一种高效液相色谱法测定面粉及面制品中氨基脲残留量的方法
【专利摘要】本方法公开了一种高效液相色谱法测定面粉及面制品中氨基脲残留量的方法，包括以下步骤：利用甲醇水溶液或乙腈水溶液振荡或者超声提取面粉及面制品中的氨基脲，提取液经离心后，采用9-羟基呫吨作衍生剂，在酸性条件下衍生，衍生产物经碳十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。本方法具有定性准确、步骤简单、准确度高、检出限低等特点，适合于面粉及面制品中氨基脲残留量的检测。
【专利说明】—种高效液相色谱法测定面粉及面制品中氨基脲残留量的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及了食品安全检测中一种面粉及面制品中氨基脲残留量的检测方法，具体涉及一种高效液相色谱法测定面粉及面制品中氨基脲残留量的方法。
【背景技术】
[0002]氨基脲（semicarbazide, SEM)又名氨基甲酰肼，化学式（分子式）：CH5N30,是一种白色结晶，易潮解，溶于水不溶于无水乙醇和乙醚，用于制备热敏记录纸上的光色染料，也用于医药，农药等有机合成的中间体，用于生产呋喃西林、呋喃妥因、肾上腺色腙，氢化泼尼松、氢化可的松等药物。也用于测定醛、酮试剂。
[0003]动物源性食品中氨基脲（semicarbazide, SEM)通常作为呋喃西林(nitrofurazone)的代谢物在兽药残留中检出，其具有可疑致突变和致癌性，大部分国家规定在动物源性食品中的残留量不得检出。欧盟制定的检测限为l.Oyg/kg，日本于2006年5月29日起实行的肯定列表制度规定了新的检测限为O. 5 μ g/kg。近年来研究发现，氨基脲的来源不仅限于呋哺西林在动物体内的代谢产生，面筋增强剂偶氮甲酰胺（azodicarbonamide,简称ADA)水解及高温热解反应也产生氨基脲。偶氮甲酰胺在湿润的条件下能够快速的转化为非挥发性物质联二脲（hydrazodicarbonamide)和脲唑(urazole)，在酸性条件下二者经加热处理可缓慢生成氨基脲。
[0004]在面粉生产过程，偶氮甲酰胺可增加面粉的口感和筋道。面制品经过高温、湿热加工后，其中的偶氮甲酰胺会转化为氨基脲，长期食用会对人体的健康产生危害。
[0005]目前，我国GB2760-2011《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》规定小麦粉中偶氮甲酰胺最大使用量为0. 045g/kg。现在国家没有面粉及面制品中氨基脲的相关检测标准和限量要求。GB2760-2011《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》食品工业加工助剂名单和SN/T2360. 25-2009《进出口食品添加剂检验规程第25部分：食品工业用加工助剂》均未对食品中的氨基脲进行规定。
[0006]当前食品中氨基脲含量的检测标准有：GB/T22987-2008《牛奶和奶粉中呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、GB/T18932. 24-2005《蜂蜜中呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、农业部1077号公告-2-2008《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱法》。
[0007]国内外文献中面粉及其制品中氨基脲检测方法主要是液相色谱串联质谱法。在酸性条件下对样品进行水解，加入衍 生试剂2-硝基苯甲醛溶液进行衍生，经乙酸乙酯提取后，用液相色谱串联质谱进行检测（张宪臣等.超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用测定面粉中呋喃西林代谢产物氨基脲的残留量；中国卫生检验杂志，2009，19 (4) :715-717)。利用液相色谱串联质谱法检测面粉及其制品中氨基脲的残留量前处理较为复杂，基质干扰也比较严重，且液相色谱串联质谱仪价格昂贵，方法不易普及。[0008]本方法建立了利用9-羟基咕吨为衍生试剂，高效液相色谱分离，荧光检测器检测氨基脲残留量的方法。该方法应用于面粉及面制品中氨基脲残留量的测定时，对前处理方法进行了优化，结合面粉及面制品基质的性质，利用甲醇水溶液或乙腈水溶液提取氨基脲， 简化了前处理的步骤，改进了衍生试剂的添加比例，明显降低了衍生试剂的用量。[0009]本发明面粉及面制品中氨基脲残留量的测定方法，具有步骤简单、准确度高、检出限低等优点。
