一种蚌毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法
【专利摘要】本发明公开了一种蚌毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，具体步骤如下：建立标准指纹图谱：制备参照物溶液：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，得参照物溶液；制备供试品溶液：取本品干燥细粉或者口服液，(供试品为液态制剂时，先干燥，然后再研成细粉)，精密加入40％～90％甲醇，称定重量，回流提取，放至室温，再称量，用40％～90％甲醇补足减失的重量，滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5～10μl，分别注入液相色谱仪，测定，得蚌毒灵口服制剂的标准高效液相指纹图谱；计算，得出结论。本发明可以进一步全面控制蚌毒灵相关口服制剂和中间体质量。
【专利说明】一种蚌毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法。
【背景技术】
[0002]蛘毒灵散中药组方收载于《中国兽药典》2010版:
[0003]【处方】黄芩、黄柏、大青叶、大黄；
[0004]【性状】本品为灰黄色的粉末；气微，味苦。
[0005]现有的鉴定方法为:(1)取本品，置显微镜下观察:纤维淡黄色、梭形，孔沟细。纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞的壁木化增厚。靛蓝结晶蓝色，存在于叶肉组织和表皮细胞中，呈细小颗粒状或片状，常聚集成堆。草酸钙簇晶大，直径60-140 μ mo (2)取本品3g，加乙醇20ml，加热回流15分钟，滤过。取滤液lml，加醋酸铅试液2滴，可生成橘黄色沉淀；另取滤液1ml，加镁粉少量与盐酸3-4滴，显红色。
[0006]现有的记载未设定其相关质量标准，且显微技术、化学方法的鉴定存在明显不足，本发明拟开发该复方的口服液制剂，并用中药指纹图谱的方法作为该制剂的质量控制。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种可以进一步全面控制蛘毒灵相关口服制剂和中间体质量的一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法。
[0008]本发明的一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，具体步骤如下:
[0009]步骤1:建立标准指纹图谱:
[0010](I)以ODS十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
[0011](2)流动相:A为甲醇，B为酸性溶液；
[0012](3)洗脱程序为:甲醇-0.1 %磷酸水梯度洗脱:0-10min40:60 ；10-30min45:55 ；30-40min60:40 ；40-50min80:20 ；50-60min60:40 ；60-62min40:60 为流动相梯度洗脱；
[0013]步骤2:制备参照物溶液:取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，得参照物溶液；
[0014]步骤3:制备供试品溶液:取本品干燥细粉或者口服液，(供试品为液态制剂时，先干燥，然后再研成细粉)，精密加入40%~90%甲醇，称定重量，回流提取，放至室温，再称量，用40%~90%甲醇补足减失的重量，滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；
[0015]步骤4:精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5~10μ 1，分别注入液相色谱仪，测定，得蛘毒灵口服制剂的标准高效液相指纹图谱；
[0016]步骤5:计算,得出结论。
[0017]作为优选，所述步骤I中的检测波长为254nm。
[0018]作为优选，所述步骤I中理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000。
[0019]作为优选，所述标准高效液相指纹图谱的制定方法为:
[0020](I)取多批蛘毒灵口服制剂的同一剂型，分别按所述供试品溶液的制备方法制得供试溶液；
[0021](2)根据检测所得的多批检测数据，建立蛘毒灵口服制剂的高效液相谱图，确立高效液相色谱峰保留时间和峰面积值；
[0022](3)收集所有检测数据，计算各对应峰相对保留时间的平均值和相对峰面积的平均值以及标准差等，分别与参照峰的平均保留时间和平均峰面积相除，作为标准指纹图谱的相对保留时间和相对峰面积值，导出计算结果；
[0023](4)制定标准指纹图谱数据，绘制标准指纹图谱。
[0024]本发明适用于检查蛘毒灵相关口服制剂和中间体，能够克服现有微技术、化学方法鉴定的不足，可以进一步全面控制蛘毒灵相关口服制剂和中间体质量。
【具体实施方式】
[0025]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0026]实施例1
[0027]—种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，具体步骤如下:
[0028]步骤1:建立标准指纹图谱:以ODS十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相:A为甲醇，B为酸性溶液；洗脱程序为:甲醇-0.1 %磷酸水梯度洗脱:10min40:60 ；20min45:55 ；30min60:40 ；40min80:20 ；50min60:40 ；60min40:60 为流动相梯度洗脱；
[0029]步骤2:制备参照物溶液:取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解得参照物溶液；
[0030]步骤3:制备供试品溶液:取本品干燥细粉或者口服液，(供试品为态制剂时，先干燥，然后再研成细粉)，精密加入50%甲醇，称定重量，回流提取，放至室温，再称量，用50%甲醇补足减失的重量，滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；
