蛋白酶荧光检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种蛋白酶荧光检测方法，包括如下步骤：（1）向含蛋白酶的样品中，加入氮杂环罗丹明双酰胺使终浓度为1-5μM，在温度为20-37℃条件下，培养1-3小时；（2）检测步骤（1）获得的培养液的绿色荧光強度；所述氮杂环罗丹明双酰胺的结构式为式（I）：式（I）中PA表示含2-3个氨基酸的肽或末端有Cbz保护基的四个氨基酸的肽。本发明用于蛋白酶荧光检测，具有高敏感性和高选择性。
【专利说明】蛋白酶荧光检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物检测领域，具体地涉及一种蛋白酶荧光检测方法。
【背景技术】
[0002]蛋白酶是构成和参与细胞凋亡、凝血、炎症、复制、纤维蛋白溶解、免疫反应等多种生理过程的一大类重要的酶。许多疾病的特点是引起特定蛋白酶及其抑制剂状态的改变，测量这些状态的改变可以应用于临床治疗及疾病的早期诊断。然而准确测定蛋白酶的活性目前仍然很困难。目前可获得的合成底物价格昂贵、反应迟钝、还没有选择性。此外使用目前可获得的合成底物进行测量，需要高浓度的目标蛋白酶，存在蛋白酶的自我淬灭，结果在某种程度上是不准确的。因此，亟需一种快速蛋白酶荧光检测方法。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种蛋白酶荧光检测方法。
[0004]本发明的技术方案概述如下:
[0005]一种蛋白酶荧光检测方法，包括如下步骤:
[0006](I)向含蛋白酶的样品中，加入氮杂环罗丹明双酰胺使终浓度为1_5μΜ，在温度为20-37 °C条件下，培养1-3小时；
[0007](2)检测步骤(1)获得的培养液的绿色荧光強度；
[0008]所述氮杂环罗丹明双酰胺的结构式为式(I):
[0009]
【权利要求】
1.一种蛋白酶荧光检测方法，其特征是包括如下步骤: (O向含蛋白酶的样品中，加入氮杂环罗丹明双酰胺使终浓度为1-5μΜ，在温度为20-37 °C条件下，培养1-3小时； (2)检测步骤(1)获得的培养液的绿色荧光強度； 所述氮杂环罗丹明双酰胺的结构式为式(I):
2.根据权利要求1所述的一种蛋白酶荧光检测方法，其特征是所述四个氨基酸的肽为Cbz-Asp-Glu-Val-Asp。
3.根据权利要求1所述的一种蛋白酶荧光检测方法，其特征是所述肽中含有一个精氨酸残基。
【文档编号】G01N21/64GK103558199SQ201310547080
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月6日 优先权日:2013年11月6日
【发明者】伍谊波, 第五振军, 廖劲芳 申请人:天津百萤生物科技有限公司