【发明内容】
[0010]本发明要解决的技术问题在于选择合适的有机溶剂提取面粉及面制品中的氨基脲，降低基质干扰，同时选择适宜衍生试剂并优化衍生试剂的添加比例。[0011]本发明所述的的技术问题可通过以下技术方案得以解决：[0012]I.标准工作溶液制备[0013]用高浓度氨基脲标准储备液，逐级稀释成系列标准溶液，如2. 00 μ g/mL, 5. 00 μ g/ mL, 10.0 μ g/mL, 20.0 μ g/mL, 50.0 μ g/mL。分别取 O. 5 ~1.0mL 各浓度标准于 I. 5mL 进样瓶中，加入50-300 μ L浓度为0.02mol/L9-羟基咕吨衍生剂，I. 5mol/L盐酸溶液20-100 μ L， 室温下避光衍生20-30min后，待分析。[0014]2.试样溶液制备[0015](I)试样提取：准确称取l_5g面粉或粉碎后的面制品样品于50mL离心管中，加入 10~20mL甲醇水溶液或乙腈水溶液，震荡或者超声提取30~60min ;其中，甲醇水溶液浓度为20 %~60 %，乙腈水溶液浓度为20 %~60 %。提取液在6000~8000r/min条件下离心3~lOmin，取上清液过O. 45 μ m微孔有机滤膜，收集滤液；[0016](2)试样提取液衍生：取上述滤液0.5~l.OmL，加入50~300yL浓度为O.02mol/L9-羟基咕吨衍生剂，I. 5mol/L盐酸溶液20~100 μ L，室温下避光衍生20~ 30min后，样液待分析。[0017]3.标准工作溶液及样液分析[0018]衍生后的标准工作溶液和样液采用下述分离检测条件经高效液相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量，计算样品中氨基脲的残留量。[0019]高效液相色谱分离检测条件：[0020]仪器：高效液相色谱仪，配有荧光检测器；[0021]色谱柱：碳十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；[0022]流动相：乙腈+0. 02mol/L乙酸钠溶液（梯度洗脱，优化的洗脱程序见表1)；[0023]流速：1.OmL/min ；[0024]进样量：5~20 μ L ;[0025]柱温：25~40°C ;[0026]激发波长：213nm,发射波长：308nm。[0027]表1液相色谱梯度洗脱程序[0028]
【权利要求】
1.一种高效液相色谱法测定面粉及面制品中氨基脲残留量的方法，其特征包括如下步骤：(1)取一定量样品加入提取溶剂，振荡或者超声提取试样中的氨基脲；(2)提取液经离心处理后，取上清液过微孔滤膜；(3)取一定量滤液加入O.02mol/L9-羟基咕吨衍生剂，加入一定量的盐酸溶液，在酸性条件下衍生；(4)衍生后的样液经高效液相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量，计算面粉及面制品中氨基脲的残留量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取面粉及面制品中氨基脲的溶剂为甲醇水溶液或乙腈水溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述O.02mol/L9-羟基咕吨衍生试剂的用量为50 μ L~300 μ L ;盐酸溶液的浓度为O. 15mol/L~I. 5mol/L,盐酸溶液的用量为 20 μ L ~100 μ L0
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，本方法采用高效液相色谱分离，荧光检测器检测。
【文档编号】G01N30/02GK103487529SQ201310480062
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年10月15日 优先权日:2013年10月15日
【发明者】宋薇 申请人:谱尼测试科技(天津)有限公司