[0031]步骤4:精密吸取参照物溶液与供试品溶液各7 yl，分别注入液相色谱仪，测定，得蛘毒灵口服制剂的标准高效液相指纹图谱；
[0032]步骤5:计算,得出结论。
[0033]其中，所述步骤I中的检测波长为254nm。
[0034]其中，所述步骤I中理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000。
[0035]其中，所述标准高效液相指纹图谱的制定方法为:取多批蛘毒灵口服制剂的同一剂型，分别按所述供试品溶液的制备方法制得供试溶液；根据检测所得的多批检测数据，建立蛘毒灵口服制剂的高效液相谱图，确立高效液相色谱峰保留时间和峰面积值；收集所有检测数据，计算各对应峰相对保留时间的平均值和相对峰面积的平均值以及标准差等，分别与参照峰的平均保留时间和平均峰面积相除，作为标准指纹图谱的相对保留时间和相对峰面积值，导出计算结果；制定标准指纹图谱数据，绘制标准指纹图谱。
[0036]经测定，所得样品指纹图谱与标准指纹图谱比较，经计算，相似度不低于0.09。
[0037]实施例2
[0038]一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，具体步骤如下:
[0039]步骤1:建立标准指纹图谱:以ODS十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相:A为甲醇，B为酸性溶液；洗脱程序为:甲醇-0.1 %磷酸水梯度洗脱:5min40:60 ；15min45:55 ；35min60:40 ；45min80:20 ；55min60:40 ；62min40:60 为流动相梯度洗脱；
[0040]步骤2:制备参照物溶液:取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，得参照物溶液；
[0041]步骤3:制备供试品溶液:取本品干燥细粉或者口服液，(供试品为态制剂时，先干燥，然后再研成细粉)，精密加入90%甲醇，称定重量，回流提取，放至室温，再称量，用90%甲醇补足减失的重量，滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；
[0042]步骤4:精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μ 1，分别注入液相色谱仪，测定，得蛘毒灵口服制剂的标准高效液相指纹图谱。
[0043]步骤5:计算,得出结论。
[0044]其中，所述步骤I中的检测波长为254nm。
[0045]其中，所述步骤I中理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000。
[0046]其中，所述标准高效液相指纹图谱的制定方法为:取多批蛘毒灵口服制剂的同一剂型，分别按所述供试品溶液的制备方法制得供试溶液；根据检测所得的多批检测数据，建立蛘毒灵口服制剂的高效液相谱图，确立高效液相色谱峰保留时间和峰面积值；收集所有检测数据，计算各对应峰相对保留时间的平均值和相对峰面积的平均值以及标准差等，分别与参照峰的平均保留时间和平均峰面积相除，作为标准指纹图谱的相对保留时间和相对峰面积值，导出计算结果；制定标准指纹图谱数据，绘制标准指纹图谱。
[0047]经测定，所得样品指纹图谱与标准指纹图谱比较，经计算，相似度不低于0.09
[0048]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，其特征在于，具体步骤如下: 步骤1:建立标准指纹图谱: (1)以ODS十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； (2)流动相:A为甲醇，B为酸性溶液； (3)洗脱程序为:甲醇-0.1 %磷酸水梯度洗脱:0-10min40:60 ； 10_30min45:55 ；30-40min60:40 ；40-50min80:20 ；50-60min60:40 ；60-62min40:60 为流动相梯度洗脱； 步骤2:制备参照物溶液:取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，得参照物溶液； 步骤3:制备供试品溶液:取本品干燥细粉或者口服液，(供试品为液态制剂时，先干燥，然后再研成细粉)，精密加入40%?90%甲醇，称定重量，回流提取，放至室温，再称量，用40%?90%甲醇补足减失的重量，滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液； 步骤4:精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5?10 iil，分别注入液相色谱仪，测定，得蛘毒灵口服制剂的标准高效液相指纹图谱； 步骤5:计算，得出结论。
2.根据权利要求1所述的一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，其特征在于，所述步骤I中的检测波长为254nm。
3.根据权利要求1所述的一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，其特征在于，所述步骤I中理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1000。
4.根据权利要求1所述的一种蛘毒灵口服制剂的中药指纹图谱检查方法，其特征在于，所述标准高效液相指纹图谱的制定方法为: (1)取多批蛘毒灵口服制剂的同一剂型，分别按所述供试品溶液的制备方法制得供试溶液； (2)根据检测所得的多批检测数据，建立蛘毒灵口服制剂的高效液相谱图，确立高效液相色谱峰保留时间和峰面积值； (3)收集所有检测数据，计算各对应峰相对保留时间的平均值和相对峰面积的平均值以及标准差等，分别与参照峰的平均保留时间和平均峰面积相除，作为标准指纹图谱的相对保留时间和相对峰面积值，导出计算结果； (4)制定标准指纹图谱数据，绘制标准指纹图谱。
【文档编号】G01N30/02GK103529142SQ201310502729
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月15日 优先权日:2013年10月15日
【发明者】王宏军, 蒋红, 周铁忠, 刘秀萍, 王铁良, 苏玉虹, 迟进坤, 张华 , 刘英姿, 张玲, 李丽, 张安国 申请人:辽宁医学院