇提物也被证实具有美容功效，但是对于白蔹提取物的美白和抗衰老美容功效检测方法则鲜有报道。对于白蔹提取物的获得，目前主要采用传统的水提法、醇提法以及新兴起的超临界二氧化碳萃取技术从白蔹块根中提取。
[0003]化妆品中的美白功能性成分(美白剂)的美白机理是:美白剂通过作用于皮肤黑色素形成或代谢途径的某个阶段，控制或抑制黑色素生成，从而实现对皮肤的美白功效。目前多数化妆品中添加的美白剂是通过抑制酪氨酸酶活性或阻断从酪氨酸生成黑色素的氧化反应，从而减少黑色素的生成而达到美白皮肤的效果。因此，该类美白剂对酪氨酸酶活性抑制率的高低成为衡量其美白功效的重要指标，抑制率越高则其美白功效越好。目前常用的美白剂功效检测方法有细胞水平功效测定法(陆晔，周名权，吕小枫等.特殊用途化妆品的功效评价.环境与健康.2001，18(2): 121 - 124)、动物实验法(黄畋，仲王旬.某些化妆品致色素作用的实验研究.中华皮肤科.1996，(6):430 - 431)和人体实验法(KawadaA, Kameyama H，Asai M，et al.A new approach to the evaluation of whitening effectof a cosmetic using computer analysis of video-captured image.J DermatolSc1., 2002, 29(1):10-18),但大多存在操作复杂、实验技术要求高、检测周期长、精度较差等问题。目前市售常用的美白剂有熊果苷、曲酸、维生素C及其衍生物等物质。
[0004]对于化妆品中的抗衰老功能性成分(自由基清除剂)的抗衰老机理，目前学界普遍认同Denham Harman提出来的“自由基(Free Radicals)衰老”学说。该学说认为:在体内许多物质代谢过程中会产生过氧化的自由基，当机体内的自由基代谢处于不平衡状态时，过量的自由基就会引起机体损伤，将不饱和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素；氧自由基过多还会破坏细胞膜及其他重要成分，使蛋白质和酶变性，当自由基引起的损伤积累战胜了机体的修复能力时，就会导致细胞分化状态的改变甚至丧失，从而导致或加速衰老。依据此学说，清除过量的自由基就成为延缓衰老的重要手段。目前常用的抗衰老功效检测方法有体内实验法(Blumberg J.Use of Biomarkers of Oxidative Stress in ResearchStudies.J Nutr., 2004, 134 (11): 3188 - 3189)和体外实验法(Liu RH, Finley J.Potentialcell culture models for antioxidant research.J Agric Food Chem., 2005, 53:4311 -4314)，但普遍存在测定周期长、实验成本高、操作复杂等缺点。目前市售化妆品中常用的自由基清除剂主要有维生素C、维生素E和辅酶QlO等。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于针对白蔹提取物在美白功效的检测方法上存在的欠缺，提供一种白蔹提取物美白功效的检测方法。
[0006]本发明包括以下步骤:
[0007]I)分别配制酪氨酸酶溶液、L-酪氨酸溶液和PBS (磷酸缓冲液)溶液作为基础溶液，再分别配制4种待测溶液，4种待测溶液分别为:熊果苷溶液、超临界二氧化碳萃取白蔹提取物溶液、水提白蔹提取物溶液和醇提白蔹提取物溶液，取4支试管按下表定量加入各基础溶液和4种待测溶液中的一种，摇匀；
[0008]
【权利要求】
1.白蔹提取物美白功效的检测方法，其特征在于包括以下步骤: .1)分别配制酪氨酸酶溶液、L-酪氨酸溶液和PBS溶液作为基础溶液，再分别配制4种待测溶液，4种待测溶液分别为:熊果苷溶液、超临界二氧化碳萃取白蔹提取物溶液、水提白蔹提取物溶液和醇提白蔹提取物溶液，取4支试管按下表定量加入各基础溶液和4种待测溶液中的一种，摇匀；
2.如权利要求1所述白蔹提取物美白功效的检测方法，其特征在于在步骤I)中，所述酪氨酸酶溶液、L-酪氨酸溶液和PBS溶液的用量分别为100u/ml、2.0mmol/l,0.2mol/l，所述PBS溶液的pH为6.8。
3.如权利要求1所述白蔹提取物美白功效的检测方法，其特征在于在步骤I)中，所述待测溶液的浓度范围为1.0?30.0mg/ml。
4.如权利要求1所述白蔹提取物美白功效的检测方法，其特征在于在步骤2)中，所述水浴锅中加热的条件是采用310K恒温水浴锅，加热时间60min。
【文档编号】G01N21/31GK103439280SQ201310411195
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年9月11日 优先权日:2013年9月11日
【发明者】王宏涛, 钟佩英, 张东丽, 张登, 李军, 苏玉忠, 洪燕珍 申请人:厦门大学